HPLCRID法测定氨基葡萄糖盐酸盐的含量_图文（精）

HPLCRID法测定氨基葡萄糖盐酸盐的含量_图文（精）
海峡药学2011年第23卷第2期
2.4.2精密度试验:取同一对照品溶液。

重复进样6次,按“2.1色谱条件”项下进样测定,测定得峰面积,求得磺胺甲嘌唑RSD为0.59%.甲氧苄啶RSD为0.44%.说明本方法精密度良好。

2.4.3稳定性试验:对同一供试品溶液(批号:091003,每隔 2h测定1次。

共测定6次。

测定得峰面积.求得磺胺甲嚼唑RSD=0.55%;甲氧苄啶RSD=0.86%,说明供试品溶液中磺胺甲嗯唑及甲氧苄啶在10h内稳定。

2.4.4重复性试验:取同一批样品(批号:091003。

按“2.1色谱条件”项下平行测定6份,结果磺胺甲嗯唑RSD= 0.75%;甲氧苄啶RSD=0.54%。

测定方法的重复性较好。

2.4.5加样回收率试验:按照处方比例配制样品,其中两种对照品加入量分别为标示量的80%,100%,120%,按照样品含量测定方法测定.分别计算回收率。

结果(见表1。

表1加样回收率试验结果(n=3l
2.5样品测定取本品3份.按上述供试品制备法制备。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20肚L,注入液相色谱仪,按“2.1色谱条件”项下测定.记录峰面积,以外标法计算各组分的含量.结果(见表2。

表2样品含量测定结果《标示含量%.n=3J
3讨论
.3.1检测波长的选择取磺胺甲嗯唑对照品和甲氧苄啶对照品分别进行紫外扫描.结果磺胺甲嗯唑在264nm处有最大吸收,但在此波长处甲氧苄啶几乎没有吸收;而
在240nm波长处2者吸光度接近,故选择240nm作为检测波长,以提高测定结果的准确度。

3.2流动相的选择曾比较不同的流动相:磷酸盐缓冲液. 乙腈(75:25;磷酸盐缓冲液一甲醇(75:25;水一乙腈一三乙胺(800:200:1等。

考虑到分离效果和时间等因素。

选用了水. 乙腈.三乙胺(800:200:1。

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HPLC—RID法测定氨基葡萄糖盐酸盐的含量
李俊(浙江台州市食品药品检验所台州318000
摘要:目的建立高效液相色谱.示差折光检测法测定氨基葡萄糖盐酸盐的含量。

方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Bondapak c。

8柱(3.9×300ram,lOp.m,流动相为0.005tool?L.1庚烷磺酸钠溶液(pH4.O.乙腈(97:3,流适:2.0mL?min~,柱温25。

C。

示差折光检测器池温度40‘ Co结果本法精密度高,稳定性好,氨基葡萄糖盐酸盐在0.998~7.497mg?mL-1的浓度范圆内具有良好的线性关系(r=0.9999。

平均加样回收率为99.4%。

RSD=1.2%(n=9。

结论表方法简便。

准确.重现性好。

可作为该药品的含量测定方法。

关键t司:HPLC;示差折光检测器;氨基葡萄糖盐酸盐;含量测定
中图分类号:R927.2文献标识码:B文章编号:1006—376512011.02,0042—03
Determination of glucosamine hydrochloride by RID—HPLC LI Jun(Taizhou institute for food and drug control,Taizhou 318000,China
作者简介:李俊,男(1979.12一。

职称:主管药师,从事药品检验及药物分析研究工作。

联系电话:0576—88552715。

42?
Strait Pharmaceutical Journal Vol 23No.22011
ABSTRAOT:OBJECTIVE An RID.HPI。

C method was established tO determine the content of glucosamine hy.
drochloride.METHODS Using a HPI,C method with Bondapak
Cls column(3.9x 300mm,lOt.tm,the mobile
phase was0.005md?L-11一heptanesulfonic acid sodium salt solution(pH
4.0aeetonitrile(97:3,the flow rate was 2.Oml。

?min
一.acolumn temperature was
25℃and the cell temperature of Refractive Index Detector was 40℃.RESULTS Precision and stability of the method were fine.The standard curve was linear in the range of
0.998~7.497mg?mI。

1(r=0.9999,and the average recovery was 99.4%with RSD of
1.2%.CONCLUSION The method was simple,accurate and reproducible,and can be used for the method of determination.
KEY WORDS:HPLC;Refractive Index Detector;91ucosamiae
hydrochloride;determination
氨基葡萄糖(2.氨基一2.脱氧一D.葡萄糖是人体关节软骨
基质中合成蛋白聚糖所必需的重要成分,参与构造人体组织
和细胞膜,是蛋白多糖大分子合成的中间物质【1J。

它具有特
殊的生理活性,可直接抗炎.缓解骨性关节炎的疼痛症状,改
善关节功能,在北美和欧洲被用于食品添加剂和药品【2.3】,因
此近年来越来越受到重视,相关的研究也日益增多。

本文首次建立了HPLC-RID法测定氨基葡萄糖盐酸盐的含量,该方法简便.结果准确可靠,可用于氨基葡萄糖盐酸盐的质量控制。

1仪器及材料
1.1实验仪器Waters 2695Alliance高效液相色谱仪,包括柱温箱、在线真空脱气机、2414示差折光检测器以及Empow. er色谱工作站(美国Waters公司,BP221S型电子天平(德国 Satorius公司,万分之一。

1.2药品与试剂氨基葡萄糖盐酸盐(浙江澳兴生物科技有限公司,批号20080417、20080418、20080419;氨基葡萄糖盐酸盐对照品(Sigma公司,批号
047K0129,N一乙酰氨基葡萄糖对照品(FLUKA公司,批号
1323294;乙腈、庚烷磺酸钠、冰乙酸均为色谱纯。

乙酸钠为分析纯,水为重蒸馏水。

2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱:Bondapak C18柱(
3.9X 300mm, lOum;以0.005mol?L‘1庚烷磺酸钠溶液(称取庚烷磺酸钠和乙酸钠适量加水配制成浓度分别为0.005mol?L-1和0.01 mol?L-1的溶液,用冰醋酸调pH至
4.0±0.05一乙腈(97:3 为流动相;流
速:2.0mL?min_1;柱温25。

C,检测器池温度40。

C。

进样量lOlL。

2.2测定方法精密称取氨基葡萄糖盐酸盐约250nag,置 50mL量瓶中。

加3%的乙腈溶液30mL,超声2min使完全溶解,放置至室温,稀释至刻度摇匀。

精密世取
IO#L照2.1项下的色谱条件进样到液相色谱仪中,记录色谱图;另取氨基葡萄糖盐酸盐对照品约250mg同法配制成对照品溶液。

同法测定。

按外标法以峰面积计算含量。

2.4系统适用性在上述色谱条件下。

D氨基葡萄糖盐酸盐峰的理论板数为3639.与相邻的峰(系统峰的分离度为6.82;空白及N.乙酰氨基葡萄糖峰均不干扰n氨基葡萄糖盐酸盐峰(见图1-4。

取对照品溶液连续进样6针.记录色谱图,计算峰面积的相对标准偏差为
0.5%。

说明方法的系统适用性较好。

圈1空白溶液色谱图
囝2对照品溶液色谱图
雷3N.乙酰氨基葡萄糖对照品溶液色谱图
图4供试品溶液色谱图
2.5检出限与定量限取对照品溶液逐级稀释当色谱峰的S/N约等于3h.对照品溶液的检测限浓度为0.02mg?mL一1最低检出量0.2旭。

同法取对照品溶液逐级稀释当色谱峰的S/N约10时. 对照品溶液的定量限浓度为0.08rag?mL一1取该浓度溶液进样6次.相对标准偏差为1.8%。

2.6线性范围精密称取n氨基葡萄糖盐酸盐对照品?43?
海峡药学2011年第23卷第2期
49.9、125.2、201.1、249.4、301.0、374.8mg分别置50mL量瓶中,加3%的乙腈溶液30mL。

超声2min使完全溶解,放置至室温,稀释至刻度摇匀,得到6个浓度
的溶液,按2.1的色谱条件分别进样10vL,记录色谱图,以峰面积A 对浓度C(mg ?mL_1作线性回归,结果:在0.998~7.497mg?mL。

1的浓度范围内,测定的峰面积与D氨基葡萄糖盐酸的浓度呈良好的线性关系。

线性方程
为:A=21969.329C+155.313,r= 0.9999。

2.7回收率试验精密称取适量的D氨基葡萄糖盐酸盐供试品(批号200804179份。

各约125mg,置50mL量瓶中。

分别加入D.氨基葡萄糖盐酸盐对照品约25、125、225mg各3份,按2.2项下的方法配制得到9份回收率测试溶液,按上述方法进样测定,计算氨基葡萄糖盐酸的回收率,结果平均回收率为99.4%.相对标准偏差为1.2%。

2.8精密度试验取n氨基葡萄糖盐酸供试品(批号 20080417按2.2项下的方法分别配制6份供试品溶液。

然后分别进样测定,以外标法计算:D氨基葡萄糖盐酸含量为99.16%、99.69%、99.70%、98.38%、99.65%、99.75%.相对标准偏差为
O.5%。

2.9稳定性试验取D一氨基葡萄糖盐酸盐供试品(批号20080417按2.2项下的方法配制1份供试品溶液,分别间隔O、l、2、4.6、8、10、12h后进样测定。

计算氨基葡萄糖盐酸盐峰面积的相对标准偏差.结果分别为O.7%。

表1样品含量测定结果
2.10样品测定取D氨基葡萄糖盐酸盐供试品3批,按按 2.2项下的方法各配制两份,在上述色谱条件下进样测定。

计算氨基葡萄糖盐酸盐的含量,结果(见表1。

3讨论
由于氨基葡萄糖盐酸盐的极性比较强,在C18柱上不易保留,本实验
采用反相离子对色谱法,在流动相中加人了离子对试剂庚烷磺酸钠,使氮基葡萄糖盐酸盐的保留时问延长。

与紫外可见吸收检测器(UVD相比,示差折光检测器(RID 的灵敏度较低,但氨基葡萄糖盐酸盐无发色团,在紫外区内无特征吸收峰。

因此选择了示差折光检测器检测氨基葡萄糖盐酸盐。

氨基葡萄糖常用的测定方法有比色法(4’5和I-IPLC 法(6-8。

现行国家标准均采用的比色法,专属性和重现性均较差,而美国药典采用的HPLC-UVD法的可靠性和重现性值得怀疑【9J。

在不苛求灵敏度的情况下,本方法作为氨基葡萄糖盐酸盐的
含量测定法,具有方法简便、不需要衍生化,结果准确可靠的优点,可作为该药品的质量控制方法。

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HPLC法测定蔬菜中2,4一二氯苯氧乙酸
方袁媛(浙江省杭州市萧山区第一人民医院杭州311201
摘要:gl的建立应用高效液相色谱洲定蔬菜中的2.4.二氯苯氧乙酸的方法。

方
法蔬菜样品经过捣碎,调pH,液液革取.旋转蒸发浓缩后. 以甲醇-水(8:2,V/V为流动相.
在ODS-C18柱上进行分离,紫外检测器282nm下检测。

结果经方法学验证.2,4.二氯苯氧乙酸在2—100肛g. mLl的线性范围内,相关系数r2=0.9987。

--,g平力口标回收率>94%.日内精密度3.45%。

方法检出限为12tag?k~。

结论经方法适用性验证.本法适用于白菜,四季豆,辣椒,黄瓜,青菜,豆芽等各种蔬菜中2,4-二氯苯氧乙酸的含量测定,具有良好的适用性。

关键词:2,4-二氯苯氧乙酸;液液萃取;蔬菜;高教液相色谱法;色谱柱中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1006.3765(2011J.02.0044.03
作者简介:方袁媛.]ff'(1983一。

2006年毕业于浙江中医药大学药学专业。

职称:药师。

研究方向:医院药学。

E-mail:********************?44?。