实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察
微生物学实验一 微生物制片及形态观察
实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。
光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。
图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。
焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。
油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。
目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。
聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。
聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。
显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。
一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。
有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。
2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
实验一显微镜的使用及微生物形态的观察
contents
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果 • 实验总结
01 实验目的
掌握显微镜的使用方法
掌握显微镜的基本操作
包括调整焦距、照明调节、移动载玻片等。
了解显微镜的保养和清洁
定期清洁显微镜，保持其良好的工作状态。
熟悉不同倍率下的观察效果
04
原生动物属于真核生物，根据形态和运动方式可分为鞭毛虫、变形虫、 纤毛虫等。
微生物在自然界中的作用和意义
分解有机物
微生物在自然界中起到分解有机物的作用，将动 植物残体和排泄物等有机物分解成简单的无机物 ，如二氧化碳和水，为其他生物提供营养。
促进植物生长
一些微生物能够促进植物的生长和发育，如根瘤 菌能够与豆科植物共生形成根瘤，为植物提供氮 素营养；菌根真菌能够与植物根系形成共生关系 ，为植物提供磷素营养等。
03 实验步骤
显微镜的准备
01
02
03
清洁显微镜
使用柔软的湿布擦拭显微 镜的表面，确保显微镜干 净无尘。
检查显微镜部件
确保显微镜的目镜、物镜、 载物台等部件完好无损， 没有损坏或松动。
调整光源
打开显微镜的光源，确保 光源亮度适中，没有闪烁。
样本的制备
选择样本
选择要观察的微生物样本，如细菌、藻类、原生 动物等。
详细地观察。
观察和记录微生物形态
观察记录
在观察过程中，注意记录不同微生物的形态特征，并 绘制简单的显微镜图像或使用相机拍摄记录。
分析结果
根据观察记录，分析微生物的种类、数量和分布情况， 并得出实验结论。
整理器材
实验结束后，清洁并整理好显微镜和相关器材，以便 下次使用。
实训1普通光学显微镜的使用微生物形态学
实训1普通光学显微镜的使用微生物形态学普通光学显微镜是一种常见的显微镜，常用于观察微生物的形态学。
在微生物形态学研究中，可以利用普通光学显微镜观察微生物的形态、结构和组织等特征，从而对微生物的分类、形态变化、生活习性以及疾病诊断等方面进行研究。
使用普通光学显微镜观察微生物形态的过程需要注意以下几个步骤。
首先，将需要观察的样品制备成薄片。
在制备样品时，可以选择将微生物直接涂布在载玻片上或者将微生物培养液滴在载玻片上，然后再覆盖一张盖玻片，使得样品薄而均匀。
之后可以用染色法对微生物进行染色增强对比度，便于观察。
接下来，将载玻片放置在显微镜的载物台上，并逐渐转动调整光源。
适当调整光源可以提高图像的清晰度。
可以使用孔光阑和光源亮度调节装置来调整光线的强度和均匀度，以便获得清晰的图像。
在观察时，需要正确调整镜头的焦距。
首先用低倍镜观察确定感兴趣区域的位置，然后再调整为高倍镜进行观察。
在调整焦距时，可以用粗调控制大范围的焦距变化，然后再用细调进行微小的调整，以获得清晰的图像。
观察过程中，可以通过调整机械臂和旋钮来移动载物台，以便于观察样品不同区域的微生物形态。
可以通过连续观察多个视野来全面了解微生物的形态和结构。
在观察过程中，需要将目镜对准自己的眼睛，并通过调整聚合度和检览度来获得舒适的观察体验。
同时，还需要注意保持目镜和物镜的清洁，以避免灰尘影响观察效果。
观察结束后，应当将载玻片等清理干净，并将显微镜关闭。
同时，需要将观察结果记录下来，并进行进一步的分析和研究。
总之，普通光学显微镜在微生物形态学中的应用是非常重要的。
通过合理的调整显微镜的参数，可以观察到微生物的形态、结构和组织等特征，进而对微生物进行分类和研究。
掌握普通光学显微镜的使用技巧，对于微生物形态学研究具有重要的意义。
环境工程微生物学实验
实验器材
（1）活材料：培养18h的大肠杆菌（E. coli）培养液。 （2）培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支 (每支10ml)，浓缩5倍的牛肉膏蛋白胨培养基。无菌 酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。 （3）器材：1ml无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、 标签等。
实验方法
1、接种：按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2 ml 的大肠杆菌培养液。 2、培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下 振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1.5、3、5、 7、9、12、24和36h后取出，放冰箱中贮存，待测定。 3、比浊：以未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基调零 点，在光电比色计上，选用520～560nm波长进行比浊， 从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。
实验步骤
1．将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45℃左右倒入无 菌培养皿内(每皿约10～
15毫升)，共倒3个，静置待冷凝即成平板。
2．在无菌操作条件下，用接种环分别挑取大肠杆菌和活性污泥 各一环分别在4个平板上各点种4个点。倒置于37℃恒温箱内培 养24～48h。
3．观察结果，取出平板，分别在2个平板内菌落周围滴加碘液， 观察菌落周围颜色的变化。若在菌落周围有一个无色的透明圈， 说明该细菌产生淀粉酶并扩散到基质中去。若菌落周围仍为蓝 色，说明该细菌不产生淀粉酶。
实验器材
1．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 2．仪器：电炉、恒温水浴锅．恒温培养箱．放大 镜。 3．试剂：硫代硫酸钠溶液。 4．其他用品：无菌采样瓶，9ml无菌水试管，无菌 培养皿(直径9cm)，无菌移液管等。
实验步骤
1．水样采取 2．细菌总数测定 (1) 水样稀释：根据水样受有机物或粪便污染的程度，可用无
3．高倍镜观察
实验一显微镜的使用及细菌形态观察
03
实验时间安排不够合理
本次实验时间安排较为紧张，导致部分同学在规定时间内未能完成实验。
建议合理安排实验时间，确保同学有足够的时间进行实验操作和观察。
对未来实验的展望与计划
拓展观察对象
了解细菌的基本形态
学习识别不同种类的细菌，了解其基 本形态特征，如球形、杆形、螺旋形 等。
通过观察不同细菌的形态，理解其在 生物学和医学领域的应用价值。
学习细菌的观察与识别
掌握细菌的染色和观察方法， 了解常用的染色技术和原理。
学习使用显微镜观察细菌的形 态、大小、排列等特征，提高 实验操作技能和观察能力。
04
革兰氏阳性菌
在显微镜下观察到革兰氏阳性 菌呈圆形或椭圆形的外观，细
胞壁厚，表面光滑。
革兰氏阴性菌
革兰氏阴性菌呈杆状或球状， 细胞壁薄，表面粗糙。
大肠杆菌
大肠杆菌呈杆状，两端钝圆， 无芽孢和鞭毛。
葡萄球菌
葡萄球菌呈葡萄串状排列，无 芽孢和鞭毛。
细菌形态特征的描述与分类
根据革兰氏染色结果，可以将细 菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴
性菌两类。
根据细菌的形状、大小、排列方 式等特征，可以初步判断细菌的
种类。
不同种类的细菌具有不同的形态 特征，如球菌、杆菌、螺旋菌等。
实验结论的总结与归纳
通过观察显微镜下细菌的形态特 征，可以初步判断细菌的种类。
革兰氏染色是区分革兰氏阳性菌 和革兰氏阴性菌的重要方法。
了解不同种类细菌的形态特征对 于临床诊断和治疗具有重要意义。
增强团队合作意识
在实验过程中，我与同学们相互协作， 共同完成实验任务，增强了团队合作 意识。
实验 光学显微镜的使用及微生物个体形态的观察
实验一光学显微镜的使用及微生物个体形态的观察一、实验目的和要求1）了解显微镜的构造及成像原理。
2）掌握显微镜的使用方法和保养方法。
二、显微镜的构造（一）机械裝置部分：1）镜座：是显微镜的支架，由底座和镜臂组成。
2）载物台：又称镜台，用于安放载玻片，其上安有玻片夹和玻片移动器，调节移动器上的螺旋可使载玻片前后左右移动。
镜台中央有一孔，称通光孔，可使反光镜上的光反射到物镜中来。
3）镜筒：其上端连接目镜，下端连接转换器。
4）转换器：其上安装三个物镜，镜检时旋转转换器即可换物镜头。
注意转换物镜时。
必须用手按住园盘旋转，勿用手指直接推动物镜，以免使物镜与转换器之间的螺纹松脱而损坏显微镜。
5）调焦裝置：包括粗细调焦旋钮，是调节镜筒上下移动的裝置。
（二）光学系统部分：1）物镜：又称为镜头。
有三个物镜头，二个干燥系物镜，一个油系物镜。
物镜上标有主要参数，其含意是：例如：上排100/1.25是放大倍数为100，数值口径为1.25，下排160/0.17是指镜筒长为160毫米，盖玻片的厚度小于0.17毫米。
它是显微镜的最重要的部分。
普通显微镜接物镜的工作原理2）目镜：供眼睛观察物像用的，它将物镜放大的物像再放大，配有三个目镜，其上标有放大倍数。
显微镜的总放大倍数是目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积.3）聚光器：起聚集光线的作用，它可上下移动以调节最适光度。
其下方安装有可变光圈,用以调节光的强度。
4）反光镜：安装在镜座上。
它是一个有平凹两个面的双面镜。
其作用是采集外来光线，并且送入聚光器，一般采集自然光时用平面镜，采集人工光源时用凹面镜。
三、实验材料和器材双目显微镜、二甲苯、苯酚、擦镜纸、固定片等四、实验操作步骤（一）显微镜的使用方法：1.准备工作：取出显微镜时，应一手握镜臂,一手托镜座，轻拿轻放，切忌碰撞和猛震。
显微镜应放在离桌边60毫米左右的位置。
再将登子的高低调节好，不得将显微镜倾斜。
2.采光：将低倍镜与镜筒调节成一条直线，用双眼向下看，同时调节反光镜寻找光源。
显微镜的使用和微生物的形态观察
实验内容
1、显微镜的使用 2、微生物的形态观察
普通光学显微镜的结构
由一组光学放大系统、调 节系统及机械支持系统组成。
1、机械系统部件：镜座、 载物台、物镜转换器、镜 筒和调节器等。
2、光学放大系统部件：反 光镜、聚光器、物镜和目 镜等。
显微镜的使用
用显微镜观察肉眼看不到的微生 物，但大多数微生物用高倍镜也看 不清，需要用油镜（100×）观察。 用油镜观察时，镜头必须浸入香柏 油里 。
杆状细菌代表1-大肠杆菌
螺旋菌的典型代表-钩端螺旋体
细菌的特殊结构-鞭 毛
微生物第二大类-放线菌
❖ 放线菌菌丝
放线菌轮生菌丝
螺 旋菌丝
放线菌菌丝及孢子丝
微生物的第三大类：霉菌 霉菌菌丝的典型结构-1.无隔菌丝和
有隔菌丝
霉菌菌丝的典型结构-2。根霉的假根 及孢子囊孢子
霉菌菌丝的典型结构3.青霉的青霉穗
菌落形态
菌落是由某一微生物的单个细胞或 孢子在培养基表面繁殖后形成的肉眼 可见的集落。
菌落形态在一定程度上是个体细胞 形态结构在群体上的反映。
菌落形态特征
从菌落的大小、气味、颜色、表 面有无光泽，是否透明、干燥程度、 粘稠度、菌落隆起情况、边缘是否 整齐等角度描述四大类型菌群的菌 落形态特征
观察要求
霉菌菌丝的典型结构3.曲霉的足细胞
足细胞
分生孢子
霉菌菌丝的典型结构4. 毛霉的孢子
微生物的第四大类：酵母菌
假丝
❖ 酿酒 酵母
实验要求
❖ 每位同学必须观察的涂片为： 细菌三型涂片、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、
四联球菌、八叠球菌、金黄色球菌、放线菌、 酿酒酵母、青霉、曲霉、匍枝根霉
实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
护的基本知识
使用油镜观察细菌的几种基本形态 用悬滴法在高倍镜或油镜下观察细菌的
运动
显微镜油镜使用的原理
普通光学显微镜 欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜
欧林巴斯（OLYMPUS）相差显微镜
普通光学显微镜Ⅰ
显微镜的构造 1.光学部分:接目镜 、
接物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等). 它 使检视物放大,造成物象. 2.机械部分:镜座、镜 臂、镜筒、物镜转换器、 载物台、载物台转移器、 粗调节器、细调节器等部 件.它起着支持 调节 固定 等作用.
普通光学显微镜Ⅱ
显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数=接物镜放大倍数× 接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
2. 打开主开关。 3. 移动电压调整旋，使亮度 适中。 4. 把标本固定在再物台上。 5. 放松粗调锁挡。 6. 用低倍物镜，旋转粗调和 微控制钮来进行对焦。 7. 调节双目镜筒间距和视度 差。 8. 再适当调节照明度。 9. 使焦点正确地对准标本。
11. 调节孔径光栏。 12. 依次用低、中、高倍镜 观察。 13. 油镜观察：与普通光学 显微镜方法一致。 14. 观察完毕，复原：先将 电压调节旋钮复原，关闭主 开关，切断电源，放开粗调 锁挡。油镜的处理与普通光 学显微镜方法一致。 15. 放入保存箱中。
实验程序III
细菌三种基本形态的观察：
菌落形态观察和个体形态观察，这里主要指 个体形态的观察。 1. 结合油镜的使用，观察三张细菌染色片（球 状菌、杆状菌、和螺旋状菌），边观察边绘图。 2. 看示范镜：观察双球菌、四联球菌察（示范）： 一般采用水浸片法、悬滴法、 半固体培养法，常用水浸法 和悬滴法来观察细菌的运动 性。 1. 水浸片法 2. 悬滴法
实验一-光学显微镜的使用与微生物观察
实验一光学显微镜的使用与微生物观察第一节普通光学显微镜的使用一、实验目的1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。
2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。
3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。
二、基本原理（一）普通光学显微镜的构造普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。
1、机械系统机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。
（1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。
（2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。
（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。
镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。
镜筒长度一般固定，通常是160mm。
有些显微镜的镜筒长度可以调节。
（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。
为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。
转动物镜转换器可以选用合适的物镜。
转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。
（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。
载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移动。
有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。
（6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。
粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。
图1-1 普通光学显微镜的构造1. 镜座2. 镜臂3. 镜筒4. 转换器5. 载物台6. 压片夹7. 标本移动器8. 粗调螺旋9. 细调螺旋10. 目镜11. 物镜12. 虹彩光阑（光圈） 13. 聚光器 14. 反光镜2、光学系统光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。
（1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。
实验指导_实验一、显微镜的使用和微生物形态的观察
实验一显微镜的使用和微生物形态的观察一、目的要求1、熟悉普通光学显微镜的构造及其使用方法。
2、了解油镜的原理，并掌握其使用方法。
3、观察各种染色标本，认识微生物的基本形态和特殊结构。
二、基本原理显微镜包括普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
微生物个体微小，难于用肉眼观察形态结构，只有借助显微镜，才能对其进行研究和利用。
普通光学显微镜是一种精密的光学仪器，是观察微生物最常用的工具。
细菌等原核细胞型微生物个体微小，一般需要使用油镜观察其形态结构。
而油镜头晶片极小，投入光线少，从载玻片透过光线，又被空气折射（空气折光广率1.00、玻璃折光率为1.52），更不易射入镜头内，致使光线较弱物像不清。
当在镜头和载玻片之间滴加香柏油后，由于香柏油折光率为1.515，与玻璃相近，可消除光线通过玻璃与物镜间空气时发生折射现象，避免光线损失，使亮度和清晰度都得到了提高，几乎可以看清所有细菌。
三、实验材料及仪器（1）标本及试剂：微生物标本片、香柏油、二甲苯。
（2）仪器及其他用具：普通光学显微镜、擦镜纸等。
四、实验步骤1.普通光学显微镜的构造及使用方法。
1）普通光学显微镜的构造。
普通光学显微镜有机械部分和光学部分组成。
A．显微镜的机械部分。
包括镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、推动器、粗调节器（粗调螺旋）和细调节器（微调螺旋）等部件（图1-1）普通光学显微镜机械部分各部件的构造与功能见表1-1B．显微镜的光学系统。
由反光镜、聚光镜、物镜、目镜、虹彩光圈等组成，光学系统使标本物像放大，形成倒立的放大物像。
表1-2普通光学显微镜光学系统的构造与功能2）普通显微镜的使用①取镜。
从镜箱中取镜时，一手握镜臂，一手托镜座，保持镜体直立，以防反光镜及目镜脱落被摔坏，将显微镜放置于平稳的实验台上。
端正坐姿，镜检时两眼同时睁开，单目显微镜一般用左眼观察，用右眼帮助绘图或做记录。
双目显微镜用双眼观察。
②使低倍镜与镜筒呈一直线，调节反光镜，让光线均匀照射在反光镜上，电光源显微镜打开照明光源，并使整个视野都有均匀的照明。
环境微生物学-环境微生物学-实验一 显微镜使用及微生物观察
实验一：显微镜的使用及菌体形态观察一、实验目的1、掌握光学显微镜的结构、原理，学习光学显微镜的操作方法和保养。
2、观察细菌、放线菌、真核微生物的个体形态及真菌孢子类型，学习生物图的绘制。
3、学习用压滴法制作标本片。
二、实验仪器和材料显微镜、载玻片、盖玻片，75%二甲苯、吸管、烧杯，香柏油，擦镜纸、吸水纸、浮游生物网示范片：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、青霉、曲霉、根霉、梨头霉、毛霉。
三、实验原理（一）显微镜的结构和光学原理显微镜分机械装置和光学系统两部分。
1、机械装置（1）镜筒：镜筒上端装目镜，下端接转换器。
镜筒有单筒和双筒两种。
单筒有直立式和后倾斜式（倾角为45o）。
双筒都是倾斜式的，并有屈光度调节装置，以备视力不同者调节使用。
两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用。
（2）转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有三个孔或四个孔。
不同规格的物镜旋转安装在各孔上，在显微镜不使用时，旋下物镜，用护盖盖住。
（3）载物台：载物台为方形（多数）或圆形的平台，中间有一光孔，孔的两侧各装一个夹片，右端夹片固定，左端夹片可旋转，载物台上还有移动器（其上有刻度标尺，用以标记玻片的位置），可纵向和横向移动，移动器的作用是夹住和移动标本片。
（4）镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。
镜臂有固定式和活动式（可改变倾斜度）两种。
有弧形和折形两种。
移动显微镜时用手握住镜臂进行移动。
（5）镜座：镜座为马蹄形和方形，具有一定的质量，支撑整台显微镜，马蹄形的镜座在其上有一可旋转的反光镜。
（6）调节器：调节器包括粗螺旋调节器和细螺旋调节器。
可调节物镜与所需观察的物体之间的距离。
2、光学系统及其光学原理显微镜的总放大倍数为物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。
（1）目镜目镜一般有10×、16×两种，高级的显微镜还有5×和20×。
目镜上标有：N.A.1.25、100×、“OI”、160/0.17、0.16等字样，其中：N.A.1.25为数值孔径，100×为放大倍数，“OI”（即Oil immersion ）表示油镜、160表示镜筒长，0.17表示要求盖波片的厚度，0.16为工作距离。
光学显微镜的使用和微生物形态观察
(1)光谱分析 法的发展状 况。
什么是仪器分析
分析化学是化学量测和表征的科学，仪器 分析是分析化学重要的组成部分。
化学量测— 获取指定体系中有关物质的质、量、
和结构等各种信息；
表征—是精确地描述其成分、含量、价态、状态、
结构和分布等特征。
光学分析法（optical analysis)：基于物质发射的电磁辐射
实训一 光学显微镜的使用和微生物形态观察
一、目的要求 1．学习普通光学显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。 2．学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3．掌握微生物临时装片制作技术。
二、器材 1.菌种：啤酒酵母。 2.溶液或试剂：香柏油、二甲苯 3.仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、酒精灯、载玻片、接种环等
2）高倍镜操作方法 将低倍镜观察到的目标移动至视野中央-->将低倍镜镜头转换成高倍 镜镜头-->用微调焦螺旋调至清晰。 注意：高倍镜观察时，光线需增强。
3）油镜的操作方法
将高倍镜观察到的目标移动至视野中央将高倍镜镜头挪开，于载 玻片上滴一滴石蜡油将油镜镜头移动至视野中央，让油镜镜头浸 入石蜡油（至油晕不再扩大为止）用微调焦螺旋调节至清晰
注意：油镜的操作需要较强的Байду номын сангаас线，故需将光线调至最强。 油镜用后处理： 第一遍：用擦镜纸拭去镜头上的镜油 第二遍：用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去头上残
留的油迹 第三遍：再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。
（二）制作临时装片观察酵母菌
1.制作酵母菌临时装片 2.低倍镜观察 3.油镜观察
四、实验报告
绘制酵母菌图
五、思考题
1、用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加 滴什么油？起什么作用？
实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察本次实验主要介绍了显微镜油镜的使用以及细菌形态的观察。
显微镜是生物科学中最基本最必要的仪器，也被称为生命科学研究的窗口。
而观察细菌形态则是微生物学重要的研究内容之一，对于深入了解微生物的特性和分类十分关键。
一、显微镜油镜的使用1、准备工作在使用显微镜前，需要对仪器做一些准备工作，具体如下：（1）检查显微镜是否清洁干净。
使用棉花棒和无水酒精擦拭镜头和接口。
（2）插入镜片，拧紧螺丝。
注意，平光镜的凹面朝上。
（3）透镜的高度应调整至最高点，油镜周围涂上润滑油。
（4）在准备好玻片后，使用无菌针将样本划到玻片上。
2、操作步骤（1）将玻片插入载置物台。
调整光源，使其在镜片下方成圆形状。
（2）使用低倍放大的物镜，在载置物台下调整样本位置，然后转动焦点，调整到最清晰的位置。
（3）切换到高倍物镜。
在不移动载置物台的情况下，调整焦距直至视野内的细胞详细可见。
（4）将油镜轻轻接触载置物台上的镜片，调节光源以得到最佳观察效果。
（5）旋转调节管，使细胞从上到下等比例进入视野，观察细菌的形态、大小、数量等。
二、细菌形态的观察1、细菌分类根据细菌的细胞形态、大小、结构和移动方式等特征，可以将细菌分为不同的分类。
细菌形态既包含单细胞长条状物、圆球体等基本形态，又包括复杂的细胞、菌株组成的群体等。
常见的细菌形态有以下几种：（1）球菌（cocci）：球形或椭圆形的细胞。
（2）杆菌（bacilli）：棒状或柱状的细胞。
在实验过程中，使用显微镜观察样本，发现细菌形态上虽然存在一定的差异，但一般表现为以下情况：（1）球菌或细圆菌：呈球形，直径一般在0.5-2μm之间。
（3）螺旋菌：呈螺旋形，长度几乎无限制，直径0.5-1μm左右。
然而，即使细菌大小、形态有所不同，它们的细微结构也存在着明显的相似性，这种结构相似性在分类学上具有相当的意义。
细菌形态的观察是微生物学中非常重要的基础工作，通过观察细菌的形态、大小、数量等，能够更好地了解微生物的生长繁殖规律，对于深入研究微生物的特性、分类以及对环境的影响等方面具有非常重要的价值。
试验一显微镜的使用及微生物形态的观察
三、实验步骤
(一)显微镜的结构和各部分的作用 机械部分主要包括:
1.镜筒 2.载物台 3.调节器
光学部分主要包括:
1.接目镜 2.接目镜 3.集光器 4.反光镜
显微镜的结构
三、实验步骤
(二)显微镜的使用和保护方法 1.低倍镜的使用方法 2.高倍镜的使用方法
三、实验步骤
3.显微镜的保护法
一、实验目的
了解活性污泥或生物膜中微生物及微型动物 的数量及生长状况。
二、材料与器皿
(一)显微镜、载玻片、盖玻片、微型动物计数板； (二)活性污泥(或生物膜)样品。
三、方法与步骤
(一)压片标本的制备 1. 取活性污泥法曝气池混合液一小滴，放在洁净 的载玻片中央(如混合液中污泥较少，可待其沉淀 后，取沉淀的活性污泥一小滴放在载玻片上；如 混合液中污泥较多，则应稀释后进行观察)。
实验一 显微镜的使用及微生物 形态的观察
一、实验目的
1.学习普通光学显微镜的使用方法。 2.结合生物滤池生物膜及曝气池活性污泥的观
察,认识原生动物、菌胶团等微生物的形态,并 学习测量微生物大小的方法。
二、实验器材
1.生物滤池滤料、活性污泥法曝气池混合液。 2.显微镜、目测微尺、物测微尺、载玻片、
(1)显微镜应放置在干燥的地方,使用时避免 强烈的日光照射。
(2)接物镜或接目镜不清洁时,应当用擦镜纸 或软绸揩擦。
(3)用完显微镜后,应当立即放到镜匣中。
三、实验步骤
(三)活性污泥和生物膜的观察
1.标本的制备
(1)活性污泥
取活性污泥法曝气池混合液一小滴，放 在洁净的载玻片的中央(如混合液中污泥较 少，可待其沉淀后,去沉淀污泥一小滴加到 载玻片上；如混合液中污泥较多，则应稀 释后进行观察)显微镜的使用及微生物形态 的观察。
《食品微生物》实验一 ：显微镜的构造、使用及细菌基本形态观察20190917
金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 炭疽芽孢杆菌
细菌三型片 Leabharlann 放线菌细菌名称形态？例如长杆状、 短杆状 、球状。
曲 霉
青霉菌
分生孢子
六、显微镜的擦拭与维护观察结束后，先降载物台，取下载玻片，用擦镜纸擦周围的油。用擦镜纸分别擦拭物镜和目镜。先擦镜头上的油，沾二甲苯擦，擦镜纸再擦。 将物镜转成倒“八”字形，低倍镜向前，高倍镜向后。 同时把聚光镜降下，以免物镜和聚 光镜发生碰撞危险。把显微镜放回原处。 “两低一个倒八字”
光学系统：物镜：是显微镜中最重要的部分，由许多块透镜组成。其作用是将标本上的待检物进行放大，形成一个倒立的实像，一般显微镜有3~4个物镜，根据使用方法的差异可分为干燥系和油浸系两组。干燥系物镜包括低倍物镜（4~10x）和高倍物镜（40~45x），使用时物镜与标本之间的介质是空气；油浸系物镜（90~100x）在使用时，物镜与标本之间加有一种折射率与玻璃折射率几乎相等的油类物质（香柏油）作为介质。目镜：一般由2~3块透镜组成。其作用将由物镜所形成的实像 进一步放大，并形成虚像而印入眼帘。一般显微镜的标 准目镜是10x。
四、操作步骤1.接通电源：根据所用物镜的放大倍数，调节光亮度调节钮、 调节虹彩光圈的大小，使视野内的光线均匀、 亮度适宜。2.油镜的使用（观察细菌）：在待检部位加一滴香柏油，固定到载物台上。高倍镜（油镜）使用方法：首先，将油镜转入光路，将聚光镜升至最高位置并开足光圈，获得较强光线。其次，侧面注视，用粗调节钮小心上升载物台，使油镜浸到香柏油内，并压住油向四周扩散，再稍微上升载物台，镜头有压缩迹象。最后，眼睛对准目镜，先用粗调焦旋钮慢慢下降载物台，然后再用细调焦旋钮调出清晰图像为止，仔细观察并作记录。如果油镜离开油面仍未找到，重复上述过程。
实验一显微镜油镜的使用及微生物形态观察
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（镜臂）
（粗调节器） （细调节器） （载物台调节器）
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二、实验原理（二）
2、油镜的工作原理
普通光学显微镜的物镜通常有低倍物镜（10×），高倍 物镜（40×），和油镜（100×）三种。
➢ 油镜的识别：油镜是三者中放大倍数最大的，因使用时必须 浸于香柏油内，故称油镜。油镜与其他物镜有以下区别：
（4）切不可将高倍镜转动经过加有香柏油的区域。
【油镜头的保护】
（1）油镜头使用完结后，必须用擦镜纸滴加少量乙醚与无水
乙醇的混合液或二甲苯，将油擦洗干净（混合液或二甲苯
用量宜少，以免镜片间粘胶溶解）。
（2）将光源灯亮度调至最低后关闭，拔下电源插头，然后把
物镜转成“八”字或将最低放大倍数物镜转到工作位置，
（1）油镜一般是所有物镜中最长的； （2）油镜头上标有其放大倍数 “100×”； （3）不同厂家生产的显微镜，常在不同镜头上标有不同颜色
的线圈以示区别，使用时应先熟悉一下油镜头上的线圈颜色， 以防用错物镜。
➢ 基本原理：用油镜观察标本、是在使用高倍镜的基础上，采 用同玻璃折光率（n=1.52）相似的油状物（如香柏油、液体 石腊等），滴加在标本与油镜头中间，以避免光线散射，提 高显微镜的清晰度和分辨精能选力ppt课。件使观察物象更加清楚明了4 。
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【注意事项】
（1）当油镜头与标本片几乎接触时，不可再用粗调螺旋向上 移动载物台或下降油镜头，以免损坏玻片甚至压碎镜头。
（2）油镜头和玻片只能用擦镜纸擦拭，不能用手、棉布或其 他纸张擦拭。
（3）香柏油的用量以1-2滴、能浸到油镜头的中间部分为宜， 用量太多则浸染镜头，太少则视野变暗不便观察。
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3、霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝
和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产 生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝 体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别 不同种类霉菌的重要依据。
毛霉与根霉
青霉
分生孢子梗
分生孢子
小梗 梗基 附枝
曲霉
顶囊 分生孢子梗
分生孢子 次生小梗 初生小梗
（5）油镜观察
①用粗调节器将镜筒提起约2㎝，将油镜转至正下方。
②在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油，切勿加多。 ③从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油 镜浸在香柏油中，其镜头几乎与标本相接，应特别 注意不能压在标本上，更不可用力过猛，否则不仅 压碎玻片，也会损坏镜头。 ④标本观察完毕后，转动粗调节器将镜筒升起，取下 标本玻片。立即用擦镜纸将镜头上的香柏油擦净， 然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹， 最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。
足细胞
四、器材
显微镜、细菌三型涂片、霉菌
和放线菌的永久玻片等。
五、操作步骤
（1）置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约 3-4 ㎝，镜检者姿势要端正，一般用左眼观察，右眼便于绘图 或记录，两眼必须同时睁开，以减少疲劳，亦可练习左右 眼均能观察。
（2）调节光源、光线较强的天然光源宜用平面镜；光线较 弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜。
（4）高倍镜观察将高倍镜转源自正下方，在转换物镜时，需用眼睛在侧面 观察，避免镜头与玻片相撞。如果高倍镜触及载玻片应
立即停止旋动，说明原来低倍镜就没有调准焦距，目的
物并没找到，要用低倍镜重调，如果调对了，换高倍镜 时基本可以看到目的物，若有点模糊，用细调节器调就 清晰可见。找到最适宜观察的部位后，将此部位移至视 野中心，准备用油镜观察。
转换器（nosepiece）：为两个金属碟所合成的一个转盘， 其上装 3 - 4个物镜 , 可使每个物镜通过镜筒与目镜构成 一个放大系统。 载物台（stage）：又称镜台，为方形或圆形的盘，用以载 放被检物体，中心有一个通光孔。在载物台上有的装有 两个金属压夹称标本夹，用以固定标本；有的装有标本 推动器，将标本固定后，能向前后左右推动。有的推动 器上还有刻度，能确定标本的位置，便于找到变换的视 野。 调焦装置：是调节物镜和标本间距离的机件，有粗动螺旋 （coarse adjustment）即粗调节器和微动螺旋（fine adjustment）即细调节器，利用它们使镜筒或镜台上下移动， 当物体在物镜和目镜焦点上时，则得到清晰的图像。
六、思考题和作业题
1、使用油镜观察时，为什么要在载玻片上滴加 香柏油？ 2、镜检玻片标本时，为什么要先用低倍物镜观
察，而不是直接用高倍物镜或油镜观察？
3、绘制青霉和根霉图
显微镜是由机械装置和光学系统两大部分组成。
1．机械装置
镜座（base）和镜臂（arm） 镜座位于显微镜底部 , 呈马蹄形，它支持全镜。镜 臂有固定式和活动式两种，活动式的镜臂可改变角 度。镜臂支持镜筒。 镜筒（body tube） 是由金属制成的圆筒，上接目镜，下接转换器。镜 筒有单筒和双筒两种，单筒又可分为直立式和后倾 式两种。而双筒则都是倾斜式的，倾斜式镜筒倾斜 45°。双筒中的一个目镜有屈光度调节装置，以备 在两眼视力不同的情况下调节使用。
聚光器（condenser）：光源射出的光线通过聚光器汇聚成光锥照射 标本，增强明度和造成适宜的光锥角度，提高物镜的分辨力。聚 光器由聚光镜和虹彩光圈（iris diaphragm）组成，聚光镜由透镜 组成。虹彩光圈由簿金属片组成，中心形成圆孔，推动把手可随 意调整透进光的强弱。调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小，可 得到适当的光照和清晰的图像。 光源（light source）：较新式的显微镜其光源通常是安装在显微镜的 镜座内，通过按扭开关来控制；老式的显微镜大多是采用附着在 镜臂上的反光镜，反光镜是一个两面镜子，一面是平面，另一面 是凹面。在使用低倍和高倍镜观察时，用平面反光镜；使用油镜 或光线弱时可用凹面反光镜。 滤光片（filter）：可见光是各种颜色的光组成的，不同颜色的光线波 长不同。如只需某一波长的光线时，就要用滤光片。选用适当的 滤光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度。滤光片有 紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色的，分别透过不同波长 的可见光，可根据标本本身的颜色，在聚光器下加相应的滤光片。
2．光学系统 物镜（objective）：安装在镜筒下端的转换器上，因接近 被观察的物体，故又称接物镜。其作用是将物体作第一 次放大，是决定成像质量和分辨能力的重要部件。物镜 上通常标有数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等主 要参数。如10×/0.25 ；160/0.17 ，其中 “10 ×”表示放 大倍数，“0.25” 表示数值孔径（numerical aperture）， “160/0.17”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度 （m m）。 目镜（coular lens）：装于镜筒上端，由两块透镜组成。目 镜把物镜造成的像再次放大，不增加分辨力，上面一般 标有4×、10×、16×等放大倍数，可根据需要选用。一 般可按与物镜放大倍数的乘积为物镜数值孔径的 500-700 倍，最大也不能超过 1000 倍的选择。目镜的放大倍数过 大，反而影响观察效果。
三、基本原理 1、细菌的个体形态是指细菌细胞的大小， 形状等特征，利用观察个体形态对细菌 进行初步识别和鉴定。
2、放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类
革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体， 紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌 丝，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气
生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。
（6）观察后的处理工作
擦完后，把物镜转离光轴，把反光镜转到与载 物台垂直的方向，以减少灰尘粘落上面，而后 罩上镜套，小心的放回镜箱内，保存备用。 注意：微生物标本片，多用涂片法制成，观察 完毕，不能用力擦去玻片上的镜油，只能用擦 镜纸轻轻压吸或滴一滴二甲苯用擦镜纸轻拉。 示教片看完处理后应放回原处。
（3）低倍镜观察
检查的标本需先用低倍镜观察，因为低倍镜视野较大， 易发现目标和确定检查的位置。
将三型涂片玻片标本置镜台上，用标本夹夹住，移动推 动器，使观察对象处在物镜正下方，转动粗调节器，物 镜降至距标本约0.5cm处，由目镜观察，此时可适当地 缩小光圈，否则视野中只见光亮一片，难见到目的物， 同时用粗调节器慢慢升起镜筒，直至物像出现后再用细 调节器调节到物像清楚时为止，然后移动标本，认真观 察标本各部位，找到合适的目的物，并将其移至视野中 心，准备用高倍镜观察。
实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察
一、目的要求
1．熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能； 2．学习并掌握油镜的原理和使用方法； 3．学习观察微生物的个体形态； 4．学会生物图的绘制。
二、显微镜的基本构造
1. 物镜转换器 2. 接物镜 3.游标卡尺 4.载物台 5.聚光器 6. 彩虹光阑 7.光源 8. 镜座 9. 电源开关 10. 光源滑动变阻器 11. 粗调螺旋 12. 微调螺旋 13. 镜臂 14.镜筒 15.目镜 16.标本移动螺旋