酶活力的测定130304
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a、控制试样质量，含量高时，少取样或稀释试 液；含量低时，可多取样或萃取富集
b、如果溶液已显色，则可通过改变比色皿的厚 度来调节吸光度大小
c、选择适当的参比溶液
4．制作标准曲线
OD
0.80
ODx
0.60
c1 c2 c3 c4
0.40
0.20
0.00
0
1.0 2.0
ODx cx cx
3.0 4.0 c(mmol/L)
2．配制系列浓度的酪氨酸标准溶液
管号
0 1 2 3 4 5 6
酪氨酸浓度 （μg/ml）
0 10 20 30 40 50 60
加 100μg/ml 酪氨酸的量 加蒸馏水的量
（ml）
（ml）
0
10
1
9
2
8
3
7
4
6
5
5
6
4
用 5 或 10ml 刻度移液管移取
操作解释
为什么酪氨酸要干燥至恒重？ 为什么酪氨酸要称准至0.1000g？ 为什么酪氨酸用盐酸溶解？
三、试剂
10﹪ CL3CCOOH溶液 0.55 mol/L 碳酸钠溶液 0.5 mol/L NaOH溶液 0.1 mol/L HCL溶液 缓冲溶液 福林试剂 显色剂 一种杂多酸
磷钼酸 H3[P(Mo3O10)4] 磷钨酸 H3[P(W3O10)4]
福林试剂的配制
Na2WO4·2H2O 100g
Na2MoO4·2H2O 25g
磷酸: pKa1 = 2.12 pKa2 =7.21 pKa3 = 12.67
Ka1 = 7.52×10-3 Ka2 = 6.23×10-8 Ka3 = 2.2×10-8
（3）硼砂—氢氧化钠缓冲溶液 （pH=10，2709酶）
A液：0.055mol/L Na2B4O7 ·8 H2O
19g Na2B4O7 ·8 H2O B液：0.2 mol/L NaOH
pH
pH最适 缓冲溶液
时间
t0 t= t0
3.0 10min
7.5 10min
10 10min
Na2WO4 Na2MoO4 H2O H3PO4 HCL
Li2SO4 Br2
2．显色
显色剂 福林试剂→ 亮金黄色
显色反应
钼蓝+钨蓝 福林试剂 + 酪氨酸 OH- 蓝色物质
HO — 还原性
—CH2—CH—COOH NH2
福林—酚法测定蛋白酶活力
配制系列浓度的酪氨酸标准溶液，在一定条 件下（T、pH、t）与福林试剂显色后，测定光密 度OD值，绘制标准曲线。
精称酶制剂，配成适当浓度的溶液。以过量 酪素为底物，在一定温度、pH下与上述酶液作用 一定时间，用三氯醋酸终止反应，使未水解的酪 素沉淀，过滤后移取滤液，加入碳酸钠调节pH为 碱性，再加入福林试剂，显色后测定光密度，与 标准曲线比较，计算出被测酶制剂的活力。
4．描点作图
（1）画图求直线斜率的倒数K （2）计算K （3）直接查取 （4）计算机处理，回归曲线：C=K.OD
（1）画图求直线斜率的倒数K
ΔC K=
ΔOD
（μg/ml OD）
OD
0.7
0.6 0.5
0.4
0.3
ΔOD
0.2
ΔC
0.1
0 10 20 30 40 50 60
C（μg/ml）
（2）计算K
3.朗伯-比尔定律及其应用
透光度：为透射光的强度It 与入射光强度I0之比，
有色真溶液
即 T= It/I0
C 入射光强度I0
透过光强度It
吸光度: 为透光度倒数的
L
对数，用A表示，
即 A=lg1/T=lgI0/It
3．朗伯-比尔定律及其应用
E = K·Ｃ·L
有色真溶液
= K′· C
=lg(I0/I) = - lg T
中性蛋白酶
1398 pH最适= 7～7.5；166 pH最适= 7～8
碱性蛋白酶
2709 pH最适= 9 ～11； 209 pH最适= 9.5～11
（3）温度对酶反应的影响
a.温度升高,酶促反应速度加快
(温度系数Q10：反应温度提高 10C，其反应速度与原来的反 应速度之比。Q10多为1-2)。
Cn Kn = ODn
K1+K2+K3+K4+K5 K=
5
（3）直接查取
（二）测定蛋白酶活力—实测
1．缓冲溶液的配制 2．底物配制 3．待测酶液配制 4．测定
1．缓冲溶液的配制
酸性蛋白酶 如：537 pH最适=3.0 柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液 pH=3.0
中性蛋白酶 如：1398 pH最适 =7～7.5； 0.02mol/L的磷酸缓冲溶液 pH=7.5
反应速度不再增加，达最pH值对酶反应的影响
pH值影响酶活力的原 因有以下几点：
a. 影响酶分子构象的稳定性。 b. 影响酶分子（包括辅因子）
极性基团的解离状态，使 其荷电性发生变化 c.影响底物分子的解离状态
根据酶的最适pH分类
酸性蛋白酶
3350 pH最适= 2～4； 7401 pH最适= 3.0
3．系列浓度的酪氨酸显色并测OD值
酪氨酸标准溶液1ml 5ml0.55mol/L Na2CO3
福林试剂1ml
摇匀 40℃水浴 10分钟
蓝色
冷却
1cm比色皿 680nm波长
0号调零，测OD值
说明
（1）各试剂均用刻度移液管移取 （2）显色后需冷却到室温 （3）每一点测两份，ΔOD≤0.01
共3×6＝18支干试管
b.另一方面,温度升高,酶的高
级结构将发生变化或变性，导
T最适
致酶活性降低甚至丧失，反应
速度很快下降。
（4）作用时间对酶反应的影响
Q（反应物的消耗量或生成物的生成量)
t0（反应初速度时间） t
（5）酶浓度对酶反应的影响
（6）激活剂对酶反应的影响
能提高酶的活性或使酶从无活性变为有活 性的物质，都称为激活剂
第三章 蛋白酶活力的测定
一、概述 二、测定原理 三、试剂 四、操作 五、计算 六、注意事项
一、概述
1．酶的概念 2．影响酶催化反应的因素 3．酶的活力 4．测定方法 5．测定意义
1. 酶的概念
酶：一类由活性细胞产生的具有催化作用和高 度专一性的特殊蛋白质。简单说，酶是一 类由活性细胞产生的生物催化剂。
酶反应速度：用单位时间内、单位体积 中底物的减少量或产物的增加量来表示。单位： 浓度/单位时间
蛋白酶的活力： 在一定温度、pH值下，1g酶粉
或1mL酶液每分钟催化水解酪蛋白 （或血红蛋白）所产生的酪氨酸的 质量（微克数，μg）
单位/g 或单位/mL
4 测定方法
化学测定法、光学测定法、气体测定法
5 测定意义
入射光强度I0
透过光强度It
C
透光率T = I I0
E —— 吸光度
L
A —— 消光度
OD —— 光密度
朗伯-比尔定律的应用
OD= K·Ｃ·L = K′· C组分
[X] → [RX] → OD
[X]
OD
注意
①选择λmax λmax = 680nm
②OD值的范围 OD = 0.2～0.7
吸光度范围的控制 A：0.20～0.70； T：20%～65%
1000ml
8g NaOH
A液50ml
H2O
B液43ml
1000ml 200ml
硼砂—氢氧化钠缓冲溶液的pH计算
弱酸—弱酸盐缓冲体系 Na2B4O7 + 7H2O ═ NaOH + 4H3BO3
H3BO3 + H2O ═ B(OH)4- + H+ 一元弱酸Ka = 5.6×10-10
pH = pka- lg（C酸/C盐） = 9.24 - lg（C酸/C盐）
（二）测定蛋白酶活力——实测 1．缓冲溶液的配制 2．底物配制 3．待测酶液配制 4．测定
（一）制作标准曲线
1．配制100μg/mL酪氨酸标准溶液 0.1000g酪氨酸 0.1mol/LHCl 100ml容量瓶
移取10ml
1mg/ml=1000μg/ml 0.1mol/LHCl 100ml容量瓶
100μg/ml
➢ 存在：动物内脏、植物茎叶、果实 微生物细胞
➢ 生物催化剂 ➢ 特殊催化功能的蛋白质
酶学发展史
公元前两千多年，我国已有酿酒记载。 一百余年前，Pasteur认为发酵是酵母细胞生命活动的 结果。 1877年，Kuhne首次提出Enzyme一词。 1897年，Buchner兄弟用不含细胞的酵母提取液，实现 了发酵。 1926年，Sumner首次从刀豆中提纯出脲酶结晶。 1982年，Cech首次发现RNA也具有酶的催化活性，提 出核酶(ribozyme)的概念。 1995年，Jack W.Szostak研究室首先报道了具有DNA连 接酶活性DNA片段，称为脱氧核酶(deoxyribozyme)。
（1）无机离子：金属离子(K+、Na+、 Mg2+、Zn2+ Fe2+、 Ca2+)、阴离子(Cl- Br-)、氢离子 （2）简单有机分子：某些还原剂、乙二胺四乙酸
(3)具有蛋白质性质的大分子物质 主要是激活酶原 无活性的酶原 激活作用 有活性的酶
引起酶反应速度降低的主要原因
斜率 = 浓度/时间 =
酶的作用特点
（一）与一般催化剂的相同点
1.反应前后质与量不变，且用量少 2.缩短到达平衡的时间，不改变平衡常 数 3.只能催化本来进行的反应 4.降低反应所需活化能
酶的分类与命名
酶催化的化学反应性质：氧化还原酶、转移酶、水解酶等 酶在代谢调节中的作用：静态酶、调节酶、潜在酶 酶的来源和作用底物分：动物酶、植物酶、微生物酶 酶的最适作用pH与作用底物分类：酸性、碱性、中性 酶在细胞中合成后存在部分分：胞内酶、胞外酶 酶作用体系是否外加酶分：内源酶、外源酶 酶在基因工程中的应用分：连接酶、聚合酶、内切酶
H2O
100ml
85﹪H3PO4
50ml
浓HCL
100ml
回流
Δ 10hr+
Li2 SO4 50g H2O 50ml
混匀 + 溴水 Δ 15` 冷却 →黄色 → 过滤
金黄色溶液
(1)柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液 （pH=3.0， 537酶 ）
A液：0.1mol/L柠檬酸 21.01g C6H8O7·H2O → 1000ml CH2—COOH HO — C —COOH CH2—COOH
Ka1 = 7.1×10-4 Ka2 = 1.68 10-5 Ka3 = 4.1×10-7
（2）磷酸盐缓冲溶液（1398酶）
A液：0.2mol/L NaH2PO4溶液 31.2g NaH2PO4·2H2O → 1000ml
B液：0.2mol/L Na2HPO4溶液 71.7g Na2HPO4·12H2O → 1000ml
2.影响酶催化反应的因素
底物浓度 pH值 温度 时间 酶浓度、激活剂、抑制剂
（1）底物浓度对酶反应的影响
V Vmax
[S] 当底物浓度较低时
反应速度与底物浓度成正比；反 应为一级反应。
V Vmax
[S] 随着底物浓度的增高
反应速度不再成正比例加速；反应 为混合级反应。
V Vmax
[S] 当底物浓度高达一定程度
（4）乳酸—乳酸钠缓冲溶液 pH=3.0
A液：0.2mol/L 乳酸液
9g 乳酸 500ml
B液：0.2mol/L乳酸钠液
11g乳酸钠
500ml
A液: B液=5 : 1混合，再加三倍混合体积水
四、操作手续
（一）制作标准曲线 1．配制100μg/ml酪氨酸标准溶液 2．配制系列浓度的酪氨酸标准溶液
1、底物浓度的降低；
产
2、酶的部分失活；
物 浓
3、产物对酶的抑制；
度
4、产物增加引起的逆反应
速度的增加
时间
酶反应速度曲线
酶催化反应
反应初速度时间内 最适温度 最适pH 饱合底物浓度 在最大活力处比较
3. 酶的活力
酶活力：也称酶活性，指酶催化一定化 学反应的能力。其大小可用在一定条件下，它 所催化的某一化学反应的反应速度来表示，两 者呈线性关系。所以测定酶的活力就是测定酶 的反应速率。
B液：0.1mol/L柠檬酸钠 29.4gNa3C6H5O7·2H2O → 1000ml
用时：A∶B = 18.6∶1.4混合
柠檬酸—柠檬酸钠溶液的pH计算
弱酸—弱酸盐缓冲体系
pH = pka1 - lg（C酸/C盐） = 3.13 - lg（C酸/C盐）
柠檬酸:
pKa1 = 3.13 pKa2 = 4.76 pKa3 = 6.40
① pH=7.2的磷酸盐缓冲溶液
A液 28ml B液 72ml
H2O
1000ml
② pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液
A液16ml B液84ml
H2O 1000ml
磷酸盐缓冲溶液pH值计算
弱酸—弱酸盐缓冲体系
pH = pKa — lg（C酸/C盐） = 7.21 — lg([H2PO4-]/[HPO42-])
酶的活力会下降 酶的催化能力强
二、测定原理
酪蛋白 酶催化 条件
酪氨酸 显色剂
比色，OD
1．酶催化反应
条件： 底物浓度 温度
选择： C0
T最适
措施： C≥ C0 恒温水浴
例子：537 酸性蛋白酶
0.5%酪蛋白 40℃
例子：1398 中性蛋白酶
0.5%酪蛋白 40℃
例子：2709 碱性蛋白酶
0.5%酪蛋白 40℃
b、如果溶液已显色，则可通过改变比色皿的厚 度来调节吸光度大小
c、选择适当的参比溶液
4．制作标准曲线
OD
0.80
ODx
0.60
c1 c2 c3 c4
0.40
0.20
0.00
0
1.0 2.0
ODx cx cx
3.0 4.0 c(mmol/L)
2．配制系列浓度的酪氨酸标准溶液
管号
0 1 2 3 4 5 6
酪氨酸浓度 （μg/ml）
0 10 20 30 40 50 60
加 100μg/ml 酪氨酸的量 加蒸馏水的量
（ml）
（ml）
0
10
1
9
2
8
3
7
4
6
5
5
6
4
用 5 或 10ml 刻度移液管移取
操作解释
为什么酪氨酸要干燥至恒重？ 为什么酪氨酸要称准至0.1000g？ 为什么酪氨酸用盐酸溶解？
三、试剂
10﹪ CL3CCOOH溶液 0.55 mol/L 碳酸钠溶液 0.5 mol/L NaOH溶液 0.1 mol/L HCL溶液 缓冲溶液 福林试剂 显色剂 一种杂多酸
磷钼酸 H3[P(Mo3O10)4] 磷钨酸 H3[P(W3O10)4]
福林试剂的配制
Na2WO4·2H2O 100g
Na2MoO4·2H2O 25g
磷酸: pKa1 = 2.12 pKa2 =7.21 pKa3 = 12.67
Ka1 = 7.52×10-3 Ka2 = 6.23×10-8 Ka3 = 2.2×10-8
（3）硼砂—氢氧化钠缓冲溶液 （pH=10，2709酶）
A液：0.055mol/L Na2B4O7 ·8 H2O
19g Na2B4O7 ·8 H2O B液：0.2 mol/L NaOH
pH
pH最适 缓冲溶液
时间
t0 t= t0
3.0 10min
7.5 10min
10 10min
Na2WO4 Na2MoO4 H2O H3PO4 HCL
Li2SO4 Br2
2．显色
显色剂 福林试剂→ 亮金黄色
显色反应
钼蓝+钨蓝 福林试剂 + 酪氨酸 OH- 蓝色物质
HO — 还原性
—CH2—CH—COOH NH2
福林—酚法测定蛋白酶活力
配制系列浓度的酪氨酸标准溶液，在一定条 件下（T、pH、t）与福林试剂显色后，测定光密 度OD值，绘制标准曲线。
精称酶制剂，配成适当浓度的溶液。以过量 酪素为底物，在一定温度、pH下与上述酶液作用 一定时间，用三氯醋酸终止反应，使未水解的酪 素沉淀，过滤后移取滤液，加入碳酸钠调节pH为 碱性，再加入福林试剂，显色后测定光密度，与 标准曲线比较，计算出被测酶制剂的活力。
4．描点作图
（1）画图求直线斜率的倒数K （2）计算K （3）直接查取 （4）计算机处理，回归曲线：C=K.OD
（1）画图求直线斜率的倒数K
ΔC K=
ΔOD
（μg/ml OD）
OD
0.7
0.6 0.5
0.4
0.3
ΔOD
0.2
ΔC
0.1
0 10 20 30 40 50 60
C（μg/ml）
（2）计算K
3.朗伯-比尔定律及其应用
透光度：为透射光的强度It 与入射光强度I0之比，
有色真溶液
即 T= It/I0
C 入射光强度I0
透过光强度It
吸光度: 为透光度倒数的
L
对数，用A表示，
即 A=lg1/T=lgI0/It
3．朗伯-比尔定律及其应用
E = K·Ｃ·L
有色真溶液
= K′· C
=lg(I0/I) = - lg T
中性蛋白酶
1398 pH最适= 7～7.5；166 pH最适= 7～8
碱性蛋白酶
2709 pH最适= 9 ～11； 209 pH最适= 9.5～11
（3）温度对酶反应的影响
a.温度升高,酶促反应速度加快
(温度系数Q10：反应温度提高 10C，其反应速度与原来的反 应速度之比。Q10多为1-2)。
Cn Kn = ODn
K1+K2+K3+K4+K5 K=
5
（3）直接查取
（二）测定蛋白酶活力—实测
1．缓冲溶液的配制 2．底物配制 3．待测酶液配制 4．测定
1．缓冲溶液的配制
酸性蛋白酶 如：537 pH最适=3.0 柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液 pH=3.0
中性蛋白酶 如：1398 pH最适 =7～7.5； 0.02mol/L的磷酸缓冲溶液 pH=7.5
反应速度不再增加，达最pH值对酶反应的影响
pH值影响酶活力的原 因有以下几点：
a. 影响酶分子构象的稳定性。 b. 影响酶分子（包括辅因子）
极性基团的解离状态，使 其荷电性发生变化 c.影响底物分子的解离状态
根据酶的最适pH分类
酸性蛋白酶
3350 pH最适= 2～4； 7401 pH最适= 3.0
3．系列浓度的酪氨酸显色并测OD值
酪氨酸标准溶液1ml 5ml0.55mol/L Na2CO3
福林试剂1ml
摇匀 40℃水浴 10分钟
蓝色
冷却
1cm比色皿 680nm波长
0号调零，测OD值
说明
（1）各试剂均用刻度移液管移取 （2）显色后需冷却到室温 （3）每一点测两份，ΔOD≤0.01
共3×6＝18支干试管
b.另一方面,温度升高,酶的高
级结构将发生变化或变性，导
T最适
致酶活性降低甚至丧失，反应
速度很快下降。
（4）作用时间对酶反应的影响
Q（反应物的消耗量或生成物的生成量)
t0（反应初速度时间） t
（5）酶浓度对酶反应的影响
（6）激活剂对酶反应的影响
能提高酶的活性或使酶从无活性变为有活 性的物质，都称为激活剂
第三章 蛋白酶活力的测定
一、概述 二、测定原理 三、试剂 四、操作 五、计算 六、注意事项
一、概述
1．酶的概念 2．影响酶催化反应的因素 3．酶的活力 4．测定方法 5．测定意义
1. 酶的概念
酶：一类由活性细胞产生的具有催化作用和高 度专一性的特殊蛋白质。简单说，酶是一 类由活性细胞产生的生物催化剂。
酶反应速度：用单位时间内、单位体积 中底物的减少量或产物的增加量来表示。单位： 浓度/单位时间
蛋白酶的活力： 在一定温度、pH值下，1g酶粉
或1mL酶液每分钟催化水解酪蛋白 （或血红蛋白）所产生的酪氨酸的 质量（微克数，μg）
单位/g 或单位/mL
4 测定方法
化学测定法、光学测定法、气体测定法
5 测定意义
入射光强度I0
透过光强度It
C
透光率T = I I0
E —— 吸光度
L
A —— 消光度
OD —— 光密度
朗伯-比尔定律的应用
OD= K·Ｃ·L = K′· C组分
[X] → [RX] → OD
[X]
OD
注意
①选择λmax λmax = 680nm
②OD值的范围 OD = 0.2～0.7
吸光度范围的控制 A：0.20～0.70； T：20%～65%
1000ml
8g NaOH
A液50ml
H2O
B液43ml
1000ml 200ml
硼砂—氢氧化钠缓冲溶液的pH计算
弱酸—弱酸盐缓冲体系 Na2B4O7 + 7H2O ═ NaOH + 4H3BO3
H3BO3 + H2O ═ B(OH)4- + H+ 一元弱酸Ka = 5.6×10-10
pH = pka- lg（C酸/C盐） = 9.24 - lg（C酸/C盐）
（二）测定蛋白酶活力——实测 1．缓冲溶液的配制 2．底物配制 3．待测酶液配制 4．测定
（一）制作标准曲线
1．配制100μg/mL酪氨酸标准溶液 0.1000g酪氨酸 0.1mol/LHCl 100ml容量瓶
移取10ml
1mg/ml=1000μg/ml 0.1mol/LHCl 100ml容量瓶
100μg/ml
➢ 存在：动物内脏、植物茎叶、果实 微生物细胞
➢ 生物催化剂 ➢ 特殊催化功能的蛋白质
酶学发展史
公元前两千多年，我国已有酿酒记载。 一百余年前，Pasteur认为发酵是酵母细胞生命活动的 结果。 1877年，Kuhne首次提出Enzyme一词。 1897年，Buchner兄弟用不含细胞的酵母提取液，实现 了发酵。 1926年，Sumner首次从刀豆中提纯出脲酶结晶。 1982年，Cech首次发现RNA也具有酶的催化活性，提 出核酶(ribozyme)的概念。 1995年，Jack W.Szostak研究室首先报道了具有DNA连 接酶活性DNA片段，称为脱氧核酶(deoxyribozyme)。
（1）无机离子：金属离子(K+、Na+、 Mg2+、Zn2+ Fe2+、 Ca2+)、阴离子(Cl- Br-)、氢离子 （2）简单有机分子：某些还原剂、乙二胺四乙酸
(3)具有蛋白质性质的大分子物质 主要是激活酶原 无活性的酶原 激活作用 有活性的酶
引起酶反应速度降低的主要原因
斜率 = 浓度/时间 =
酶的作用特点
（一）与一般催化剂的相同点
1.反应前后质与量不变，且用量少 2.缩短到达平衡的时间，不改变平衡常 数 3.只能催化本来进行的反应 4.降低反应所需活化能
酶的分类与命名
酶催化的化学反应性质：氧化还原酶、转移酶、水解酶等 酶在代谢调节中的作用：静态酶、调节酶、潜在酶 酶的来源和作用底物分：动物酶、植物酶、微生物酶 酶的最适作用pH与作用底物分类：酸性、碱性、中性 酶在细胞中合成后存在部分分：胞内酶、胞外酶 酶作用体系是否外加酶分：内源酶、外源酶 酶在基因工程中的应用分：连接酶、聚合酶、内切酶
H2O
100ml
85﹪H3PO4
50ml
浓HCL
100ml
回流
Δ 10hr+
Li2 SO4 50g H2O 50ml
混匀 + 溴水 Δ 15` 冷却 →黄色 → 过滤
金黄色溶液
(1)柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液 （pH=3.0， 537酶 ）
A液：0.1mol/L柠檬酸 21.01g C6H8O7·H2O → 1000ml CH2—COOH HO — C —COOH CH2—COOH
Ka1 = 7.1×10-4 Ka2 = 1.68 10-5 Ka3 = 4.1×10-7
（2）磷酸盐缓冲溶液（1398酶）
A液：0.2mol/L NaH2PO4溶液 31.2g NaH2PO4·2H2O → 1000ml
B液：0.2mol/L Na2HPO4溶液 71.7g Na2HPO4·12H2O → 1000ml
2.影响酶催化反应的因素
底物浓度 pH值 温度 时间 酶浓度、激活剂、抑制剂
（1）底物浓度对酶反应的影响
V Vmax
[S] 当底物浓度较低时
反应速度与底物浓度成正比；反 应为一级反应。
V Vmax
[S] 随着底物浓度的增高
反应速度不再成正比例加速；反应 为混合级反应。
V Vmax
[S] 当底物浓度高达一定程度
（4）乳酸—乳酸钠缓冲溶液 pH=3.0
A液：0.2mol/L 乳酸液
9g 乳酸 500ml
B液：0.2mol/L乳酸钠液
11g乳酸钠
500ml
A液: B液=5 : 1混合，再加三倍混合体积水
四、操作手续
（一）制作标准曲线 1．配制100μg/ml酪氨酸标准溶液 2．配制系列浓度的酪氨酸标准溶液
1、底物浓度的降低；
产
2、酶的部分失活；
物 浓
3、产物对酶的抑制；
度
4、产物增加引起的逆反应
速度的增加
时间
酶反应速度曲线
酶催化反应
反应初速度时间内 最适温度 最适pH 饱合底物浓度 在最大活力处比较
3. 酶的活力
酶活力：也称酶活性，指酶催化一定化 学反应的能力。其大小可用在一定条件下，它 所催化的某一化学反应的反应速度来表示，两 者呈线性关系。所以测定酶的活力就是测定酶 的反应速率。
B液：0.1mol/L柠檬酸钠 29.4gNa3C6H5O7·2H2O → 1000ml
用时：A∶B = 18.6∶1.4混合
柠檬酸—柠檬酸钠溶液的pH计算
弱酸—弱酸盐缓冲体系
pH = pka1 - lg（C酸/C盐） = 3.13 - lg（C酸/C盐）
柠檬酸:
pKa1 = 3.13 pKa2 = 4.76 pKa3 = 6.40
① pH=7.2的磷酸盐缓冲溶液
A液 28ml B液 72ml
H2O
1000ml
② pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液
A液16ml B液84ml
H2O 1000ml
磷酸盐缓冲溶液pH值计算
弱酸—弱酸盐缓冲体系
pH = pKa — lg（C酸/C盐） = 7.21 — lg([H2PO4-]/[HPO42-])
酶的活力会下降 酶的催化能力强
二、测定原理
酪蛋白 酶催化 条件
酪氨酸 显色剂
比色，OD
1．酶催化反应
条件： 底物浓度 温度
选择： C0
T最适
措施： C≥ C0 恒温水浴
例子：537 酸性蛋白酶
0.5%酪蛋白 40℃
例子：1398 中性蛋白酶
0.5%酪蛋白 40℃
例子：2709 碱性蛋白酶
0.5%酪蛋白 40℃