生物药物分析思考题

思考题

*生物药物的特点？

答：组成结构复杂，具有严格的空间构像，以维持其特定的生理功能。要测定分子量（组分相同的、分子质量不同、活性不同）要测定生物活性（和药效相关）要效价测定（除含量测定，要效价测定或酶活力测定表明有效成分含量）要确定结构（如氨基酸序列分析）

*生物制品的质量检定包括哪些方面？

答：理化测定.安全检定效力检定

*生物药物常用的定量方法有哪些？

答：酶法电泳法理化测定生物检定法

*什么是电泳？如何对其分类，分别有哪些？

答：电泳是指带电粒子在电场力的作用下与自身所带相反的电荷方向移动

分类。按支持物可分为：纸电泳，醋酸纤维素薄膜电泳，淀粉凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳。按凝胶形状可分为：水平平板电泳，圆盘柱状电泳，垂直平板电泳。

*影响电泳迁移率的因素包括？

答：，带电粒子的性质，电子带静电荷越多，越接近球形，电泳速度快

，电场强度，越强速度越快溶液的值，对于蛋白质来说，当接近等电点，速度越快，溶液离子强度，离子强度越小，速度越快电渗作用

*血清蛋白常用什么电泳技术分离？核酸常用什么电泳技术分离？

答：血清蛋白：常用醋酸纤维素薄膜电泳；核酸：琼脂糖电泳

*为什么聚丙烯酰胺凝胶电泳是应用最广泛的凝胶电泳技术？

答：聚丙烯酰胺聚合物分子解离基因量很少，故电渗作用小，对样品吸附作用小，容易制备，并可在吸收机械性较好，孔隙可以调节凝胶比重实现可调，具有可拉性分析筛效应，一定范围对热稳定，无色透明，容易观察，丙烯酰胺较纯，可精制，污染小聚丙烯酰胺凝胶在没有吸收利于样品蛋白质电泳后的扫描检测。

*电泳用于测定？其中的作用是什么？

答：主要是用来测定蛋白质的分子量，其中作用有两个：，消除不同蛋白表面表面电荷效应，引起蛋白构象改变，消除蛋白质的结构效应.

*核酸在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率取决于哪三个因素？

答：琼脂糖浓度，核酸分子的大小，核酸的形状

*分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有什么效应与什么效应？

答：分子筛效应和电荷效应

*聚丙烯酰胺凝胶电泳包括连续系统和不连续电泳，其定义和区别分别是什么？

答：.连续系统：缓冲液的离子成分、、凝胶浓度、电位梯度都相同，带电颗粒电泳时仅具有电荷效应、分子筛效应。

.不连续系统：缓冲液离子成分、、凝胶浓度、电位梯度不连续，带电颗粒电泳时具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。

区别：不连续系统能使稀样品在电泳过程中浓缩成层，从而提高分离条带清晰度以及分辨率。

*什么是分子筛效应？

答：分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的

程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。分子量小，阻力小，移动快；分子量大，阻力大，移动慢。

什么是等电点？什么是等电聚焦？

答：在某一的溶液中，当两性例子的正负电荷值相等，该值为等电点。

等电聚焦：在电泳槽中放入载体的两性点解质形成一个由阳极到阴极增加的梯度，当蛋白质放进此体系时，不同蛋白质即移动到或者聚焦于与其等电点相当的值的位置上。

*在生物大分子的高效液相色谱分离分析中，哪些是常用的分离模式？各分离模式的原理和应用对象是什么？

答：常用的分离模式为：吸附色谱，分配色谱，离子交换色谱，体积排阻色谱，亲和色谱

吸附色谱：机理：依靠分离物质和流动相分子竞争固定相的活性位置，从而使溶质洗脱下来

对象：几何异构体，磷脂，甾体，脂溶性维生素，前列腺素

分配色谱：机理：利用被分离物质在两相的分配系数不同而使组分分离

对象：氨基酸，多肽分析，蛋白质分离，碱基核酸和核酸酶，糖类

离子交换色谱：机理：组分离子与树脂上的可交换例子基团进行可逆交换，根据组分离子对树脂的亲和不同而达到分离。

对象：例子或者可离解的化合物，如氨基酸，多肽核酸，核苷和碱基

体积排阻色谱：机理：组分通过体积排阻色谱中的固定相（多孔隙凝胶），产生分子筛效应来实现分离。

对象：高聚物，蛋白质

亲和色谱：机理：样品中各种物质与固定相载体配基之间亲和作用的差别而实现分离

对象：酶，酶抑制剂，抗体，抗原，受体

*简述亲和色谱的分离机理。

答：机理：样品中各种物质与固定相载体配基之间亲和作用的差别而实现分离，，过程是待测物质和配机间的亲和复合物形成及其解离的过程，对于非转移性的吸附的杂质，可用缓冲液洗去。

*什么是生物检定法？

答：生物检定法：利用药物对生物（整体和离体）的作用，来测定其生物活性的一种定量方法。应用范围：药物效价的测定，药物毒性成分和有害物质的限度检查，新药的研发

氨基酸、蛋白质

*氨基酸最常用的鉴别方法是什么？

答：氨基酸的茚三酮检测法，现象：显蓝紫色

*蛋白质多用什么提取？

答：水溶液提取（稀盐溶液提取，以下，碘乙酸防水解），有机溶液提取（乙醇，丙酮，丁醇提取脂类蛋白），表面活性剂提取（非离子型表面活性剂）

*蛋白质的纯化方法有哪些？

答：. 沉淀法（，有机溶剂，盐析，等电点，热处理）. 色谱法（离子交换，亲和，疏水，体积排阻）. 电泳法（聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦）. 离心法. 膜分离法（透析）. 双水相系统萃取法

*什么是盐溶？什么是盐析?