免疫组化病理技术及质量控制方式的研究

２０２１年１２月　第２７期综合医学论坛
免疫组化病理技术及质量控制方式的研究
李跃武
淮安市第二人民医院病理科，江苏 淮安 223002
【摘要】目的：研究免疫组化病理技术及质量控制方法。

方法：从2018年4月至2019年12月间，我院收治的胃肠肿瘤患者中选取150例，数表法随机分成两组：对照组、试验组均为75例。

对照组实施常规免疫组化检验技术，试验组采用PDCA循环法进行质量控制。

比较两组制片优良率和病理诊断结果，评价免疫组化检验质量。

结果：试验组制片优良率为98.67%，病理诊断的确诊率为97.33%，比对照组的90.67%、88.00%要高，有显著性差异(P<0.05)。

相比于对照组，试验组在切片、染色、固定等操作环节的质量评分更高(P<0.05)。

结论：采用免疫组化病理技术进行检验时，实施PDCA循环进行质量控制能提高制片优良率和确诊率，促进检验质量不断提升。

【关键词】免疫组化检验；病理技术；PDCA法；制片优良率；质量评分
[中图分类号]R361.2 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2021)27-0206-02
免疫组化，是利用抗原抗体反应原理，对组织细胞内的抗原进行定位、定性、定量分析，为临床诊治工作提供科学依据[1]。

随着诊断技术进步、检测设备更新，免疫组化检验的应用更加普遍，显著提高了病理诊断水平。

但是，由于操作步骤复杂，开展质量控制工作成为一个要点。

王璇[2]的研究中，将品管圈模式应用于免疫组化的质量控制中，结果显示免疫组化优片率由原来的83.45%提高到92.90%。

本研究选取150例患者作为对象，探讨了免疫组化检验的质量控制方法和效果，报告如下。

1　资料与方法
1.1 一般资料　从2018年4月至2019年12月间，我院收治的胃肠肿瘤患者中选取150例，采用随机数表法划分为对照组、试验组两个组别，均为75例。

对照组中，40例男性患者、35例女性患者，构成比为53.33%、46.67%；最小的患者32岁、最大的患者79岁，计算平均值(5
2.48±9.67)岁；肿瘤直径8～24 mm，平均为(14.67±
3.82)mm；临床分期：II期28例、III期34例、IV期13例。

试验组中，38例男性患者、37例女性患者，构成比为50.67%、49.33%；最小的患者31岁、最大的患者80岁，计算平均值(53.60±9.34)岁；肿瘤直径7～26 mm，平均为(15.16±3.70)mm；临床分期：II期31例、III期30例、IV期14例。

两组临床资料无明显差异(P>0.05)，可进行比较。

纳入要求[3]：年龄18～80岁，临床资料真实完整；对本研究有正确认识，在同意书上签字。

排除患者：血液或免疫系统病变患者，接受放化疗治疗的患者；肿瘤发生远处转移的患者等。

1.2方法　对照组实施常规免疫组化检验技术，操作步骤是：①室温下对肿瘤标本脱蜡切片，先浸泡在3%双氧水中，20 min后取出用磷酸盐溶液冲洗3次。

②使用柠檬酸缓冲液，置于烧杯中加热，依次加入CK19抗体、Ki-67抗体、HBcAg 和HBsAg抗体的切片，持续时间15 min，滴加一抗放在40℃冰箱内。

③使用PBS冲洗液(pH值为7.4)冲洗切片3次。

④室温下向切片分别滴加二抗，继续孵育15 min；然后用PBS冲洗液再次冲洗3次。

⑤使用DAB显色剂，加入切片5～10 min 左右，用苏木精进行染色、水洗、封固，按照规范标准检测即可。

试验组在此基础上进行质量控制，采用PDCA循环管理法：(1)P-计划：首先组建质控小组。

由经验丰富的医务人员组建质控小组，包括科室主任1名、副主任医师2名、副主任技师1名、主管技师1名。

明确各自职责：科室主任是组长，负责总体指导管理；副主任医师负责在患者、医师、技师之间进行沟通；副主任技师负责流程优化和检验监督；主管技师负责落实管理措施。

然后采用鱼骨图，对不合格切片进行回顾分析，明确相关原因，包括：①仪器维护不当；
②人员操作不规范；③试剂更换不及时；④室内管理不到位。

(2)D-实施：根据不合格切片原因，制定针对性的管理措施，包括：①明确组织处理标准，重点是切片、染色、固定等环节，注重实效性。

②不同脱水机的程序要统一，根据组织数量确定更换试剂的时间。

③监测冰箱温度、室内温湿度，新试剂使用前预实验，获得最佳参数。

④对仪器定期检修保养，及时发现故障问题并处理。

同时开展人员培训，在副主任技师和主管技师的指引下，对全科检验人员进行培训，了解国内外前沿技术，既要丰富理论知识，又要增强实操能力。

培训完成后进行考核评价，看各个环节的技术规范是否落实，抽检染色切片评估质量，对整个操作过程进行评分等。

处理完成的组织切片，将评价结果记录在病理信息系统中，方便查询查看。

(3)C-检查：质控小组每月开展一次会议，对本月免疫组化检验工作进行总结，评价管理措施是否落实，并汇总新出现的问题。

检查要点包括：①和手术室护士加强沟通，确保组织离体后30 min内固定，特殊的组织可适当延长时间；②脱水机连续工作后及时更新试剂，标准是脱水3000个蜡块；③新试剂进行效价检验，确定最佳的浓度、孵育时间；④总结仪器常见问题和原因，进一步完善操作规程，提高检测结果的准确性。

(4)A-处理：对于没有解决的问题，进入下一个循环，如此反复循环，促进检验质量不断提升。

1.3观察指标　①评价两组制片优良率，优的标准是：切片厚度均匀、色彩明亮、对比明确且编号清晰；良的标准是：切片编号清晰、色彩明亮，存在轻微褶皱，但没有污染和气泡；差的标准是：切片编号不清晰，存在明显褶皱和较多气泡[4]。

②观察病理诊断结果，分为确诊、误诊漏诊、诊断不明三种情况。

③对免疫组化检验质量进行评分，包括切片、染色、固定三个环节，单项满分10分，操作质量越好、得分就越高[5]。

1.4统计学处理　利用Excel表格记录数据，统计学计算
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采用SPSS 25.0软件。

制片优良率、确诊率的表示形式是(例数，百分率)，检验质量评分的表示形式是(均数±标准差)，分别进行χ2检验和t检验。

P<0.05，代表有显著性差异。

2　结果
2.1制片优良率比较　数据显示，试验组中有74例制片达到优良等级，对照组中有68例达到优良等级，对比可见试验组制片优良率更高(P<0.05)，详见表1。

2.2病理诊断结果比较　数据显示，试验组中有73例患者确诊，对照组中有66例患者确诊，对比可见试验组确诊率更高(P<0.05)，详见表2。

2.3免疫组化检验质量评分比较　数据显示，相比于对照组，试验组在切片、染色、固定等操作环节的质量评分更高(P<0.05)，详见表3。

3　讨论
免疫组化是病理检验中常见的一种技术手段，基本原理是抗体和抗原的结合具有高度特异性。

按照标记物种类不同，主要分为酶法、金法、荧光法、铁蛋白法、自显影法等。

在实际操作时，免疫组化病理技术一环扣一环，前一个步骤会影响后一个步骤。

第一，在取材环节，选取的病变组织体积大小不适，切片太薄或太厚，记录标本时描述存在差异等，就会造成不合格切片。

第二，在固定环节，目的是保持组织内细胞的原来形态，避免组织自溶，为后续染色和观察提供有利条件，通常小样本固定4～6 h，大样本固定18～24 h甚至更长。

第三，在染色环节，需要选择合适的染色剂，要及时更新药物、检查酒精和二甲苯等物质。

如果染色操作不当，或试剂没有及时更新，就会降低切片质量。

在实际检验工作中，如何控制检验质量，成为工作人员的关注重点。

有学者研究指出，制片是免疫组化检验的第一步，要想提高诊断结果的准确性，就必须提高制片质量，满足规范标准的要求[6]。

从已有研究来看，滑洋洋[7]以肝肾组织为对象，从取材、切片、试剂、染色四个方面，分析问题、制定处理措施，为检验工作的开展提供技术支持，结果显示有效制片率明显提高。

本次研究选取150例患者的胃肠肿瘤组织，对照组实施常规免疫组化检验技术，试验组采用PDCA法进行质量控制，包括分析问题原因、制定管理措施、检查管理成果、处理遗留问题等。

结果表明：试验组制片优良率和确诊率更高，切片、染色、固定等环节的质量评分高于对照组，差异有统计学意义。

分析可知，PDCA循环法的应用，是一个螺旋式、阶梯式上升的过程，不断发现问题、解决问题，从被动管理理念转变为主动管理，强调管理工作的全员性、全方位、全过程。

既能提升工作人员的综合技能水平，又发挥出监督、考核、评价的作用，因此应用价值更高[8]。

综上，采用免疫组化病理技术进行检验时，实施PDCA 循环进行质量控制能提高制片优良率和确诊率，促进检验质量不断提升。

参考文献
[1] 王立山, 车超, 李占林, 等. 免疫组化病理技术及质量控制方式的研
究[J]. 中国医药指南, 2019, 17(4): 151-152.
[2] 王璇, 魏雪, 章如松, 等. 品管圈在提高免疫组化制片优片率中的应
用[J]. 诊断病理学杂志, 2019, 26(8): 542-543.
[3] 王晓星, 易慕华, 方捷迪, 等. 免疫组织化学染色中不同返蓝液效果
评价[J]. 临床与实验病理学杂志, 2020, 36(5): 606-607.
[4] 陈杰伟, 刘君, 张淦梅, 等. 高效实用的组织芯片免疫组织化学对照体系
的建立[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2017, 26(2): 170-177.
[5] 林雪松. 免疫组化病理技术质量控制管理的应用效果观察[J]. 中国医
药指南, 2019, 17(29): 101-102.
[6] 饶兰, 范婉婷, 杨婉, 等. PDCA循环法持续改进免疫组化染色切片
质量[J]. 诊断病理学杂志, 2019, 26(12): 872-873.
[7] 滑洋洋, 龙安予, 王玉. 免疫组化病理技术质量控制问题分析与对策
研究[J]. 临床医药文献电子杂志, 2020, 7(22): 132, 169.
[8] 李文洁. 影响免疫组化染色的因素及相关注意事项[J]. 世界最新医学
信息文摘(连续型电子期刊), 2018, 18(93): 125.
(收稿日期：2021-4-8 接受日期：2021-5-15)
表1　两组切片的制片优良率比较[例(%)]
组别例数优良差制片优良率
试验组7544(58.67)30(40.00)1(1.33)74(98.67)
对照组7535(46.67)33(44.00)7(9.33)68(90.67)
χ2值 4.753
P值0.029
表2　两组病理诊断结果比较[例(%)]
组别例数确诊误诊漏诊诊断不明
试验组7573(97.33)0(0)2(2.67)
对照组7566(88.00)3(4.00)4(5.33)
χ2值 4.807 3.0610.694
P值0.0280.0800.404
表3　两组切片的检验质量评分比较(分, `x±s)
组别例数切片染色固定
试验组758.79±0.438.53±0.748.75±0.24
对照组758.32±0.807.96±1.158.46±0.62
t值 4.481 3.609 3.777
P值0.0010.0010.001
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