正交实验法优选消肿止痛膏的提取工艺

正交实验法优选消肿止痛膏的提取工艺
蔡攀峰;朴春梅;韩云霞;杨亮;蒋玲;骆红梅
【摘要】采用正交实验法,以欧前胡素的转移率为评价指标,对影响消肿止痛膏的提取效率的主要因素(提取次数、溶剂用量、溶剂比例、提取时间)进行考察,根据实验结果优选提取工艺.结果为最佳提取条件为:溶剂为80％的乙醇水溶液,溶剂量为药
材量8倍,回流3次,每次1h.优选得到的提取工艺简便易行,稳定性好,可为医院制剂生产提供理论依据.
【期刊名称】《贵州科学》
【年(卷),期】2014(032)002
【总页数】4页(P19-21,26)
【关键词】消肿止痛膏;正交试验;欧前胡素;提取工艺
【作者】蔡攀峰;朴春梅;韩云霞;杨亮;蒋玲;骆红梅
【作者单位】贵阳中医学院,贵阳550002;贵阳中医学院第二附属医院药剂科,贵阳550001;贵阳中医学院第二附属医院药剂科,贵阳550001;贵阳中医学院第二附属
医院药剂科,贵阳550001;贵阳中医学院第二附属医院药剂科,贵阳550001;贵阳中
医学院第二附属医院药剂科,贵阳550001
【正文语种】中文
【中图分类】R269
医院制剂消肿止痛膏为伤科外用软膏剂，临床主治软组织损伤、挫伤、跌仆闪挫伤、
闪腰岔气等病症，也适用于疔疮肿毒证，在医院临床应用近20年。

本实验采用正交试验法，以白芷的主要成分欧前胡素的转移率为评价指标，对影响欧前胡素提取效率的主要因素，提取次数、溶剂用量、溶剂比例、回流时间进行考察，优选出最佳提取工艺参数。

1 仪器与材料
1.1 仪器
G1313A高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司);WFA-203B三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司);SK1200H科导斯超声仪(上海科导超声仪器有限公司);MA110
分析天平(上海良平仪器仪表有限公司);101-1AB电热鼓风干燥箱(天津泰斯特仪器有限公司);色谱柱(Agilent ZORBAX SBC18 4.6×150 mm安捷伦科技有限公司)。

1.2 材料
当归、姜黄、白芷、黄连、天花粉、生半夏均购于贵阳市济仁堂药业有限公司，并经贵阳中医学院周汉华教授准确鉴定;欧前胡素对照品购于中国药品生物制品检定所，批号:110826-201013;甲醇为色谱纯、水为重蒸馏水、其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2.1 正交试验
根据文献(国家药典委员会，2010;冯光富，2012;梁明金，2000;赵志良，2013)，以欧前胡素的转移率为评价指标进行4因素、3水平正交试验。

4因素为:乙醇用量(A)、乙醇浓度(B)、回流时间(C)及提取次数(D)。

按L9(34)正交试验法安排试验，因素、水平(表1)，正交试验安排及欧前胡素转移率(表2)，方差分析(表3)。

2.2 检测方法
2.2.1 色谱条件
色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇-水(55:45)，流速:1.0 ml/min;柱温为30℃;检测波长为300 nm。

表1 消肿止痛膏的提取工艺优选正交试验因素水平Tab.1 The factor level of orthogonal experiment on extraction technique optimization of Xiaozhong Zhitong Plaster水平因素乙醇用量(A) 乙醇浓度(B) 回流时间(C)h 提取次数(D)1 8 70% 1 1 2 10 80% 1.5 2 3 12 95% 2 3
表2 消肿止痛膏的提取工艺优选正交试验表Tab.2 The extraction process of Xiaozhong Zhitong Plaster by optimization orthogonal test table综合评价
得分 =(欧前胡素转移率×0.7+干膏得率×0.3)×100试验号 A B C D 欧前胡素转
移率(%) 干膏得率(%)综合评价得分1 1 1 1 1 20.86 21.67 21.10 2 1 2 2 2 33.31 29.00 32.02 3 1 3 3 3 25.21 25.22 25.21 4 2 1 2 3 30.57 34.95 31.88 5 2 2 3 1 22.91 23.22 23.00 6 2 3 1 2 18.79 21.09 19.48 7 3 1 3 2 28.97 33.14 30.22 8
3 2 1 3 38.5
4 32.5
5 36.74 9 3 3 2 1 13.08 16.8
6 14.21 K1 26.11 27.74 25.78 19.44 K2 24.79 30.59 26.04 27.24 K3 27.06 19.64 26.15 31.28 R 2.2
7 10.95 0.37 11.84
表3 方差分析表Tab.3 Analysis of variance table注:*A、C因素影响较小作为误差项。

方差来源离差平方和自由度均方F P B 193.73 2 96.86 48.32 ＜0.01 D 217.37 2 108.69 54.22 ＜0.01误差8.02 4 2.00
2.2.2 对照品溶液的制备
取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml含10 μg的溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备
称取1/20处方量的药材(当归4 g，白芷、栀子、姜黄、生大黄各1.5 g，细辛1 g)进行混合，按照正交试验进行回流提取，过滤，置于蒸发皿(已恒重)，挥干，得到干浸膏。

称取0.5 g干浸膏置于25 ml容量瓶中，加入甲醇溶解，定容至刻度，即得。

2.2.4 测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

测定结果见图1、图2。

图1 对照品溶液HPLC图谱Fig.1
图2 供试品溶液HPLC图谱Fig.2
2.2.4 干膏得率的测定
取正交实验所得各样品液20 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量，计算干膏得率。

2.3 结果
以欧前胡素的转移率与干膏得率为评价指标时，采用综合评价(综合评价=欧前胡
素的转移率×70+干膏得率×30)为指标，由表2正交实验直观分析(极差分析)可知，对提取效果的影响排序是:B＞D＞A＞C，说明乙醇浓度对其影响最大，提取次数
次之，回流时间影响最小。

由表3方差分析显示，B因素、D因素对评价指标均具有显著性影响，A因素、C因素无显著性影响。

因此，从实际生产节能考虑，最佳提取工艺为B2D3A1C1，即处方药材加8倍量80%的乙醇回流3次，每次1h。

3 验证试验
按最佳工艺条件B2D3A1C1提取同一批药材3次，测定欧前胡素转移率以及得膏率。

结果见表4。

表4 验证试验结果Tab.4 Verify the test resultstion编号欧前胡素转移率(%) 干膏率(%) 综合评价得分平均值 RSD(%)1 51.58 37.32 47.302 2 50.78 37.05
46.661 46.90 0.75%3 51.01 36.73 46.726
4 讨论
本实验在正交试验阶段，欧前胡素的转移率都未超过50%。

但用正交实验优选提
取工艺时，欧前胡素的转移率均超过50%，而且干膏得率也高。

另外，根据正交
实验结果得到最佳提取工艺为:A3B2C1 D3，而A因素不显著，且在乙醇8倍量和
12倍量下所测得的欧前胡素转移率相差不大，考虑到消肿止痛膏为医院制剂需大
批量生产，出于成本考虑而选择乙醇8倍量。

故本实验最终确定的提取工艺
为:A1B2C1D3，即处方药材加8倍量80%的乙醇回流3 次，每次1 h。

本制剂以中医理论为指导，参考历代相关的中医药书籍，经过精心筛选而成。

由于医院生产制剂的时候，没有制定提取的标准以及方法，所以没有指标以及依据去衡量提取是否完全。

本实验通过正交设计法对提取工艺进行优选，并考虑了节省能源和时间问题。

按最佳工艺进行重复性试验，稳定性较理想，适合于医院的生产，故此提取工艺合理可行。

［REFERENCES］
Anon.(Edited by China Pharmacopoeia Committee)，2010.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China，Vol.1［S］.Beijing:The Medicine Science and Technology Press of China:97-98(in Chinese).
Feng GF，Guo YH，Zhang S，Tu H，2012.Process of orthogonal experiments design for circulation and pain relief balm percolation extraction technique［J］.Nei Mongol Journal of Traditional Chinese Medicine，22:42-43(in Chinese).
Liang MJ，Yang GD，He LC，2000.Solvent extraction methods of imperatorin in radix angel icae dahurica［J］.Chinese Traditional Patent Medicine，12(22):829-830(in Chinese).
Zhao ZL，2013.Preparation technique optimization of geng nian mixture
by orthogonal experimental method ［J］.Traditional Chinese Medicine Research，6(48):457(in Chinese).
［附中文参考文献］
国家药典委员会，2010.中华人民共和国药典.一部［S］.北京:中国医药科技出版社，
97-98.
冯光富，郭宏彦，张嵩(全作者)，2012.正交实验优选化瘀止痛涂膜剂的渗漉法提取工艺［J］.内蒙古中医药.22:42-43.
梁明金，杨广德，贺浪冲，2000.白芷中欧前胡素的提取方法研究［J］.中成药，12(22):829-830.
赵志良，2013.正交实验法优选更年合剂的制备工艺［J］.中药研究，6(48):457.。