乳制品中低聚木糖的测定研究

乳制品中低聚木糖的测定研究
夏春
【期刊名称】《食品安全导刊》
【年(卷),期】2015(000)030
【总页数】2页(P94-95)
【作者】夏春
【作者单位】安徽省食品药品检验研究院
【正文语种】中文
运用酸水解方法和高效液相色谱-示差折光技术测定木糖，从而建立乳制品食品中
低聚木糖的检测方法。

乳制品经醇沉淀后，酸水解成木糖，液相色谱示差检测器检测。

木糖在0.5～4.0 mg/ml测定线性范围内，呈良好线性关系，相关系数均在0.999以上，加标回收率为90%～105%。

本方法快速、灵敏、重现性好，满足测定乳制品中的低聚木糖。

低聚木糖是新型低聚糖类产品，低聚木糖是由2-7个木糖分子以β-1,4糖苷键结
合而成的功能性聚合糖，以其功效强而受到业内人士的关注。

《低聚木糖》
QB/T2984-2008标准的实施，以及“卫生部公告2008年第12号文”批准低聚
木糖为新资源食品，可应用于各类食品生产加工，但不包括婴幼儿食品。

随之其在食品应用研究日趋活跃、广泛，特别酸奶、功能性牛奶等乳制品中应用，低聚木糖作为双歧因子，能使双歧杆菌增殖，抑制有害菌生长，提高肠内有益菌的比例。

目前已报道的低聚木糖测定方法，主要采用高效液相色谱法、离子色谱电化学法和电泳等方法，分别测定木七糖xos 7～木二糖xos 2组分，总和求得，《低聚木糖》
QB/T 2984-2008标准中组分测定也是采用该方法。

但是实际工作中各个低聚木
糖（xos7-2）的高纯标准品不易获取，市场价高，特别xos 7-5高聚合度，给检
测带来不便。

同时乳制品中含有的其他糖类物质以及食品添加剂，这给测定带来一定的干扰。

本实验运用醇沉淀后，酸水解成木糖，和液相色谱示差技术，测定、计算乳制品中低聚木糖的含量。

主要仪器和试剂
高效液相色谱仪（配有恒温柱温箱和示差折光检测器），岛津LC-20A型，RID-
10A，日本岛津公司。

95%乙醇，分析纯。

盐酸溶液（1+1）：量取50 ml盐酸，缓慢加入50 ml水中，冷却后摇匀。

氢氧化钠溶液（200 g/L）：称取20 g氢氧化钠加水溶解后，冷却并定容100 ml。

d-木糖标准样品(纯度>95%)，标准溶液：称取5 g（精确到0.1 mg）d-木糖标准品到100 mL容量瓶中水溶解并定容。

并分别稀释成0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml、3.0 mg/ml、4.0 mg/ml标准溶液。

仪器条件
色谱柱：REZEX RCMMonosaccharide Ca(8%) 300 mm×7.8 mm
流动相：超纯水，流速：0.6 ml/ min，柱温：75℃。

样品前处理
称取均匀的液体乳制品样品20.00 g（固体乳2.50 g+17.50 g水），置于50 ml
具塞离心管中，加乙醇30 ml溶解，剧烈震荡1 min，10 000 r/min离心10 min，澄清或用于干燥滤纸过滤，取清液25 ml置于氮吹瓶，60℃氮吹去乙醇至
7 ml左右，另取1 ml滤液用0.22 μm微孔滤膜过滤至样品瓶，待色谱仪测定。

氮吹液加入中1 ml盐酸溶液（1+1），摇匀，80～90℃水解2 h，冷却，用氢氧化钠溶液(200 g/L)调pH至5～7，氮吹定容至10 ml，取约1 ml滤液用0.22μm
微孔滤膜过滤至样品瓶，待色谱仪测定。

结果计算：水解后测定的木糖含量减去水解前木糖含量。

X=c1.v1/m1 *F-c2V2/M2（F为低聚木糖换算为木糖的系数0.915）
方法研究
醇沉法：运用醇沉法可去淀粉、糊精、蛋白等无效成分，还有高聚度的木糖聚。

试验设计：以低聚木糖和淀粉为目标物，乙醇含量为30%，40%乙醇，50%乙醇，60%乙醇，70%乙醇，80%乙醇，进行6平行醇沉试验，碘试验验证去淀粉效果，运用QB/T 2984-2008中7.6方法测定低聚木糖（加入1%）回收率。

表1试验
发现40%乙醇的醇沉试验已无显色反应，考虑去淀粉和木聚糖效果，以及低聚木
糖回收率，采用加入60%乙醇。

试验方法为：称取均匀的乳制品样品20.00 g，
置于50 ml具塞离心管中，加乙醇30 ml溶解，剧烈震荡1 min，10 000 r/min
离心10 min（见表1）。

水解试验：参考GB/T 5009.9-2008《食品中淀粉的测定》标准的水解方法，1 ml 盐酸溶液（1+1）水解时间经试验最佳水解时间为2h。

将低聚木糖水彻底解成木糖，提高检测的准确性。

换算系数F确定：低聚木糖是由2-7个木糖分子以β-1,4糖苷键结合而成的功能
性聚合糖，并木二糖、木三糖、木四糖为主要成分的混合物。

根据低聚木糖酸水解为木糖的分子量前后变化，估算换算系数（见表2）。

同时市场采购不同品种的低聚木糖，应用QB/T 2984-2008中7.6方法直接测定，和酸水解后测定木糖含量，并比较两种方法结果，验证了估算出来的换算系数。

线性范围和检出限
参考GB/T 23532-2009《木糖》5.2的仪器试验测定条件，优化并确定本方法试
验条件。

在该仪器条件下测试，得到如上谱图。

配制浓度为0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml、3.0 mg/ml、4.0 mg/ml标
准溶液。

得到线性方程y=392.16x+485.56，相关系数0.9995，呈现良好的线性关系。

按10倍信噪比计算，当样品组分的响应值等于基线噪声的10倍时，该样
品的浓度即可作为检出限。

本方法最低检出限0.1 mg/ml，根据方法标准推算出方法的检出下限约为1 mg/g。

精密度与回收试验
低聚木糖添加量成年人推荐用量0.7 g/d，牛奶按500 ml/d计，添加量在0.14
g/100 ml为宜；儿童型推荐用量0.5 g/d，牛奶按500 ml/d计添加量在0.1
g/100 ml为宜。

依据试验方法和公式计算，测试液木糖浓度为1.3 mg/ml和0.9 mg/ml，在测试线性范围内。

我们在牛奶中加入这2个不同含量的低聚木糖，按
照试验方法进行处理和测定，根据标准曲线的回归方程计算回收率，试验结果如表3。

通过测试结果的回收率在90%-105%之间，平均回收率为97.1%，完全能满足检
测的需要。

样品测定
目前低聚木糖在乳制品中应用不是十分广泛，在本地市场上寻找到一个酸奶样本和一个牛奶样本，按照本方法进行测定，数据见表4。

本实验运用醇沉淀后，酸水解，液相色谱示差技术测定木糖，从而建立乳制品中低聚木糖的检测方法。

该方法具有样品简便、快速、灵敏、重现性好等特点，满足测定乳制品食品中的低聚木糖。