生物药物分析所有课件,便于打印

②滤膜培养法
③酵母菌镜检计数法
9. 大肠杆菌检查法
概述、原理 检验程序 增菌培养 分离培养 纯培养、革兰染色、镜检
生化试验（IMViC）
实验中的注意事项
10．沙门菌检查法
11．铜绿假单胞菌检查法
12．金黄色葡萄球菌检查法
13．破伤风梭菌检查法
14．活螨检查法
15．结果判断
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微生物限度检查法概述
某一种 药物的 依据
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➢杂质及其来源
✓药物中无治疗作用，或影响药物的稳定型 和疗效，甚至对人体健康有害的物质 ✓药物纯度和一般化学品及试剂的要求不同 ✓生产过程引入杂质 ✓贮存过程引入杂质
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➢杂质的种类
✓按性质分为影响药物稳定性的杂质、毒 性杂质和信号杂质 ✓按来源分为一般杂质和特殊杂质
✓药学的分支学科，是药学和分析学的 交叉学科 ✓包括药物的检验、药物稳定性、生物 利用度、药物临床监测和生物药物检定 等多方面的定性定量分析 ✓目的是确保药物的质量及病人的用药 安全有效
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➢药物分析的任务
✓对药物生产过程的控制 ✓对药物贮运进行检测 ✓对临床用药进行监护 ✓配合药物研究部门进行新药与新剂型 的研制 ✓提高药物工作者的素质
载气：氮气 检测器：氢火焰离子化检测器检测 柱温：80～170℃ 色谱系统适用性试验：中国药典规定， 在残留溶剂测定前应作色谱系统适用性 试验。
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➢特殊杂质检查
✓指药物在生产和贮存过程中，有可能引 入的中间体、分解产物以及副产物杂质 安全性检查 ✓生物药物还有一类特殊杂质需要检查， 对生物体产生特殊生理作用。
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强生儿童退烧药召回事件 拜耳避孕药停售 维C银翘片含毒
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➢药物质量标准
✓药典是国家对药物质量标准及其检验 方法所做的技术规定，是药物生产、 监控、供应、使用及管理部门共同遵 循的法令。 ✓药典一般包括凡例、正文、附录、索 引四部分
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5. 避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯化银见 光易分解。
6. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向 下观察。
7. 平行操作原则
（四）干扰及排除 1. 若供试品有色，需经处理后方可检查。
（1）内消色法：倍量法，如枸橼酸铁铵中氯 化物的检查。
（2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查， 可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。
反映药品生产工艺的科学性、合理性及质量管理水平。通过检验，凡工艺条件、生产管理 水平、生产人员的素质差，不注意文明生产的单位和企业，其生产的药品，染菌必然严重， 不合格率无疑就高。微生物限度的检验是提供药品卫生质量状况的重要依据，因而保证销 售与使用过程中药品的有效性与安全性，是促进与提高生产单位全面质量管理水平与提高 药品质量的重要依据。
1.00％硫酸肼溶液与10％乌洛托品溶
液等量混合配制浊度标准贮备液
稀 释 浊度标准原液 稀 释
浊度标准液（5个级号）
3. 判断 药典中规定的“澄清”，系指 供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂， 或未超过0.5号浊度标准液。
4. 溶剂：水、酸、碱、有机溶剂 有机酸的碱金属盐类药物强调用“新 沸过的冷水”
✓灵敏度法 系指在供试品溶液中加入试剂，在一 定反应条件下，不得有正反应出现 特点：不需对照品
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➢药物的杂质检查方法
✓比较法 含量测定法：测定杂质的绝对含量，如 测定吸收度、pH值等。 特点：准确测定杂质的量，不需对照品
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➢一般杂质检查
✓指在自然界中分布比较广泛，在多种药 物的生产和贮存过程中容易引入的杂质 ✓检查项目有氯化物、硫酸盐、水分、酸、 碱、硫化物、硒、氟、氰化物、铁盐、 重金属、砷盐、铵盐、易炭化物、干燥 失重、炽灼残渣、溶液颜色与澄清度等
➢正确的比色、比浊方法
➢检查结果不符合规定或在限度边缘时 应对供试管和对照管各复查二份
氯化物检查法 （一）原理 对照法
药物 C lA ：g3N H O N 3 O Ag 白 C色 l
对N 照 （ ac ： ,C V ） lAg3 N H 3 N O O Ag 白 C色 l
（二）测定条件 1. 标准NaCl溶液 10gCl/ml，50ml溶液
液(0.1mol/L)至显粉红色。消耗氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)不得过 0.10ml。
易炭化物 不挥发物
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➢药典（药物质量标准、分析方法）
【含量测定】 取本品 1.5g，精密称定，置 250ml 锥形瓶中，精密加 氢氧化钠滴定液(0.5mol／L) 50ml，加热回流 1 小时，放冷，加酚酞 指示液 1 滴，用盐酸滴定液(0.5mol／L)滴定至无色，并将滴定的结果 用空内试验校正，每 1ml 氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)相当于 44.05mg 的 C4H8C2。 【类别】 药用辅料，溶剂。 【贮藏】 密封保存。
2. 当有其它干扰物质存在时，必需在检查前 除去
（1）碘中氯化物的检查 （2）碘化物中氯化物的检查 （3）溴化物中氯化物的检查
3. 不溶于水的有机药物 （1）加水振摇，过滤，取滤液进行检查。
（2）加热，放冷，过滤，取滤液进行检查。
（3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀 乙醇或丙酮溶解后进行检查。
有机溶剂残留量测定法
1. 有机溶剂残留量测定法 是用以检查药物在生产过程中引入的有害有 机溶剂，包括苯、氯仿、二氧六环、二氯甲烷、 吡啶、甲苯及环氧乙烷。
2. 检查方法 中国药典采用气相色谱 法检查残留有机溶剂
色谱条件： 固定相：直径为0.25～0.18mm的二乙 烯苯－乙基乙烯苯型高分子多孔小球
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1．微生物限度检查法的意义 药品是防病治病、关系用药者生命健康的特殊商品，必须 保证其质量，用药的安全与有效。微生物污染药品引起的药源性疾病屡见不鲜，在国内外 均有报道。为保证药品质量，必须对微生物污染进行必要的控制和检验。其意义在于：
已有许多实例表明，药品污染微生物不仅危及病人用药安全，而且也直接影响药品的有效 性，所以药品卫生质量是药品质量不可分割的部分。
生物药物的杂质检查
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一般杂质检查规则
《药品检验操作标准》规定：
➢ 遵循平行操作原则
✓仪器的配对性 如纳氏比色管应配 对，刻度线高低相差不超过2mm，砷 盐检查时导气管长度及孔的大小要一 致
✓对照品与供试品的同步操作
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➢正确的取样及供试品的称量范围 1g 不超过±2%，＞1g不超过±1%
2．微生物限度检查的范围 根据药品使用的要求，可划分为两大类：
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规定灭菌的药品：包括注射剂和输液剂，及用于体腔、严重烧伤、溃疡、出血及眼科用药 等制剂。
非规定灭菌药品：包括常用的口服制剂与一般外用制剂。对这一部分制剂一般不要求绝对 无菌，允许一定限量的微生物存在，但同时规定不得有可疑致病的细菌存在。由于致病菌 的范围很广，各国药典都规定了几个常见的致病菌或指标菌作为控制菌。
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➢生物药物的科学管理
✓GLP《良好药物实验研究规范》 ✓GMP《良好药品生产规范》 ✓GSP《良好药品供应规范》 ✓GCP《良好药品临床试验规范》
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➢生物药物的分析检验
✓药物的取样 ✓药物的鉴别 ✓药物的杂质检查 ✓药物的安全性检查 ✓药物的含量（效价）测定 ✓检查报告的书写
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➢药典（药物质量标准、分析方法）
乙酸乙酯
✓药典一般包括凡例Yisuan、yizhiyl Acetate
✓正文部分为所收载的每种原料药和制 剂的质 量标准 ，包括 名称 、 分子结 构 本品含 C4H8O2 不得少于 99.5%(g/g)。 式 、 分 子式 、 分 子 量 、 含量 限度 、 性 【性状】 本品为无色澄清的液体；具挥发性，易燃烧，有水果香味。
本品在水中溶解，能与乙醇、乙醚、丙酮或二氯甲烷任意混溶。
状 、 鉴 别 、 检 查 、 含 量 测 定 、 类 别 、 相对密度 本品的相对密度(附录Ⅵ A)为 0.898～0.902。 规格、贮藏条件等。 【鉴别】 本品燃烧时产生黄色火焰和醋酸味。
【检查】 酸度 取本品 2.0ml，置锥形瓶中，加中性乙醇 10ml 与酚酞指示液 2 滴，摇匀，滴加氢氧化钠滴定
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➢异常毒性检查法 ➢热原检查法 ➢升压物质检查法 ➢降压物质检查法 ➢致敏物质检查法
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生物药物分析
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微生物限度检查法
1．微生物限度检查法概述 2．我国药品微生物限度标准的发展情况 3．我国药品微生物限度检验方法的发展情况 4．微生物限度检查法所需的材料 5．微生物限度检查试验用物品的准备 6．无菌室技术要求 7．细菌、霉菌与酵母菌的检查方法 供试品的抽样、保存及检验量 试验操作前的准备 供试液的制备 对照用菌液的制备
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➢杂质检查的原理
✓利用生物药物和杂质在物理性质上的差 异 ✓利用生物药物和杂质在化学性质上的差 异
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➢药物的杂质检查方法
✓对照法 限量检查法 （Limit Test） 特点：不需知道杂质的准确含量
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➢药物的杂质检查方法
在非规定灭菌的制剂中，对每克或每毫升的药品按剂型或品种不同规定：
➢药典（药物质量标准、分析方法）
✓药典是国家对药物质量标准及其检验 方法所做的技术规定，是药物生产、 监控、供应、使用及管理部门共同遵 循的法令。 ✓药典与分析方法
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➢生物药物概述
✓包括生化药物、生物技术药物和生物 制品。 ✓特点：
相对分子质量的测定 生物活性检查 安全性检查 效价测定 生化法确证结构
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菌数测定阴性对照试验 细菌、霉菌（酵母菌）检验程序 供试液的稀释（10倍递增稀释法） 注平皿 倾注培养基 培养 菌落计数 菌数报告规则 注意事项 8.细菌、霉菌（酵母菌）的其他检查方法 ①管稀释法（试管法、MPN法） ② 滤膜法 ③计数板法 ④仪器法 ⑤平板涂布法
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①表面涂抹平板法
澄清度检查法
检查药物中的微量不溶性杂质， 用作注射剂的原料药一般应作此项 检查。
1. 检查方法 对照法
供 规试 定 品 级 供号 试的 品浊 溶度 比 液标较 准液
2. 浊度标准液的配制 中国药典规定用浊度标准液作为
澄清度检查的标准。 反应原理：乌洛托品在偏酸性条
件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生 成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。
药物的鉴别
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➢药物鉴别目的
✓判断药物的真伪
➢药物鉴别的特点
✓药物分析的首要任务 ✓为已知药物的确证试验 ✓个别分析 ✓化学鉴别试验要有明确的现象 ✓鉴别试验条件要准确
药物的鉴别
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➢药物鉴别的内容
性状 一般鉴别试验 专属鉴别试验
外观 溶解度 物理常数
某一类药物 的依据：
苯甲酸盐 钠盐 硫酸盐 氯化物等
中含50～80g的Cl所显浑浊梯度明显，相 当于标准NaCl溶液5～8ml。
2. 反应需在硝酸酸性条件下进行，且以 50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。
（1）加速AgCl浑浊的形成； （2）产生较好的乳浊；
（3）避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化 银沉淀的形成。
3. 试剂：硝酸银
4. 供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液， 使生成白色浑浊而不是白色沉淀
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➢药典（药物质量标准、分析方法）
✓药典一般包括凡例、正文、附录、索 引四部分
✓附录主要收载制剂通则、通用检测方 法和指导原则。包括制剂通则，生物 制品通则，光学、色谱学检查方法， 一般杂质检查方法，特殊杂质检查方 法，微生物限度检查法，抗生素微生 物检定法等。
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课程主要内容
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1 生物药物分析学概述
2 常用生物药物分析方法
3 各类生物药物的分析检验
主要参考书目 《生物药物分析》 白秀峰 中国医药科技出版社
《生物药物分析》 何华
化学工业出版社
《药物分析》 孙莹 吕洁 人民卫生出版社
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➢药物分析的性质