高效液相色谱法测定磺胺嘧啶银凝胶的含量及有关物质

高效液相色谱法测定磺胺嘧啶银凝胶的含量及有关物质
黎月玲,郑企琨,黄作君　(广州市红十字会医院,广东广州510220)
[摘要]　目的:建立测定磺胺嘧啶银凝胶中磺胺嘧啶银及其有关物质的方法。

方法:采用Nova2Pak C18色谱柱(5.0mm×300mm,4μm);柱温:30℃;以0.1%磷酸溶液2乙腈(92∶8)为流动相,流速1.0mL・min-1;检测波长265nm。

结果:SD2Ag与多种降解产物分离良好。

标准曲线的线性范围为10～1000mg・L-1,r=0.9995;重复性试验RSD为0.93%(n=6);平均回收率为100.3%(n=5),RSD为1.1%。

结论:该方法简单、快速、准确地测定磺胺嘧啶银的含量及有关物质,满足磺胺嘧啶银凝胶稳定性要求。

[关键词]　磺胺嘧啶银;有关物质;高效液相色谱法
[中图分类号]R927.2 [文献标识码]A [文章编号]100125213(2004)0820474202
Determination of the content and the related substances of silver sulfadiazine gel by HPLC
L I Yue2Ling,ZHEN G Qi2Kun,HUAN G Zuo2J un(Guangzhou Red Cross Hospital,Guangdong Guangzhou510220,China)
ABSTRACT:OB JECTIVE　To establish an HPLC method for determination of silver sulfadiazine(SD2Ag)and its related sub2 stances.METH ODS　The column:Nova2pak C18(5.0mm×300mm,4μm);The mobile phase:0.1%phosphoric acid aqueous so2 lution2acetonitrile(92∶8);The flow rate:1.0mL・min-1;The detective wavelength:265nm.RESU LTS　Decompose substances could be separated from SD2Ag.The method showed good linearity(10～1000mg・L-1,r=0.9995)and repeatabitity(RSD= 0.93%,n=6).The average recoveries of SD2Ag was99.4%with RSD=0.78%(n=5).CONC L USION　The method is simple and accurate for simultaneous determination of SD2Ag and its related substances,and can be used for the stability study of SD2Ag gel.
KE Y WOR DS:silver sulfadiazine;related substances;HPLC
磺胺嘧啶银(silver sulfadiazine,SD2Ag)是一种临床常用的烧伤创面外用药,具有较强的抗菌作用及良好的制痂和创面保护效果。

SD2Ag的常用制剂由于受剂型因素的影响,在临床应用中存在一些不足的地方,为此,我们研制了新制剂———SD2Ag水溶性凝胶。

目前,测定SD2Ag含量主要有容量分析法[1]和HPLC[2]法,测定SD2Ag有关物质主要是薄层层析法[2]。

为考察SD2Ag凝胶的稳定性,本文在《美国药典》XXIV版SD2Ag原料含量测定方法基础上,建立了一个同时测定SD2Ag凝胶中SD2Ag含量及有关物质的HPLC方法,为SD2Ag凝胶稳定性研究提供必要的检测手段。

1　仪器与试药
高效液相色谱仪(美国Waters公司):515双泵,996二极管阵列检测器,Rheodyne7725i进样器(20μL定量环), 2010Millennium色谱管理系统;SD2Ag对照品(99.2%,湖南化学试剂总厂,批号20020801);SD2Ag凝胶(自制,批号2003071421,2003071422,2003071423);乙腈为色谱纯;磷酸、氨水为分析纯;水为纯化水。

2　方法与结果
2.1　色谱条件及系统适用性试验　色谱柱:Nova2Pak C18柱(5.0mm×300mm,4μm,大连依利特科学仪器有限公司);柱温:30℃;流动相:0.1%磷酸水溶液2乙腈(92∶8);流速: 1.0mL・min-1;检测波长:265nm。

在以上色谱条件下,SD2 Ag理论塔板数>14000;SD2Ag与杂质峰的分离度>1.5;重复性RSD<2%;拖尾因子为1.02。

2.2　方法专属性考察　取SD2Ag适量,用稀硝酸溶解后水浴煮沸10h。

另取SD2Ag适量,用氨水溶解后强光照射6d (>4000Lx)破坏后,在上述色谱条件下进样,对SD2Ag及其降解产物进行HPLC分离检测,结果能分离出多种杂质。

应用二极管阵列检测器检查各峰纯度,结果SD2Ag与多种降解产物分离良好(分离度>1.5),表明本色谱条件测定SD2Ag的含量及其有关物质,方法专属性强。

高效液相色谱图见图1。

图1　HPLC方法专属性考察图谱
A.空白凝胶;
B.SD2Ag凝胶;
C.强光破坏样品;
D.加热水解破坏样品
1.SD2Ag;
2.8分解产物
Fig1　The exclusion inspection of HPLC detectivc method
A.blank gel;
B.SD2Ag gel;
C.sample of SD2Ag destroyed by light;
D. sample of SD2Ag destroyed by high temparature and Hydrolysis
1.SD2Ag;
2.8decompose substance
2.3　线性关系　取SD2Ag对照品约100mg,精密称定,置
[作者简介]　黎月玲,女,学士,主任药师,电话:02028441223327362,E2mail:liyueling01@
10mL量瓶中,加10%氨溶液适量,超声溶解,加10%氨溶液稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。

精密量取对照品溶液,分别以流动相稀释(同时定量加入稀硝酸,p H8.5)为10, 50,100,200,400,1000mg・L-1系列浓度,注入20μL定量进样环中,依法测定,记录峰面积,以6次测定的峰面积平均值与浓度作线性回归。

回归方程:Y=42092C-351156,r= 0.9995,表明在10～1000mg・L-1范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.4　最低检测限　在上述色谱条件下,最低检测限以噪声的3倍计,SD2Ag的最低检测限为0.1mg・L-1。

2.5　回收率试验　取SD2Ag对照品约80,100,120mg,精密称定,置100mL量瓶中,按处方比例加入空白凝胶4mL,摇匀。

加2.5%氨溶液适量,超声溶解并稀释至刻度,按“样品含量测定”项下方法测定,计算回收率。

结果SD2Ag的平均回收率为100.3%,RSD为1.1%(n=5)。

2.6　精密度试验　取“线性关系”项下100mg・L-1的SD2 Ag标准溶液,一日内进样6次,以及第1,2,3,4,5天分别进样,以峰面积考察日内、日间精密度。

结果日内测定平均峰面积为4054925mv・sec,RSD为0.4%(n=6)。

5d测定的平均峰面积为4051603mv・sec,RSD为1.4%(n=5)。

另按“样品含量测定”项下方法,6次平行测定同批SD2 Ag凝胶含量,考察重复性。

测定结果的RSD为0.93%(n= 6)。

2.7　溶液稳定性试验　取1000mg・L-1的SD2Ag凝胶提取溶液,室温放置,分别于一天内(24h)进样测定5次,记录主峰面积,并用归一化法计算杂质含量,考察溶液的稳定性。

结果样品溶液放置24h,杂质含量与初始溶液相比无明显变化,没有新降解产物出现,即样品溶液至少在24h内性质稳定。

2.8　样品含量测定　精密量取SD2Ag凝胶适量(约相当于SD2Ag100mg),置100mL量瓶中,加2.5%氨溶液适量,超声溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤。

精密量取续滤液5.0mL 置于50mL量瓶中,以流动相稀释(同时定量加入稀硝酸,p H 8.5)至刻度,摇匀,注入20μL定量进样环中,依法测定,记录峰面积。

另精密称取SD2Ag对照品适量,制备100mg・L-1的对照溶液,同法测定,按外标法计算样品含量。

结果3批样品的标示百分含量及RSD分别为:101.4%,0.33% (2003071421);101.3%,0.73%(2003071422);97.4%, 0.74%(2003071423),n=5。

2.9　样品有关物质测定　精密量取SD2Ag凝胶适量(约相当于SD2Ag500mg),置50mL量瓶中,加10%氨溶液适量,超声溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤。

精密量取续滤液5.0mL置于50mL量瓶中,以流动相稀释(同时定量加入稀硝酸,p H8.5)至刻度,制成浓度为1000mg・L-1的供试液。

另精密称取SD2Ag对照品适量,制备10mg・L-1的对照溶液,取对照溶液注入20μL定量进样环中,进行预试,调节灵敏度,使主成分能准确积分。

再取供试溶液依法测定,记录色谱图至主成分保留时间的3倍,量取除溶剂峰外各杂质峰面积总和,分别用自身对照法和归一化法[1]计算杂质含量。

结果表明:SD2Ag凝胶3批样品杂质含量较小,采用自身对照法和归一化法的测定结果基本一致。

SD2Ag凝胶有关物质检查结果见表1。

表1　SD2Ag凝胶有关物质检查结果(%)
Tab1　The related substances determination results of SD2Ag gel(%)
样品批号自身对照法/%归一化法/%
20030714210.050.04
20030714220.040.03
20030714230.040.04
3　讨论
SD2Ag是一个难溶性药物,它只在硝酸、氨等极少数溶剂中溶解。

本文光照试验选择在碱性氨溶液中进行,是因为磺胺嘧啶与大多数磺胺类药物一样,一般在碱性介质中以稳定的钠盐或二甲胺盐的形式存在[3]。

而光照试验选择在硝酸介质中进行,是由于磺胺类药物的水解可被酸性介质催化[3]。

由选择的条件对SD2Ag进行破坏,产生的杂质峰数目与文献报道[3]的同类药物相近。

本文经试验发现,当进样液p H值>8.5时,在SD2Ag峰的前面出现另外一峰。

这是因为磺胺嘧啶(银)是一个二性物质,对p H值很敏感,在不同的p H环境中,可以磺胺嘧啶或磺胺嘧啶盐的其中一种或二种形式同时存在。

p H>8.5时,部分磺胺嘧啶以盐式存在,与大部分磺胺药物在p H8.0～10.5时以盐形式存在[3]一致,而磺胺嘧啶与磺胺嘧啶盐二者极性不同,所以出现2个色谱峰。

基于磺胺嘧啶的上述特性以及高浓度的SD2Ag溶液当p H低于8.2时析出沉淀的考虑,本实验将进样液的p H值调至8.2～8.5之间,与《美国药典》XXIV版SD2Ag原料含量测定的进样液p H值相近。

本试验分别将流动相体系的p H值调至2.5,3.0,3.5, 4.0,4.5,5.0,5.5,6.0进行系列试验,通过对色谱图的放大比较,观察p H值对主成分峰检测的影响。

结果表明:p H> 2.5时,主成分峰有前伸现象,随着p H值的升高,前伸现象越加严重。

当p H2.5时,主成分峰峰形对称,降解产物峰形良好。

故流动相体系的p H值确定为2.5。

流动相体系的p H值虽与进样液p H值有一定的差异,但经反复试验,未发现有药物析出情况的出现,检测方法的重现性、准确性也很好,所以对本试验没有影响。

本文建立的HPLC方法能简单、快速、准确地测定SD2 Ag凝胶中SD2Ag含量及有关物质,满足SD2Ag新药稳定性研究的要求。

参考文献:
[1]　中国药典.二部[S].2000.1049.
[2]　USP.XXIV[S].2000.1566.
[3]　Jiri K,Milan M.TLC detection of photolytic and hydrolytic degra2
dation products of selected antibacterial sulfonamides[J].Planar
Chromatography,1996,(9):61.
[收稿日期]2003212229　。