葛根素对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清CRP、NO和CK含量的影响

Clinical Journal of Chinese Medicine 2018 V ol.(10) No.28 -12-
葛根素对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清CRP、NO和CK 含量的影响
Efficacy of puerarin on content of serum CRP, NO and CK in rats with myocardial ischemia reperfusion injury
柳挺
（南阳医学高等专科学校，河南南阳，473000）
中图分类号：R331.3文献标识码：A文章编号：1674-7860（2018）28-0012-
【摘要】目的：观察葛根素对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠血清C反应蛋白（CRP）、一氧化氮（NO）及磷酸激酶（CK）含量的影响，探讨其抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制。

方法：建立IR模型，治疗组尾静脉注射葛根素注射液20mg/kg，记录结扎前5min、结扎或穿线后5min、再灌注5min、1h心电图，实验结束右心房采血测定各组血清中CRP、NO和CK的含量。

结果：结扎大鼠冠状动脉左室支5min时各组心电图与假手术组相比，ST段抬高、T波高耸，治疗组ST段抬高程度低于假手术组和IR模型组；IR模型组血清CRP、NO和CK含量与假手术组比较差异显著（P＜0.01）；葛根素治疗组可以对抗CRP、CK升高和NO下降，与I/R模型组比较差异显著（P＜0.05）。

结论：葛根素能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤，其可能机制与减少心肌细胞释放CRP，抑制炎症反应；升高NO，减少心肌酶漏出有关。

【关键词】葛根素；再灌注损伤；大鼠
【Abstract】Objective: To observe the effect of puerarin on the content of serum CRP, NO and CK in rats with MIRI, and explore active mechanism. Methods: The IR model was established. The treatment group was injected with puerarin injection 20mg/kg. The contents of serum CRP, NO and CK were record before ligation 5 minutes, after ligation or stringing 5 minutes, reperfusion 5 minutes and 1 hour ECG. Results: The ECG of left ventricular branch of coronary artery after 5 minutes in rats with ligation in each group was compared. ST segment and T wave in the other groups were higher than the sham operation group. Degree of ST segment elevation in the treatment group was lower than the sham operation group and IR model group. The difference in content of serum CRP, NO and CK levels betwwen the IR model group and the sham operation group were significantly (P<0.01). The puerarin can counteract the elevation of CRP and CK and drop of NO. Those show significant difference between the puerarin treatment group and IR model group (P<0.05). Conclusion: Puerarin can reduce myocardial ischemia reperfusion injury in rats. The mechanism may be related to reducing the release of CRP from cardiac myocytes, inhibiting inflammatory response, increasing no and reducing myocardial enzyme leakage.
【Keywords】Puerarin; Reperfusion injury; Rats
doi:10.3969/j.issn.1674-7860.2018.28.005
近年来，心肌缺血再灌注损伤（Myocardial Ischemia Reperfusion Injury，MIRI）已成为冠状动脉内溶栓、冠脉搭桥以及介入治疗中常见的严重并发症，研究开发有效地防治心肌缺血性疾病的药物引起国内外的广泛关注。

近年来中药因其疗效稳定、毒副作用少、能作用于疾病多个环节等优点而受到广泛重视，探讨其在MIRI中的作用机制成为研究热点。

本实验用葛根素对大鼠MIRI模型进行干预，观察葛根素对MIRI大鼠血清C反应蛋白（CRP）、一氧化氮（NO）及磷酸激酶（CK）含量的影响，寻找中医药作用的靶点，为葛根素进一步应用于临床提供实验依据。

1材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物
实验用雄性SD大鼠，体重200～220g，购自山西医科大学动物实验中心，合格证号SEXK（晋）2014～0009。

1.1.2 实验试剂
葛根素注射剂（山东方明药业有限公司，批号：170502，规格：0.1g/mL）；NO试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号20170521；CRP试剂盒，上海科华生物工程股份有限公司提供，批号20170112；CK试剂盒，宁波美康生物科技有限公司提供，批号20170415。

1.1.3 实验动物分组及模型制备
在大鼠左胸壁3至4肋间距胸骨左缘约有0.5cm处做一3cm的刀口，钝性分离至胸腔后剪开心包，用24G动脉穿刺针[充有肝素盐水（12.5U/mL）]从左心房底部刺入，将针芯退出，在外套管进入左心室0.5～1cm后，分别测量连接传感器测量左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张最低压（LVDP＝LVSP-LVDEP）、及左心室舒张末压（LVDEP）。

用6-0prolene缝合线将左冠状动脉前降支结扎，阻断冠状动脉血流，当阻断血流30min后剪开结扎线，使其血流恢复灌注，观察120min。

以心电图Ⅱ导联ST段出现弓背抬高或T波高
CJCM 中医临床研究 2018年第10卷第28期 -13-
耸，缺血区域心肌颜色变暗为结扎成功标志。

将30只健康SD大鼠随机分为三组，每组10只。

假手术组：开胸，冠状动脉左室支只穿线不结扎；同一时间点尾静脉注射等量的生理盐水。

IR模型组：开胸结扎冠脉30min，恢复冠脉血流120min；同一时间点尾静脉注射等量的生理盐水。

葛根素治疗组：开胸结扎冠脉30min，恢复冠脉血流120min；缺血开始和再灌注即刻由尾静脉注射葛根素注射液20mg/kg。

1.2 观察指标
1.2.1心电图改变
Ⅱ导联心电图观测（标准电压0.1mV对应1.0mm，纸速50mm/s），记录结扎前5min、结扎或穿线后5min、再灌注5min、1h心电图，每个时间点不少于6个波形。

测量ST段（J 点）偏移平均值（1.0mm对应0.1mV）、T波抬高值及心律失常出现的百分比。

1.2.2血清CRP、NO、CK含量测定
各组分别于实验结束时自右心房取血5mL，免疫比浊法检测血清CRP，硝酸还原酶法测定NO含量，酶法测定CK 含量。

具体操作按试剂盒说明书操作。

1.3统计学分析
采用SPSS 18.0
）表示。

两两组间的比较用LSD-t检验。

计数资料采用χ2检验。

2结果
2.1 各组导联心电图比较
结扎大鼠冠状动脉左室支5min时心电图变化，见表1。

（1）各组心电图与假手术组相比，ST段抬高、T波高耸，各组均有心律失常出现。

葛根素治疗组ST段抬高程度低于假手术组和IR模型组，各组之间心律失常发生率亦相近（P＞0.05）。

（2）再灌注5min、1h心电图变化：IR模型组及葛根素治疗组结扎1h后再通，再灌注5min及1h时，心电图提示均有较多心律失常发生。

治疗组5min时出现6例，1h时出现3例；IR模型组5min时出现8例，1h时出现5例。

由于心律失常的影响，ST段变化及T波变化无法测量。

两组间心律失常发生率相比，葛根素治疗组有减少趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1结扎大鼠冠状动脉左室支5min 对心电图的影响（
组别n ST段（mV）T波心律失常假手术组100.13±0.040.08±0.022
IR模型组100.36±0.07aa0.29±0.12aa5
葛根素治疗组100.21±0.10b0.29±0.113注：与假手术组比较，aa P＜0.01；与IR模型组比较，b P＜0.05。

2.2 各组血清CK、CRP和NO含量比较
I/R模型组血清CRP含量明显增高，NO含量显著下降，与假手术组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）；葛根素治疗组CRP及CK含量均降低，NO含量均升高，与I/R模型组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。

见表2。

表2各组血清CK、CRP和NO
含量比较（
组别n NO（μmol/L）CK（U/L）CRP（mg/L）假手术组1098.79±10.821217.87±159.03 1.28±0.31
I/R模型组1054.29±11.97aa1990.20±218.05aa 3.87±0.52aa 葛根素治疗组1079.27±15.79b1684.97±196.39b 2.52±0.42b 注：与假手术组比较，aa P＜0.01；与IR模型组比较，b P＜0.05。

3讨论
葛根素是从豆科植物野葛或干葛藤的干燥根中提取的一种黄酮苷，具有扩张冠状动脉、保护心肌缺血再灌注损伤、阻断β-肾上腺素能受体、抗心律失常、抑制血栓形成、改善微循环等作用[3,4]，对治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、糖尿病肾病、视网膜中央静脉阻塞、突发性耳聋等有实用性价值[5]。

本实验中，结扎大鼠冠状动脉左室支5min时致ST段抬高、T波显著增高，心电图出现缺血性损伤变化；再灌注5min和1h，心电图出现较多心律失常，出现再灌注损伤改变，提示心肌缺血再灌注模型复制成功。

同时，葛根素治疗组ST段提高显著低于假手术组及I/R模型组，提示葛根素对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。

CRP是人体非特异性炎症的最敏感的标志物之一，血清CRP的高低与疾病的炎症反应程度关系密切[6]。

CRP可能是心血管疾病最有力的预示因子和独立危险因素之一。

NO是一种血管活性物质，有实验证明，持续基础的NO释放对维持心血管系统恒定的舒张状态、调节冠脉基础张力、保持心肌血流灌注等有重要作用[7]。

CK是心肌缺血时血清酶最早升高的一种，心肌酶的释放量是缺血心肌损害程度的重要标志[8]。

本实验结果显示，葛根素治疗组CRP升高程度明显减小，提示葛根素可能具有抗心肌梗死引起的炎症反应的作用，改善心肌梗死的预后；葛根素可明显提高大鼠心肌缺血再灌注时NO水平，促进内源性NO的生成和释放，增加冠状血流，缓解由于血管内皮损伤导致的心肌损伤。

葛根素还可明显降低结扎冠脉所致的血清CK活性，说明葛根素能很好的缓解心肌的缺血、缺氧现象，减轻再灌注对心肌的损伤，使酶的外漏减少。

综上所述，葛根素可以通过减少CRP释放和升高NO，减少CK漏出，对抗心肌梗死引起的炎症反应，缓解由于血管内皮损伤所导致的心肌损伤，改善心肌梗死的预后。

参考文献：
[1]方喜业.医学实验动物学[M].北京:人民卫生出版社,1995:291-295.
[2]邓汉武.大鼠心肌缺血再灌注损伤实验方法[J].中国药理学通报,1989, 5(5):317.
[3]崔岚,祝德秋,陶达人.葛根素药理作用研究进展[J].中国药师,2004, 7(12):924-927.
[4]崔书霞,田炜,郝志梅.根素对心脏疾病的保护作用[J].广东医学,2013, 34(7):1139-1140.
[5]孙桂红.葛根素的临床应用进展[J].中医临床研究,2010,6(55):100-101.
[6]李十红,李祥国.左室舒张功能障碍的中医研究进展[J].中国中西医结合杂志,1997,17(9):571-572.
[7]Kelrn M, Schrader J. Control of coronary vascular tone by nitric-oxide[J].Cir Res,199066:1561-1575.
[8]刘泽,袁恩荣,吴平生.抗高血压因子对心肌缺血损伤的保护作用[J].临床心血管病杂志,1998,14(3):159.
基金项目：
河南省重点科技攻关，项目编号：152300410193。

编辑：弓良彦编号：EA-4180314129（修回：2018-10-01）。