黄芩苷提取工艺研究_翟保同

黄芩的主要化学成分黄芩苷在植物体内以镁盐形式存 在， 所以可用水作提取溶剂。黄芩苷分子结构中 Ｃ２ 上羧基常 成盐形式存在， 加酸后黄芩苷分子就游离出来。利用黄芩苷 在酸性溶液中易析出的性质， 采用水提取、酸沉淀再用水洗、 醇洗的方法进行提取和纯化。 １ 仪器与材料 １．１ 仪器
紫外分光光度计 ＵＶ－ ２６５（ 日本岛津） 。 １．２ 材料
２ ４．０２×１０－３ ２．０１×１０－ ３
误差 ｅΔ
３ ４．８×１０－３ １．６×１０－ ３
总变异
７ ２．２２６１３３
＊Ｐ＜０．０５； ＊＊Ｐ＜０．０１
Ｆ０．０５ １０．１３
Ｆ０．０１ ３４．１２
方差分析可见 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ 均达到显著水平， 仅 Ｅ 没达到， 可以控制在任意水平， 即 最 佳 组 合为 ： Ａ１Ｂ１Ｃ１Ｄ１Ｅ１。即 浓 缩 至 相对密度 １．０５￣１．１０（８０℃测）， 加稀盐酸调节 ｐＨ１￣２， ８０℃保温 １ ｈ， 静置 ２４ ｈ。 ２．３ 水洗、醇洗工艺的研究
２ Ｂ １ １ ２ ２ １ １ ２ ２ １３．７７５ １８．０１０ ３．４３９ ４．５２３ １．０８４
３
１ １ ２ ２ ２ ２ １ １ １５．７７５ １５．９９０ ３．９４４ ３．９９８ ０．０５４
表 ２ 黄芩水提取正交试验结果
４
５
Ｃ
１
１
２
２
１
１
２
２
１
２
２
１
１
２
２
１
１４．６０５
１５．５４５
１７．１６０
［关键词］ 黄芩苷； 饮片； 粗粉； 冰乙酸； 乙醇； 紫外分光光度法； 方差分析
［中图分类号］ Ｒ２８４．２
［文献标识码］ Ａ
［文章编号］ １６７３－ ７２１０（ ２００７） ０８（ ｂ） － ０９１－ ０３
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒ ａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｂａｉｃａｌｉｎ
因素 水平
１ ２
药材 粒度 Ａ 饮片 粗粉
表 １ 黄芩水提取工艺因素水平表
煎煮次 第 １ 次煎
第 ２、３ 次煎
数（ 次）
煮时间（ ｈ）
煮时间（ ｈ）
Ｂ
Ｃ
Ｄ
２
１．０
１．０
３
２．０
２．０
加水倍 数（ 倍）
Ｅ １０ １２
准确量取 每 份 实 验 提 取 液 ２ ｍｌ， 置 烧 杯 中 ， 加稀 盐 酸 调 ｐＨ１￣２， 移入 １０ ｍｌ 离心管中， 每次用水 ０．２５ ｍｌ 洗涤容器， 洗 涤液并入离心管中， 至沉淀全部移入为止。离心， 弃去上清 液， 每次用丙酮 ０．５ ｍｌ 洗涤沉淀， 离 心 ， 弃 去 丙 酮 ， 至 丙酮 液 近无色为止。用 ９５％乙醇将沉淀移至 １００ ｍｌ 容量瓶中， 加热 使溶解， 放冷至室温， 加乙醇稀释至刻度， 摇匀。然后精密吸 取 ５ ｍｌ， 置 ５０ ｍｌ 容量瓶中， 加乙醇稀释至刻度， 摇匀。依照 分光光度法， 在 ２７９ ｎｍ 波长处测定吸收度， 按 Ｃ２１Ｈ１８Ｏ１１ 的吸
４０
０．５
静置时间（ ｈ） Ｅ ２４ ４８
份， 按表 ４ 酸沉工艺因素水平和表 ５ 酸沉工艺正交试验设计 及黄芩总苷含量进行试验， 以黄芩总苷含量（即 沉 淀 量）为指 标（ 表 ５） 。
列号 表头设计 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ Ｋ１ Ｋ２ Ｋ!１
Ｋ!２ Ｒ
１ Ａ １ １ １ １ ２ ２ ２ ２ ２０．２１７ １６．５２０
０．０９１２８ ０．０９１２８ ４．６１４
０．０５７１ ０．０２８５５ １．２７
０．０８９９ ０．０２２４７５
Ｆ０．０１ ２１．２０
因素 相对密度 水平 Ａ １ １．０５～１．１０ ２ １．１５～１．２０
表 ４ 黄芩酸沉工艺因素水平表
ｐＨ 值 保温温度（℃） 保温时间（ ｈ）
Ｂ
Ｃ
Ｄ
１～２
８０
１．０
３～４
［摘要］ 目的： 对现有黄芩苷提取工艺中的水提、酸沉、水洗、醇洗各参数进行优化， 为今后黄芩苷的提取和纯化提供
参考。方法： 以黄芩苷含量为指标， 通过正交设计实验， 对影响水提、酸沉、水洗、醇洗工艺的因素进行考察， 并进行方
差分析。结果： 确定了提取黄芩苷的最佳工艺条件。结论： 该提取工艺合理， 黄芩苷收率高， 质量易于控制。
方差来源 ｄｆ
ＡΔ
１
Ｂ
１
Ｃ
１
ＤΔ
１
Ｅ
１
误差 ｅ
２
误差 ｅΔ
４
总变异
７
＊＊Ｐ＜０．０１
表 ３ 黄芩水提取试验方差分析
ＳＳ
ｓ２
Ｆ
Ｆ０．０５
４．６５×１０－３ ４．６５×１０－３ ＜１
７．７１
２．２６３ ２．２６３ １００．６９＊＊
０．８１５９ ０．８１５９ ３６．３＊＊
０．０２８１ ０．０２８１ １．２５１
１％
收系数 （Ｅ１ ｃｍ ）６７３ 计算黄芩苷的含量， 结果见表 ２。
ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ 中国医药导报 ９１
· 药物研究 ·
２００７ 年 ８ 月第 ４ 卷第 ２３ 期
列号 表头设计 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ Ｉｊ ＩＩｊ Ｉｊ ＩＩｊ Ｒ
１ Ａ １ １ １ １ ２ ２ ２ ２ １５．７８５ １５．９８０ ３．９４６ ３．９９５ ０．０４９
用正交试验的直观分析法进行分析， 从 Ｒ 值的大小可 知 ： 各 因 素 的 主 次 顺 序 为 Ｂ＞Ｃ＞Ｅ ＞Ｄ＞Ａ。 较 优 组 合 为 ： Ａ２Ｂ２Ｃ２Ｄ２Ｅ２， 即用粗粉、煎煮 ３ 次、每次煎煮 ２ ｈ、每 次 加 １２ 倍 量水。
对上述资料进行方差分析， 见表 ３。从方差分析知： Ｂ、Ｃ 达到了极显著水平， 虽然 Ｅ 没有达到显著水平， 但其 Ｆ 值也 较大， 应控制在最优水平， 而 Ｄ 和 Ａ 因素可以在任意水平， 为了节约工时， 同时考虑到实际生产中颗粒粉易焦化、粘结， 过滤难的特点。Ａ 应取 Ａ１， Ｄ 应取 Ｄ１。因Ⅱ２＞Ｉ２， Ⅱ４＞Ｉ４， Ⅱ７＞Ｉ７。 所 以 ， Ｂ 取 Ｂ２， Ｃ 取 Ｃ２， Ｅ 取 Ｅ２。 最 佳 提 取 工 艺 是 Ａ１ Ｂ２ Ｃ２ Ｄｌ Ｅ２， 即用黄芩饮片， 煎煮 ３ 次， 第 １ 次 ２ ｈ， 第 ２、３ 次各 １ ｈ， 每 次加 １２ 倍量水。 ２．２ 黄芩酸沉工艺的研究
用正交试验， 以黄芩总苷含量（即沉淀量）为指标， 选择浓 缩 液 相 对 密 度 、加 酸 后 的 ｐＨ 值 、保 温 温 度 、保 温 时 间 、静 置 时间 ５ 个因素， 每个因素各选 ２ 个水平， 采用 Ｌ８（２７）正交表进 行设计试验（ 表 ４） 。
称取黄芩饮片 ８００ ｇ， 第 １ 次煎煮 ２ ｈ， 第 ２、３ 次各煎煮 １ ｈ， 每次加 １２ 倍量水， 合并煎液， 滤过， 将滤液平均分成 ８
１６．２２０
３．６５１
３．８８６
４．２９０
４．０５５
０．６３９
０．１６９
６ Ｄ １ ２ ２ １ １ ２ ２ １ １５．６４５ １６．１２ ３．９１１ ４．０３０ ０．１１９
７ Ｅ １ ２ ２ １ ２ １ １ ２ １５．４５５ １６．３１０ ３．８６４ ４．０７８ ０．２１４
黄芩苷含量 （ ｇ） ２．８２５ ３．９６５ ４．２６０ ４．７３５ ３．２９５ ３．６７０ ４．２２５ ４．７９０
１８．４４６
１８．１３９
１８．３５３
１７．９５７
４．５７３
４．６５０
４．５９６
４．６９５
４．６１２ ０．０３９
４．５３５ ０．１１５
４．５８８ ０．００８
４．４８９ ０．２０６
７ Ｅ １ ２ ２ １ ２ １ １ ２ １８．４０８ １８．３２９
４．６０２
４．５８２ ０．０２２
黄芩苷含量 （ ｇ） ５．４３３ ５．０８５ ４．７９８ ４．９０１ ４．５２０ ４．２２７ ３．８４７ ３．９２６
黄芩中含多种黄酮类化合物， 主要为黄芩苷（ ｂａｉｃａｌｉｎ） ［１－３］、 黄芩苷元（ ｂａｉｃａｌｅｉｎ） 、汉黄芩苷（ ｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅ） ， 汉黄芩素（ ｗｏｇｏ－ ｎｉｎ） 、黄 芩 新 素 （ ｓｋｕｌｌｃａｐｆｌａｖｏｎｅ） Ｉ 和 ＩＩ［４，５］等 ， 具 有 抗 菌 、抗 病 毒 、抗 变 态反 应 、抗 炎 、抗 氧 化 ， 增 强 机 体 免 疫 力 ， 镇 静 与 降 压， 利胆与解痉等作用［６，７］。
方差来源
ｄｆ ＳＳ
ｓ２
Ｆ
Ａ
１ １．７０８４７ １．７０８４７ １０６７．８＊＊
Ｂ
１ ０．４０１８５６ ０．４０１８５６ ２５１．１６＊＊
Ｃ
１ ０．０２６３３５ ０．０２６３３５ １６．４６＊
Ｄ
１ ０．０８４６６６ ０．０８４６６６ ５２．９２＊＊
ＥΔ
１ ７．８×１０－４ ７．８×１０－ ４ ＜１
误差 ｅ
５． ０５４
４．１３０ ０． ９１４
２ Ｂ １ １ ２ ２ １ １ ２ ２ １９．２６５ １７．４７２
４．８１６
４．３６８ ０．４４８
表 ５ 黄芩工艺正交试验设计及黄芩总苷含量
３
４
５
６
ＣＤຫໍສະໝຸດ １１１１
１
２
２
２
２
１
１
２
２
２
２
１
２
１
２
１
２
２
１
２
１
１
２
２
１
２
１
１
１８．２９１
１８．５９８
１８．３８４
１８．７８０
称取 黄 芩 饮 片 ２００ ｇ， 平 均 分 成 ４ 份 ， 每 份 ５０ ｇ； 称 取 黄 芩粗粉 ２００ ｇ， 平均分成 ４ 份， 每份 ５０ ｇ。分别按表 １ 黄芩水 提取工艺因素水平和表 ２ 黄芩水提取工艺正交设计进行试 验， 每份提取液用蒸馏水定容至 １ ０００ ｍｌ 容量 瓶 中 ， 待 测含 量。
黄芩苷（ 中国药品生物制品检定所） ； 黄芩（ 购自南阳市 药材公司） ； 甲醇为色谱纯； 冰醋酸为分析纯。 ２ 方法与结果 ２．１ 黄芩水提取工艺的研究
利用正交设计， 以黄芩苷含量为指标， 选择药材粒度、提 取次数、第 １ 次煎煮时间、第 ２、３ 次煎煮时间、加水倍数五个 因素， 每个因素各选二个水平， 采用 Ｌ８（２７）正交表进行设计试 验（ 表 １） 。
ＺＨＡＩ Ｂａｏ－ ｔｏｎｇ１，ＷＡＮＧ Ｙｉｎｇ２ （１． Ｎａｎ Ｙａｎｇ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ， Ｎａｎｙａｎｇ ４７３００４，Ｃｈｉｎａ；２． Ｎａｎｙａｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ， Ｎａｎｙａｎｇ ４７３００４， Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒ ａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ： Ｔｏ ｄｅｆｉｎｅ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒ， ｄｅｐｏｓｉｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ａｃｉｄ， ｗａｓｈｉｎｇ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｏｆ ｂａｉｃａｌｉｎ ｆｒｏｍ ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ． Ａｎｄ ｔｏ ｓｕｐｐｌｙ ａ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｉｃａｌｉｎ ｉｎ ｆｕｔｕｒｅ． Ｍｅｔｈｏｄｓ： Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｂａｉｃａｌｉｎ ａｓ ａｎ ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ｉｎｄｅｘ， ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ａｂｏｕｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒ， ｄｅｐｏｓｉｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ａｃｉｄ， ｗａｓｈｉｎｇ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ． Ｒｅｓｕｌｔｓ： Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｂａｉｃａｌｉｎ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ： Ｔｈｅ ｅｘ－ ｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｓ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ，ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｂａｉｃａｌｉｎ ｉｓ ｈｉｇｈ， ａｎｄ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｉｓ ｅａｓｉｌｙ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ］ Ｂａｉｃａｌｉｎ；Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎｐｉｅｃｅｓ；Ｃｏａｒｓｅ ｐｏｗｄｅｒ； Ｇｌａｃｉａｌ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ； Ｅｔｈａｎｏｌ； Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ； Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ
静置24h23水洗醇洗工艺的研究黄芩苷在酸性条件下可析出酸沉后的沉淀物用水洗至ph50水洗的目的是洗出酸处?过程中产生的无机盐及一些水溶性杂质继用70乙醇洗至ph70醇洗可以洗去一部分醇溶性的杂质
２００７ 年 ８ 月第 ４ 卷第 ２３ 期
· 药物研究 ·
黄芩苷提取工艺研究
翟保同 １， 王 莹 ２ （ １．河南省南阳市中心医院， 河南南阳 ４７３００４； ２．河南省南阳理工学院， 河南南阳 ４７３００４）
９２ 中国医药导报 ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ
２００７ 年 ８ 月第 ４ 卷第 ２３ 期
· 药物研究 ·
用正交试验的直观分析法进行分析， 从 Ｒ 值的大小可 知： 因素的主次顺序为 Ａ ＞Ｂ＞Ｄ＞Ｃ＞Ｅ。最优组合为 Ａ１Ｂ１Ｃ１Ｄ１Ｅ１。对 上述资料进行方差分析见表 ６。
表 ６ 黄芩酸沉试验方差分析