重组人Cu,Zn-SOD包含体的复性、纯化及复性蛋白稳定性研究

重组人Cu,Zn-SOD包含体的复性、纯化及复性蛋白稳定性
研究
刘建荣;赵晓瑜;宋小青;静天玉
【期刊名称】《中国医疗前沿》
【年(卷),期】2007(000)013
【摘要】目的通过体外复性和纯化技术获得具有高纯度、高生物活性的重组人铜锌超氧化物歧化酶(rhCu,Zn-SOD),并研究复性蛋白的稳定性.方法以透析法对在大肠杆菌中以包含体形式表达的rhCu,Zn-SOD进行复性,采用金属螯合亲和层析对
复性样品进行纯化,通过酶活性测定考查复性和纯化的rhCu,Zn-SOD的热稳定性、pH稳定性和对变性剂的稳定性.结果建立了体外透析复性的基本条件,其比活可达
2 380 U·mg-1.该复性样品经金属螯合亲和层析纯化后,结果得到纯度大于95%、
比活5 000 U·mg-1、活性回收率大于100%的目的蛋白.复性和纯化蛋白在温度25～70 ℃和pH 5.0～10.5内活性稳定,并可耐受2～10 mol·L-1的尿素和2%～8%的十二烷基硫酸钠(SDS),对更强烈的变性剂盐酸胍稳定性较弱.结论确定了重组人Cu,Zn-SOD包含体的体外复性条件和复性蛋白纯化方法,且复性蛋白表现出很好的稳定性,为重组人Cu,Zn-SOD的生产奠定了良好基础.
【总页数】6页(P969-974)
【作者】刘建荣;赵晓瑜;宋小青;静天玉
【作者单位】河北大学生命科学学院,河北,保定,071002;河北大学生命科学学院,河北,保定,071002;河北大学生命科学学院,河北,保定,071002;河北大学生命科学学院,河北,保定,071002
【正文语种】中文
【中图分类】Q55
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