RNasefree水的调配
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RNasefree水的调配
RNase free 水的调配:将的的H2O加入到无RNA酶的玻璃瓶中,加入DEPC之
0.1%(v/v-DEPC/ddH2o),搅拌均匀放置过夜并高压灭菌。
(该水可用来稀释提到的RNA)
耗材处理:
离心管﹑枪头的处理:
1﹑将各种枪头﹑离心管装于大烧杯或者大锥形瓶里
2﹑将DEPC稀释1000倍,终浓度为0.1%的稀释液使用
A﹑想1L三角瓶内加入200mlzuoyoude ddH2O
B﹑加1mlde DEPC摇匀(枪要用PE手套套住,以免接触到DEPC)慢慢摇匀,待无油状小滴即可。
C﹑再加入800mlddH2O,再次摇匀
3﹑将0.1%的DEPC水倒入装有枪头和枪头的大烧杯或者三角瓶中,用玻璃棒或者塑料棒尽量赶走瓶内气泡石枪头盒离心管充分和DEPC水接触上,再用东西压在耗材上以使耗材完全浸没在DEPC水中,用4层报纸将大烧杯或者三角瓶包好,用先生扎好。
4﹑将包扎好的放有耗材的大烧杯或者三角瓶以及接触过DEPC的物品全部放入一个塑料袋内已达到密封效果,37摄氏度温育,24h (烘箱中进行——即将塑料袋放在温度为37摄氏度的烘箱中24h)。
5﹑将装有耗材的塑料袋在121℃,30min灭菌,(灭菌时要注意通风,因为DEPC有毒且在灭菌过程中会发挥出来)
6、在超净台上倒掉耗材里面的水(倒出来的水可以用RNase free瓶子装起来作为RNase free水用),后将耗材放到80℃的烘箱中烘干待用。
金属及研钵等物品的处理:
研钵、镊子、小勺、铅盒等物品用水洗干净,烘干,用锡箔之包好,在200℃下灭菌4h。
即可使用,(如若不立即使用,镊子、小勺需用PE手套包好与其他耗材放在80℃烘箱待用)。
枪头盒的处理:
3%的H2O2浸泡24h,在80℃烘箱内烘干待用(用时将本次要用的枪头用镊子夹住放入枪头盒子)也可用DEPC水浸泡24h。