CD3AK
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
． 效应 细胞 组加 入效 应 细胞 、 Ｐ Ｉ１４ Ｒ Ｍ ６０培养 液 各 １０出， ０
核浆 比例明显减 小 ． 染色质疏松 呈网状 ， 核仁大而明显。 ２ Ｍ ｒ法检澳 Ａ Ｔ Ｉ ｃ Ｋ细胞对 Ｋ ６ 、 Ｌ６ ５２ Ｈ －０细胞及其 耐药 株 的体外杀伤作 用 结果显示 ｃ Ａ Ｋ细胞对 Ｋ ６ ５２细胞 、 Ｌ６ Ｈ －０ 细胞及其 耐药 株均 有较 强的杀 伤作用 ， 这种杀伤作 用随技靶 比的增 高而增 强 ， Ａ ｃ Ｋ细胞对 敏感 株和耐药株杀 伤率的差
髓 由附属 医院血蔽科提供 。Ｋ ６ 、 ，０Ｋ ６ ／ Ｃ ５２ｍ ６ 、 ５２Ｖ Ｒ细胞系 由
上海血液学 研究所提供 ， ｍ删 ＾ Ｍ细 胞系 由中国医学科学 Ｄ
院血液学研 究所 提供。抗 ｃ 单抗为邦定公 司产品 ； Ｔ Ｍ ｒ和
甲基纤维素为 Ｓｇ ａ公司产 品 ； Ｐ ＰＦ Ｃ为 ８ｃ ｍ ｏｌ ｒ ｉ ｍ 抗 Ｇ －１ Ｔ ｅｍ ａ ｕｅ Ｃ ｔ
浓度为 １ ／ ｌｃ Ｋ细胞浓 度分别调 整 为 ４×ｌ ｍ 、 ×ｌ ｍ ， Ａ 驴／ｌ２ ×１ ｍ ｍ 、 ｘｌ５ ｌ实验 分三组 ， 验组 加效 、 驴／ｌ１ ｌ ｌ ／ ， ｘ ／ ５ ０ ｍ 实 靶
１ ｃ Ｋ 细胞 的诱 导 与 培 养 外 周 血 单 个 核 细 胞 可 被 Ａ
２ Ａ ｃ Ｋ细胞的制备
将 ３ ＇抗 ｃ 单抗加入 ２ 孔板 ， ｇ ｂ ４
１ ｌＢ Ｓ充分稀释 ， ｍＰ ４℃过夜 ． 临用前吸去 Ｐ Ｓ 加入预玲 Ｐ Ｓ Ｂ， Ｂ
１ １５ ｌ后 吸去 Ｐ Ｓ 加入 由正常人肝素抗凝 全血常规分离 ． ｍｎ ｍ Ｂ， 的单个核 细胞 （ Ｒ Ｍ ６０调 整浓度 为 １ｘ ｌ ） 加入 ＰＩ ４ １ ， ， １０Ｕｍ Ｉ－， ２ 换 液 １ ， ０ ／ １Ｌ２ 每 —３ ｄ 次 并补加相 同浓度的 Ｉ－。 Ｌ２
陈 宝安 陈 苏宁 李翠 萍 金 宝翠 王骏 邵 泽叶 高冲 丁 家华 孙 耘 玉
肿瘤生物治疗是近年来肿瘤治疗中 的重 要进展之一 ， 其 中采用免疫效 应细胞 ， Ｌ Ｋ细胞 、１ 、 如 Ａ １Ｌ ｃ 、 Ｉ ｃ］等 ＣＫ、 【 ＿ 进行的过继免疫治疗在 某些肿瘤的治疗 中取得 了一定疗效 。 ｃ Ｋ细胞是 由抗 ｃ 单 抗联 台小 剂量 Ｉ 激活 的 Ｔ细胞 ． Ａ Ｄ２ 增殖能力和杀伤力较强。我们 在实验 中观察 了 ｃ ＡＫ细胞
异 无统 计学意义 （ １２ 。 表 ，）
３ ７℃、 体积分数为 ５ ％的 ｃ 孵育 ４ｈ再加入 ＭＩ ， Ｔ试剂 ２ ０ 孵育 ４ｈ １ ０ ｒｎ ， ５０ｄ ｉ离心 １ ｉ， ａ ０ｍｎ 弃上清 ， 每孔加 入纯二 甲基 亚 矾（ ＭＳ ）５ ， 分溶解 沉 淀后 于酶联 免疫检 测 仪 （ Ｄ Ｏ １０ 充 波 长 ５１ ） ＂ 衄 检测吸光度（ ， １ ） ）计算杀伤率。计算公式为 ：
３ 包被的抗 ｃ 单抗联 合 １０Ｕｍ － 有 效 活化 ， 腭， ０ ／ ｌＬ２ Ｉ 于第 ７ 天达增殖 高峰 ， 均增 殖 １ ． —９ 平 ７ ９倍。瑞 特 染色显 示 活化
的 ｃ Ｋ细胞呈 明显 母细胞 化 ， 圆或 椭 圆形 ， 浆 丰富 ， Ａ 为 胞
细胞各 １０ ， 细胞组加入靶细胞 、 Ｐ ６０培养液各 １０ ０ 靶 Ｒ ＭＩ ４ １ ０
６ 统计 学处理
分组实验 比较采 用 Ｓ Ｓ软件 进行成纽 检 Ａ
验和配对 检验 。 结 果
３ Ｔ＂ Ｍ Ｉ 测定 ｃ Ｋ细 胞对 Ｋ ６ 、 Ｌ６ Ａ ５ ２ Ｈ －０及其耐 药株 的细胞 毒作用 取对 数生 长期 Ｋ ６ 、 Ｌ６ 胞及其 耐药 株 ， ５ ２ Ｈ －０细 调整
维普资讯
中华 血 液 学 杂志 ２Ｏ Ｏ２年 ４月 第 卷第 ４期
ｃ ｉ ＪＨ￣ａ ｌＡ 】￣ ２ ｖ ２ ， ４ ｈｎ ｅ ｔ ， ２Ｏ ． ３ ｏ
・
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
研 究 报 告 ・
Ｃ ， Ｋ细胞对耐 药 白血 病细胞 的体 外杀伤作 用 ＤＡ
脚 单抗一１Ｃ上 机检测 。 Ｆ Ｔ
原代肿瘤细胞的体外杀伤 作用。 材料和方法 １ 材料 正常人外 周血 由健 康男性 提 供 ； Ｍ Ｃ Ｌ急变 患者 骨
５ 集落培养检测 ｃ Ａ Ｋ细 胞对 Ｈ －０细胞及其耐药株集落 Ｌ６
形成 的抑制作用 取 Ｈ －０ Ｌ６ 细胞 及 Ｈ －０Ｍ） Ｌ６ １ Ｍ细胞 ， 白血 按 病细胞与 ｃ Ｋ细胞 的比例分为 Ｉ ０ Ｉ １ ， ： Ｉ ４ Ａ ： ， ：０ １ 加， ： ０各 ４ 组， 每组均设对 照和实 验组 ， 验 组为两 种 细胞 共 同培 养 ６ 实 ｈ对照组为同样浓度和数量的细胞分别 培养 ６ｈ ， 后于临检测
产 品
前混合 。将 ０ Ｉ 白血病 细胞 悬液（ ｘ１＇ ）ｏ ３ Ｉ Ｍ ． ４ １， 、 Ｐ Ｉ
１４ 培 养液 、． 小 牛血清 加入 １ 甲基 纤维素 （ ７ｇＬ ６０ ０６ ２ ｅ ） 中 ， 匀后 加入 ２ 孔板 ， ３个 复孔 ．７℃ 、 积分 数为 ５ 混 ４ 设 ３ 体 ％ 的 ｃ 培养 ５ｄ后计数 ， ８个细胞 上即为一 个集落 。
对耐药 的白血病细胞 株 及慢性髓 系 白血病 （ Ｍ ） Ｃ Ｌ 急变患 者
４ 耐药 Ｃ ＭＬ患者原代肿 瘤细胞 的制 备及 Ｐ糖 蛋 白（ 印） ＿ Ｐ 的 检测 取耐药 Ｃ Ｌ患者肝 素抗凝 骨髓 ２—３ｍ ， Ｍ ｌ常规 分离 骨 髓单个核细胞 ， 调整浓度为 １ ／ ｌ分为实验 和对照两组 ： ×１ ｍ ， 实验组为 白血病原 代细胞 与异体 ｃ Ｋ细胞 以 １ ５的效靶 Ａ ： 比共 同培养 ６ｈ 对照组 为将 同样浓度 和数量 的白血病 原代 ， 细胞 和 Ｃ ３． Ｄ￣ ａ Ｋ细胞分别培养 ６ｈ 于临检 测前混 合 ． 后 加人抗
核浆 比例明显减 小 ． 染色质疏松 呈网状 ， 核仁大而明显。 ２ Ｍ ｒ法检澳 Ａ Ｔ Ｉ ｃ Ｋ细胞对 Ｋ ６ 、 Ｌ６ ５２ Ｈ －０细胞及其 耐药 株 的体外杀伤作 用 结果显示 ｃ Ａ Ｋ细胞对 Ｋ ６ ５２细胞 、 Ｌ６ Ｈ －０ 细胞及其 耐药 株均 有较 强的杀 伤作用 ， 这种杀伤作 用随技靶 比的增 高而增 强 ， Ａ ｃ Ｋ细胞对 敏感 株和耐药株杀 伤率的差
髓 由附属 医院血蔽科提供 。Ｋ ６ 、 ，０Ｋ ６ ／ Ｃ ５２ｍ ６ 、 ５２Ｖ Ｒ细胞系 由
上海血液学 研究所提供 ， ｍ删 ＾ Ｍ细 胞系 由中国医学科学 Ｄ
院血液学研 究所 提供。抗 ｃ 单抗为邦定公 司产品 ； Ｔ Ｍ ｒ和
甲基纤维素为 Ｓｇ ａ公司产 品 ； Ｐ ＰＦ Ｃ为 ８ｃ ｍ ｏｌ ｒ ｉ ｍ 抗 Ｇ －１ Ｔ ｅｍ ａ ｕｅ Ｃ ｔ
浓度为 １ ／ ｌｃ Ｋ细胞浓 度分别调 整 为 ４×ｌ ｍ 、 ×ｌ ｍ ， Ａ 驴／ｌ２ ×１ ｍ ｍ 、 ｘｌ５ ｌ实验 分三组 ， 验组 加效 、 驴／ｌ１ ｌ ｌ ／ ， ｘ ／ ５ ０ ｍ 实 靶
１ ｃ Ｋ 细胞 的诱 导 与 培 养 外 周 血 单 个 核 细 胞 可 被 Ａ
２ Ａ ｃ Ｋ细胞的制备
将 ３ ＇抗 ｃ 单抗加入 ２ 孔板 ， ｇ ｂ ４
１ ｌＢ Ｓ充分稀释 ， ｍＰ ４℃过夜 ． 临用前吸去 Ｐ Ｓ 加入预玲 Ｐ Ｓ Ｂ， Ｂ
１ １５ ｌ后 吸去 Ｐ Ｓ 加入 由正常人肝素抗凝 全血常规分离 ． ｍｎ ｍ Ｂ， 的单个核 细胞 （ Ｒ Ｍ ６０调 整浓度 为 １ｘ ｌ ） 加入 ＰＩ ４ １ ， ， １０Ｕｍ Ｉ－， ２ 换 液 １ ， ０ ／ １Ｌ２ 每 —３ ｄ 次 并补加相 同浓度的 Ｉ－。 Ｌ２
陈 宝安 陈 苏宁 李翠 萍 金 宝翠 王骏 邵 泽叶 高冲 丁 家华 孙 耘 玉
肿瘤生物治疗是近年来肿瘤治疗中 的重 要进展之一 ， 其 中采用免疫效 应细胞 ， Ｌ Ｋ细胞 、１ 、 如 Ａ １Ｌ ｃ 、 Ｉ ｃ］等 ＣＫ、 【 ＿ 进行的过继免疫治疗在 某些肿瘤的治疗 中取得 了一定疗效 。 ｃ Ｋ细胞是 由抗 ｃ 单 抗联 台小 剂量 Ｉ 激活 的 Ｔ细胞 ． Ａ Ｄ２ 增殖能力和杀伤力较强。我们 在实验 中观察 了 ｃ ＡＫ细胞
异 无统 计学意义 （ １２ 。 表 ，）
３ ７℃、 体积分数为 ５ ％的 ｃ 孵育 ４ｈ再加入 ＭＩ ， Ｔ试剂 ２ ０ 孵育 ４ｈ １ ０ ｒｎ ， ５０ｄ ｉ离心 １ ｉ， ａ ０ｍｎ 弃上清 ， 每孔加 入纯二 甲基 亚 矾（ ＭＳ ）５ ， 分溶解 沉 淀后 于酶联 免疫检 测 仪 （ Ｄ Ｏ １０ 充 波 长 ５１ ） ＂ 衄 检测吸光度（ ， １ ） ）计算杀伤率。计算公式为 ：
３ 包被的抗 ｃ 单抗联 合 １０Ｕｍ － 有 效 活化 ， 腭， ０ ／ ｌＬ２ Ｉ 于第 ７ 天达增殖 高峰 ， 均增 殖 １ ． —９ 平 ７ ９倍。瑞 特 染色显 示 活化
的 ｃ Ｋ细胞呈 明显 母细胞 化 ， 圆或 椭 圆形 ， 浆 丰富 ， Ａ 为 胞
细胞各 １０ ， 细胞组加入靶细胞 、 Ｐ ６０培养液各 １０ ０ 靶 Ｒ ＭＩ ４ １ ０
６ 统计 学处理
分组实验 比较采 用 Ｓ Ｓ软件 进行成纽 检 Ａ
验和配对 检验 。 结 果
３ Ｔ＂ Ｍ Ｉ 测定 ｃ Ｋ细 胞对 Ｋ ６ 、 Ｌ６ Ａ ５ ２ Ｈ －０及其耐 药株 的细胞 毒作用 取对 数生 长期 Ｋ ６ 、 Ｌ６ 胞及其 耐药 株 ， ５ ２ Ｈ －０细 调整
维普资讯
中华 血 液 学 杂志 ２Ｏ Ｏ２年 ４月 第 卷第 ４期
ｃ ｉ ＪＨ￣ａ ｌＡ 】￣ ２ ｖ ２ ， ４ ｈｎ ｅ ｔ ， ２Ｏ ． ３ ｏ
・
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
研 究 报 告 ・
Ｃ ， Ｋ细胞对耐 药 白血 病细胞 的体 外杀伤作 用 ＤＡ
脚 单抗一１Ｃ上 机检测 。 Ｆ Ｔ
原代肿瘤细胞的体外杀伤 作用。 材料和方法 １ 材料 正常人外 周血 由健 康男性 提 供 ； Ｍ Ｃ Ｌ急变 患者 骨
５ 集落培养检测 ｃ Ａ Ｋ细 胞对 Ｈ －０细胞及其耐药株集落 Ｌ６
形成 的抑制作用 取 Ｈ －０ Ｌ６ 细胞 及 Ｈ －０Ｍ） Ｌ６ １ Ｍ细胞 ， 白血 按 病细胞与 ｃ Ｋ细胞 的比例分为 Ｉ ０ Ｉ １ ， ： Ｉ ４ Ａ ： ， ：０ １ 加， ： ０各 ４ 组， 每组均设对 照和实 验组 ， 验 组为两 种 细胞 共 同培 养 ６ 实 ｈ对照组为同样浓度和数量的细胞分别 培养 ６ｈ ， 后于临检测
产 品
前混合 。将 ０ Ｉ 白血病 细胞 悬液（ ｘ１＇ ）ｏ ３ Ｉ Ｍ ． ４ １， 、 Ｐ Ｉ
１４ 培 养液 、． 小 牛血清 加入 １ 甲基 纤维素 （ ７ｇＬ ６０ ０６ ２ ｅ ） 中 ， 匀后 加入 ２ 孔板 ， ３个 复孔 ．７℃ 、 积分 数为 ５ 混 ４ 设 ３ 体 ％ 的 ｃ 培养 ５ｄ后计数 ， ８个细胞 上即为一 个集落 。
对耐药 的白血病细胞 株 及慢性髓 系 白血病 （ Ｍ ） Ｃ Ｌ 急变患 者
４ 耐药 Ｃ ＭＬ患者原代肿 瘤细胞 的制 备及 Ｐ糖 蛋 白（ 印） ＿ Ｐ 的 检测 取耐药 Ｃ Ｌ患者肝 素抗凝 骨髓 ２—３ｍ ， Ｍ ｌ常规 分离 骨 髓单个核细胞 ， 调整浓度为 １ ／ ｌ分为实验 和对照两组 ： ×１ ｍ ， 实验组为 白血病原 代细胞 与异体 ｃ Ｋ细胞 以 １ ５的效靶 Ａ ： 比共 同培养 ６ｈ 对照组 为将 同样浓度 和数量 的白血病 原代 ， 细胞 和 Ｃ ３． Ｄ￣ ａ Ｋ细胞分别培养 ６ｈ 于临检 测前混 合 ． 后 加人抗