灯盏花中总黄酮提取工艺优化研究

灯盏花中总黄酮提取工艺优化研究
何双英;陈京;胡璟
【摘要】目的用正交试验法优选灯盏花中总黄酮的的提取工艺.方法以总黄酮提取量为指标.选择提取乙醇用量、提取时间、醇提浓度为考察因素,采用正交试验法确定灯盏花中总黄酮的最佳提取工艺.应用紫外分光光度法测定总黄酮含量.结果灯盏花中的总黄酮的最佳提取条件为10倍量的60%乙醇提取2次,每次1 h,总黄酮平均回收率为97.78%,RSD为0.65%.结论优选的灯盏花总黄酮提取工艺稳定可行.【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2010(014)007
【总页数】3页(P763-765)
【关键词】灯盏花;总黄酮;工艺优化;紫外分光光度法
【作者】何双英;陈京;胡璟
【作者单位】浙江省义乌市中心医院中药房,浙江,义乌,322000;浙江中医药大学生物工程学院,浙江,杭州,310053;浙江中医药大学生物工程学院,浙江,杭州,310053【正文语种】中文
Abstract:A i mTo optimize the extraction procedure of the total flavonoids from breviscapine.M ethods Using the extraction yield of total flavonoids as the assess ment index,some important factors in the experimental orthogonal design,such as volume of extraction alcohol,extracting
time,content of alcohol,were studied in detail.The total flavonoids content
extracted from breviscapine was determined by spectrophotometric method.Results The opti mized extraction procedure was as
follows:60%alcohol,10 times volume of the weight of the dried material,refluxing 1h for twice.The average recovery rate of the total flavonoidswas 97.78%,while RSD was 0.65%.Conclusion The optimum extraction was reasonable and useful for further development.
Key words:breviscapine;total flavonoids;the control of the extraction;UV spectrophotometry
灯盏花 (Erigeron breviscapus)又名灯盏细辛,为菊科植物短葶飞蓬的全草,主要分布于我国西南部云南、广西、四川、贵州、西藏等地。

灯盏花具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、通经活络、消炎止痛之功效。

灯盏花中含有黄酮、植物甾醇、挥发油、氨基酸及微量元素等多种成分[1]。

药理学研究表明,从其中提取出的黄酮类化合物具有扩张脑血管、冠脉血管,改善微循环,抑制血小板凝集、抗凝血、抗心肌梗死,防止脑缺氧及肾功能衰竭等多种药理作用[2]。

黄酮类化合物是灯盏细辛中主要成分,具有广泛的开发前景和利用价值,值得综合利用和加强资源开发。

故本实验采用正交试验方法,对影响灯盏花醇提工艺的乙醇用量、煎煮时间、醇提浓度等因素和不同水平进行考察,应用紫外分光光度法测定总黄酮含量,确定总黄酮提取的最佳工艺。

1.1 材料芦丁(供含量测定用,中国药品生物制品检定所,批号 100080-200707),灯盏花购自浙江中医药大学中药饮片厂。

其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器 TU-1900双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公司);电子天平 (梅特勒 -拖利多 (常州)称重设备系统有限公司制造);恒温水浴锅 (金坛市大地自动化仪器厂);电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司)。

2.1 正交试验设计黄酮类化合物是灯盏细辛中主要成分,故本实验采用正交试验方
法,对影响灯盏花醇提工艺的乙醇浓度、提取时间、料液比设为三个考察因素,即A 为乙醇浓度(%),B为提取时间(min),C为提料液比,每个因素选择三个水平进行正交试验,优选出最佳水提工艺条件,采用 L9(34)正交表,因素水平安排见表 1。

2.2 总黄酮含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备取芦丁标准品 0.004 g,加 60%乙醇定容至 100 ml,即配成0.040 g·L-1的对照品溶液。

2.2.2 标准曲线的制备[3]精密量取对照品溶液 3,4,5,6, 7 ml,分别置 25 ml容量瓶中,加入 5%亚硝酸钠溶液 1 ml,放置 5 min,再加入 10%硝酸铝溶液 1 ml,摇匀后放置 6 min,然后加入1 mol·L-1氢氧化钠溶液 5 ml,最后加入 60%乙醇定容到 25 ml,在 510 nm波长处测定吸光度。

以对照品溶液浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,得回归方程为 Y=0.024 4X-0.0136,r=0.999 9(n=5)。

结果表明实验中芦丁浓度与吸光度(λ=510 nm)线性关系良好。

2.2.3 供试品溶液的制备取灯盏花 20 g置圆底烧瓶中,按表 1设定的因素进行提取,过滤,浓缩,挥干,剩余物为总黄酮提取物,并计算总黄酮得率。

准确称取灯盏花挥干物0.1 g用 60%乙醇溶解置于 100 ml容量瓶中,即为总黄酮提取液。

取总黄酮提取液 1 ml置于 25 ml容量瓶中,按 2.2.2项方法制备供试品溶液。

2.2.4 精密度实验精密量取对照品溶液 4 ml,置 25 ml容量瓶中,按照上述的方法平行测定 6次,结果表明,RSD为0.54%(n=6),说明该方法精密度良好。

2.2.5 稳定性实验精密量取供试品溶液 1 ml,按照上述的方法,每隔 15 min取样测定吸光度,结果表明供试品在 45 min内稳定。

2.2.6 重现性实验取同一批灯盏花挥干品 5份,各约 0.1 g,精密称定,按照 2.2的方法制成供试品溶液,测定吸光值。

结果表明,平均含量为51.57 mg·g-1,RSD为
0.63%,说明该方法重复性良好。

2.2.7 加样回收实验精密称取已知含量的灯盏花样品共6份,加入一定量的芦丁对
照品,按照 2.2的方法制成供试品溶液,测定其含量。

计算回收率和 RSD值。

结果表明,平均回收率为 97.78%,RSD为 0.65%,说明该方法准确度良好。

2.3 结果根据标准曲线计算总黄酮的含量。

以灯盏花总黄酮的得率(%)为指标,确定最佳提取条件,正交试验结果见表2。

2.4 方差分析对表 2结果进行统计学处理。

方差分析结果见表3。

2.5 验证试验根据实验结果,本实验优选的最佳工艺取 3份药材,每份 20 g,按照所选的提取工艺按照 2.2.2的方法制成供试品溶液,测定吸光度,计算样品中总黄酮的含量,结果样品中总黄酮平均含量为 5.07%,RSD为 1.08%。

灯盏花黄酮类化合物的提取方法[3～5]主要有水提法、有机溶剂提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法等,各有优缺点。

在预实验中,作者分别采用乙醇和水进行总黄酮的提取,结果显示,乙醇提取总黄酮含量明显高于水提,故本实验只考察乙醇提取的影响因素。

药物中如含有黄酮类成分,可用于定量分析的方法很多,主要有分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法等。

本文采用分光光度法测定总黄酮含量,通过方法学考察,结果显示,该方法显色稳定,重复性、精密度及回收率均达到定量分析的方法学考察的要求,且简便易行。

以总黄酮含量为指标,由正交试验的直观分析和方差分析结果知,灯盏花中总黄酮的最佳提取工艺为:加 10倍量60%乙醇,提取 2次,每次 60 min。

总黄酮平均含量为5.07%,RSD为 1.08%。

优选的灯盏花总黄酮提取工艺稳定可行。

【相关文献】
[1] 张卫东,陈万生,王永红,等.灯盏细辛化学成分的研究Ⅱ[J].中国药学杂志,2001,36(4):233-5.
[2] 姜秀娥.灯盏花素的药理作用研究进展[J].医学理论与实践, 2009,22(8):915-6.
[3] 那吉,董学畅,王雪梅,等.超声波协同丙醇 -硫酸铵双水相体系提取灯盏花总黄酮的研究[J].化学与
生物工程,2007,24 (12):51-3.
[4] 张俭,杨艳梅,肖雅元,等.灯盏花黄酮超声波辅助提取工艺研究[J].江苏农业科学,2008,4:212-3.
[5] 王万能,全学军,郑一敏.超声波碱水法提取灯盏花总黄酮的研究[J].声学技术,2006,25(3):214-7.。