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含5_氟尿嘧啶的氨基甲酸聚乙二醇酯前药的合成与表征

( ) NHCOO) ) , 1 160 ( C) O) C ) , 765 ( C) C l ) 。1HNMR ( CDC l3 ), D: 7147 ( m, 1H, )
NH COO) ) , 4162( s, 2H, C lCH 2 ) ), 4112( s, 2H, ) NH COO CH2 ) ) , 3163( s, 4H, ) CH2 CH2 O ) ) 。其中原料配比根据正交实验结果确定, 其他相对分子质量的双氯乙酰氨基甲酸聚乙二醇酯按照相同方法合成。 11212 含 5-FU 的氨基甲酸聚乙二醇酯的合成
Ab stract: A ser ies o f po lyethy lene g lycol derivates w as synthesized by the react ion of A- chloroacety l isocyanate w ith polyethy lene g lyco.l Ow ing to the good reactive activity o f A-chlorin in term ina,l it can react w ith 5- fluorourac i,l and the prodrug could be obtained. T he prodrug w as characterized by FT IR, 1HNMR and UV spectroscopy and confirm ed that the 5- fluorourac il unit w as successfully connected to polyethy lene glyco l term ina.l T he m axm ium loading content o f prodrug w as 2216% m easured by UV and it show ed enhanced w ater so lub ility and longer duration of activ ity due to slow release com pared w ith 5- fluorouraci.l T he prodrugs cou ld release 5- fluorourac il or its derivatives in different pH so lut ions. W hen the m o lecu lar w e ight reaches 2 000, it has the fastest hydrolyzation speed. The m ax im um drug release percentage w as 7115% in 20 h. Key words: 5- fluo rourac i;l A-chloroacety l isocyanate; po lyethylene g lyco;l po lym eric prodrug; ant ineop lastic drug; drug and cosm etic m aterials

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Results
2.2. Overexpressed of PTBP1 promotes migration of lung cancer cells
Results
2.3. Knockdown of PTBP1 inhibits levels of EMT-related proteins in lung cancer cells
Background
Seven alternative splicing (AS) subgroups: • Exon skipping accounts for nearly 40% of AS events; • alternative 3′ splice site (3′SS) selection (18.4%) and 5′SS
3. Dewei Niu, ******, Shanze Yi, Feng Wang*. Gene cloning, protein expression and functional analysis of a type 3 metallothionein gene from Sonneratia alba with biosorption potential. Polish Journal of Environmental Studies, Accepted. PJOES-00647-2017-02.
A
B
A. PTBP1 expression was elevated in LUAD tissues (N=515) compared with normal lung tissues (N=59) according to TCGA database (p<0.01); B. Kaplan-Meier plots of patients with LUAD according to high (N=127) and low (N=375) PTBP1 expression from the TCGA database and compared by paired t-test, p<0.01.

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Inhibitors, Agonists, Screening LibrariesSafety Data Sheet Revision Date:Jul.-04-2017Print Date:Jul.-04-20171. PRODUCT AND COMPANY IDENTIFICATION1.1 Product identifierProduct name :LEE011 (succinate hydrate)Catalog No. :HY-15777CCAS No. :1374639-79-81.2 Relevant identified uses of the substance or mixture and uses advised againstIdentified uses :Laboratory chemicals, manufacture of substances.1.3 Details of the supplier of the safety data sheetCompany:MedChemExpress USATel:609-228-6898Fax:609-228-5909E-mail:sales@1.4 Emergency telephone numberEmergency Phone #:609-228-68982. HAZARDS IDENTIFICATION2.1 Classification of the substance or mixtureNot a hazardous substance or mixture.2.2 GHS Label elements, including precautionary statementsNot a hazardous substance or mixture.2.3 Other hazardsNone.3. COMPOSITION/INFORMATION ON INGREDIENTS3.1 SubstancesSynonyms:Ribociclib succinate hydrate; LEE 011 succinate hydrate; LEE–011 succinate hydrateFormula:C27H38N8O6Molecular Weight:570.64CAS No. :1374639-79-84. FIRST AID MEASURES4.1 Description of first aid measuresEye contactRemove any contact lenses, locate eye-wash station, and flush eyes immediately with large amounts of water. Separate eyelids with fingers to ensure adequate flushing. Promptly call a physician.Skin contactRinse skin thoroughly with large amounts of water. Remove contaminated clothing and shoes and call a physician.InhalationImmediately relocate self or casualty to fresh air. If breathing is difficult, give cardiopulmonary resuscitation (CPR). Avoid mouth-to-mouth resuscitation.IngestionWash out mouth with water; Do NOT induce vomiting; call a physician.4.2 Most important symptoms and effects, both acute and delayedThe most important known symptoms and effects are described in the labelling (see section 2.2).4.3 Indication of any immediate medical attention and special treatment neededTreat symptomatically.5. FIRE FIGHTING MEASURES5.1 Extinguishing mediaSuitable extinguishing mediaUse water spray, dry chemical, foam, and carbon dioxide fire extinguisher.5.2 Special hazards arising from the substance or mixtureDuring combustion, may emit irritant fumes.5.3 Advice for firefightersWear self-contained breathing apparatus and protective clothing.6. ACCIDENTAL RELEASE MEASURES6.1 Personal precautions, protective equipment and emergency proceduresUse full personal protective equipment. Avoid breathing vapors, mist, dust or gas. Ensure adequate ventilation. Evacuate personnel to safe areas.Refer to protective measures listed in sections 8.6.2 Environmental precautionsTry to prevent further leakage or spillage. Keep the product away from drains or water courses.6.3 Methods and materials for containment and cleaning upAbsorb solutions with finely-powdered liquid-binding material (diatomite, universal binders); Decontaminate surfaces and equipment by scrubbing with alcohol; Dispose of contaminated material according to Section 13.7. HANDLING AND STORAGE7.1 Precautions for safe handlingAvoid inhalation, contact with eyes and skin. Avoid dust and aerosol formation. Use only in areas with appropriate exhaust ventilation.7.2 Conditions for safe storage, including any incompatibilitiesKeep container tightly sealed in cool, well-ventilated area. Keep away from direct sunlight and sources of ignition.Recommended storage temperature:Powder-20°C 3 years4°C 2 yearsIn solvent-80°C 6 months-20°C 1 monthShipping at room temperature if less than 2 weeks.7.3 Specific end use(s)No data available.8. EXPOSURE CONTROLS/PERSONAL PROTECTION8.1 Control parametersComponents with workplace control parametersThis product contains no substances with occupational exposure limit values.8.2 Exposure controlsEngineering controlsEnsure adequate ventilation. Provide accessible safety shower and eye wash station.Personal protective equipmentEye protection Safety goggles with side-shields.Hand protection Protective gloves.Skin and body protection Impervious clothing.Respiratory protection Suitable respirator.Environmental exposure controls Keep the product away from drains, water courses or the soil. Cleanspillages in a safe way as soon as possible.9. PHYSICAL AND CHEMICAL PROPERTIES9.1 Information on basic physical and chemical propertiesAppearance Light yellow to yellow (Solid)Odor No data availableOdor threshold No data availablepH No data availableMelting/freezing point No data availableBoiling point/range No data availableFlash point No data availableEvaporation rate No data availableFlammability (solid, gas)No data availableUpper/lower flammability or explosive limits No data availableVapor pressure No data availableVapor density No data availableRelative density No data availableWater Solubility No data availablePartition coefficient No data availableAuto-ignition temperature No data availableDecomposition temperature No data availableViscosity No data availableExplosive properties No data availableOxidizing properties No data available9.2 Other safety informationNo data available.10. STABILITY AND REACTIVITY10.1 ReactivityNo data available.10.2 Chemical stabilityStable under recommended storage conditions.10.3 Possibility of hazardous reactionsNo data available.10.4 Conditions to avoidNo data available.10.5 Incompatible materialsStrong acids/alkalis, strong oxidising/reducing agents.10.6 Hazardous decomposition productsUnder fire conditions, may decompose and emit toxic fumes.Other decomposition products - no data available.11.TOXICOLOGICAL INFORMATION11.1 Information on toxicological effectsAcute toxicityClassified based on available data. For more details, see section 2Skin corrosion/irritationClassified based on available data. For more details, see section 2Serious eye damage/irritationClassified based on available data. For more details, see section 2Respiratory or skin sensitizationClassified based on available data. For more details, see section 2Germ cell mutagenicityClassified based on available data. For more details, see section 2CarcinogenicityIARC: No component of this product present at a level equal to or greater than 0.1% is identified as probable, possible or confirmed human carcinogen by IARC.ACGIH: No component of this product present at a level equal to or greater than 0.1% is identified as a potential or confirmed carcinogen by ACGIH.NTP: No component of this product present at a level equal to or greater than 0.1% is identified as a anticipated or confirmed carcinogen by NTP.OSHA: No component of this product present at a level equal to or greater than 0.1% is identified as a potential or confirmed carcinogen by OSHA.Reproductive toxicityClassified based on available data. For more details, see section 2Specific target organ toxicity - single exposureClassified based on available data. For more details, see section 2Specific target organ toxicity - repeated exposureClassified based on available data. For more details, see section 2Aspiration hazardClassified based on available data. For more details, see section 212. ECOLOGICAL INFORMATION12.1 ToxicityNo data available.12.2 Persistence and degradabilityNo data available.12.3 Bioaccumlative potentialNo data available.12.4 Mobility in soilNo data available.12.5 Results of PBT and vPvB assessmentPBT/vPvB assessment unavailable as chemical safety assessment not required or not conducted.12.6 Other adverse effectsNo data available.13. DISPOSAL CONSIDERATIONS13.1 Waste treatment methodsProductDispose substance in accordance with prevailing country, federal, state and local regulations.Contaminated packagingConduct recycling or disposal in accordance with prevailing country, federal, state and local regulations.14. TRANSPORT INFORMATIONDOT (US)This substance is considered to be non-hazardous for transport.IMDGThis substance is considered to be non-hazardous for transport.IATAThis substance is considered to be non-hazardous for transport.15. REGULATORY INFORMATIONSARA 302 Components:No chemicals in this material are subject to the reporting requirements of SARA Title III, Section 302.SARA 313 Components:This material does not contain any chemical components with known CAS numbers that exceed the threshold (De Minimis) reporting levels established by SARA Title III, Section 313.SARA 311/312 Hazards:No SARA Hazards.Massachusetts Right To Know Components:No components are subject to the Massachusetts Right to Know Act.Pennsylvania Right To Know Components:No components are subject to the Pennsylvania Right to Know Act.New Jersey Right To Know Components:No components are subject to the New Jersey Right to Know Act.California Prop. 65 Components:This product does not contain any chemicals known to State of California to cause cancer, birth defects, or anyother reproductive harm.16. OTHER INFORMATIONCopyright 2017 MedChemExpress. The above information is correct to the best of our present knowledge but does not purport to be all inclusive and should be used only as a guide. The product is for research use only and for experienced personnel. It must only be handled by suitably qualified experienced scientists in appropriately equipped and authorized facilities. The burden of safe use of this material rests entirely with the user. MedChemExpress disclaims all liability for any damage resulting from handling or from contact with this product.Caution: Product has not been fully validated for medical applications. For research use only.Tel: 609-228-6898 Fax: 609-228-5909 E-mail: tech@Address: 1 Deer Park Dr, Suite Q, Monmouth Junction, NJ 08852, USA。

L_精氨酸水溶液循环吸收与解吸CO_2实验研究

第 35 O2 实验研究
85
氨基酸是生命体所需的主要营养成分，也是治疗诸多疾病的常用药物。它是一类同时含有氨基和羧基的有机化合物，根据氨基和羧基数目的不同，分别呈碱性、中性、酸性
[16]
pKa 值为 12.48，可归功于胍基。这个胍基碱性很强，
HN(C4 H8 )NH 2 H + H 2 N (C 4 H8 )NH 2
1 反应机制
精氨酸分子中同时存在氨基、羧基、胍基、直链烷烃、疏水基团和亲水基团、酸性基团和碱性基团、分子间氢键和分子内氢键[17]，由于特殊的结构特点及作为蛋白质的基本结构单元和重要的化工原料，一直是理论和实验研究的热点。 L–精氨酸的结构式如式(1)所示，除含有 1 个胍基外，还包括 1 个羧基和 1 个氨基。分子内羧基和氨基能反应成盐，称为内盐，亦称两性离子或偶极离子[16]，如式(2)所示。
文献标志码：A
L–精氨酸水溶液循环吸收与解吸 CO2 实验研究
赵云霞，钟秦
(南京理工大学化工学院，江苏省南京市 210094)
Experiment Research on CO2 Absorption-desorption Cycles in L-Arginine Aqueous Solutions
(4) (5)
氨基酸电离产生的 H3O 会抑制 CO2 在水中电离，即降低 CO2 在水中的溶解度。实验测得只含 1 个氨基和 1 个羧基的氨基酸，如甘氨酸水溶液，完全不吸收 CO2。因此可将上述内盐近似视为中性盐，那么在 L–精氨酸分子中起碱性并吸收 CO2 作用的
+
86
1 2
中
国
电
机
工
(6)

小檗碱抑制类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞的自噬并促进其凋亡：基于下调ROS

类风湿关节炎（RA ）是一种全身性自身免疫性疾病，主要临床表现为关节滑膜炎症、滑膜异常增生、血管翳形成以及骨和软骨破坏［1］。

成纤维样滑膜细胞（FLSs ）［2］约占关节滑膜细胞总量的70%［3］，是RA 主要的效应细胞［4］，在疾病进展过程中呈现“类肿瘤样增殖”，同时分泌多种基质金属蛋白酶（MMPs ），包括MMP2、MMP9等，以及大量促炎症细胞因子包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β、白细胞介素-6等，进而导Berberine inhibits autophagy and promotes apoptosis of fibroblast-like synovial cells from rheumatoid arthritis patients through the ROS/mTOR signaling pathwayZONG Shiye 1,ZHOU Jing 2,CAI Weiwei 1,YU Yun 1,WANG Ying 1,SONG Yining 1,CHENG Jingwen 1,LI Yuhui 1,GAO Yi 1,WU Baihai 1,XIAN Hao 1,WEI Fang 11School of Pharmacy,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China;2Department of Pharmacy,Hangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Hangzhou 310007,China摘要：目的探究小檗碱（BBR ）对类风湿关节炎（RA ）成纤维样滑膜细胞（FLSs ）凋亡/自噬失衡的调控作用及机制。

方法CCK-8法检测BBR 对RA-FLSs 的增殖抑制作用，实验设空白对照组、TNF-α（25ng/mL ）组、TNF-α+BBR （10、20、30、40、50、60、70、80µmol/L ）组，Annexin V/PI 双染流式法和JC-1免疫荧光染色检测BBR 对RA-FLSs 凋亡的影响，Western blot 检测BBR 对RA-FLSs 自噬和凋亡相关蛋白表达水平的影响。

高效液相色谱法测定注射用美罗培南的有关物质

第35卷第3期长治医学院学报2021 年 6 月JOURNAL OF CHANGZHI MEDICAI COLLEGE167Vol. 35 No. 3Jun. 2021高效液相色谱法测定注射用美罗培南的有关物质李金格禹玉洪**作者单位山西医科大学药学院药剂教研室(030001)* 通信作者(E-mail ：3024546064@ qq. com)摘要目的：探讨优化注射用美罗培南杂质A 、B 的测定方法。

方法：运用高效液相色谱法(HPLC) 进行检测，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A ：20. 0 mmol-L'1磷酸二氢钠-甲醇(89 ：11, V/V)，流动相B ：甲醇，流速1.0 mL-min 1,检测波长220 nm,柱温30 P 。

结果：主成分峰与杂质峰可实现基线分离，杂质A 检测限和定量限分别为1. 62,5.15 ng,杂质B 检测限和定量限分别为0. 85,2. 51 ng ；1.2~24.0 ixg-mL -1的杂质A 具有良好的线性关系(r=0. 999 9) ,0.7-14.0 ixg-mL 1的杂质B 具有良好的线性关系(r=0. 999 9)；杂质A 平均加样回收率为101.2%(RSD= 1.38%,“ = 9),杂质B 平均加样回收率为100.2%(RSD=1.29%,n = 9)o 经破坏性试验，美罗培南可能的降解杂质A 、B 均不干扰美罗培南主峰的测定。

结论:检测限及定量限、精密度、稳定性、耐用性试验结果均符合HPLC 有关物质测定的方法学验证要求。

本HPLC 法专属性良好，可用于美罗培南的主要杂质A 、B 的定量控制。

关键词美罗培南；有关物质；高效液相色谱法中图分类号R97&1文献标识码 A 文章编号1006(2021)03-167-05Determination of Related Substances of Meropenem for Injection by High Performance Liquid ChromatographyLI Jinge , YU YuhongDepartment of Pharmacy , School of Pharmacy , Shanxi Medical UniversityAbstract Objective : To explore and optimize the determination method of impulity A andB of meropenem for injection. Meth ods :Using the high performance liquid chromatography ( HPLC ) to detection , Octadecylsilane-bonded silica gel was used as the fi ler ； The mobile phase A : 20. 0 mmol * L -1 sodium dihydrogen phosphate-methanol ( 89 ： 11, V/V) . The mobile phase B : methanol ,the flow rate was 1. 0 mL *m in _1 and the detection wavelength was set at 220 nm. The column temperature was set at 30 % . Re sults :The principal component peak and impurity peak could achieve baseline separation. The detection limit and quantitative limit of impurity A were 1. 62 ng and 5. 15 ng respectively , and the detection limit and quantitative lim 让 of impurity B were 0. 85 ng and 2. 51 ng respectively. There was A good linear relationship between impurity A (r = 0. 999 9) and impurity B ( r= 0. 999 9 ) in therange of 1. 2-24. 0 |xg *m L _1 and 0. 7 ~ 14. 0 jig * mL -1. The average recovery of impurity A was 101. 2% ( RSD = 1. 38% , n = 9),and that of impurity B was 100. 2% ( RSD = 1. 29% , n= 9). After stressing test, both of impurities A and B of meropenem didn * tinterfere w 让h the determination of meropenem main peak. Conclusion : The test results of detection lim 让 and quant N ative lim 让，pre cision ,stabil 让y and durability all meet the methodological verification requirements of HPLC related substance determination. The HPLC method has good specificity and can be used for the quant N ative control of major impurities A and B.Key words meropenem ； related substances ； HPLC注射用美罗培南(Meropenem, C ”H25弘0申) 是由日本住友制药公司与英国ICI 制药公司共同开发的第二代碳青霉烯抗生素，通过干扰细菌细胞壁的合成发挥杀菌作用，具有广谱耐酶的特点[1_4]o 在美罗培南原料中常检测出杂质A 及杂质B,杂质A(C 17H 27N 3O 6S)为美罗培南四元内酰胺环结构发生水解反应而形成，系美罗培南的降解产物；杂质B(C 34H 50N 6O 10S 2)为美罗培南与杂质A 发生聚合反应而形成，系美罗培南的二聚体X 。

西红花提取物调控免疫细胞，提高程序性死亡受体-1抑制剂治疗肺腺癌效果的实验研究

·封面专题·西红花提取物调控免疫细胞，提高程序性死亡受体-1抑制剂治疗肺腺癌效果的实验研究李诗颖1 李存雅1 张雪2钟薏1（1. 上海中医药大学附属上海市中西医结合医院肿瘤科上海 200082；2. 上海市药材有限公司上海 200082）摘要目的：多项研究提示，西红花提取物能影响肿瘤的发展进程。

本实验探究西红花提取物在肺腺癌小鼠模型中对肿瘤免疫微环境和免疫治疗的影响，为西红花提取物抗肿瘤研究提供更多基础性数据。

方法：构建Lewis肺癌细胞和萤光素酶稳定结合的小鼠皮下瘤模型，观察西红花提取物对小鼠皮下瘤和肿瘤免疫微环境的影响：运用活体成像技术跟踪肿瘤生长情况；运用流式细胞技术检测小鼠CD4+、CD8+ T细胞的数量及占比；运用反转录-聚合酶链式反应技术检测程序性死亡受体配体1、含有T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域的蛋白3（T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3, TIM3）、淋巴细胞活化基因-3（lymphocyte-activation gene-3, LAG3）、具有免疫球蛋白和ITIM结构域的T细胞免疫受体（T cell immunoreceptor with immunoglobulin and ITIM domain, TIGIT）、胸腺细胞选择相关的高迁移率族蛋白（thymocyte selection-associated high mobility group box, TOX）1、TOX2、TOX3基因的mRNA表达情况。

结果：与对照组相比，给予西红花提取物能一定程度地抑制小鼠皮下瘤的生长（P＜0.05），且小鼠CD4+、CD8+ T细胞的数量及占比均增加（P＜0.05），TIM3、LAG3、TIGIT、TOX1、TOX2、TOX3的基因表达均上调（P＜0.05）。

结论：西红花提取物能提高肺腺癌免疫微环境中的CD4+、CD8+ T细胞的占比，增强免疫治疗的抗肿瘤作用，进而提高肺癌免疫治疗效果，抑制肺癌发展。

白花蛇舌草提取物诱导人肾癌GRC-1细胞凋亡及抑制血管生成的实验研究

鼠荧光标记物，充分振摇。洗涤液洗涤，离心，人固加定液。流式细胞仪检测、片后荧光显微镜下观察。制
１５Ｗｅｔｎｂｏ分析ＭＭＰ表达．ｓｒｌｔｅｓ取对数生长期
的ＧＣ１胞，细胞数为５ｘ１。ｍ，分别加入Ｒ一细调０／ｌ
２０，７１）１６ —２２０６１（６：２１１６．
３讨论
白花蛇舌草系茜草科植物，民间常用中草药，为
［］￣ａａＫ，ｅＣｖｅｃｒｌｅｌｎｉｉｕａｅｏｅａｃｌ３ｄｖＳＬｅＳ．Ｅｉｎｅｆｄｎａｄｄｆｓ－ｖｋｄｃｎｅｄｏＯａ＂
摘要：目的
通过体外实验研究白花蛇舌草提取物对人肾癌ＧＣ１细胞凋亡抑制血管生成的可能机制，Ｒ一探讨
其抗肿瘤的作用机制。方法
体外培养人肾癌ＧＣ１Ｒ．细胞，ｌ．、５５、０ｇｍ白花蛇舌草提取物处理４以２５２、０１０ｍ／ｌ８ｈ
ｍ／￣白花蛇舌草提取液组人肾癌ＧＣ１细胞凋ｇｎＲ一
亡率分别为（．２±０４％、８２０８．６）（．５±０１）、．３％
（０６ ±０２）、１．２ ±０４％、１．９ ± １．４．８％（２１．２）（４３０４），间比较均有统计学差异（．４％组Ｐ＜００）．１。２２对ＭＭＰ２和ＭＭＰ９表达的影响．．－见图ｌ。由
于恶性肿瘤、泌尿系统感染、肠炎等有治疗作用，结外用可治疗毒蛇咬伤、痈肿毒等症 ¨ 。研究结果疮２

高效液相-串联质谱测定血浆中依西美坦的浓度

在“１．３”，“１．４”色谱条件下，依西美坦出峰时间在２．５ｒａｉｎ左右，内标非那雄胺出峰时间在２．６ｍｉｎ左右；峰形良好，空白血浆中杂质对两者的测定无干扰，色谱图见图１。
—二眨
：八：
图１
，／１３１１１＂１
，’ｉｎＵｌ
血浆中依西美坦和非那雄胺（内标）的ＳＲＭ色谱图
Ａ，Ｂ一空白血浆；Ｃ，Ｄ一空白血浆中加入依西美坦（２．４８５ｔｔｇ·Ｉ。＿１）；Ｅ，Ｆ空白血浆加入非那雄胺（内标）；Ｇ，Ｈ一健康受试者口服依西美坦胶囊后２ｈ
仪器厂）；旋涡振荡混合器（上海医科大学仪器厂）；ＰＬ５２４２实验室超纯水系统（美国Ｐａｌｌ公司）；１２孔固相萃取装置（美国Ｓｕｐｅｌｃｏ公司）；ＬＣ一１８ＳＰＥ固相萃取小柱（美国Ｓｕｐｅｌｃｏ公司）。１．２试药与试剂
受试制剂：依西美坦胶囊（山西振东金晶制药有限公司，批号：０５１００１，规格：２５ｍｇ）；参比制剂：可怡（依西美坦片，上海复星朝晖药业有限公司，０５１００１，规格：２５ｍｇ）；依西美坦对照品（北京万全阳光医药科技有限公司，含量：９９．５％，批号：０５０８０２）；非那雄胺对照品（北京万全阳光医药科技有限公司，含量：９９．７％，批号：２００５０７０１）；甲醇（色谱纯）；甲酸（分析纯）；水为去离子超纯水；空白血浆（南京市血液中心）。１．·Ｌ～，依西美坦受试制剂和参比制剂的ｔ∽分别为（１３．３７±４．６２）和（１５．６５±５．８９）ｈ，Ｐ。。分别为
（１９．９７－４－８．５１）和（２０．０４±９．１６）ｐｇ·Ｌ～，ｔ，ｎａｘ分别为（０．９５±０．３９）和（０．９０±０．２９）ｈ，ＡＵＣｏ＿７２分别为（９５．６４±２６．８７）和
色谱柱：ＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒＣ１８（４．６ｔｈｉｎ×１５０ｎｌｎｌ，５Ｉ．ｏｎ，江苏汉邦科技有限公司）；流动相：甲醇一水（含０．０５％甲酸）（８０：２０）；流速：１．０ｍＬ·ｍｉｎ；柱温：２５℃。１．４质谱条件

活细胞提取和HPLC - MS分析预测中药生物活性成分

活细胞提取和HPLC - MS分析预测中药生物活性成分李松林一，李平，一，，良闳奢嗯一，瑞燕丽一，连闻柒一和陆雍喳嗯一一药科大学重点实验室中国近代中国药品，药学教育教育部中华人民共和国和系，南京210039，中国收到2005年9月3日;修订了30件2005年12月接受06年1月5日。

可在线2006年2月20号。

摘要一个新的战略，提出了在传统的生物活性成分，用于预测中药（中医）利用活细胞提取和高效液相色谱二极管阵列检测质谱法（HPLC - DAD的- MS）分析。

这个假设是，当细胞一起孵育减少中药提取物，成分中的潜在活性中医应该有选择的细胞结合，在悬架和细胞组分的相对浓度相结合的培养基应，而细胞结合部分将提取物中检出变性细胞。

结合部分的细胞的身份，可确定的HPLC - DAD的质谱分析。

使用该方法，所用的中药活性成分的潜在当归补血，常用汤贫血，它的成分，黄芪当归当归和黄芪的内皮细胞，进行了调查。

六化合物的提取物汤当归补血检测元件的结合选择性内皮细胞，其中两个是由药材贡献当归当归，黄芪及四个基数。

生物活性化合物的潜在身份的四个六分别鉴定为ononoside，毛蕊异黄酮，三丁基苯酞和藁本内酯的HPLC - DAD的质谱分析。

结果表明，该方法可用于预测候选人中医药的生物活性。

关键词：活细胞萃取高效液相色谱法，二极管阵列质谱;预测生物活性成分;当归补血汤，黄芪，黄芪当归当归文章概要1。

简介2。

实验2.1。

中药材和化学品2.2。

样品制备2.3。

细胞培养2.4。

内皮细胞提取2.5。

高效液相色谱分析3。

结果与讨论3.1。

生物活性当归补血汤候选人和血管内皮细胞中的成分为3.2。

当归补血汤鉴定候选人的生物活性和血管内皮细胞的成分为4。

结论致谢参考文献1。

简介传统中药）中药（是中国传统的天然治疗的医疗理念的指导下使用的补救措施，并已订明中医界在中国及全球华人对几千年的历史。

中医主要是结合使用，其中复合公式将产生协同作用或拮抗作用[1] 。

检测细胞中1—磷酸鞘氨醇含量的LC—MS／MS分析方法的建立

检测细胞中1—磷酸鞘氨醇含量的LC—MS／MS分析方法的建立目的建立并确证可以检测1-磷酸鞘氨醇（S1P）快速、灵敏、特异的LC-MS/MS定量分析方法。

方法采用C17-S1P作为内参，甲醇一步法进行蛋白沉淀，随后进行正相电喷雾离子化LC-MS/MS分析。

流动相为甲醇-0.1%甲酸水（95∶5，v/v），流速0.2 mL/min，每个样品的分析时间为4 min。

细胞经TNF-α处理后S1P含量显著增加；而经DMS处理后S1P含量显著下降。

结果S1P的标准曲线线性范围为0.1～10 ng/mL。

体外诱导脂肪来源间充质干细胞间质-上皮转换

体外诱导脂肪来源间充质干细胞间质-上皮转换杨倩;张丽娜;李康华;赵春华【摘要】目的探讨在体外诱导人脂肪来源间充质干细胞(hAD-MSCs)发生间质-上皮转换(MET)的可行性.方法从人脂肪中分离、培养间充质干细胞,流式细胞术鉴定其细胞表面标志.在体外添加激活素A( activin A)、维甲酸(RA)和骨形态发生蛋白7(BMP7)培养后,倒置显微镜下观察hAD-MSCs诱导后的形态变化,采用RT-PCR 方法检测间质和上皮细胞相关基因vimentin,E-cadherin,ZO-1和β-catenin在诱导分化过程中表达水平改变.Western blot 检测诱导前后间质标记vimentin和上皮标记β-catenin的表达.结果诱导后细胞形态发生改变,由长梭形变为卵圆形,上皮标记基因E-cadherin,ZO-1和β-catenin的mRNA表达显著上调(P＜0.05),同时间质标志基因vimentin 的mRNA表达显著下降(P＜0.05).Western blot结果显示,与未诱导组相比,诱导后细胞开始表达β-catenin,而vimentin的表达明显下降(P＜0.05).结论 Activin A、RA和BMP7联合使用可诱导hAD-MSCs发生MET的过程.%Objective To explore the feasibility of the induction of mesenchymal-epithelial transition of human adipose-derived mesenchymal stem cells in vitro. Methods MSCs were isolated from human adipose and induced with activin A, RA, BMP7 in vitro. The morphological changes were observed and the expressing of protein vimentin and β-catenin were analysed by Western blot. The mRNA expression level of vimentin, E-cadherin, ZO-1 and β-catenin -was compared in induced and non-induced groups by semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Results After inducing, hAD-MSCs morphology changed from spindle to orbicular-ovate, and expressed epithelialidentification marker. The mRNA expression levels of E-cadherin, ZO-1 and β-catenin were significantly higher (P <0. 05) , vimentin was lower in induced group than those in non-induced group (P <0. 05). Conclusions Human adipose-derived mesenchymal stem cells can be induced into epithelial-like cells in vitro.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2012(032)002【总页数】5页(P123-127)【关键词】脂肪间充质干细胞;诱导;间质-上皮细胞转换【作者】杨倩;张丽娜;李康华;赵春华【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心,北京100005;中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心,北京100005;中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心,北京100005;中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心,北京100005【正文语种】中文【中图分类】R329.2+8胚胎发育过程中普遍存在间质-上皮细胞转换（mesenchymal-epithelial transitions，MET）和上皮-间质细胞转换（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的现象。

UPLC-MS

基因毒性杂质研究专栏㊀基金项目:中国食品药品检定研究院关键技术研究基金(Ｎｏ.ＧＪＪＳ－２０２２－４－２)ꎻ＃同为第一作者ꎬ∗同为通信作者作者简介:袁松ꎬ男ꎬ硕士ꎬ助理研究员ꎬ研究方向:化学药品质量控制ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｙｕａｎｓｏｎｇ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎꎻ李婕ꎬ女ꎬ硕士ꎬ副主任药师ꎬ研究方向:化学药品质量控制ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｌｉｊｉｅ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎ通信作者:刘阳ꎬ男ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ研究方向:药品质量安全ꎬＴｅｌ:０１０－５３８５１５７１ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｙａｎｇｌｉｕ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎꎻ张庆生ꎬ男ꎬ硕士ꎬ主任药师ꎬ研究方向:药品质量安全ꎬＴｅｌ:０１０－５３８５１３７５ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｚｑｓ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎＵＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ法测定磷酸西格列汀中基因毒性杂质ＮＴＴＰ袁松＃ꎬ李婕＃ꎬ张娜ꎬ张龙浩ꎬ刘阳∗ꎬ张庆生∗(中国食品药品检定研究院ꎬ国家药品监督管理局化学药品质量研究与评价重点实验室ꎬ北京１０２６２９)摘要:目的㊀建立磷酸西格列汀原料药及制剂中基因毒性杂质Ｎｉｔｒｏｓｏ－ＳＴＧ－１９(ＮＴＴＰ)的超高效液相色谱－串联质谱(ＵＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ)检测方法ꎮ方法㊀色谱柱为ＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８ＲＲＨＤ(３.０ｍｍˑ１５０ｍｍꎬ１.８μｍ)ꎬ以含０.１％甲酸的水溶液为流动相Ａꎬ０.１％甲酸的乙腈溶液为流动相Ｂꎬ梯度洗脱ꎬ流速为０.３５ｍＬｍｉｎ－１ꎬ柱温为３０ħꎬ进样器温度为１０ħꎬ进样体积为５μＬꎮ采用多反应监测(ＭＲＭ)模式ꎬ对磷酸西格列汀原料药及制剂中的ＮＴＴＰ进行定量检测ꎮ结果㊀ＮＴＴＰ在０.５４~５３.９３ｎｇｍＬ－１范围内具有良好的线性关系ꎮ检测限和定量限分别为０.０２ｎｇｍＬ－１和０.０８ｎｇｍＬ－１ꎮ原料药及制剂在低㊁中㊁高３个浓度的平均加样回收率范围(ｎ＝３)分别为１０５.４３％~１０７.２１％(ＲＳＤɤ３.２％)及１１５.０３％~１２０.２０％(ＲＳＤɤ３.６％)ꎮ应用该方法对１２批原料药及３批制剂中的ＮＴＴＰ进行检测ꎬ结果显示均有检出ꎮ结论㊀该方法灵敏度高㊁专属性强ꎬ可用于测定磷酸西格列汀原料药及制剂中的ＮＴＴＰꎬ可为磷酸西格列汀原料药及制剂的质量控制提供参考ꎮ关键词:磷酸西格列汀ꎻ基因毒性杂质ꎻＮｉｔｒｏｓｏ－ＳＴＧ－１９ꎻ含量测定ꎻ超高效液相色谱－串联质谱中图分类号:Ｒ９２７.１㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２３)１２－１０００－００５ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２３.１２.００９ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｍｐｕｒｉｔｙＮＴＴＰｉｎＳｉｔａｇｌｉｐｔｉｎＰｈｏｓｐｈａｔｅｂｙＵＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳＹＵＡＮＳｏｎｇ＃ꎬＬＩＪｉｅ＃ꎬＺＨＡＮＧＮａꎬＺＨＡＮＧＬｏｎｇｈａｏꎬＬＩＵＹａｎｇ∗ꎬＺＨＡＮＧＱｉｎｇｓｈｅｎｇ∗(ＮＭＰＡＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＱｕａｌｉｔｙＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＤｒｕｇｓꎬＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌꎬＢｅｉｊｉｎｇ１０２６２９ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＵＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｍｐｕｒｉｔｙＮｉｔｒｏｓｏ－ＳＴＧ－１９(ＮＴＴＰ)ｉｎＳｉｔａｇｌｉｐｔｉｎＰｈｏｓｐｈａｔｅ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＮＴＴＰｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８ＲＲＨＤ(３.０ｍｍˑ１５０ｍｍꎬ１.８μｍ)ｗｉｔｈｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ０.１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｔｉｏｎ(ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＡ)ａｎｄ０.１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄｍｅｔｈａｎｏｌｓｏｌｕｔｉｏｎ(ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＢ)ｕｎｄｅｒａｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎａｔａｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ０.３５ｍＬｍｉｎ－１ａｎｄａｃｏｌｕｍｎｔｅｍ￣ｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ３０ħ.Ｍｕｌｔｉｐｌｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ(ＭＲＭ)ｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａｔｒｉｐｌｅｑｕａｄｒｕｐｏｌｅｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒｉｎｐｏｓｉｔｉｖｅｍｏｄｅ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｗａｓｉｎｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０.５４~５３.９３ｎｇｍＬ－１.Ｔｈｅｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｓ０.０２ｎｇｍＬ－１ꎬａｎｄｔｈｅｌｉｍｉｔｏｆｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｗａｓ０.０８ｎｇｍＬ－１.Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ(ｎ＝３)ｏｆａｃｔｉｖｅｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ(ＡＰＩ)ａｎｄｔａｂｌｅｔｓａｔｌｏｗꎬｍｉｄｄｌｅꎬａｎｄｈｉｇｈｓｐｉｋｅｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅ１０５.４３％~１０７.２１％(ＲＳＤɤ３.２％)ａｎｄ１１５.０３％~１２０.２０％(ＲＳＤɤ３.６％)ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.ＵｓｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄｍｅｔｈｏｄꎬｗｅｄｅｔｅｃｔｅｄＮＴＴＰｉｎ１２ｂａｔｃｈｅｓｏｆＡＰＩａｎｄ３ｂａｔｃｈｅｓｏｆｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＮＴＴＰｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎａｌｌｂａｔｃｈｅｓ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅꎬｗｈｉｃｈｃａｎｂｅａｐｐｌｉｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＮＴＴＰｉｎＳｉｔａｇｌｉｐｔｉｎＰｈｏｓｐｈａｔｅꎬｐｒｏｖｉｄｉｎｇｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＳｉｔａ￣ｇｌｉｐｔｉｎＰｈｏｓｐｈａｔｅ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＳｉｔａｇｌｉｐｔｉｎＰｈｏｓｐｈａｔｅꎻＧｅｎｏｔｏｘｉｃｉｍｐｕｒｉｔｙꎻＮＴＴＰꎻＣｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎꎻＵＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ㊀㊀Ｎ－亚硝胺类化合物(Ｎ－ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓꎬＮＡｓ)是一类结构通式为Ｒ１(Ｒ２)Ｎ－Ｎ＝Ｏ的化合物ꎬ其中Ｒ１和Ｒ２为烷基或芳烃ꎬ国际癌症研究机构于１９８７年将ＮＡｓ列入致癌物清单ꎮ２０１７年世界卫生组织发布的致癌清单中ꎬ有近１６个短脂肪链的Ｎ－亚硝胺类化合物被列为２类致癌物质[１]ꎮＮＡｓ常常存在于食品㊁饮用水㊁烟草㊁化妆品等物质中[２－５]ꎬ人们长期接触含ＮＡｓ的这些物质会产生潜在危害ꎮ自２０１８年欧洲药品管理局(ＥｕｒｏｐｅａｎＭｅｄｉｃｉｎｅｓＡｇｅｎｃｙꎬＥＭＡ)宣布在缬沙坦原料和制剂中检测出Ｎ－亚硝基二甲胺(ＮＤＭＡ)后ꎬ各国药品监管机构纷纷加强对药品中ＮＡｓ的监测ꎬ并对多批含有ＮＤＭＡ或其他亚硝胺类杂质的沙坦类药物进行召回ꎬ并要求对产品中ＮＡｓ存在进行风险评估及建立合适的控制策略[６－９]ꎮ西格列汀(结构式见图１)是一种二肽基肽酶－４(ＤＰＰ－４)抑制剂ꎬ可以刺激胰高血糖素的释放并减少胰岛素的分泌ꎬ从而发挥降糖作用ꎬ是一种常见的降糖药ꎬ可与其他药联合用药来治疗包括超重肥胖㊁胰岛素治疗不佳㊁肥胖型２型糖尿病等疾病ꎬ治疗效果良好[１０－１２]ꎮ２０２２年报道表明西格列汀合成中间体三氟甲基－５ꎬ６ꎬ７ꎬ８－四氢－１ꎬ２ꎬ４－三唑并－[４ꎬ３－α]－吡嗪盐酸盐(ＴＴＰ)[１３]可能与亚硝酸盐反应生成Ｎｉｔｒｏｓｏ－ＳＴＧ－１９(ＮＴＴＰꎬ见图１)ꎮＮＴＴＰ是新发现的一种存在于西格列汀中的基因毒性杂质ꎬ可能是以ＴＴＰ为原料合成西格列汀时产生或是最终产品中残留的ＴＴＰ与辅料中微量的亚硝酸盐反应生成ＮＴＴＰꎮＥＭＡ和美国食品药品监督管理局(ＦＤＡ)最初都将其最大摄入量设定为３７ｎｇｄ－１ꎬ但ＦＤＡ为了避免西格列汀产品的短缺ꎬ将最大摄入量调整为２４６.７ｎｇｄ－１ꎬ暂未召回该产品[１４－１５]ꎮ目前国内外尚无对西格列汀中的ＮＴＴＰ检测方法的报道ꎬ本文建立了一个超高效液相色谱－串联质谱(ＵＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ)检测西格列汀中ＮＴＴＰ的方法ꎬ为西格列汀相关原料药与制剂的药品质量控制和监管提供参考ꎮ图１㊀西格列汀㊁ＴＴＰ和ＮＴＴＰ的结构式１㊀材料１.１㊀仪器㊀高效液相色谱－串联三重四极杆质谱仪(美国Ｗａｔｅｒｓ公司)ꎬ配备电喷雾离子源(ＥＳＩ)和ＭａｓｓＬｙｎｘＶ４.２数据处理系统ꎻＸＰ２０５ＤＲ型电子分析天平(瑞士Ｍｅｔｔｌｅｒ公司)ꎻＭｉｌｌｉ－Ｑ超纯水纯化系统(美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司)ꎮ１.２㊀药物与试剂㊀乙腈㊁甲酸㊁甲酸铵(质谱级ꎬ美国ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ)ꎬ水为超纯水ꎬ对照品ＮＴＴＰ来自本实验室合成ꎬ采用高分辨质谱(见图２Ａ)和核磁(见图２Ｂ㊁Ｃ)对其结构进行了确证ꎮ２㊀方法与结果２.１㊀溶液的制备２.１.１㊀标准曲线溶液的制备㊀取ＮＴＴＰ对照品约１０ｍｇꎬ精密称定ꎬ置１００ｍＬ量瓶中ꎬ加水使溶解并稀释至刻度ꎬ作为对照品储备液ꎻ精密量取对照品储备液适量ꎬ以水为稀释剂逐级定量稀释制成每１ｍＬ中含ＮＴＴＰ０.５４㊁１.０８㊁４.３１㊁１０.７９㊁２６.９７㊁５３.９３ｎｇ的溶液ꎬ作为系列线性溶液ꎮ２.１.２㊀供试品溶液的制备㊀取磷酸西格列汀原料药约１００ｍｇꎬ精密称定ꎬ置１０ｍＬ量瓶中ꎬ加水适量ꎬ超声使溶解ꎬ用水稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ作为原料药的供试品溶液ꎮ取磷酸西格列汀片１０片ꎬ精密称定ꎬ研细ꎬ混匀ꎬ精密称取约相当于磷酸西格列汀１００ｍｇ的细粉ꎬ置１５ｍＬ离心管中ꎬ精密加入水１０ｍＬꎬ超声并振摇１０ｍｉｎꎬ滤过ꎬ取续滤液作为片剂的供试品溶液ꎮ２.２㊀色谱及质谱条件２.２.１㊀色谱条件㊀采用ＡｇｉｌｅｎｔＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８ＲＲＨＤ(３.０ｍｍˑ１５０ｍｍꎬ１.８μｍ)色谱柱ꎬ以含０.１％甲酸的水溶液为流动相Ａꎬ０.１％甲酸的乙腈溶液为流动相Ｂꎬ梯度洗脱:０~８.０ｍｉｎꎬ４０％Ｂң１００％Ｂꎻ８.０~８.１ｍｉｎꎬ１００％Ｂң４０％Ｂꎻ８.１~１２.０ｍｉｎꎬ４０％Ｂꎻ流速为０.３５ｍＬｍｉｎ－１ꎬ柱温为３０ħꎬ进样器温度为１０ħꎬ进样体积为５μＬꎮ２.２.２㊀质谱条件㊀采用电喷雾离子源(ＥｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙＩｏｎｉｚａｔｉｏｎＳｏｕｒｃｅꎬＥＳＩ)ꎬ正离子检测模式ꎬ毛细管电压为４.０ｋＶꎬ脱溶剂气温度为５００ħꎬ脱溶剂气流量为１０００Ｌｈ－１ꎬ锥孔气流量为１５０Ｌｈ－１ꎬ离子源温度为１５０ħꎮ监测模式为多反应监测(Ｍｕｌｔｉｐｌｅｒｅ￣ａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒꎬＭＲＭ)ꎬ以ｍ/ｚ２２１.８３ң１９１.９５作为定量离子对ꎬ锥孔电压为１０Ｖꎬ碰撞能量为１０Ｖꎬ以离子对ｍ/ｚ２２１.８３ң１６４.７１作为定性离子对ꎬ锥孔电压为１０Ｖꎬ碰撞能量为２０Ｖꎮ采集时间为２.３~８.０ｍｉｎꎮ２.３㊀方法学考察２.３.１㊀专属性试验㊀取水作为空白溶剂和２.１.１项下约４ｎｇｍＬ－１的对照品溶液分别进样ꎬ记录色谱图ꎬ在所建立的色谱和质谱条件下ꎬＮＴＴＰ的保留时间为２.６２ｍｉｎ(见图３Ａ)ꎬ峰型良好ꎬ空白溶剂对检测无干扰ꎮ图２㊀结构确证－高分辨质谱图(ＡꎬＨ－ＥＳＩ＋)㊁核磁共振氢谱图(Ｂ)和碳谱图(Ｃ)２.３.２㊀系统精密度㊀取２.１.１项下约４ｎｇｍＬ－１的线性溶液连续进样６次ꎬ得ＮＴＴＰ峰面积的ＲＳＤ为１.１３％ꎬ结果表明系统精密度良好ꎮ２.３.３㊀重复性㊀２.３.３.１㊀原料药重复性㊀取磷酸西格列汀原料药(批号:ＳＧＺ１０４０００６)ꎬ按２.１.２项下方法平行制备６份原料药供试品溶液ꎬ进样检测ꎬ按标准曲线法计算ＮＴＴＰ含量ꎬ计算得６份原料药供试品溶液中ＮＴＴＰ含量的ＲＳＤ为７.２％ꎮ结果表明方法对原料药测定具有良好的重复性ꎮ２.３.３.２㊀片剂重复性㊀取磷酸西格列汀片ꎬ按２.１.２项下方法平行制备６份片剂供试品溶液ꎬ进样检测ꎬ按标准曲线法计算ＮＴＴＰ含量ꎬ计算得６份片剂供试品溶液中ＮＴＴＰ含量的ＲＳＤ为３.３％ꎬ结果表明方法对片剂测定具有良好的重复性ꎮ２.３.４㊀线性㊀分别取２.１.１项下系列线性溶液ꎬ进样检测ꎬ记录色谱图ꎮ以质量浓度为横坐标(Ｘ)ꎬＮＴＴＰ峰面积为纵坐标(Ｙ)进行线性回归ꎬ在０.５４~５３.９３ｎｇｍＬ－１浓度范围内线性结果为Ｙ＝５１００.８４Ｘ＋５３９.７９(ｒ＝１.００００)ꎮ结果显示ＮＴＴＰ在其线性范围内峰面积与进样浓度之间呈良好的线性关系ꎮ２.３.５㊀回收率试验２.３.５.１㊀原料药回收率试验㊀取磷酸西格列汀原料药(批号:ＧＺ１０４０００６)约１００ｍｇꎬ精密称定ꎬ置１０ｍＬ量瓶中ꎬ分别用２.１.１项下２５ｎｇｍＬ－１(高浓度)㊁１０ｎｇｍＬ－１(中浓度)㊁４ｎｇｍＬ－１(低浓度)的线性溶液溶解并稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ作为原料药回收率溶液ꎬ每个浓度点平行制备３份ꎬ进样检测ꎬ结果见表１ꎬ低㊁中㊁高浓度点的回收率分别为１０７.２１％(ＲＳＤ２.９％ꎬｎ＝３)㊁１０５.９５％(ＲＳＤ２.５％ꎬｎ＝３)㊁１０５.４３％(ＲＳＤ３.２％ꎬｎ＝３)ꎬ结果表明原料药回收率良好ꎮ２.３.５.２㊀片剂回收率试验㊀取磷酸西格列汀片(批号:２００５１５ＪＡ)ꎬ精密称定ꎬ研细ꎬ混匀ꎬ精密称取细粉适量(约相当于西格列汀１００ｍｇ)ꎬ置１０ｍＬ量瓶中ꎬ分别用２.１.１项下２５ｎｇｍＬ－１(高浓度)㊁１０ｎｇｍＬ－１(中浓度)㊁４ｎｇｍＬ－１(低浓度)的线性溶液溶解并稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ滤过ꎬ取续滤液作为片剂回收率溶液ꎬ每个浓度点平行制备３份ꎬ进样检测ꎬＡ.空白溶剂ꎻＢ.对照品溶液ꎻＣ.片剂供试品溶液图３㊀空白溶剂㊁对照品溶液和片剂供试品溶液提取的离子流色谱图结果见表３ꎬ低㊁中㊁高浓度点的回收率分别为１１５.０３％(ＲＳＤ２.１％ꎬｎ＝３)㊁１１５.９５％(ＲＳＤ３.６％ꎬｎ＝３)㊁１２０.２０％(ＲＳＤ１.４％ꎬｎ＝３)ꎬ结果表明片剂回收率在可接受范围内ꎮ表１㊀原料药加样回收率结果编号加入量/ｎｇ检测量/ｎｇ本底/ｎｇ回收率(％)平均回收率(％)ＲＳＤ(％)１４３.１５４８.７２２.８０１０６.４２２４３.１５４７.９７２.８４１０４.５９１０７.２１２.９３４３.１５５０.６３２.９０１１０.６１４１０７.８７１１７.３１２.９６１０６.０１５１０７.８７１１９.９９２.８５１０８.５９１０５.９５２.５６１０７.８７１１４.１８２.８２１０３.２４７２６９.６６２９７.６４２.８４１０９.３２８２６９.６６２８２.８５２.８３１０３.８４１０５.４３３.２９２６９.６６２８１.０９３.０１１０３.１２２.３.６㊀检测限与定量限㊀取２.１.１项下约０.５ｎｇｍＬ－１的线性溶液ꎬ以水为稀释剂逐步稀释ꎬ分别在信噪比为３ʒ１和１０ʒ１时作为检测限和定量限ꎬ测得ＮＴＴＰ的检测限和定量限分别为０.０２ｎｇｍＬ－１和０.０８ｎｇｍＬ－１ꎮ２.３.７㊀提取效率考察㊀取磷酸西格列汀原料药(批号:ＳＧＺ１０４０００６)和磷酸西格列汀片(批号:Ｔ０２４４４７)ꎬ分别按２.１.２项平行制备２份溶液ꎬ分别超声并振摇１０㊁２０ｍｉｎꎬ进样检测ꎬ按标准曲线法计算ＮＴＴＰ含量ꎬ计算得原料药２份供试品溶液中ＮＴＴＰ含量相对标对偏差为３.３２％ꎬ片剂２份供试品溶液中ＮＴＴＰ含量相对标对偏差为２.０２％ꎬ结果表明超声并振摇１０ｍｉｎ可提取完全ꎮ表２㊀片剂加样回收率结果编号加入量/ｎｇ检测量/ｎｇ本底/ｎｇ回收率(％)平均回收率(％)ＲＳＤ(％)１４３.１５５０.５８０１１７.２２２４３.１５４９.８４０１１５.５０１１５.０３２.１３４３.１５４８.４９０１１２.３８４１０７.８７１２８.８９０１１９.４９５１０７.８７１２０.１８０１１１.４１１１５.９５３.６６１０７.８７１２６.１５０１１６.９５７２６９.６６３２８.６４０１２１.８７８２６９.６６３２４.３５０１２０.２８１２０.２０１.４９２６９.６６３１９.３９０１１８.４４２.３.８㊀溶液稳定性㊀取２.１.１项下约１ｎｇｍＬ－１的对照品溶液ꎬ放置于进样盘ꎬ间隔６ｈ进样检测ꎮ０ｈ和６ｈ时ＮＴＴＰ峰面积的相对偏差为２.７７％ꎬ结果表明对照品溶液１０ħ时６ｈ内稳定ꎮ２.４㊀样品测定㊀按２.１项下制备磷酸西格列汀供试品溶液ꎬ照２.２项下条件进样检测ꎬ记录色谱图(典型图谱见图２Ｂ㊁Ｃ)ꎬ以峰面积按标准曲线法计算供试品溶液中ＮＴＴＰ的含量ꎮ４家原料厂家的１２批样品中检出ＮＴＴＰ含量为０.０１４~０.２０μｇｇ－１ꎻ有３批磷酸西格列汀片中检测出ＮＴＴＰꎬ含量为１.２６~１.４１μｇｇ－１ꎮ３㊀讨论ＮＴＴＰ在水中易溶ꎬ以水为溶剂配制浓度约为１μｇｍＬ－１的对照品溶液ꎬ分别采用ＥＳＩ离子源和ＡＰＣＩ离子源下针泵进样对ＮＴＴＰ的响应及定量/定性离子进行考察ꎬ结果表明ＮＴＴＰ在ＥＳＩ离子源正离子采集模式下响应更好ꎬ继续对ＥＳＩ＋条件进行优化ꎬ最终确定ＮＴＴＰ定量离子对为ｍ/ｚ２２１.８３ң１９１.９５ꎬ锥孔电压为１０Ｖꎬ碰撞能量为１０ｅＶꎬ定性离子对为ｍ/ｚ２２１.８３ң１６４.７１作为ꎬ锥孔电压为１０Ｖꎬ碰撞能量为２０ｅＶꎮ以水为溶剂配制含磷酸西格列汀和ＮＴＴＰ浓度均约为１００μｇｍＬ－１的混合溶液ꎬ采用紫外检测器对ＮＴＴＰ峰与西格列汀峰之间的分离情况进行了考察ꎬ分别试验了甲醇－水㊁乙腈－水系统ꎬ试验证明当流动相为乙腈－水时ＮＴＴＰ和西格列汀出峰较快ꎬ且可完全分离ꎬ水中加入甲酸铵后ＮＴＴＰ的质谱响应降低明显且峰型变差ꎬ加入甲酸可以增强离子化效率提高质谱响应ꎮ最终以含０.１％甲酸的水溶液为流动相Ａꎬ０.１％甲酸的乙腈溶液为流动相Ｂꎬ并进行梯度洗脱ꎮ在最终确定的色谱条件下ꎬ磷酸西格列汀在２.２ｍｉｎ即可洗脱完全ꎬ质谱采集时间设定为２.３~８.０ｍｉｎꎬ高浓度的磷酸西格列汀经液相洗脱后直接从废液排出ꎬ以避免对质谱的污染ꎮ磷酸西格列汀片未明确最大单日剂量ꎬ按推荐剂量１００ｍｇｄ－１计ꎻＥＭＡ和ＦＤＡ最初都将ＮＴＴＰ最大摄入量设定为３７ｎｇｄ－１ꎬ但ＦＤＡ为了避免西格列汀产品的短缺ꎬ将ＮＴＴＰ最大摄入量调整为２４６.７ｎｇｄ－１[１５]ꎻ如按３７ｎｇｄ－１计算ꎬ则磷酸西格列汀中ＮＴＴＰ的残留限度为０.３７μｇｇ－１ꎬ所检原料药中ＮＴＴＰ均未超过此限度ꎬ但片剂中ＮＴＴＰ含量已超限度值ꎻ如按２４６.７ｎｇｄ－１计算ꎬ则磷酸西格列汀中ＮＴＴＰ的残留限度为２.４７μｇｇ－１ꎬ原料药和片剂中ＮＴＴＰ均未超出此限度ꎮ片剂中ＮＴＴＰ含量显著高于原料药ꎬ可能是由于终产品中的ＴＴＰ残留继续与极微量的亚硝酸盐继续反应生产ＮＴＴＰꎬ关于ＴＴＰ残留量与ＮＴＴＰ残留量之间的相关性还需进行进一步的研究ꎮ４㊀结论本研究建立了磷酸西格列汀原料药及片剂中ＮＴＴＰ的ＵＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ检测方法ꎬ并进行了相关方法学验证ꎬ结果表明ꎬ所建立的方法具有良好的专属性㊁灵敏度和准确度ꎬ可准确测定磷酸西格列汀原料药及片剂中潜在的ＮＴＴＰ含量ꎬ有助于磷酸西格列汀的市场监管ꎬ保障药品质量安全ꎮ参考文献:[１]㊀袁松ꎬ黄海伟ꎬ于颖洁ꎬ等.ＵＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ法同时测定氯沙坦钾和缬沙坦中７个亚硝胺类基因毒性杂质[Ｊ].药物分析杂志ꎬ２０２１ꎬ４１(７):１２１８－１２２５.[２]ＰＡＲＫＪＥꎬＳＥＯＪＥꎬＬＥＥＪＹꎬｅｔａｌ.ＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｓｅｖｅｎＮ－ＮｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓｉｎＦｏｏｄ[Ｊ].ＴｏｘｉｃｏｌＲｅｓꎬ２０１５ꎬ３１(３):２７９－２９８. [３]ＫＲＡＳＮＥＲＳＷꎬＭＩＴＣＨＷＡꎬＭＣＣＵＲＲＹＤＬꎬｅｔａｌ.Ｆｏｒ￣ｍａｔｉｏｎꎬｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓꎬｃｏｎｔｒｏｌꎬａｎｄｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓｉｎｄｒｉｎｋｉｎｇｗａｔｅｒ:ａｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＷａｔｅｒＲｅｓꎬ２０１３ꎬ４７(１３):４４３３－４４５０.[４]ＥＤＷＡＲＤＳＳＨꎬＨＡＳＳＩＮＫＭＤꎬＴＡＹＬＯＲＫＭꎬｅｔａｌ.Ｔｏ￣ｂａｃｃｏ－ＳｐｅｃｉｆｉｃＮｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓｉｎｔｈｅＴｏｂａｃｃｏａｎｄＭａｉｎ￣ｓｔｒｅａｍＳｍｏｋｅｏｆＣｏｍｍｅｒｃｉａｌＬｉｔｔｌｅＣｉｇａｒｓ[Ｊ].ＣｈｅｍＲｅｓＴｏｘｉｃｏｌꎬ２０２１ꎬ３４(４):１０３４－１０４５.[５]ＡＬＨＯＯＳＨＡＮＩＫ.ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓｉｎｓｋｉｎｃａｒｅｃｏｓｍｅｔｉｃｓｕｓｉｎｇＣｅ－ＳＢＡ－１５ｂａｓｅｄｓｔｉｒｂａｒ－ｓｕｐｐｏｒｔｅｄｍｉｃｒｏ－ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ[Ｊ].ＡｒａｂＪＣｈｅｍꎬ２０２０ꎬ１３(１):２５０８－２５１６.[６]ＭＡＬＩＨＩＦꎬＷＡＮＧＴ.Ａｎｉｍｐｒｏｖｅｄａｎａｌｙｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓｉｎｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｓｏｌｕ￣ｔｉｏｎｓｕｓｉｎｇｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗｉｔｈｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃ￣ｔｒｏｍｅｔｒｙ[Ｊ].ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＯｐｅｎꎬ２０２２(２):１０００３７. [７]ＦＤＡ.ＵｐｄａｔｅｓｏｎＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩＲｅｃｅｐｔｏｒＢｌｏｃｋｅｒ(ＡＲＢ)ＲｅｃａｌｌｓＩｎｃｌｕｄｉｎｇＶａｌｓａｒｔａｎꎬＬｏｓａｒｔａｎａｎｄＩｒｂｅｓａｒｔａｎ[ＥＢ/ＯＬ].[２０２２－１２－２４].ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｆｄａ.ｇｏｖ/Ｄｒｕｇｓ/Ｄｒｕｇ￣Ｓａｆｅｔｙ/ｕｃｍ６１３９１６.ｈｔｍ.[８]ＢＨＡＲＡＴＥＳＳ.ＣｒｉｔｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤｒｕｇＰｒｏｄｕｃｔＲｅｃａｌｌｓｄｕｅｔｏＮｉｔｒｏｓａｍｉｎｅＩｍｐｕｒｉｔｉｅｓ[Ｊ].ＪＭｅｄＣｈｅｍꎬ２０２１ꎬ６４(６):２９２３－２９３６.[９]ＧＵＮＡＳＥＫＡＲＡＮＰＭꎬＣＨＥＲＴＯＷＧＭꎬＢＨＡＬＬＡＶꎬｅｔａｌ.ＣｕｒｒｅｎｔＳｔａｔｕｓｏｆＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＲｅｃｅｐｔｏｒＢｌｏｃｋｅｒＲｅｃａｌｌｓ[Ｊ].Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎꎬ２０１９ꎬ７４(６):１２７５－１２７８.[１０]ＨＥＲＭＡＮＧＡꎬＳＴＥＶＥＮＳＣꎬＶＡＮＤＹＣＫＫꎬｅｔａｌ.Ｐｈａｒ￣ｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎꎬａｎｉｎ￣ｈｉｂｉｔｏｒｏｆｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌｐｅｐｔｉｄａｓｅＩＶꎬｉｎｈｅａｌｔｈｙｓｕｂｊｅｃｔｓ:Ｒｅ￣ｓｕｌｔｓｆｒｏｍｔｗｏｒａｎｄｏｍｉｚｅｄꎬｄｏｕｂｌｅ－ｂｌｉｎｄꎬｐｌａｃｅｂｏ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｓｔｕｄｉｅｓｗｉｔｈｓｉｎｇｌｅｏｒａｌｄｏｓｅｓ[Ｊ].ＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒꎬ２００５ꎬ７８(６):６７５－６８８.[１１]ＨＥＲＭＡＮＧＡꎬＢＥＲＧＭＡＮＡꎬＬＩＵＦꎬｅｔａｌ.Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉ￣ｎｅｔｉｃｓａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅｏｒａｌＤＰＰ－４ｉｎ￣ｈｉｂｉｔｏｒｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎｉｎｍｉｄｄｌｅ－ａｇｅｄｏｂｅｓｅｓｕｂｊｅｃｔｓ[Ｊ].ＪＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２００６ꎬ４６(８):８７６－８８６.[１２]ＪＡＮＡＮＩＬꎬＢＡＭＥＨＲＨꎬＴＡＮＨＡＫꎬｅｔａｌ.ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＳｉｔａ￣ｇｌｉｐｔｉｎａｓＭｏｎｏｔｈｅｒａｐｙａｎｄＡｄｄ－ＯｎｔｏＭｅｔｆｏｒｍｉｎｏｎＷｅｉｇｈｔＬｏｓｓａｍｏｎｇＯｖｅｒｗｅｉｇｈｔａｎｄＯｂｅｓｅＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＴｙｐｅ２Ｄｉａｂｅｔｅｓ:ＡＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＲｅｖｉｅｗａｎｄＭｅｔａ－Ａｎａｌｙｓｉｓ[Ｊ].ＤｒｕｇＲｅｓ(Ｓｔｕｔｔｇ)ꎬ２０２１ꎬ７１(９):４７７－４８８.[１３]ＨＡＮＳＥＮＫＢꎬＨＳＩＡＯＹꎬＸＵＦꎬｅｔａｌ.Ｈｉｇｈｌｙｅｆｆｉｃｉｅｎｔａｓｙｍｍｅｔｒｉｃｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ[Ｊ].ＪＡｍＣｈｅｍＳｏｃꎬ２００９ꎬ１３１(２５):８５９８－８８０４.[１４]ＥｕｒｏｐｅａｎＭｅｄｉｃｉｎｅｓＡｇｅｎｃｙ.Ｑｕｅｓｔｉｏｎｓａｎｄａｎｓｗｅｒｓｆｏｒｍａｒｋｅｔｉｎｇａｕｔｈｏｒｉｚａｔｉｏｎｈｏｌｄｅｒｓ/ａｐｐｌｉｃａｎｔｓｏｎｔｈｅＣＨＭＰＯｐｉｎｉｏｎｆｏｒｔｈｅＡｒｔｉｃｌｅ５(３)ｏｆＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ(ＥＣ)Ｎｏ７２６/２００４ｒｅｆｅｒｒａｌｏｎｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓｉｎｈｕｍａｎｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｒｏｄｕｃｔｓ[ＥＢ/ＯＬ].[２０２２－１２－２４].ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｅｍａ.ｅｕｒｏｐａ.ｅｕ/ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ/ｒｅｆｅｒｒａｌ/ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓ－ｅｍｅａ－ｈ－ａ５３－１４９０－ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ－ａｎｓｗｅｒｓ－ｍａｒｋｅｔｉｎｇ－ａｕｔｈ￣ｏｒｉｓａｔｉｏｎ－ｈｏｌｄｅｒｓ/ａｐｐｌｉｃａｎｔｓ－ｃｈｍｐ－ｏｐｉｎｉｏｎ－ａｒｔｉｃｌｅ－５３－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ－ｅｃ－ｎｏ－７２６/２００４－ｒｅｆｅｒｒａｌ－ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ－ｉｍｐｕ￣ｒｉｔｉｅｓ－ｈｕｍａｎ－ｍｅｄｉｃｉｎａｌ－ｐｒｏｄｕｃｔｓ＿ｅｎ.ｐｄｆ.[１５]Ｕ.Ｓ.ＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ.ＱＦＤＡｗｏｒｋｓｔｏａｖｏｉｄｓｈｏｒｔａｇｅｏｆｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎｆｏｌｌｏｗｉｎｇｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｉｍ￣ｐｕｒｉｔｙ[ＥＢ/ＯＬ].[２０２２－１２－２４].ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｆｄａ.ｇｏｖ/ｄｒｕｇｓ/ｄｒｕｇ－ｓａｆｅｔｙ－ａｎｄ－ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ/ｆｄａ－ｗｏｒｋｓ－ａｖｏｉｄ－ｓｈｏｒｔａｇｅ－ｓｉｔａ￣ｇｌｉｐｔｉｎ－ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ－ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ－ｉｍｐｕｒｉｔｙ.(收稿日期:２０２３－０２－２５)。

高灵敏度液相色谱- 串联质谱法测定人血浆中普拉克索

拉克索还可以缓解帕金森病患者伴发的抑郁病症 [ 3, 4] 。普拉克索是目前美国神经病学会、运动障
碍学会以及各国帕金森病治疗指南推荐的一线治疗
药物。药动学研究表明 [ 5] , 普拉克索口服吸收迅速完
全, 绝对生物利用度高于 90% , 最大血浆浓度在服药后 1~ 3 h之间出现, 90% 的普拉克索以原形从肾脏排泄。普拉克索临床使用剂量很低, 初始用于治疗帕金森病的推荐剂量为 01125 mg, 最大血药浓度 Cmax小于 0161 ng# mL- 1 [ 5] 。因此需要建立非常灵敏的生物样品分析方法以进行药动学研究。
普拉克索的线性范围为 5192~ 740 pg# mL- 1, 定量下限为 51 92 pg# mL- 1, 日内、日间精密度 ( R SD ) 均小于 917% , 准确度
( RE)在 - 21 5% ~ 01 6% 之间。本法被成功应用于健康受试者单剂量口服 01125 m g 和 01 25 mg 盐酸普拉克索片的药动学研
目前测定普拉克索人血浆中浓度的分析方法报
道较少。已有的几篇文献采用液相色谱 - 串联质谱 ( LC- M S /M S) 法测定 [ 6~ 8] , 定量下限大于 20 pg# mL- 1, 其灵敏度不敏、操作简便的 LC M S /M S法测定血浆中的普拉克索浓度, 并用于普拉克索片单剂量药动学研究。 1 仪器与试药 111 仪器用于血浆样品定量分析的仪器为 Ag-i lent 1100液相色谱系统 ( 包括 G1311A 型四元输液泵, G1367A 型自动进样器, G1316A 型柱温箱和 G1322A 型脱气机 ) , 美国 Ag ilent公司; TSQ Quantum U ltra型三重四极杆串联质谱仪, 配备电喷雾电离源 ( ESI源 ) 以及 Xcalibur 21017 软件, 美国 T hermo F inn igan公司; Turbo Vap LV 蒸发仪, 美国 Caliper公司; M illi- Q Gradient超纯水系统, 法国 M illipore公司; 用于高分辨质谱分析的仪器为 Synapt H DM S 四极杆 - 飞行时间质谱仪, 美国 W aters公司。 112 药品与试剂盐酸普拉克索水合物对照品 ( 批号 1018351 / 0006, 纯度: 9915% ) 由上海勃林格殷格翰药业有限公司提供, 石杉碱甲对照品 ( 批号 100243- 200401, 纯度: 100% ) 购自中国药品生物制品检定所; 色谱纯醋酸铵购自美国 T ed ia公司, 色谱纯甲醇, 乙腈和甲酸购自美国 S igm a公司, 乙醚, 二氯甲烷, 氢氧化钠均为分析纯, 由国药集团化学试剂有限公司提供; 水为 M illipore超纯水; 森福罗 ( 盐酸普拉克索片, 规格: 01125 m g# 片 - 1, 游离碱含量:

不饱和脂肪酸与炎症性肠病因果关系的孟德尔随机化分析　

不饱和脂肪酸与炎症性肠病因果关系的孟德尔随机化分析*李　健1　高建淑1,2　赵可可1,2　高鸿亮1,2#新疆医科大学第一附属医院消化病二科1（830054）　新疆医科大学研究生学院2背景：炎症性肠病（IBD ）是一种慢性复发性胃肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎（UC ）和克罗恩病（CD ）。

目前尚不清楚不饱和脂肪酸与IBD 之间是否存在因果关系。

目的：采用两样本孟德尔随机化分析探究不饱和脂肪酸与IBD 之间的因果关系。

方法：不饱和脂肪酸和IBD 的全基因组关联研究（GWAS ）数据均来源于网络公开数据库。

采用逆方差加权分析法进行两样本孟德尔随机化分析，使用加权中位数法和MR⁃Egger 回归分析验证因果效应，以OR 及其95% CI 评价不饱和脂肪酸与IBD 风险的因果关系。

结果：ω⁃6脂肪酸与CD 无直接因果关系，与UC 有直接因果关系，逆方差加权分析结果显示ω⁃6脂肪酸基因水平每增加一个标准差，UC 风险增加16%（OR =1.16，95% CI : 1.00~1.36，P =0.04）。

而ω⁃3脂肪酸、单不饱和脂肪酸与IBD 之间均未发现因果关系。

结论：ω⁃6脂肪酸可能仅与UC 存在因果关系，ω⁃3脂肪酸、单不饱和脂肪酸与IBD 之间均未发现因果关系。

关键词　脂肪酸类，不饱和；　脂肪酸类，ω⁃6；　炎症性肠病；　结肠炎, 溃疡性；　Crohn 病；　孟德尔随机化分析Causal Association Between Unsaturated Fatty Acids and Inflammatory Bowel Disease: A Mendelian Random ⁃ization Analysis LI Jian 1, GAO Jianshu 1,2, ZHAO Keke 1,2, GAO Hongliang 1,2. 1The Second Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi (830054); 2Graduate School of Xinjiang Medical University, UrumqiCorrespondence to:GAOHongliang,Email:*************************.cnBackground: Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic recurrent inflammatory disease of gastrointestinal tract including ulcerative colitis (UC) and Crohn's disease (CD). It is unclear whether there is a causal association between unsaturated fatty acids and IBD. Aims: A two ⁃sample Mendelian randomization analysis was used to explore the causal association between unsaturated fatty acids and IBD. Methods: The data of the genome⁃wide association study (GWAS) of unsaturated fatty acids and IBD were obtained from web ⁃based public databases. Two ⁃sample Mendelian randomization analysis was performed by using inverse⁃variance weighted analysis, and weight median estimator and MR⁃Egger regression were conducted to validate the association of the causal effect. The causality of unsaturated fatty acids on the risk of IBDwas evaluated by OR and 95% CI . Results: No direct causal association was found between ω⁃6 fatty acids and CD, and a direct causal association was found with UC. Inverse⁃variance weighted analysis showed a 16% increase in the risk of UC for each standard deviation increase in ω⁃6 fatty acid gene levels (OR =1.16, 95% CI : 1.00⁃1.36, P =0.04). However, no causal association was found between ω⁃3 fatty acids, monounsaturated fatty acids and IBD. Conclusions: ω⁃6 fatty acids may be onlycausally associated with UC, and no causal association is found between ω⁃3 fatty acids, monounsaturated fatty acids and IBD.Key words Fatty Acids, Unsaturated;　Fatty Acids, Omega⁃6;　Inflammatory Bowel Disease;　Colitis, Ulcerative;　Crohn Disease;　Mendelian Randomization AnalysisDOI ： 10.3969/j.issn.1008⁃7125.2023.01.003*基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学基金杰出青年科学基金项目（2022D01E25）炎症性肠病（inflammatory bowel disease, IBD ）是一种免疫介导的胃肠道慢性炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC ）和克罗恩病（Crohn's disease, CD ），临床特征以腹痛和腹泻为主。

姜黄素类似物的合成及其生物活性的测定

第202019卷年第7月7期
化学研究与应用 Chem ical Research and App lication
文章编号 : 100421656 (2009) 0720984205
Vol. 21, No. 7 July, 2009
姜黄素类似物的合成及其生物活性的测定
李俊海 1 ,孙纲春 13 ,谢晶曦 2
986
化学研究与应用
第 21卷
的改变量为 ( 0. 0、0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00、 1. 20mL ) , DNA 的改变量为 ( 0. 0、0. 80、1. 00、1. 20、1. 40、1. 60、1. 80mL ) 。
缩氨基硫脲 Schiff 碱配体 E1,及其 Schiff 碱配体 E1的锌 ( Ⅱ)配合物 D1,其合成路线如图 1。
图 1 合成路线
Fig. 1 The synthesis route of curcum in analogues
公司 ) 。其它试剂均为分析纯。
1 实验部分
X24数字显微熔点测定仪 (北京福凯仪器有限公司 ) ; IRPrestige221 型红外分析仪 (日本岛
收稿日期 : 2009201205;修回日期 : 2009204212 基金项目 :河南工业大学引进人才资助项目 (150207) 联系人简介 :孙纲春 (19732) ,男 ,博士 ,硕士研究生导师 , 研究方向为药物合成。 Email: sungangchun@163. com
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=====================================================================Acq. Operator : Li Shan(LCMS-02) Seq. Line : 24
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Analysis Method : D:\AGLIENT 1260\METHOD\BL40-80A-100A,35MIN,45,MIN.225(LCMS).M Last changed : 8/21/2014 11:57:27 AM by Li Shan(LCMS-02) (modified after loading)Method Info : HPLC A-RP-102
Additional Info : Peak(s) manually integrated
min
0.5
1 1.5
2 2.53mAU
2505007501000125015001750 DAD1 B, Sig=214,4 Ref=off (D:\AGLIENT...0\DATA\20140821\20140821 2014-08-21 08-46-22\CPK2014-821-11002.D)
A r e a : 39.497
0.988 A r e a : 6887.61
1.142 A r e a : 20.5183
2.056 A r e a : 12.6896 2.329 A r e a : 10.7762
2.459
===================================================================== Area Percent Report =====================================================================
Sorted By : Signal Multiplier : 1.0000Dilution : 1.0000
Do not use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs
Signal 1: DAD1 B, Sig=214,4 Ref=off
Peak RetTime Type Width Area Height Area # [min] [min] [mAU*s] [mAU] %
----|-------|----|-------|----------|----------|--------| 1 0.988 MM 0.1606 39.49697 4.09805 0.5666 2 1.142 MM 0.0597 6887.60645 1921.38477 98.8025 3 2.056 MM 0.0693 20.51825 4.93310 0.2943 4 2.329 MM 0.0669 12.68955 3.16147 0.1820 5 2.459 MM 0.0626 10.77621 2.86968 0.1546
Totals : 6971.08743 1936.44707
===================================================================== *** End of Report ***
Catalog No : HY-15777B Batch#11002
=====================================================================Acq. Operator : Li Shan(LCMS-02) Seq. Line : 24
Acq. Instrument : HY-LCMS-02 Location : Vial 36Injection Date : 8/21/2014 11:08:54 AM Inj : 1
Inj Volume : 3.000 µl
Acq. Method : D:\AGLIENT 1260\DATA\20140821\20140821 2014-08-21 08-46-22\100-1000MS+3MIN. M
Last changed : 8/21/2014 8:46:23 AM by Li Shan(LCMS-02)
Analysis Method : D:\AGLIENT 1260\METHOD\BL40-80A-100A,35MIN,45,MIN.225(LCMS).M Last changed : 8/21/2014 11:59:23 AM by Li Shan(LCMS-02) (modified after loading)Method Info : HPLC A-RP-102
Additional Info : Peak(s) manually integrated
min
0.5
1
1.5
2
2.5
3
500000
1000000150000020000002500000 MSD1 TIC, MS File (D:\AGLIENT 1260\DATA\20140821\20140821 2014-08-21 08-46-22\CPK2014-821-11002.D) ES-API, Pos, Sc
A r e a : 1.47774e +007
1.149
Catalog No : HY-15777B Batch#11002
MS Signal: MSD1 TIC, MS File, ES-API, Pos, Scan, Frag: 50 Spectra averaged over upper half of peaks. Noise Cutoff: 1000 counts.
Reportable Ion Abundance: > 10%.
Retention Mol. Weight Time (MS) MS Area or Ion
1.149 14777413 435.15 I 218.05 I
m/z
200
400
600
800
20406080100*MSD1 SPC, time=1.106:1.197 of D:\AGLIENT 1260\DATA\20140821\20140821 2014-08-21 08-46-22\CPK2014-821-11002.D ES-API Max: 1.44051e+006
436.1
435.1
218.1
*** End of Report ***。