戟叶酸模黄酮的含量及抗氧化活性

戟叶酸模黄酮的含量及抗氧化活性
翁贵英;左经会;李金辉;陈超
【摘要】为探明戟叶酸模各部位黄酮的含量及抗氧化活性，为其进一步开发利用
提供参考，进行了戟叶酸模根、茎、叶中黄酮的含量测定及其抗氧化活性试验。

结果表明：戟叶酸模根、茎、叶的黄酮含量分别为0．0451 mg／g、0．0196 mg ／g 和0．0175 mg／g，对二苯代苦味酰肼自由基（DPPH·）、羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O－2·）、亚硝基（NO－2·）均具较好的清除作用，当戟叶酸模根、茎、叶黄酮样液浓度分别为2．82×10－1 mg／mL、
1．225×10－1 mg／mL 和1．143×10－1 mg／mL 时清除率均达最高，对DPPH·的清除率分别达55．44％、47．60％和47．49％，对·OH 的清除率分别达18．52％、16．54％和13．45％，对 O—2·的清除率分别达58．08％、54．89％和53．57％，对 NO－2·的清除率分别达66．85％、66．09％和63．89％。

%The content and antioxidant activity of flavonoids from different R.hastatus parts were determined to provide a reference for its development and utilization. The results showed that the flavonoids content in roots,stems and leaves is 0.045 1 mg/g,0.019 6 mg/g and
0.0175mg/g separately and flavonoids from different Rumex hastatus parts has good scavenging effect on DPPH·,·OH,O-2 · and NO-2 ·.The DPPH·,· OH,O-2 · and NO-2 · scavenging rate of 2.82 × 10 -1 mg/mL flavonoids from R.hastatus roots,1.225×10-1 mg/mL flavonoids from
R.hastatus stem and 1.143×10 -1 mg/mL flavonoids from R.hastatus leaves are 55.44%,18.52%,58.08% and 53.57%,47.60%,16.54%, 54.89% and
66.09%,and 47.49%,13.45%,53.57% and 63.89% respectively.
【期刊名称】《贵州农业科学》
【年(卷),期】2015(000)004
【总页数】3页(P75-77)
【关键词】戟叶酸模;黄酮;清除率;抗氧化活性
【作者】翁贵英;左经会;李金辉;陈超
【作者单位】六盘水师范学院生命科学系，贵州六盘水 553004; 六盘水市生物研究所，贵州六盘水 553004;六盘水师范学院生命科学系，贵州六盘水 553004;
六盘水市生物研究所，贵州六盘水 553004;六盘水师范学院生命科学系，贵州六盘水 553004;六盘水师范学院生命科学系，贵州六盘水 553004
【正文语种】中文
【中图分类】S793
酸模属植物根系发达，能固结土壤，涵养水分，具有保持水土的作用[1]。

其根可
入药，俗称土大黄。

戟叶酸模(Rumex.hastatus D.Don)为蓼科(Polygonaceae)酸模属(Rumex L.)植物，彝药称之为窝津津和娃梯格来母，具有发表止咳、祛风除湿、止血之功效[2]；主治感冒、头痛、咳喘、跌打损伤等症，其主要化学成分为蒽醌类、黄酮类、萘、二苯乙烯、香豆素及有机酸等[3]。

目前，对戟叶酸模的研究主
要有戟叶酸模酚类的抗氧化活性[4]、生药学[2]和对金属铜的吸收作用[5]。

但未见戟叶酸模根、茎、叶黄酮的提取及其抗氧化活性研究的相关报道。

黄酮是许多中草药的有效成分，具有抗氧化、抗辐射、抗肿瘤、抗抑郁、扩张血管、降低血糖等多种功能[6-10]，是一种天然抗氧化剂和天然保健原料，因此在农业、医学及食品营养学等领域被广泛应用，具有广阔的市场前景[11-13]。

为探明戟叶酸模各部位黄
酮的含量及对自由基的清除作用，为其进一步合理开发利用提供参考，笔者于2013年10月进行了戟叶酸模的黄酮测定和抗氧化试验。

1.1 试验材料
戟叶酸模全草：2013年7月采自六盘水钟山区，将根、茎、叶洗净，自然风干，粉碎后备用。

试剂：芦丁标准品(中国药品生物制品检定所)，无水乙醇，二苯代苦味酰肼自由基(DPPH)，邻苯三酚，对氨基苯磺酸，盐酸-α-萘胺，Tris，FeSO4，H2O2，NaNO2，Al(NO3)3，NaOH，水杨酸，盐酸等均为市售国产分析纯。

仪器：722型可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)，DK29821型电热恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司)，SartoriusBS110S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，DFT-200手提式高速万能粉碎机(浙江温岭市林大机械有限公司)，XYJ-A电动离心机(江苏金坛市杰瑞尔电器有限公司)。

1.2 黄酮的提取
准确称取戟叶酸模根、茎、叶样品各1.000 g分别置于60 mL平底烧瓶中，加入石油醚10 mL浸泡1 h，置于50℃水浴中脱脂2 h，倒出上清液待石油醚挥发完全后，加入70%乙醇20 mL浸泡1 h，于50℃水浴中浸提2 h[14]，将提取液3 000 r/min离心20 min后，上清液置于4℃冰箱保存，备用。

1.3 标准曲线的绘制
称取120℃干燥的芦丁标准品10 mg，用70%乙醇定容至100 mL，得质量浓度为0.1 mg/mL芦丁标准液。

取6个10 mL容量瓶，分别加入0.1 mg/mL芦丁标准液0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL和5.0 mL，每瓶补加70%乙醇至5 mL，再加入5% NaNO2溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min后加入10% Al(NO3)3溶液0.3 mL，摇匀，再放置6 min，加入4% NaOH 4 mL，用70%乙醇定容至10 mL，摇匀，放置10～15 min后以试剂空白为参比，于360～600 nm波长范围内扫描，在510 nm波长处有最大吸收，故选择510 nm为测定波
长。

以芦丁标准液质量浓度(C)为横坐标，吸光度值(A)为纵坐标绘制标准曲线，拟合回归方程。

1.4 黄酮含量的测定
分别将根、茎、叶提取的上清液稀释后各取1 mL加入10 mL容量瓶中，按绘制
标准曲线的方法，以试剂空白为参比，在波长510 nm处测吸光度。

根据标准曲
线回归方程计算样液浓度。

戟叶酸模黄酮含量参照文献[15]的方法计算，即黄酮含量=C×V÷M，式中，C为样液浓度(mg/mL)，V为样液总体积(mL)，M为样品质量(g)。

1.5 戟叶酸模黄酮抗氧化能力的测定
1.5.1 对二苯代苦味酰肼自由基(DPPH·)的清除分别取根、茎、叶提取上清液各1 mL，稀释成10-1、10-2、10-3、10-4和10-55个不同浓度样液，精确吸取不同浓度样液0.1 mL分别加入试管中，再加120 μmol/L DPPH溶液3 mL，摇匀放
置30 min，以试剂空白为参比，在波长517 nm处测吸光度(Ai)。

清除率=[(Ac-Ai)÷Ac]×100%，式中，Ac为0.1 mL无水乙醇加120 μmol/L DPPH溶液3 mL 的吸光度。

1.5.2 对羟基自由基(·OH)的清除用Fenton反应法[16]，在试管中加入2 mmol/L FeSO4 0.1 mL，依次加入6 mmol/L水杨酸0.1 mL，再加入10-1、10-2、10-3、10-4和10-55个不同浓度的根、茎、叶样液2 mL，6 mmol/L H2O2 0.1 mL，
启动反应，在37℃水浴锅中保温30 min，在波长510 nm处测吸光度(Ax)。

参照文献[17]的方法计算清除率，即清除率=1-[(Ax-Ax0)÷A0]×100%，式中，Ax0为不加H2O2反应体系的吸光度，A0为不加样液反应的吸光度。

1.5.3 对超氧阴离子自由基的清除在试管中各加入10-1、10-2、10-3、10-4和
10-55个不同浓度的根、茎、叶样液1.5 mL，再分别依次加入蒸馏水2.5 mL、
50 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 8.2)4.5 mL、3 mmol/L邻苯三酚0.5 mL，以试
剂空白为参比，在波长325 nm处每隔30 s测1次吸光度，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标进行线性回归，其斜率为(Vs)[18]。

清除率=[(V0-Vs)÷V0]×100%，式中，V0为不加样液的吸光度进行线性回归的斜率。

1.5.4 对亚硝酸钠的清除在试管中各加入10-1、10-2、10-3、10-4和10-55个
不同浓度的根、茎、叶样液4 mL，再依次加入0.01% NaNO2 0.1 mL、柠檬酸-
磷酸缓冲液(pH 3.0)2 mL、蒸馏水3.9 mL，37℃水浴锅中保温1 h，从中取1
mL再依次加入0.4%对氨基苯磺酸2 mL、0.2%盐酸-α-萘胺1 mL，静置15 min 后在波长544 nm处测吸光度。

清除率=[(A0-A)÷A0]×100%，式中，A0为不加样液的吸光度，A为加样液后的吸光度。

2.1 黄酮含量
芦丁标准曲线回归方程为A=12.16C-0.004 6，相关系数R2=0.999 1，线性关系良好(图1)。

根据方程计算出戟叶酸模根、茎、叶的黄酮浓度分别为2.82 mg/mL、1.225 mg/mL和1.143 mg/mL，黄酮含量分别为0.045 1 mg/g、0.019 6
mg/g和0.017 5 mg/g。

2.2 戟叶酸模黄酮的抗氧化能力
从图2看出，戟叶酸模根、茎、叶不同浓度黄酮样液对和均有一定的清除作用，
且清除率随样液浓度升高而增加。

当戟叶酸模根、茎、叶样液浓度分别为
2.82×10-1mg/mL、1.225×10-1mg/mL和1.143×10-1mg/mL时清除率均达
最高，对DPPH·的清除率分别达55.44%、47.60%和47.49%，对·OH的清除率
分别达18.52%、16.54%和13.45%，对的清除率分别达58.08%、54.89%和53.57%，对的清除率分别达66.85%、66.09%和63.89%。

测定结果表明，戟叶酸模根、茎、叶的黄酮含量分别为0.045 1 mg/g、0.019 6 mg/g和0.017 5 mg/g，即根>茎>叶，根部含量较高，为戟叶酸模主要以根入
药提供了有力证据。

戟叶酸模黄酮对二苯代苦味酰肼自由基(DPPH·)、羟自由基
(·OH)、超氧阴离子自由基亚硝酸钠均有一定的清除作用，且清除率随样液中黄酮
浓度的升高而增强，清除率根>茎>叶。

根中黄酮对亚硝酸钠的清除效果最为明显，当黄酮浓度为1.143×10-1mg/mL时清除率可达66.85%。

因此，用戟叶酸模做
成保健药品可预防亚硝酸盐中毒及导致的一些疾病。

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