黄牛白细胞介素-2基因的克隆与序列分析

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牛HSL基因的克隆和生物信息学分析

牛HSL基因的克隆和生物信息学分析刘燕;李赞;田万年【摘要】旨在克隆牛HSL基因的CDS序列,并对该基因进行生物信息学、组织表达谱分析.根据GenBank登录的牛HSL基因序列(NM_001080220)设计1对引物,对牛组织样品中的HSL基因CDS序列进行RT-PCR扩增及序列测定;利用半定量RT-PCR方法检测HSL基因在牛各组织中的表达情况;利用生物信息学软件对其所编码的牛HSL蛋白进行分析.结果显示,获得的牛HSL基因CDS全长为2271 bp,编码756个氨基酸,与GenBank登录的牛HSL基因同源性最高,为99.9％.HSL蛋白含有一个HSL-N superfamily保守结构域,无信号肽结构,具有疏水性.半定量RT-PCR显示,HSL基因在检测的心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肝脏、大网膜、皮下脂肪、肌肉8种组织中均有表达,其中在大网膜和皮下脂肪中表达量较高,在肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、肌肉和心脏中度表达.该试验可为研究牛HSL蛋白的结构和功能提供参考.【期刊名称】《畜牧与饲料科学》【年(卷),期】2019(040)006【总页数】4页(P9-12)【关键词】克隆;分析;HSL基因;生物信息学;表达谱;牛【作者】刘燕;李赞;田万年【作者单位】辽宁禾丰牧业股份有限公司,辽宁沈阳 110164;吉林农业科技学院动物科技学院,吉林吉林 132101;吉林农业科技学院动物科技学院,吉林吉林 132101【正文语种】中文【中图分类】Q785;S823.2激素敏感脂酶（hormone sensitive lipase，HSL）是动物脂肪分解的重要酶之一，动物将体内的脂肪酸以甘油三酯的形式储存在脂肪细胞内，HSL能够把动物体内储存的脂肪进行分解，转变为游离脂肪酸和甘油来满足动物机体的需要，是影响机体脂肪代谢的关键酶和限速酶［1-2］。

目前有关猪的HSL 基因序列分析及表达研究研究报道较多［3-5］。

黄艳娜等［6］对陆川猪激素敏感性脂肪酶基因进行了克隆和序列分析。

牛白细胞介素2基因克隆、表达及多克隆抗体的制备的开题报告

牛白细胞介素2基因克隆、表达及多克隆抗体的制备的开题报告题目：牛白细胞介素2基因克隆、表达及多克隆抗体的制备一、研究背景白细胞介素2 (IL-2) 是一种细胞因子，可以使激活的T细胞和自然杀伤细胞增殖和分化，同时也可以作用于其他免疫和非免疫细胞。

因此，IL-2 在研究和治疗免疫相关疾病中具有广泛的应用前景。

牛在畜产品生产中占有重要地位，牛 IL-2 的研究对于了解牛免疫系统功能和疾病治疗具有重要意义。

目前，已经有许多研究报道了牛 IL-2 的生物学特性、发育过程中的表达等方面的情况，但是牛IL-2 的克隆、表达及抗体制备等方面的研究还比较少。

因此，本研究拟对牛白细胞介素2进行克隆、表达及多克隆抗体的制备，为进一步研究牛 IL-2 功能和应用提供基础支持。

二、研究目的1. 对牛 IL-2 基因进行PCR扩增、克隆并进行序列分析，获得牛 IL-2 基因序列并进行分析。

2. 对牛 IL-2 的重组表达载体进行构建，并进行表达筛选和纯化。

3. 制备牛 IL-2 的多克隆抗体，并进行鉴定和应用。

三、研究内容和方法1. PCR扩增、克隆和序列分析设计牛 IL-2 的引物，并用 RT-PCR 的方法从牛外周血单个核细胞中扩增牛 IL-2 基因。

将扩增的 PCR 产物进行克隆，并经测序和分析。

2. 表达重组载体构建将牛 IL-2 基因克隆到特定的表达载体中，经过转染进入特定的细胞质中，使载体表达牛 IL-2。

将表达后的重组蛋白进行纯化，以获得高纯度的牛 IL-2 蛋白。

3. 制备多克隆抗体选择合适的动物（小鼠、兔子等）进行抗原接种，用已纯化的牛 IL-2 蛋白或其表位肽免疫，收集免疫血清，制备多克隆抗体，并进行鉴定和应用。

四、预期结果完成牛 IL-2 基因的克隆、表达和多克隆抗体的制备，建立一套完善的实验方法和技术体系，为后续的研究提供基础和技术支持。

五、可行性和创新本研究所设计的实验方法和技术路线已经在其他物种的 IL-2 研究中得到应用，并取得了较好的研究结果。

水牛白细胞介素-2基因的克隆及其序列分析

—
关键词：沼泽型水牛；淋巴细胞；一２克隆；ｍ；
测序
体购于大连宝生物工程有限公司。１３水牛外周血淋巴细胞分离培养及诱导．无菌采集水牛外周血，素抗凝。按常规肝方法分离淋巴细胞，用含１％胎牛血清的Ｒ．０ＰＭＩ６０１４培养液吹散细胞，台盼蓝染色计数活细
列同源性为９．％。９８
Ｅ．ｌＤａ由本实验室保存；ｃｉＩｏ中国广西区本地沼泽型健康水牛由广西大学农场提供。
１２主要试剂．
淋巴细胞分离液购于上海试剂二厂，ＰＲ．ＭＩ６０ＴｉｌＩｉｏｅ品ｄＴ、１４、ｒｏ为ｎｔｇｎ产ｚｖｒＮＰ氨苄青霉素（ｍｐ、Ａ）氯仿、苯酚购于上海生工生物工程技术服务有限公司；ａ聚合酶、Ｔｑ反转录酶ＭＭＬＶ为Ｐｏｅａｒｍｇ产品；回收试剂盒购于上胶海华舜生物工程有限公司。ｐ１一Ｔ克隆载ＭＤ８
１材料和方法
１１菌种和实验动物．
作者简介：忠伟，，９０年生，陈男１７兽医师。
下游引物：ＴｒＴＣ５’ ＡＧ的克隆及阳性质粒的鉴定．
＊通讯作者：张为宇，Ｅ—ｍａ：ｗｉ＠ｈｍ￣ｉｍｉｚｅｕｏａ．ｌｙｌ
（．１广西区兽医研究所，广西南宁５００；．３０１２广西大学动物科学技术学院，广西南宁５００）３０５
文献标识码：Ｂ文章编号：０２２５２０）４—０４１０ —５３｛０６０１７—０３

獭兔白细胞介素-2(IL-2)基因克隆及真核表达的开题报告

獭兔白细胞介素-2（IL-2）基因克隆及真核表达的开题报告
一、项目背景
白细胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）是一种免疫调节因子，广泛存在于人和动
物的生物体内，对免疫系统的调节具有重要意义。

研究表明，IL-2对于T细胞增殖、
活化及调节具有重要作用。

因此，对于IL-2的研究和应用具有重要的生物和医学意义。

獭兔是世界上重要的实验动物之一，其免疫系统与人类有很高的相似度。

因此，研究獭兔IL-2基因的克隆和真核表达，不仅能够深入了解獭兔免疫系统的调节机制，
也有助于研究其在人类免疫系统中的生物学作用。

二、研究目的
本研究的主要目的是克隆獭兔IL-2基因并进行真核表达，为进一步研究IL-2在
獭兔免疫系统中的调控机制及其在人类免疫系统中的生物学作用奠定基础。

三、研究内容和方法
1. 獭兔IL-2基因的克隆
本研究将采用RT-PCR技术从獭兔外周血中提取总RNA，通过cDNA合成和PCR 扩增得到獭兔IL-2基因的全长序列。

PCR产物将经过酶切、连接和转化等步骤，得到
重组质粒pEGFP-N1-IL-2。

2. 獭兔IL-2基因的真核表达
本研究将采用流感病毒质粒转染法将重组质粒pEGFP-N1-IL-2导入到HEK293T
细胞中。

通过Western blot、ELISA等方法，检测獭兔IL-2蛋白的表达情况。

四、预期成果
通过克隆和真核表达獭兔IL-2基因，有效地探讨了獭兔免疫系统调节机制和其
在人类免疫系统中的生物学作用。

同时，为进一步深入研究獭兔免疫系统及其在临床
医学中的应用提供了技术和理论支持。

鸭白细胞介素2(IL-2)克隆表达及生物活性检测的开题报告

鸭白细胞介素2（IL-2）克隆表达及生物活性检测的
开题报告
一、研究背景及意义
白细胞介素2 （IL-2）是一种重要的免疫调节因子，能够促进T细
胞和自然杀伤细胞的增殖和分化，增强细胞免疫反应。

因此，IL-2在临
床上被广泛应用于肿瘤、感染、自身免疫疾病等方面的治疗。

但是，由
于IL-2自身的不稳定性和高度抗原性，从而受到自身免疫应答的影响，
研究人员通过克隆表达技术来获得高纯度的重组IL-2，并进一步研究其
生物学活性、组织染色等方面的性质。

二、研究内容和目的
本研究旨在构建鸭白细胞介素2（IL-2）克隆表达系统，采用质粒转染的方式，将鸭IL-2基因克隆到表达载体中，通过表达、纯化和活性鉴
定等方法，获得高纯度的重组鸭IL-2。

三、研究方法
1.构建鸭IL-2克隆表达质粒
将鸭白细胞中的IL-2基因扩增，通过PCR克隆到表达载体中，包括启动子、启动子元件、选择标记等。

2.质粒转染
将构建好的鸭IL-2克隆表达质粒转染到E.coli BL21（DE3）细胞中，诱导鸭IL-2的表达和积累。

3.纯化
采用亲和层析法和透析法对重组鸭IL-2进行纯化和精制，获得高纯
度的重组蛋白。

4.生物活性检测
采用MTT法或放射性同位素标记法，对重组鸭IL-2的生物学活性进行检测，包括对T细胞和自然杀伤细胞的增殖和分化的影响。

四、预期结果和意义
通过构建鸭白细胞介素2克隆表达系统，成功获得高纯度的重组鸭IL-2，并进一步研究其生物学活性和组织染色等方面的性质，可以为研究鸭免疫系统、疾病治疗等领域提供有益的参考数据和理论支持。

牛Tollip基因编码区克隆及功能分析

ＤｏｇｉｇＬａｅＢａｉ，ｈｎｄ１００，ｈｎ）ｎｔｎｋｓｎＣａｇｅ４５０Ｃｉａ
Ａｂｔａｔｎｔｉｓｕｙｔｅｂｖｎｌｉｅｅｗａｌｎｄｂｓｒｃ：Ｉｈｓｔｄ，ｈｏｉｅＴｏｌｐｇｎｓｃｏｅｙＲＴ — ＰＣＲ．ｕｓｑｅｔＤＮＡｅＳｂｅｕｎｓ— ｑｅｃｎｈｗｅｈｔｔｅｌｎｔｆｔｅｐｒｉｌｓｑｅｃｓ２６ｂｉｃｕｉｇｔｅｃｍｐｅｅＣ￣ｎｉｇｓｏｄｔａｈｅｇｈｏｈａｔｅｕｎｅｉ１ｐ，ｎｌｄｎｈｏｌｔＤＳｕａ９（２ｔｉｎｔｆｏ５ｏ８３ｎｏｉｇａｐｏｅｎｏ７ａＴｈｌｃｌｒｗｅｇｔａｄｉｏｌｃ８２ｎｎｌｇｈ，ｒｍ２ｔ７）ｅｃｄｎｒｔｉｆ２３ａ．ｅｍｏｅｕａｉｈｎｓｅｅ～ｅ
中图分类号：８３￥２
文献标识码：Ａ
文章编号：１００４—３６（０１１ —０３ —０２８２ｌ）１１６４
ＣｌｎｎｎｎｔｏａｎｌｓｓｏｈｏｉｇａｄＦｕｃｉｎｌＡａｙｉｆｔｅＣＤＳｏｆ
ｔｉｏｉｔｏｆＴｏｌｐｐｒｔｉｒ０８ｋａｄ５０，ｅｐｃｉｅｙＴｏｌｐｐｏｔｉｏａｎｅｏ— ｒｃｐｎｌｉｏｅｎａｅ３．０Ｄｎ．３ｒｓｅｔｖｌ．ｌｉｒｅｎｃｎｔｉｄａＣ２ｄ

鸭白细胞介素-2基因克隆、原核表达及生物学活性检测

第２９卷第４期２００８年ｌＯ月
华南农业大学学报
ＪｕｎｌｏｏｔｉａＡｇｉｕｔｒｌＵｎｖｒｉｏｒａｆＳｕｈＣｈｎｒｌｕａｉｅｓｔｃｙ
Ｖｏ．９．Ｎ．１２ｏ４
０ｃ．２０ｔ０８
鸭白细胞介素一因克隆、核表达及２基原生物学活性检测
胞增殖的活性．
关键词：；白细胞介素一；因克隆；原核表达；鸭２基生物学活性
中图分类号：５１Ｑ８Ｑ１：７６文献标识码：Ａ文章编号：０ — １Ｘ（０８０ —０３０１１４１２０）４０８ —４０
ＣｌｎｉｎｄＰｒｋａｙｔｃＥｘｒｓｉｎｆＤｕｃｎｔｒｅｉ－ｅｅｏｎｇａｏｒｏｉｐｅｓｏｏｋＩｅｌｕｋｎ－Ｇｎ２
ａｔｃｉｎｏｔｏｃｉｉｙｎｄＤｅｅｔｏｆＩｓＢｉａｔｖｔ
ＺＨＡＮＧｎＸｉ，ＣＵＩＭｉ，ＦＡＮＧｎｇｙｎｇｎＨｏ — ｉ，ＨＥｎ —ｈｎ，ＬＵＯｎｌＤｏｇｓｅｇＭａ —ｉｎ
（ｏｅｅｏｅｒａｙＭｅｉｎＳｕｈＣｉａＡｒｕｔａＵｉｒｔ，ｕｎｚｏ６２１ｌｇｆｔｉｒｄｃｅ，ｏｔｈｇｃｕｌｎｖｓｙＧａｇｈｕ１４；ＣｌＶｅｎｉｎｉｌｒｅｉ５０
张欣崔敏房红莹，，，贺东生，罗满林
（１华南农业大学兽医学院，东广州５０４；建农林大学动物科学学院，广１６２２福福建福州３００）５０２摘要：根据Ｇｎａｋ发表的鸭白细胞介素－（Ｌ２基因序列设计并合成了特异性引物，ｅＢｎ２Ｉ－）以经ＣｎｏＡ诱导的广州白鸭外周血淋巴细胞提取的总ＲＡ为模板，Ｒ —ＣＮ用ＴＰＲ方法扩增出长度为３０ｂ６ｐ的目的基因片段．将该基因克隆到ｐ１一ｉｐｅｅｔ上，ＭＤ８Ｔｓｌｖｃｏｍｒ经酶切、ＣＰＲ鉴定及序列测完整克隆．构建的表达质粒ｐＴＩ一ＢｍＨ、ｈ双酶切鉴定构建正确；ＳＳＰＧＥ — ２经ａＩＸｏＩＬ经Ｄ —ＡＥ分析，在约３０出现新的蛋白条带，３０处０Ｗｅｅｎｂｏｉｇｓｒ—ｌｔ分析表明，ｔｔｎ融合蛋白能够被抗Ｈｓｉ单克隆抗体识别，体外活性检测表明，重组蛋白具有促进淋巴细

牛干扰素-γ基因克隆、序列分析及其表达产物的生物学活性研究（六）

⽜⼲扰素-γ基因克隆、序列分析及其表达产物的⽣物学活性研究（六）第五章结论1 根据GenBank上发表的⽜⼲扰素－γ基因序列设计引物。

从⽤PHA诱导的⽜外周⾎淋巴细胞中提取基因组RNA，采⽤RT-PCR技术，扩增出⼲扰素－γ基因并进⾏了序列分析，结果表明，⽜⼲扰素－γ基因序列全长517bp，开放阅读框架内包含501个核苷酸，共编码166个氨基酸，分⼦量19.4kd，与参考序列完全⼀致。

2 ⾸次采⽤温度诱导的原核pBV220⾼效表达质粒载体并成功构建了pBV220-BoIFN-γ重组表达体系，温度诱导表达，经SDS-PAGE电泳分析在19.4kd左右出现了1条特异性蛋⽩带，与预测分⼦量⼤⼩⼀致，蛋⽩产量约占菌体总蛋⽩的15%，经蛋⽩可溶性分析，所表达蛋⽩以包涵体形式存在。

3 成功的对包涵体进⾏了变性、复性。

采⽤免疫荧光实验⽅法证明了pBV220-BoIFN-γ重组表达载体已构建并表达成功。

4 通过超声波破碎提取的重组BoIFN-γ包涵体可以使鸡体产⽣特异性抗BoIFN-γ的抗体，再次表明pBV220-BoIFN-γ重组质粒在⼤肠杆菌中通过温度诱导已成功表达。

5 重组⽜γ—⼲扰素具有⼀定的⽣物学活性，对⽜外周⾎淋巴细胞具有抑制其分裂及抗其凋亡的作⽤。

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小鼠IL—2基因的RT—PCR克隆

小鼠IL—2基因的RT—PCR克隆摘要：根据GenBank中小鼠的IL-2 cDNA序列设计引物，从小鼠肝脏组织中提取总RNA，采用RT-PCR技术扩增出小鼠的IL-2基因。

结果表明，克隆出了IL-2基因，获得了与预期大小相一致的850 bp的DNA片段，为研究其组成、结构和利用基因工程生产该药物打下基础。

关键词：小鼠；白细胞介素2（IL-2）基因；反转录白细胞介素2（Interleukin-2，IL-2）是由CD4+ T细胞在受促有丝分裂素或异源物刺激后分泌的一种15 ku蛋白，具有广泛生物学活性的细胞因子。

1983年，Taniguchi等[1]从ConA刺激的Jurkat白血病T细胞中成功克隆IL-2 cDNA，并在大肠杆菌中得到高水平的表达。

1986年，人IL-2克隆成功。

随后，IL-2开始应用，主要作为免疫治疗剂和免疫增强剂。

Weinberg等[2]报道将重组牛IL-2注入牛乳房，可以明显降低细菌性乳房炎的发病率；重组牛所生产的IL-2能促进牛病毒性腹泻死疫苗的免疫效果；IL-2分别与狂犬病疫苗或疟疾疫苗联合使用，对相应抗原的攻击有保护作用[3]。

本研究根据GenBank中小鼠的IL-2 cDNA序列，利用RT-PCR的高度灵敏性、特异性及操作简便快速等特点，克隆小鼠IL-2基因，为研究其组成、结构和利用基因工程生产该药物打下基础。

1 材料与方法1.1 试验材料试验小鼠由湖北医药学院附属太和医院生命科学研究所实验动物中心提供；反转录试剂盒及RT-PCR所需酶及耗材均购于Progema公司；试验所需其他试剂均为分析纯，购于上海强智生物科技有限公司。

2 结果与分析2.1 小鼠肝脏组织的总RNA采用Trizol法提取肝脏组织总RNA，结果看出：10个样品管中，都出现3条清晰的rRNA条带，分别为28S rRNA、18S rRNA、5S rRNA，其中含量最多的为35S rRNA，其次为28S rRNA，最少的为5S rRNA（图1）。

延边黄牛γ-干扰素基因的克隆与序列分析

（１．ＡｎｉｎａｌＱｕａｒａｎｅｉｎｅＳｔａｔｉｏｎｏｆＨｅｌｏｎｇＣｉｔｙ，ＨｅｌｏｎｇＪｉｌｉｎ１３３５００，Ｃｈｉｎａ；２．ＡｇｒｉｃｕｌｔｒａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＹａｎｂｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＹａｎｊｉＪｉｌｉｎ１３３００２，Ｃｈｉｎａ）
第３９卷第１期２０１７年３月
延
边
大
学
农
学
学
报
Ｖｏ１．３９ＮＯ．１
Ｍａｒ．２０１７
ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＹａｎｂｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ＹＩＮＣｈａｎｇｓｈａｎ，ＺＨＡＮＧＬｉｘｉａ，ＸＵＥＳｈｕｊｉａｎｇ，ＳｏＮＧＪｉａｎｃｈｅｎ，ＬＩＨａｉｆｅｎｇ。，ＸＵＹｉｎｇｔｉａｎ
尹昌善，张立霞，薛书江。，宋建臣，李海峰，许应天
（１．和龙市动物检疫站，吉林和龙１３３５００；２．延边大学农学院，吉林延吉１３３００２）
摘要：应用刀豆素蛋白（ＣｏｎＡ）和植物分裂素（ＰＨＡ）双重诱导培养延边黄牛脾淋巴细胞，提取脾淋巴细胞总ＲＮＡ，ＲＴ — ＰＣＲ扩增延边黄牛干扰素基因，并将其克隆到ｐＭＤ１８一Ｔｓｉｍｐｌｅ载体中，进行ＰＣＲ鉴定和酶切鉴定及测序。结果表明：成功克隆了４６２ｂｐ大小的延边黄牛一干扰素基因片段；所克隆基因片段序列与欧洲牛、印度牛的亲缘关系最近，同源性分别为９９．８和９９．６，与欧洲牛的氨基酸同源性为１００。本试验为进

牦牛KDM2的克隆、表达谱分析及其在卵母细胞减数分裂中的作用研究

牦牛KDM2的克隆、表达谱分析及其在卵母细胞减数分裂中的作用研究牦牛生活在青藏高原及其毗邻的高海拔地区,有“高原之舟”的美誉,是当地居民经济收入的主要来源之一,但其繁殖力较低,大部分为两年一胎或三年两胎。

上世纪60年代以来,国内外学者对牦牛生殖生理与繁殖技术展开了大量的研究,发现卵母细胞的发育与减数分裂成熟是影响哺乳动物繁殖效率的重要因素之一。

减数分裂是真核生物有性生殖的共同特征,其进程受多种因素的共同调控。

表观遗传修饰可以确保与减数分裂有关的基因适当表达,促使与减数分裂进程相关的染色体发育完整。

最近的研究发现组蛋白去甲基化酶参与了卵母细胞减数分裂的调控,KDM2(lysine(K)-specific demethylase 2)作为组蛋白去甲基化酶家族的成员之一,被发现在在卵母细胞减数分裂中有表达,但有关KDM2在此过程中的功能未见报道。

本试验通过PCR克隆获得牦牛组蛋白去甲基化酶KDM2A和KDM2B基因序列,进行生物信息学分析;通过免疫组化和q PCR检测KDM2在卵母细胞中的表达情况,然后通过KDM2的特异性抑制剂丁酰肼初步研究KDM2与牦牛卵母细胞减数分裂的关系,并探讨其作用。

结果如下:1、测序结果显示,KDM2A基因CDS区长为3 489 bp,编码1 162个氨基酸;KDM2B基因CDS区长为3 930 bp,编码1 309个氨基酸。

同源性比对结果显示KDM2在进化过程中保守性较强。

组织表达谱分析结果显示KDM2在脾脏、子宫、睾丸和卵巢中表达量较高。

2、免疫组化定位分析发现KDM2存在于牦牛卵母细胞和颗粒细胞中;q PCR定量分析发现KDM2在牦牛卵母细胞GV期、MI期和MII期中动态变化,MI期的表达量显著高于GV期和MII期。

3、在体外成熟液中添加KDM2的特异性抑制剂丁酰肼,qPCR和免疫荧光结果显示MI期卵母细胞中KDM2的表达量下降;当丁酰肼浓度为20μmol/L时,卵母细胞成熟率显著降低,但受精后卵裂率和囊胚率显著升高。

基因的克隆方法ppt课件

1）直接从基因组中扩增过程：（1）提取基因组DNA作模板（2）根据目的基因序列设计引物（3）PCR扩增及产物鉴定
31
提取基因组DNA
PCR引物设计
PCR扩增
基因序列分析
此法适合扩增原核生物基因。
真核生物基因组含有内含子32 ！
2）从mRNA中扩增: RT-PCR
（1）提取基因组 total RNA （2）反转录合成总cDNA作模板（3）根据目的基因序列设计引物（4）PCR扩增及序列分析
工作量大。无法定量研究。扩出的条带往往是3`端比较短的UTR区的一
段序列，提供的信息较少。
19
优点：
简便、灵敏、高效、省时，能快速显示 mRNA的组成。
所需的mRNA量少。各样本mRNA的差异可同时进加标签的基因克隆方法野生株构建基因组基因苗构建基因组文库基因苗
阳性克隆
获得阳性克隆目的基因
基因序列分析，24 确定为基因
转座子标签法
转座子又称转座因子或者跳跃因子，实际上也是DNA片段，它可以在生物的染色体组中移动，从染色体的一个位点跳到另一个位点，或从一条染色体跳到另一条染色体上，引起基因功能的改变。
mRNA
5` RP
A T C G
AAAAAAAA
A C
TTTTTTTTTT
G
3`
15
mRNA
5` RP
A T C G
AAAAAAAA
A C
TTTTTTTTTT
G
3`
AATTTTTTTT ACTTTTTTTT AGTTTTTTTT TATTTTTTTT
TCTTTTTTTT TGTTTTTTTT CATTTTTTTT CCTTTTTTTT CGTTTTTTTT GATTTTTTTT

il-2原始碱基序列 -回复

il-2原始碱基序列-回复DNA是生物体内负责遗传信息传递的分子。

它由四种不同的碱基组成，包括腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）。

DNA的精确定序对于许多生物学和医学领域的研究至关重要。

IL2（Interleukin-2，白细胞介素-2）是一种免疫系统内产生的蛋白质，在免疫应答和免疫调节中起着重要的作用。

本文将以IL2原始碱基序列为主题，逐步解释和探讨相关的内容。

首先，让我们来了解一下DNA的结构和功能。

DNA是由两条互补的链组成的双螺旋结构，这两条链通过碱基间的氢键相互连接在一起。

DNA 的碱基序列决定了生物体内所有蛋白质的合成方式，即遗传物质的编码。

每个碱基可以与另一种碱基形成互补配对，A和T之间有两个氢键连接，G和C之间有三个氢键连接。

IL2序列是由一系列的碱基组成的，其中包括了A、G、T和C。

这个序列是不同生物体中IL2基因的一个特定部分，它被称为IL2原始碱基序列。

这个序列的特点和变异对于研究生物体的免疫系统以及疾病的发生发展有很重要的意义。

接下来，让我们深入了解IL2基因和其序列的功能。

IL2是一种细胞因子，它参与了免疫系统中调节和增强T淋巴细胞功能的过程。

IL2通过与特定的受体结合，激活T细胞并促进它们的增殖和分化。

IL2的产生和释放在免疫应答中起着至关重要的作用。

IL2的基因含有多个区域，其中一个重要的区域是编码IL2蛋白质的外显子序列。

外显子是基因中的一个片段，它会被转录成RNA，并最终翻译成蛋白质。

IL2的外显子与其生物学功能密切相关。

通过对IL2基因外显子序列的研究，我们可以了解IL2的产生和调控机制，以及它在免疫系统中的作用。

IL2外显子序列的研究通常涉及到对DNA样本的测序分析。

测序是一种用于确定DNA序列的实验技术。

通过将DNA样本分离成单链，然后使用特定的引物和酶来复制和扩增特定的片段，最后通过测序仪器可以获得DNA序列的信息。

这样的测序分析可以揭示IL2序列中的变异和突变，进一步了解其与免疫系统疾病的关系。

高邮麻鸭白细胞介素-2基因的克隆与序列分析

高邮麻鸭白细胞介素-2基因的克隆与序列分析陈诚;佘步宏;任春芝;陶建平;许金俊【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2010(038)028【摘要】[目的]对高邮麻鸭白细胞介素-2(CIL-2)基因进行克隆和序列分析.[方法]以高邮麻鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,根据已发表的鸭IL-2基因cDNA序列设计并合成1对引物,应用两步RT-PCR技术扩增出IL-2基因的特异性片段.将扩增片段插入pGEM-T-easy载体,并进行测序分析和结果验证.[结果]阳性克隆所含插入片段的DNA序列全长为433 bp,与预期大小一致,含有1个423 bp 大小的开放性阅读框,共编码141个氨基酸的前体蛋白,N端21个氨基酸形成信号肽,成熟蛋白为120个氨基酸,分子量约为13.66 kD, 含1个糖基化位点.该序列与绿头鸭、绍兴鸭、固始鸭相应序列的同源性均为99.8%,与广州白鸭的同源性为99.3%,存在少量核苷酸差异.[结论]高邮麻鸭IL-2编码区基因相对高度保守,为其用于临床疾病治疗提供了一定参考.【总页数】3页(P15670-15672)【作者】陈诚;佘步宏;任春芝;陶建平;许金俊【作者单位】扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009;扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009;扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009;扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009;扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】S83+.83【相关文献】1.麻鸭γ-干扰素基因的克隆与序列分析 [J], 陈红英;崔保安;赵丽;崔沛;郑兰兰;王东方;郭小参2.麻鸭和樱桃谷鸭的CD3ε、CD4、CD8α基因ORF克隆及序列分析 [J], 李卫;白家媛;许媛媛;谷长勤;张万坡;程国富;陈敏;胡薛英3.三穗麻鸭JAK2基因克隆与序列分析研究 [J], 张美兰;文明;张宇;邹作成;田芳;张飘;龙立书;华敏;程振涛;周碧君4.三穗麻鸭SOCS1基因克隆及序列分析 [J], 龙立书;华敏;万润;欧德渊;苟万里;文明5.三穗麻鸭MT基因克隆与序列分析 [J],因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

牛白细胞介素2基因原核表达及多克隆抗体制备

牛白细胞介素2基因原核表达及多克隆抗体制备盖仁华;王衡;郎跃深;李广兴;张瑞莉;马德星;张国庆;杨贵君【摘要】Specific primers for bovine IL-2 (BoIL-2) cDNA were designed and synthesized according to the previously published sequence in GenBank. The total cell RNA, isolated from ConA-stimulated peripheral blood lymphocyte of bovine, was used as template to generate complementary DNA by reverse transcription. The DNA fragments were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and digestion, and cloned into thepMD18-T vector. The fragment was confirmed bovine interleukin-2 by DNA sequencing. The sequence analysis showed that it was similar to the sequence of bovine IL-2 publised in GenBank, the homology was 98. 7 % in nucleotide acid. Then the prokaryotic expression plasmid pET30a/rBoIL-2 was constructed and transformed into BL21 cell. The recombinant rBoIL-2 was expressed efficiently in forms of inclusion body. SDS-PAGE and Western blotting analysis showed that the recombinant fusion protein had a molecular weight 23. 49 ku. The inclusion body was purified by QIAGEN Ni-NTA resin. The protein was purified and used to immunize rabbit, and polyconal antibody was prepared. The preparation of its polyclonal antibody will provide solid basis for the biological activity study and application of BoIL-2.%根据GenBank发表的牛白细胞介素2(BoIL-2)基因序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增出重组牛白细胞介素2(rBoIL-2)基因.将克隆片段与pMD18-T载体连接,并经过酶切及PCR鉴定,测序结果显示,克隆的BoIL-2基因与GenBank发表的BoIL-2基因序列同源性为98.7％.将测序正确的克隆片段与pET30a(+)载体连接,构建重组表达质粒pET30a(+ )-rBoIL-2,通过双酶切及PCR鉴定阳性的重组质粒进行序列测定后在大肠杆菌的表达,分子质量约为23.49 ku；表达产物主要分布在包涵体中.Western blotting证实所得到的重组蛋白为BoIL-2重组蛋白.用镍离子亲和树脂对所得的BoIL-2重组蛋白进行纯化,并免疫新西兰兔成功制备兔抗rBoIL-2多克隆抗体,为下阶段的研究提供了重要的试验材料.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(000)012【总页数】5页(P71-75)【关键词】白细胞介素-2;原核表达;多克隆抗体【作者】盖仁华;王衡;郎跃深;李广兴;张瑞莉;马德星;张国庆;杨贵君【作者单位】东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;浙江大学药物安全评价研究中心,浙江杭州 310058;华南农业大学兽医学院,广东广州 510642;河北秦皇岛青龙满族自治县职教中心,河北秦皇岛 066500;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】Q78白细胞介素2（interleukin 2，IL－2）是由 Thl细胞在有丝分裂原的刺激下，产生的一种具有多种生物活性的细胞因子。

牛白细胞介素2基因的克隆及原核表达的开题报告

牛白细胞介素2基因的克隆及原核表达的开题报告
1.背景介绍：
白细胞介素2（IL-2）是一种蛋白质细胞因子，可促进免疫细胞的增殖和分化，具有重要的免疫调节功能。

牛白细胞介素2（bovine IL-2）在牛的免疫反应中也扮演着重要的角色，因此研究牛IL-2基因的序列和功能具有重要的理论和实践意义。

2.研究目的：
本研究旨在对牛IL-2基因进行克隆和原核表达，为后续对其生物学特性的研究提供基础支持。

3.研究内容：
（1）从牛淋巴细胞中提取总RNA，利用RT-PCR方法扩增IL-2基因全长序列。

（2）将扩增得到的IL-2基因克隆至原核表达载体pET28a中，构建重组质粒。

（3）将重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）菌株中，并通过等温诱导和IPTG 诱导高效表达。

（4）利用SDS-PAGE和Western blot方法检测表达产物的分子量和免疫活性。

4.预期结果：
预计能够成功克隆出牛IL-2基因，并利用原核表达技术高效表达其蛋白产物。

通过Western blot等方法对表达产物进行鉴定，确定其分子量和免疫活性。

5.研究意义：
本研究对于深入研究牛IL-2的生物学特性具有重要的意义。

同时，成功表达的牛IL-2蛋白产物将为后续开展基于该蛋白的生物学研究提供条件保障。

鲁西黄牛α干扰素成熟蛋白基因的克隆及序列分析

鲁西黄牛α干扰素成熟蛋白基因的克隆及序列分析张永红;王长法;杨少华;高运东;王洪梅;李景鹏;仲跻峰【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2007(28)2【摘要】根据GenBank上发表的牛α干扰素基因序列,设计了一对特异性引物.提取黄牛血液中白细胞基因组DNA,PCR扩增出α干扰素基因,并与pMD18-T克隆载体相连.测序结果表明,扩增片段含有498个核苷酸,编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型最相近,氨基酸序列同源性为97.6%.获得BoIFN-α成熟蛋白基因,为重组牛干扰素的开发奠定了基础.【总页数】3页(P12-14)【作者】张永红;王长法;杨少华;高运东;王洪梅;李景鹏;仲跻峰【作者单位】东北农业大学生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150030;山东省农业科学院奶牛研究中心,山东,济南,250100;山东省农业科学院奶牛研究中心,山东,济南,250100;山东省农业科学院奶牛研究中心,山东,济南,250100;山东省农业科学院奶牛研究中心,山东,济南,250100;山东省农业科学院奶牛研究中心,山东,济南,250100;东北农业大学生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150030;山东省农业科学院奶牛研究中心,山东,济南,250100【正文语种】中文【中图分类】Q78;S852.4;S858.23【相关文献】1.中国黑白花奶牛干扰素-τ成熟蛋白基因的克隆与序列分析及牛干扰素-τ的分类[J], 张明;管晓斌;朱庆;刘学方;冯玉梅;赖松家2.中国黄牛PrPc成熟蛋白基因的克隆和序列分析 [J], 王志亮;王长杰;吴晓东3.杂交牛(大额牛×云南黄牛)朊蛋白基因的分子克隆及其序列分析 [J], 刘情;席冬梅;陈学礼;李继中;杨舒黎;邓卫东4.鲁西黄牛运铁蛋白基因多态性及其与生长性状的关联分析 [J], 谷朝勇5.鲁西黄牛α干扰素基因的克隆及表达 [J], 张永红;王长法;杨少华;高运东;李爱芹;王洪梅;李景鹏;仲跻峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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黄牛白细胞介素一２基因的克隆与序列分析
刘杰，谢昆，蒋成砚，吴晶萍，韩雪，王冉
（河学院生命科学与技术学院，红云南蒙自６１０６１０）
摘要：了克隆黄牛Ｉ为Ｌ一２基因，用Ｒ采Ｔ—ＰＲ技术，Ｃｎ刺激１Ｃ用ｏＡ２ｈ的黄牛颈部外周血淋巴细胞为材料，从
ＣＯＮＮＧＡＮＥＥＥＡＬＩＮＩ一ＮＣＴＥＬＩＤＳＱＵＮＣＮＡＹＳＳＯＬ２ＧＥＥＩＡＴＬＮ
ＬＵＪｅＸＩｎ，ＩＩｉ，ＥＫｕＪＡＮＧＣｅｇ—ｙｎ，ＵＪｎｈｎａＷｉｇ—ｐｎ，ｉｇＨＡＮＸｕＷＡＮＧＲａｅ，ｎ
山东农业大学学报（自然科学版）０ｌ２（）０２０，２１，４２：２５— １ＪｕａｏｈｎｏｇＡｒｕｕａＵｉｒｉ（ａｕａＳｉｃ）ｏｒｌｆａｄｎｇｉｌｒｌｎｅｓｙＮｔｒｌｃｎｅｎＳｃｔｖｔｅ
ｔｄｔｏｉｅ，ｂｆａｏ，ｓｅｐ，ｃｔｏｓｉｅｗｉｈｂｖｎｕｆｌｈｅａ，ｈｒｅ，ｃｉｋｎ，ｃｎｎ，ｕａｈｃｅａｉｈｍｎ，ｇａ，ｍｉｅａｄｐｇ，ｈｏｌａｅｒｏｔｃｎｉｔｅｈｍｏｏｉｓｗｅｅ
总ＲＡ中扩增出黄牛ＩＮＬ一２基因，脂糖凝胶电泳技术显示扩增片段约为５０ｂ，离纯化，其克隆到琼０ｐ分将ＰＭ１Ｔ载体，组质粒经ＰＲ鉴定、酶切鉴定以及核苷酸测序。结果显示，隆的黄牛ＩＤ８一重Ｃ双克Ｌ一２基因大小４８ｂ，Ｇｎａｋ中报道的水牛、、羊、、、、、、６ｐ与ｅＢｎ牛绵猫马鸡犬人山羊、、Ｉ鼠猪Ｌ一２基因比较，源性分别为９．同８
ｎｌｉｉｄｃｔａｃｔｅＩ２ｇｎａｉｅｎｏｅａｉａｅ（Ｒ）ｏ８ｂ．Ｃｍａｅｅｎｃｅ— ａｙｓｎｉａｄｔｔａｔＬ一ｅｅｃｔｎｄａｐｎｒｄｎｆｍｓＯＦｆ６ｐｏｐｒｄｔｕｌｓｅｈｌａｅｇｒ４ｈｏ
９％：９８．％；５９７．０％；２．８４％；９．７９％；３％；５．７８．２％；７９．７％；５．９９％；５．６２％；４．８７％。
关键词：牛；黄ＩＬ一２克隆；列分析；序
中图分类号：２．Ｓ８３８＋ｌ文献标识码：Ａ文章编号：００— ３４２１）２— ２５— ６１０２２（０１００００
ｔｄｂｎｓｉａｅ２一ｈｕｓｃｔｅｐｒｐｅａｌｏｙｈｃｔｓ．ｎｈｎｃｎｓｒｃｅｅｙＣｏＡｔｍｕｌｔｄ１ｏｒａｔｅｉｈｒｌｂｏｄｌｍｐｏｙｅａｄｔｅｏｔｕｔｄｐＭＤ一１ｌ８Ｔ—Ｉ一２ＬｒｃｍｂｎｎｅｔｒｏｌｗｉｇｉｅｔｃｔｏｆＰＣＲｎｕｅｄｇｓｉｎｏｏ一１ｎｍＨＩ．ｑｅｃ — ｅｏｉａｔｖｃｏ，ｆｌｏｎｄｎｉａｉｎｏｉｆａｄｄｏｂｌｉｅｔｏｆＥｃＲａｄＢａＳｅｕｎｅａ
白细胞介素一（ｎｅｌｋｎ一２Ｉ２主要是由活化的Ｔ淋巴细胞产生的一类重要的淋巴因子，２ｉｔｅｉｒｎ，Ｌ一）具有广泛的生物学特性。可以促进Ｔ、Ｂ淋巴细胞的增殖和分化，可增强Ｎ细胞、核细胞 ห้องสมุดไป่ตู้ 的杀伤活性，并Ｋ单在抗肿瘤、病毒、抗免疫调节及感染性疾病的治疗中具有重要作用 ¨ 。特别是牛Ｉ２不仅对牛而且对Ｌ一
（ｏｅｅｏＬｆＳｉｎｅａｄＴｃｎｌｙ，ｎｈｎｖｒｔ，Ｍｅｇｉ６１Ｃｉ）ＣｌｇｆｉｃｃｎｅｈｏｏＨｏｇｅＵｉｓｙｌｅｅｇｅｉｎｚ６１０，ｈｎａ
ＡｂｔａｔＩｒｅｌｎａｔｎｅｌｕｉｅ一２ｇｎｓｒｃ：ｎｏｄｒｏｃｏｅｃｔｅｉｔｒｋｎｔｌｅｅｅ，ａｃｒｉｇｔｎａｋｉｈｏｉｅＩｔｒｕｉｅ一２（ＬｃｏｄｎＧｅＢｎｔｅｂｖｎｎｅｌｋｎｏｎｅＩ
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