五味子提取物体外抑菌作用研究2800字

五味子提取物体外抑菌作用研究2800字
【摘要】[目的]研究五味子提取物体外抑菌作用。

[方法]用75%乙醇从五味子中提取其活性成分进行抑菌试验。

[结果]在PH=6的情况下，抑菌效果最强。

滤纸片琼脂扩散法表明MIC值金黄色葡萄球菌为62.5mg/ml，大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌为31.3mg/ml;与二倍稀释法测得的结果基本一致，除金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外，其余3种菌的MIC均为25mg/ml。

另外，瞬时高温处理后，仍具有较强的抑菌作用。

[结论]五味子提取物在体外对微生物有明显的抑制作用，并且其抑菌成分具有一定热稳定性。

【关键词】五味子;提取物;抑菌作用;实验五味子(Schisandrachinensis(Turcz.)Baill)别名北五味子、辽五味子、山花椒、乌梅子、软枣子等，为木兰科五味子属植物。

多年生落叶木质藤本，以野生为主，为常用中药材。

主要以果实入药，因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，有敛肺、滋肾、止汗、生津、止泻、涩精等功能。

可以治疗咳嗽、哮喘、口渴自汗、盗汗、遗精、久泻、神经衰弱等症，也是很好的果酒和饮料的原料[1]，具有极高的药用价值和营养价值，是一种新型的“药食同源”功能性保健食品，其果实在国际上已成为一种新兴食品工业的重要原料[2?3]。

本实验采用滤纸片琼脂扩散法，研究五味子提取物对常见的几个污染菌的抑制作用，为五味子的进一步开发利用提供科学依据。

1材料与方法1.1菌种与培养基试验选用金
黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapeneumoniae)。

以上菌种由浙江省台州医院微生物实验室友情赠送。

采用牛肉膏蛋白胨培养基，按文献[4]自制，pH为6.0(用磷酸缓冲液配制[5])，其中固体培养基加琼脂20‰。

1.2五味子提取物的制备实验用五味子饮片购自临海市医药有限公司，经70℃烘干后研成粉末。

取粉末10g用75%乙醇在超声波清洗器中提取，反复多次，直至浸出液色淡。

将浸出液浓缩，并定容至10ml，即1ml提取液为1g五味子粉末的提取物[6]。

提取液过0.22μm滤膜除菌，贮存于4℃冰箱中备用。

1.3抑菌试验1.3.1抑菌效力的测定分别将菌种从斜面上转接到5ml 的液体牛肉膏蛋白胨培养基中，30℃培养24h，再从中吸取50μl 到5ml液体培养基中，30℃培养6h后吸取100μl菌液均匀涂抹到灭菌平板上。

将浸渍过提取液的滤纸圆片(?6mm)稍风干，贴到每个涂有菌液的平板上(每皿4片)，每个浓度重复3次。

37℃倒置培养24h后测定抑菌圈大小，并用无菌水作空白对照(以CK表示)，确定抑菌效果。

1.3.2最低抑菌浓度(MIC)的测定采用二倍稀释法[7]测定五味子提取物对4种供试菌的MIC。

取7支试管，第1支加入10ml提取液，其余6支各加入5ml无菌水，从第1支吸取5ml提取液移至第2支，混匀后，再吸取5ml至第3支，以此类推，最后1支试管取出5ml弃去，每一试管的浓度分别为
1000mg/ml、500mg/ml、250mg/ml、125mg/ml、62.5mg/ml、
31.3mg/ml和15.6mg/ml。

分别将5ml上述各浓度的提取物与20ml 牛肉膏固体培养基混匀，制成提取物的浓度分别为200mg/ml，100mg/ml，50mg/ml，25mg/ml，12.5mg/ml，6.3mg/ml，
3.2mg/ml(五味子粉末重量/培养基体积)的平板，随后涂布接种菌液，倒置培养24h后观察，以完全没有供试菌生长的最低浓度为提取物的MIC。

1.3.3抑菌活性的pH范围用磷酸缓冲液配制4种pH(分别为5、6、7和8)的牛肉膏蛋白胨培养基，制成平板并分别涂布各种供试菌;再将滤纸片置于浓度为500mg/ml的提取液中浸泡24h，稍风干后贴在涂有供试菌的平板中，测定其抑菌效果。

1.3.4热稳定性试验将五味子提取液置于80℃水浴、100℃水浴和121℃湿热条件下[8]，热处理20min，并制成浓度为500mg/ml的提取液，将滤纸片置于其中浸泡24h，稍风干后贴在涂有各种菌液的乎板中，测定其抑菌效果。

2结果与分析2.1pH对提取物的抑菌活性影响在pH为5时，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌均不能生长，在pH为6～8范围内，五味子提取物对4种供试菌的生长均有一定的抑制作用，其中pH为6时的抑制作用最强(见表1)。

表1pH对五味子提取物抑菌效力的影响(略)2.2提取物浓度对抑菌效力的影响滤纸片法测定结果(见表2)显示，五味子提取物对4种供试菌的生长均有很强的抑制作用，其中对绿脓杆菌的抑制作用最强，肺炎克雷伯氏菌其次，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最弱。

表2五味子提取物的浓度对抑菌效率的影响(略)2.3不同菌的MIC五味子提取物(二倍稀释法)对金黄色
葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表3所示。

除了对金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外，对其余三种菌的MIC为25mg/ml(与滤纸片法的结果基本一致)。

表3五味子提取物的MIC(略)2.4提取物的热稳定性试验五味子提取物经3种温度的热处理20min后，仍具有较强的抑菌效力，其抑菌圈直径与未经高温处理的样品(对照)接近，其中只有对绿脓杆菌抑制作用，经100℃处理和湿热灭菌后有显著下降，对金黄色葡萄球菌的抑制作用，经湿热灭菌后有显著降低;而对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3种处理与对照均无显著差异(见表4)。

说明五味子提取物中的抑菌成分具有一定的热稳定性。

表4热处理对五味子提取物抑菌效力的影响(略)3结论经反复实验，结果表明五味子提取物的浓度在31.3～1000mg/ml范围内，pH为6～8时，对常见的4种致病菌有广谱的抑菌作用，其中在pH=6时具有最佳的抑菌效果，抑制效应依次为：绿脓杆菌>肺炎克雷伯氏菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌。

滤纸片琼脂扩散法结果显示，除金黄色葡萄球菌MIC为62.5mg/ml外，其余3种供试菌MIC均为31.3mg/ml;采用二倍稀释法测得的MIC也显示基本一致的结果，金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外，其余3种供试菌的MIC均为25mg/ml。

另外，五味子提取物经短时高温处理后，仍保持较强的抑菌效果，且多数与对照无显著差别。