竹柏籽油预防或治疗癌症的用途[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011199881.6
(22)申请日 2020.10.30
(71)申请人 厦门稀土材料研究所
地址 361021 福建省厦门市集美区兑山西
珩路258号
(72)发明人 雍建平　卢灿忠　
(74)专利代理机构 北京知元同创知识产权代理
事务所(普通合伙) 11535
代理人 汪泉
(51)Int.Cl.
A61K 36/185(2006.01)
A61P 35/00(2006.01)
A61K 131/00(2006.01)
(54)发明名称
竹柏籽油预防或治疗癌症的用途
(57)摘要
本发明公开竹柏籽油在预防或治疗癌症中
的新用途，通过对本发明制备的竹柏籽油及其抗
癌药物组合物的体外抗肿瘤测试意外发现，其对
肺腺癌细胞株(A549)、胃癌细胞株、乳腺癌细胞
株(MCF ‑7)和宫颈癌细胞株(Hela)具有较强的抑
制活性。

可用于预防、治疗肿瘤/癌症疾病的药
物。

权利要求书2页 说明书5页CN 112274539 A 2021.01.29
C N 112274539
A
1.一种竹柏籽油在制备抗癌药物中的应用；
优选地，所述癌症为胃癌、乳腺癌、宫颈癌和肺腺癌。

2.一种抗癌药物组合物，其包含有效量的竹柏籽油；
优选地，所述竹柏籽油采用如下制备方法，包括如下步骤：
(1)将所述竹柏籽粉碎得到竹柏籽粉；
(2)将步骤(1)得到的所述竹柏籽粉进行气蒸；
(3)将步骤(2)得到的气蒸过的竹柏籽粉挤压出油；
(4)将步骤(3)得到的挤压出的油经静置过滤得到所述竹柏籽油。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述竹柏籽原料为竹柏果仁；
优选地，步骤(1)所述竹柏籽粉的粒度可以为20～70目。

4.根据权利要求2或3所述的组合物，其特征在于，步骤(2)所述气蒸利用水蒸气实现，所述气蒸的设备为水浴锅、蒸锅中的任一种；
所述气蒸的时间为5～30分钟，优选为10～25分钟，更优选18～22分钟。

5.根据权利要求2-4任一项所述的组合物，其特征在于，步骤(3)所述挤压通过挤压装置实现，所述挤压的压力为0～50MPa，所述挤压的时间为5～60分钟；
优选地，步骤(2)得到的所述气蒸过的竹柏籽细粉在挤压之前，先在固定模具中人工压成固定形状。

6.根据权利要求2-5任一项所述的组合物，其特征在于，步骤(4)所述静置的时间为6～48小时；
步骤(4)所述过滤使用布氏漏斗、砂芯漏斗中的任一种。

7.根据权利要求2-6任一项所述的组合物，其特征在于，所述竹柏籽油中总黄酮(以芦丁计)的含量≥4％；
所述竹柏籽油中不饱和脂肪酸的含量≥75％；
所述竹柏籽油中维生素E的含量≥2mg/100g。

8.根据权利要求2-7任一项所述的组合物，其特征在于，所述药物组合物可以为固体口服制剂或注射制剂；
优选地，所述固体口服制剂可以为胶囊、片剂、颗粒剂、缓释剂等；
优选地，所述注射剂可以为小针注射剂、冻干注射剂；
优选地，所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的辅料；所述的辅料包括填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、肠溶衣或缓释材料中的一种或几种混合物。

9.根据权利要求2-9任一项所述的组合物，其特征在于，所述的填充剂包括：乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、甘露醇、山梨醇、磷酸氢钙、碳酸钙、微晶纤维素中的一种或几种混合物；
优选地，所述的粘合剂包括蔗糖、淀粉、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙二醇、水中的一种或几种混合物；
优选地，所述的崩解剂包括淀粉、交联聚微酮、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠中的一种或几种混合物；
优选地，所述的润滑剂包括滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸、微粉硅胶、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000中一种或几种混合物；
优选地，所述的矫味剂包括蔗糖、山梨醇、糖精钠、麦芽糖醇、甜菊糖苷、阿斯巴甜中的
一种或几种混合物；
优选地，所述的缓释材料包括不同规格粘度的羟丙甲纤维素、瓜尔胶中的一种或几种混合物。

10.根据权利要求2-9任一项所述的组合物，其特征在于，所述抗癌药物组合物为固体口服制剂时，包括以下重量份的组分：竹柏籽油0.01-0.5份、乳糖2-20份、预胶化淀粉1-10份、微晶纤维素1-5份、羧甲淀粉钠0.1-5份、10％聚维酮溶液2-10份、硬脂酸镁1-5份和滑石粉1-5份；
优选地，所述抗癌药物组合物为固体口服制剂时，其制备方法包括：将辅料混合后，过40-100目筛，将竹柏籽油加入10％聚维酮溶液，混合后，加入过筛后的辅料中，研磨混合后，50-60℃干燥2-3小时，压片得到所述抗癌药物组合物固体口服制剂。

竹柏籽油预防或治疗癌症的用途
技术领域
[0001]本发明属于医药技术领域。

具体涉及竹柏籽油在预防或治疗癌症方面的用途。

背景技术
[0002]癌症已成为世界范围内最主要的致死性疾病。

癌症可于任何年龄在各种器官及组织中发生，导致死亡的主要癌症种类有：肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌和乳腺癌等。

近年来，肺癌成为发病率最高的恶性肿瘤。

根据世界卫生组织(WHO)统计：2008年全世界被诊断为肺癌的人数约为160万人，约占癌症总发病人数的13％，死亡人数约140万例，约占癌症总死亡人数的18％(Jemal A,et al.C A Cancer J.Clin.2011,61:69-90)；2010年，美国新增肺癌患者222,520人，死亡人数157,330例，其中死于非小细胞肺癌(NSCLC)患者约占肺癌总死亡人数的85％(Jemal A,et al.C A Cancer J.Clin.2010,60:277-300)。

2020年美国预计将新确诊约180万癌症病例，相当于每天新增约4950个癌症病例。

2020年美国预计将有约60万人死于癌症，相当于每天有1600多人死于癌症。

男性中死于肺癌、前列腺癌和结肠、直肠癌的人数最多，而女性中死于肺癌、乳腺癌和结肠、直肠癌的人数最多。

肺癌引起的死亡数量接近于所有癌症死亡数量的四分之一，成为了名符其实的死亡率第一的癌症(Re becca L.Siegel,et al.Cancer Statistics,2020.CA：A Cancer Journal for Clinicians, 2020.)。

[0003]据我国国家癌症中心2019年发表的最新文章数据显示(郑荣寿等，2015年中国恶性肿瘤流行情况分析，中华肿瘤杂志，2019,41(1):19-28)：2015年我国新发恶性肿瘤病例约392.9万例，恶性肿瘤发病率为285.83/10万，中国人口标化率为190.64/10万，高于世界人口标化率186.09/10万；2015年我国恶性肿瘤死亡病例约233.8万，死亡率为170.05/10万，中标死亡率106.72/10万，高于世标死亡率105.84/10万。

农村地区恶性肿瘤死亡率为166.79/10万，中标死亡率为110.76/10万。

我国常见的恶性肿瘤为肺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌和女性乳腺癌等。

前10位发病约占全部恶性肿瘤新发病例的76.70％。

肺癌、肝癌、胃癌、食管癌和结直肠癌等是主要的肿瘤死因，前10位死亡约占全部恶性肿瘤死亡病例的83.00％。

[0004]然而大部分癌症患者发觉病情时已是中期至晚期，临床治疗总体效果较差，尤其是多药耐药性的不断出现，使得癌症的治疗困难重重。

因此，开发出活性高、副作用低的新型抗癌药物来满足临床的需求迫在眉睫。

尤其是从药食同源的药材中发现具有抗肿瘤活性的功能产品更受患者青睐。

[0005]竹柏(Podocarpus nagi)，属于罗汉松科(Podocarpaceae)，起源距今约1亿5500万年前的中生代白垩纪，被人们称为活化石，是国家二级保护植物。

它全身是宝，有“植物钻石”的美誉，是珍贵的稀有濒危树种。

竹柏的根、茎叶及种子富含多种化学活性成分，瑶族民间用于治疗骨折、刀伤、枪伤、腰肌劳损、精神疾病、狐臭、眼疾以及抗感冒等。

另一方面，竹柏富含大量的黄酮与β-榄香烯，黄酮作用较多，具有抗癌、控制血糖、增强免疫力等功效，而β-榄香烯是国家二类抗癌新药。

在前期研究中，我们提取了竹柏籽油，并研究了其化学成
分。

该油达到了食用油的标准，而且具有抗氧化活性和降血压活性(雍建平，卢灿忠，张世碧，中国专利申请号：CN202010203003.0)。

该油可作为药食两用的功能性油，具有良好的应用前景。

发明内容
[0006]本发明的目的是针对临床上应用的抗肿瘤/癌症药物具有毒、副作用大的现状，提供了一种可食用的竹柏籽油在预防、治疗肿瘤/癌症方面的新用途。

[0007]本发明提供了一种竹柏籽油在制备抗癌药物中的应用。

[0008]根据本发明的实施方案，所述癌症可以为胃癌、乳腺癌、宫颈癌和肺腺癌。

[0009]本发明提供了一种抗癌药物组合物，其包含有效量的竹柏籽油。

[0010]根据本发明的实施方案，所述竹柏籽油采用如下制备方法，包括如下步骤：[0011](1)将所述竹柏籽粉碎得到竹柏籽粉；
[0012](2)将步骤(1)得到的所述竹柏籽粉进行气蒸；
[0013](3)将步骤(2)得到的气蒸过的竹柏籽粉挤压出油；
[0014](4)将步骤(3)得到的挤压出的油经静置过滤得到所述竹柏籽油。

[0015]根据本发明的实施方案，所述竹柏籽原料为竹柏果仁(竹柏籽经去皮处理)。

[0016]根据本发明的实施方案，步骤(1)所述竹柏籽的重量为10～100kg，优选为30～70kg，例如50kg。

[0017]根据本发明的实施方案，步骤(1)所述竹柏籽粉的粒度可以为20～70目，优选为30～60目，例如40目。

[0018]根据本发明的实施方案，步骤(2)所述气蒸可以利用水蒸气实现，所述气蒸的设备可以为水浴锅、蒸锅中的任一种；所述气蒸的时间可以为5～30分钟，优选为10～25分钟，更优选为18～22分钟，例如为20分钟左右。

[0019]根据本发明的实施方案，步骤(3)所述挤压可以通过挤压装置实现，所述挤压的压力可以为0～50MPa，例如采用0～30MPa程序升压；
[0020]挤压时间为5～60分钟，优选10～40分钟，更优选20～30分钟，例如为25分钟。

[0021]优选地，步骤(2)得到的所述气蒸过的竹柏籽细粉在挤压之前，可先在固定模具中人工压成固定形状，例如饼状。

[0022]根据本发明的实施方案，步骤(4)所述静置的时间为6～48小时，优选8～24小时，例如12小时。

[0023]根据本发明的实施方案，步骤(4)所述过滤可以使用布氏漏斗、砂芯漏斗中的任一种，优选4微米砂芯漏斗。

[0024]根据本发明的实施方案，所述竹柏籽油中总黄酮(以芦丁计)的含量(质量百分数)≥4％，例如为4.23％。

[0025]根据本发明的实施方案，所述竹柏籽油中不饱和脂肪酸的含量≥75％，例如为75.5％。

[0026]根据本发明的实施方案，所述竹柏籽油中亚油酸的含量≥35％，例如为38.2％。

[0027]根据本发明的实施方案，所述竹柏籽油中花生一烯酸的含量≥1％，例如为1.40％。

[0028]根据本发明的实施方案，所述竹柏籽油中花生二烯酸的含量≥8％，例如为8.04％。

[0029]根据本发明的实施方案，所述竹柏籽油中维生素E的含量≥2mg/100g，例如为2.11mg/100g。

[0030]根据本发明的实施方案，所述竹柏籽油对氧自由基的清除率≥86％，优选地，大于等于88％。

[0031]根据本发明的实施方案，所述药物组合物可以为固体口服制剂或注射制剂。

[0032]根据本发明的实施方案，所述固体口服制剂可以为胶囊、片剂、颗粒剂、缓释剂等。

[0033]根据本发明的实施方案，所述注射剂可以为小针注射剂、冻干注射剂。

[0034]根据本发明的实施方案，所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的辅料；所述的辅料包括填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、肠溶衣或缓释材料中的一种或几种混合物。

[0035]根据本发明的实施方案，所述的填充剂包括：乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、甘露醇、山梨醇、磷酸氢钙、碳酸钙、微晶纤维素中的一种或几种混合物；
[0036]根据本发明的实施方案，所述的粘合剂包括蔗糖、淀粉、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙二醇、水中的一种或几种混合物；
[0037]根据本发明的实施方案，所述的崩解剂包括淀粉、交联聚微酮、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠中的一种或几种混合物；
[0038]根据本发明的实施方案，所述的润滑剂包括滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸、微粉硅胶、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000中一种或几种混合物；
[0039]根据本发明的实施方案，所述的矫味剂包括蔗糖、山梨醇、糖精钠、麦芽糖醇、甜菊糖苷、阿斯巴甜中的一种或几种混合物；
[0040]根据本发明的实施方案，所述的缓释材料包括不同规格粘度的羟丙甲纤维素、瓜尔胶中的一种或几种混合物。

[0041]根据本发明的实施方案，所述抗癌药物组合物为固体口服制剂时，包括以下重量份的组分：竹柏籽油0.01-0.5份、乳糖2-20份、预胶化淀粉1-10份、微晶纤维素1-5份、羧甲淀粉钠0.1-5份、10％聚维酮溶液2-10份、硬脂酸镁1-5份和滑石粉1-5份。

[0042]根据本发明的实施方案，所述抗癌药物组合物为固体口服制剂时，包括以下重量份的组分：竹柏籽油0.078份、乳糖13份、预胶化淀粉3.5份、微晶纤维素2.5份、羧甲淀粉钠0.8份、10％聚维酮溶液5份、硬脂酸镁1.5份和滑石粉1.5份。

[0043]根据本发明的实施方案，所述抗癌药物组合物为固体口服制剂时，其制备方法包括：将辅料混合后，过40-100目筛，将竹柏籽油加入10％聚维酮溶液，混合后，加入过筛后的辅料中，研磨混合后，50-60℃干燥2-3小时，压片得到所述抗癌药物组合物固体口服制剂。

[0044]有益效果
[0045]本发明在对竹柏籽油进行体外抗肿瘤测试时，意外发现竹柏籽油对肿瘤细胞，特别是胃癌细胞株、乳腺癌细胞株(MCF-7)、宫颈癌细胞株(Hela)及肺腺癌细胞株(A549)具有抑制活性。

特别是对宫颈癌细胞株(Hela)和肺癌细胞株(A549)的抑制率分别可达到85.33％和93.21％。

具体实施方式
[0046]下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。

应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。

凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

[0047]除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

[0048]仪器与试剂：
[0049]竹柏籽油(按照专利文献CN202010203003.0中描述的方法制备)；CCK8(上海贝博生物科技有限公司)；DMEM高糖培养基(赛默飞世尔(苏州)仪器有限公司)；EDTA(胰酶) (gibco)；Foetal Bovine Serum(Biological Industries)；磷酸缓冲盐溶液；96孔细胞培养板；多功能酶标仪。

[0050]实施例1：体外抗肿瘤活性测试
[0051]以胃癌细胞株的测试过程为例进行阐述，其它肿瘤细胞[肺腺癌细胞株(A549)、乳腺癌细胞株(MCF-7)、宫颈癌细胞株(Hela)]的测试过程如胃癌细胞株的测试过程。

具体流程如下：
[0052] 1.测试样品浓度配制
[0053]称取竹柏籽油100mg，加入到5mL的塑料离心管中，用DMSO稀释至1mL。

[0054]既得浓度为100mg/mL的初始浓度。

然后将初始浓度用DMSO进行倍比稀释，依次获得100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL、3.125mg/mL、1.5625mg/mL、0.78125mg/mL 8个不同的浓度梯度，置于4℃冰箱保存待用。

[0055] 2.胃癌细胞株、乳腺癌细胞株的培养及抑制活性测试
[0056]将胃癌细胞株、乳腺癌细胞株分别置于37℃，饱和湿度，含有5％的CO2培养箱中培养24小时，当细胞处于对数生长期时，吸弃上层培养液，并用0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液消化后，使用高糖培养基终止消化。

并将细胞接种于96孔板中，使得细胞密度为5000个/孔。

将96孔板置于培养箱中培养24小时。

随之吸弃96孔板中的细胞培养液。

并向96孔板中补加100μL的高糖培养基，然后每孔加入不同浓度的测试样品1μL(每个浓度设置5个复孔)，接着置于37℃，饱和湿度，5％CO2的培养箱中继续培养48h后，每孔加入10μL CCK8，继续在37℃培养箱中孵育1-4h后。

在多功能酶标仪上测定450nm波长下每孔的吸光度值。

按照抑制率％＝[(OD对照细胞-OD加药细胞)/(OD对照细胞-OD空白)]×100。

阴性对照为V(高糖培养基)/V (DMSO)＝10:1的混合溶液。

测试结果显示：在25mg/mL浓度下，样品针对胃癌细胞株、乳腺癌细胞株(MCF-7)具有较好的抑制效果，抑制率(％)±SD分别达到64.298±2.798、52.868±2.566。

[0057] 3.宫颈癌细胞、肺腺癌细胞株的培养及抑制活性测试
[0058]将宫颈癌细胞株、肺腺癌细胞株分别置于37℃，饱和湿度，含有5％的CO2培养箱中培养24小时，当细胞处于对数生长期时，吸弃上层培养液，并用0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液消化后，使用高糖培养基终止消化。

并将细胞接种于96孔板中，使得细胞密度为5000个/孔。

将96孔板置于培养箱中培养24小时。

随之吸弃96孔板中的细胞培养液。

并向96孔板中补加100μL的高糖培养基，然后每孔加入不同浓度的测试样品1μL(每个浓度设置5个复孔)，接着置于37℃，饱和湿度，5％CO2的培养箱中继续培养48h后，每孔加入10μL CCK8，继续在37℃
培养箱中孵育1-4h后。

在多功能酶标仪上测定450nm波长下每孔的吸光度值。

按照抑制率％＝[(OD对照细胞-OD加药细胞)/(OD对照细胞-OD空白)]×100。

阴性对照为V(高糖培养基)/ V(DMSO)＝10:1的混合溶液。

测试结果显示：在50mg/mL浓度下，样品针对胃癌细胞株、乳腺癌细胞株(MCF-7)具有较好的抑制效果，抑制率(％)±SD分别达到85.33±3.035、93.207±2.237。

[0059]实施例2：固体口服制剂的配料及制备工艺
[0060]
[0061]制备工艺：将固体辅料混合均匀，过60目筛3次，将竹柏籽油加入10％聚维酮溶液，超声混合均匀后，加入过筛后的辅料中，研磨混合均匀后，50-60℃干燥2-3小时，然后再研磨混合均匀后，压片成型，得到100片规格为0.78mg/片的竹柏籽油片剂。

[0062]其它固体口服制剂的制备可以参考片剂的制备过程。

[0063]以上，对本发明的实施方式进行了说明。

但是，本发明不限定于上述实施方式。

凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。