性激素结合球蛋白基因启动子(TAAAA)n重复多态与卵巢早衰的关联性

性激素结合球蛋白基因启动子(TAAAA)n重复多态与卵巢早
衰的关联性
程方;赵君利;刘丹;刘丽;李彩艳
【摘要】目的探讨性激素结合球蛋白(SHBG)基因启动子(TAAAA)n重复多态与卵巢早衰(POF)的关联性.方法应用聚合酶链反应及变性聚丙烯酰胺凝胶分离技术检测75例POF患者及167例卵巢功能正常的对照女性SHBG基因启动子(TAAAA)n多态性,比较并分析其在两组中的重复情况.结果 POF组和对照组的SHBG基因启动子(TAAAA)n重复范围分别为6～11次和4～10次,两组等位基因均值分别为(7.85±1.31)和(7.24±1.60),差异有统计学意义(P＜0.05).SHBG基因(TAAAA)n长重复多态(n≥8)在POF组和对照组分布分别为32.0％和
20.4％,SHBG基因(TAAAA)n短重复多态(n＜8)在POF组和对照组中的分布分别为68.0％和79.6％,长、短多态分布差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SHBG基因启动子(TAAAA)n多态可能与POF发病有关.
【期刊名称】《宁夏医科大学学报》
【年(卷),期】2015(037)005
【总页数】5页(P495-498,封4)
【关键词】卵巢早衰;性激素结合球蛋白基因;启动子;(TAAAA)n重复多态性
【作者】程方;赵君利;刘丹;刘丽;李彩艳
【作者单位】宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学总医院生殖医学中心,银川750004;宁夏医科大学生殖与遗传重点实验室,银川750004;宁夏医科大学生育力
保持教育部重点实验室,银川750004;宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学总医院生殖医学中心,银川750004
【正文语种】中文
【中图分类】R711.75
程方(1984-)，女，山西人，在读硕士研究生，研究方向为生殖内分泌。

赵君利，女，主任医师，硕士研究生导师，从事生殖医学工作。

卵巢功能早衰(premature ovarian failure，POF)病因复杂，主要包括遗传、免疫、感染、医源性等方面，是一类典型的异质性疾病[1]。

这些病因可能源于不同的基
因以及相关基因与环境的相互作用。

研究表明，性激素结合球蛋白(sex hormone- binding globulin,SHBG)能够介导性激素传递，具有激素样作用，并发现SHBG
基因(TAAAA)n多态性与胰岛素抵抗、男性不育、乳腺癌、多囊卵巢综合症、2型糖尿病及卵巢癌等[2-7]多种疾病的发生、发展有关。

本研究对性激素结合球蛋白
基因启动子(TAAAA)n重复序列与POF 发病的相关性进行探讨。

1.1 一般资料选择2008年2月-2015年2月就诊于宁夏医科大学总医院生殖
医学中心，因闭经或不孕为主诉的75例POF患者(POF组)，年龄18～39岁，平均(28.84±6.19)岁；体重指数(BMI)17.15～29.76kg·m-2，平均
(21.46±2.74)kg·m-2。

POF诊断标准:(1)40岁前绝经；(2)超过3个月经周期无月经来潮；(3)至少2次不同日血清表现：高促性腺激素和低性腺激素，
FSH>40IU·L-1，雌激素水平低值，E2<25pg·mL-1；(4)特发性POF为无自身免
疫性及其他代谢性疾病，并排除卵巢手术、放疗、化疗等卵巢损害性因素，其染色体核型正常的POF患者。

对照组选择同一时间段在宁夏医科大学总医院生殖医学中心就诊的女性167例(月
经周期、基础内分泌、超声均正常)，年龄18～43岁，平均(29.72 ± 4.98)岁; BMI 15.82～37.58kg·m-2，平均(22.48 ±3.36) kg·m-2。

所有患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法
1.2.1 样本采集POF 组和对照组患者者均留取新鲜外周血，EDTA抗凝血2～3 mL，于-70℃保存。

1.2.2 DNA提取按照基因组DNA提取试剂盒(购自天根公司)的操作方法提取。

1.2.3 引物设计针对(TAAAA)n重复区域设计引物：上游FAM-5-GCTTGAACTCGAGAGGCAG;下游5-CAGGGCCTAAACAGTCTAGCAGT。

1.2.4 PCR反应PCR反应体系为25μL，内含DNA 模板3μL，PCR Mix 12μL，ddH2O 7.75μL，Tap enzyme 0.25μL, Primer(10μL) 1μL。

扩增条件: 95℃预变
性5min，Touch-down 循环(95℃变性45s,65℃退火45s,72℃延伸45s，循环
35次),72℃再延伸10min。

PCR产物经3%琼脂糖凝胶电泳检测， PCR扩增产物大小为170bp左右。

1.2.5 SHBG基因启动子(TAAAA)n重复多态性检测SHBG基因(TAAAA)n重
复次数由北京金诺锐杰基因科技有限公司采用变性聚丙烯酰胺凝胶分离技术进行测定。

根据北京金诺锐杰基因科技有限公司检测(TAAAA)n片段长度及测序的结果建立起(TAAAA)n值的检测系统，标本的SHBG基因启动子(TAAAA)n重复数目经
过测序鉴定。

SHBG基因(TAAAA)n测序结果，见图1(封4)。

1.3 统计学方法采用SPSS 19.0统计软件，计数资料采用χ2检验，计量资料
用t检验，P≤0.05为差异有统计学意义。

2．1 SHBG基因(TAAAA)n重复多态对242例研究对象SHBG基因启动子(TAAAA)n重复序列进行扩增，其等位基因在POF组和对照组频数分布,见表1和图2(封4)。

POF组共检测到6种不同的等位基因，(TAAAA)n重复次数变异范围
为6～11次，(TAAAA)n重复9次的等位基因频率最高，占38.10%；其次为(TAAAA)n重复7次的等位基因，占23.81%。

对照组共检测到7种不同的等位基因，(TAAAA)n重复次数变异范围为4～10次。

仍然是重复9次的等位基因频率最高，占30.41%；其次为重复6次的等位基因，占28.53%。

POF组和对照组(TAAAA)n等位基因平均重复次数分别为(7.85±1.31)和(7.24±1.60)，两组比较差异有统计学意义(t=4.014，P<0.05) 。

2．2 SHBG基因(TAAAA)n重复多态与POF的关联性参考国内文献[18]，以(TAAAA)8重复等位基因为分割点，将基因型划分为两组：两等位基因均≥8次为长重复多态组；1或2个等位基因<8次(短链)为短重复多态组。

见表2，POF组与对照组长、短重复多态分布比较差异有统计学意义(P<0.05)。

SHBG是一种由肝脏合成的循环类固醇结合糖蛋白，主要生理功能是特异性结合并转运性激素，是雄激素和雌激素的重要载体。

SHBG与睾酮有较高亲和力，与雌二醇亲和力较低，但是雌二醇的亲和力又大约是雌酮4倍，雌三醇10倍[8]。

所以SHBG是雄激素有效测定的一个辅助参数。

其启动子(TAAAA)n重复序列多态性是目前研究的热点。

SHBG基因(TAAAA)n多态性位于上游启动子区的Alu序列内，该基因多态性通过影响下游其他元件的结合位点，而改变基因的转录活性。

在人群统计中发现，(TAAAA)n重复6～11次，不同人种重复数目有差异[9]。

Hogeveen 等[9]以肝癌细胞研究发现，SHBG基因的转录和该基因五核苷酸数目的重复相关，启动子区(TAAAA)n重复6次的SHBG基因转录最低，因为肝脏中含有一种蛋白质，大小约为46 ku，此种蛋白是一转录因子，与(TAAAA)6 次重复序列亲和力高，结合后影响该基因的转录活性。

Wei等[10]发现SHBG基因可以调节血浆中性激素的水平，从而引起月经周期的紊乱。

Xita等[11]发现月经初潮的年龄与SHBG基因的多态性有关，拥有短(TAAAA)n等位基因，(即重复序列<8个)的女孩初潮年龄较早，相反拥有长(TAAAA)n等位基因(即重复序列>8个)的女
孩初潮年龄延迟。

Van Anders等[12]对月经周期正常和无月经的妇女调查发现，无月经且肥胖的妇女SHBG基因水平明显低于月经周期正常非肥胖的妇女，而且雄激素水平同时明显升高。

Ferk 等[13]研究发现，无论健康成年女性还是PCOS 患者，携带(TAAAA)n重复次数与其SHBG的血清中水平均成反比。

2005年赵君利等[14]对性激素结合球蛋白与69例多囊卵巢综合征患者研究，研究结果提示低血清SHBG可能是PCOS糖代谢异常发生的预示因素之一。

Xita等[15]发现SHBG基因启动子区域(TAAAA)n重复次数在PCOS患者中比正常人增多，而血清中SHBG水平更低，提示SHBG基因可能是PCOS发生的一个决定因素，作者还推测基因遗传因素对SHBG血清浓度起决定作用。

2013年，Ruixia H等[7]研究性激素结合球蛋白在卵巢癌患者中的表达，结果表明，除了肝细胞表达SHBG 外，脑、子宫、睾丸、前列腺、乳腺、卵巢和胎盘等其他器官亦有表达。

此外，局部表达的SHBG可以参加类固醇信号传导通路和调节雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)血清中水平。

因为SHBG基因可特异性结合并且转运性激素，目前研究激素相关疾病与SHBG基因(TAAAA)n重复序列多态性之间的关系成为热点。

但国内外文献未查阅到有关SHBG基因(TAAAA)n重复序列多态性和POF关联性的报道。

Mamoulakis等[16]研究SHBG基因(TAAAA)n重复多态和睾丸下降不良的关系时，发现了5～10次(TAAAA)n重复多态，我们研究中，卵巢早衰组重复次数为6～11次，对照组4～10次，2组等位基因9次的重复频率最高，这与王海燕等[17]研究SHBG基因(TAAAA)n重复多态性与北方汉族男性有氧能力相关性研究中(TAAAA)n等位基因9的重复频率最高一致。

本研究中SHBG基因(TAAAA)n长与短重复多态在POF组和对照组差异有统计学意义。

POF患者SHBG基因(TAAAA)n重复序列缩短，可导致SHBG功能减弱，雄激素活性降低，导致卵泡生长调控失调，造成卵巢功能减退，这可能是引起卵巢
早衰的致病因素。

综上所述，推测SHBG基因启动子(TAAAA)n多态可能与POF 的发病有关。

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