纸片快速法测定水中粪大肠菌群质量控制研究

纸片快速法测定水中粪大肠菌群质量控制研究
杨虹;王志强
【摘要】本文对纸片快速法测定粪大肠菌群的质量控制进行了研究.结果表明,样品间的准确度和精密度结果都在质控范围内.通过加强质量控制可使获得的数据更加具有代表性和准确性,能满足相关环境标准和环保工作的要求.
【期刊名称】《现代农业科技》
【年(卷),期】2019(000)003
【总页数】2页(P151-152)
【关键词】纸片快速法;粪大肠菌群;测定;质量控制
【作者】杨虹;王志强
【作者单位】天津市生态环境监测中心,天津 300191;天津市生态环境监测中心,天津 300191
【正文语种】中文
【中图分类】X830.5
粪大肠菌群是具有一些特性并与粪便污染相关的细菌，是需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

粪大肠菌群数量不仅代表粪便污染程度，而且关系人体健康。

它是引起呼吸道、泌尿道以及伤口等感染的源头，还会引起肠道感染、伤寒、腹泻等诸多病状。

在测定水样中的粪大肠菌群时，若要保证水质监测获得的数据具有可靠性和代表性，就必须采取科学有效的质量控制手段。

在环境监测过程中要针对不同
环节的特点采用不同控制方法，以实现对监测过程全面的质量控制，既可提高检测效率，又能更好地适应环境监测的需要。

大肠菌群利用纸片上的营养迅速生长繁殖，进一步分解乳糖产生酸，酸又能使溴甲酚紫指示剂由天蓝色转变成黄色，在黄色区域生长的大肠菌群所产生的脱氢酶使纸片上的基质分解脱氢，脱下氢转给受体氯化三苯基四氯唑（TTC），此时TTC接
受氢之后，由无色变成还原后不溶于水的红色物质，即三苯甲胺。

通过以上显示剂的颜色反应就能判断出产酸产气的情况，从而判断纸片上是否有大肠菌群的存在，然后通过查MPN表即可明确相应大肠菌群的浓度值[1]。

1 材料与方法
1.1 主要仪器及试剂
主要试剂有水质大肠菌群测试纸片、无菌水、硫代硫酸钠溶液、乙二胺四乙酸二钠溶液[1]。

主要仪器和设备有恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、冰箱、试管、移液管、采样瓶。

1.2 样品测定方法
根据《水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》（HJ 755-2015）进行
样品采集、保存、接种、培养以及结果判读、结果计算。

在试验过程中设置恒温培养箱温度为（37±1）、（44.5±0.5）℃，每次试验应填写温控记录。

测定粪大肠菌群时要单独采样并且要有专人看管，运输中应防止破损[4]。

采样时
使用的采样瓶需经过灭菌后封口，要谨慎打开，尽量避免采样瓶受到污染。

采样时不需要用水样冲洗采样瓶。

为了能在瓶内留出足够的空间，且能充分摇匀样品，采样量为采样瓶容量的80%左右。

1.2.1 空白试验。

每次试验必须以无菌水做全程序空白测定，培养后应该呈现阴性，以达到良好的灭菌效果并保证结果准确。

1.2.2 阴阳性对照。

（1）阳性菌株试验：挑取阳性菌株—大肠埃希氏菌，置于无菌水中，充分摇匀，接种到纸片上，在（44.5±0.5）℃的培养箱中培养22 h，观察结果，应该出现产
气现象。

若纸片上出现红斑或红晕且周围变黄，为阳性；若纸片全片变黄，无红斑或红晕，为阳性。

（2）阴性菌株试验：挑取阴性菌株—粪链球菌，置于无菌水中，充分摇匀后，接种到纸片上，于（44.5±0.5）℃的培养箱中培养22 h，观察结果，若未出现产气
现象，证明样品中没有大肠菌群。

若纸片部分变黄，无红斑或红晕，为阴性；若纸片上出现了红斑或红晕，但红晕周围仍是紫色，未出现黄色，为阴性；若纸片无变化，则为阴性。

如果阴阳性现象不明显或未出现相应现象，则应查阅相关资料或咨询有关专家，弄清原因，重新测定。

1.2.3 准确度测定。

对纸片法的准确度进行验证，使用有证标准样品进行测定，平行测定8次。

1.2.4 精确度测定。

对纸片法的精密度进行验证，对3种浓度的实际水样进行测定，每个样品平行测定8次。

1.3 质量控制
1.3.1 实验室。

实验室在装修时要合理安排空间，要有制备培养基和灭菌的准备室，要有对玻璃器皿和其他器具进行高温消毒灭菌用的高温室，要有进行分装和制备无菌培养基专门设立的无菌室，要有专门的灭菌区域存放已灭菌的物品，并明确标示灭菌区和非灭菌区。

实验室要求通风良好，以避免室内温度大幅度变化，要保持实验室内空气清洁，保证实验室用具摆放整齐、干净。

实验室内需要经常消毒，样品室地面最好使用透水性极低的材料，同时注意开窗，以保持空气流通。

实验室的工作台必须是完整无接缝的表面，要求光滑、宽敞，由抗腐蚀性材料制成，工作台高度要合适且需保证实验室内有适宜的照明条件。

1.3.2 实验人员。

从事微生物技术的人员必须有一定的理论知识和高水平的技能，并有经过专业考试取得的证书。

实验室技术人员应积极参加培训，经常参与学术交流，不断提高业务技术水平。

要积极主动地自学专业期刊和书籍，以便及时更新和掌握微生物检验新技术。

此外，检验人员要有责任心和严谨求实的态度[2]。

1.3.3 设备。

恒温培养箱应能达到（37±1）、（44.5±0.5）℃。

每次使用完应填
写使用记录，并检查培养箱温度是否能够保持稳定、温度是否无误。

高压蒸汽灭菌器要求提供均匀的121℃高压蒸汽灭菌温度，每次使用时应用121℃压力蒸汽灭
菌化学指示卡检查是否符合灭菌条件。

计量部门应对上述设备进行年检，每年检定1次，检查其是否合格，检查温度是否达到要求。

1.3.4 玻璃器皿。

玻璃器皿应采用硼硅玻璃制品，且沥干后可重复使用。

对新买的玻璃器具，应放入2%盐酸溶液中浸泡若干小时，并用自来水和蒸馏水分别冲洗2～3遍，待晾干后使用。

玻璃器皿的灭菌通常使用高压蒸汽灭菌或干热灭菌，严
格按照操作规程进行，以免玻璃器皿因骤冷或压力不均而爆裂[3]。

移液管、试管、采样瓶等玻璃器皿试验前按无菌操作要求包扎，并用121℃高压蒸汽对其灭菌20 min，烘干，备用。

1.3.5 纸片。

必须使用质量鉴定合格的纸片。

纸片的内外包装应密封完好，无破损。

纸片外观应整齐干净，无损坏，纸片边不毛躁，纸片为均匀的淡黄绿色，加去离子水或蒸馏水后呈紫色，无论有无加水，纸片表面都应平整，不含有杂色和斑点，不出现变形情况[4]。

用无菌水做全程序空白测定，培养好的纸片应一直保持原有状态，没有任何颜色变化，否则需重新测定[5]。

2 结果与分析
2.1 准确度
粪大肠菌群质量控制范围为34～744MPN/100mL。

如表1所示，粪大肠菌群准
确度测定的几何平均值为224 MPN/L，标准偏差为0.30，相对标准偏差为
12.9%。

表1 粪大肠菌群准确度的测定编号样品值/MPN·（100 mL）-1 编号样品值
/MPN·（100 mL）-1 1 170 5 210 2 430 6 280 3 350 7 540 4 70 8 110
2.2 精确度
如表2所示，低、中、高浓度粪大肠菌群精密度测定的几何平均值分别为119、5281、63782MPN/L，标准偏差分别为0.22、0.18、0.22，相对标准偏差分别为10.6%、4.88%、4.58%。

由此可见，纸片快速法测定粪大肠菌群的精密度试验结果在《水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》（HJ 755-201）的方法规定范围内。

表2 粪大肠菌群精密度的测定（MPN·L-1）编号低浓度中浓度高浓度1 210 3 300 110 000 2 70 4 300 70 000 3 80 9 400 79 000 4 170 5 400 34 000 5 70 6 300 33 000 6 210 4 300 63 000 7 170 3 300 49 000 8 80 9 400 130 000
3 结论与讨论
本文对大肠菌群的质量控制进行了研究，提出试验过程都应严格按照相关环境标准的要求进行操作，对每批样品都进行全程序空白对照、阴阳性对照试验及准确度和精密度的验证。

结果表明，样品间的准确度和精密度结果都在质控范围内。

综上所述，加强质量控制可使获得的数据更加具有代表性和准确性，能满足相关环境标准和环保工作的要求。

4 参考文献
【相关文献】
[1]中华人民共和国环境保护部.水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法：HJ755-2015[S].北京：中国环境科学出版社，2015.
[2]杨美琴，孙来玉，王风云．微生物实验室质量控制与管理[J]．职业与健康，2008，24（2）：126-127.
[3]张绍华，李育彬.水环境监测中粪大肠菌群测定的质量保证与质量控制[J].黑龙江科技信息，2014（30）：26.
[4]郑高峰.提高水体中粪大肠菌群分析测试准确度的研究[J].化学工程与装备，2016（8）：302-304.
[5]黄晓容.水中粪大肠菌群测定方法—张片快速法与多管发酵法的比较[J].生物技术世界，2016（4）：33.。