人肠三叶肽在大肠杆菌中的表达

人肠三叶肽在大肠杆菌中的表达
路睿;王昕;陈建平;陈宪;徐佳楠
【期刊名称】《四川大学学报：医学版》
【年(卷),期】2010()1
【摘要】目的构建三叶肽(TFF)原核重组质粒pET32a-TFF3,实现TFF3融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达并鉴定表达产物。

方法用TRIzol试剂提取人结肠组织mRNA,逆转录后经PCR扩增得到不含信号肽的TFF3编码序列,插入原核表达载体pET32a,构建pET32a-TFF3重组质粒,转化大肠杆菌BL-21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,用SDS-PAGE和Western blot检测表达蛋白。

结果酶切和测序证实pET32a-TFF3重组质粒构建成功。

SDS-PAGE分析表明在IPTG浓度为1 mmol/L时,诱导6 h后蛋白表达量最大。

Western blot分析表明,TFF3融合蛋白相对分子质量约为24×103,其能与兔源TFF3抗体特异性结合。

结论成功构建了pET32a-TFF3重组质粒,实现了该基因在大肠杆菌中的高效表达,为后续深入研究TFF3奠定了基础。

【总页数】4页(P114-117)
【关键词】人肠三叶肽TFF3;蛋白质表达;融合蛋白
【作者】路睿;王昕;陈建平;陈宪;徐佳楠
【作者单位】四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室;浙江大学药学院;浙江海正药业股份有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】Q786
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