荷移分光光度法测定奈替米星

荷移分光光度法测定奈替米星
李满秀;徐丹;丁茹
【期刊名称】《理化检验-化学分册》
【年(卷),期】2015(051)009
【总页数】3页(P1333-1335)
【作者】李满秀;徐丹;丁茹
【作者单位】忻州师范学院化学系,忻州034000;忻州师范学院化学系,忻州034000;忻州师范学院化学系,忻州034000
【正文语种】中文
【中图分类】O657.32
奈替米星是一种半合成氨基糖苷类抗生素,抗菌谱广活性高,对肠杆菌科细菌如大肠杆菌、克雷伯菌属、肠杆菌属及变形杆菌属等具有良好的抗菌作用。

目前,奈替米星的检测方法有分光光度法[1-2]、散射光谱法[3]、高效液相色谱法[4-5]、薄层色谱法[6]和高效毛细管电泳法[7]等。

本工作利用水杨基荧光酮与奈替米星发生荷移反应生成稳定的荷移络合物,其最大吸收波长512 nm,比试剂的最大吸收波长450 nm红移62 nm。

试验通过探讨反应条件和络合物组成等,建立了测定奈替米星的荷移分光光度法。

1．1 仪器与试剂
岛津UV-2550型紫外分光光度计;752N型分光光度计;KQ-400KDE型超声波清洗器。

奈替米星标准储备溶液:1.0×10-3mol·L-1,称取奈替米星标准品(纯度为99.9%) 0.047 6 g,用水溶解,并定容至100 mL容量瓶中,使用时稀释至所需浓度。

水杨基荧光酮溶液:1.0×10-4mol·L-1,称取水杨基荧光酮0.033 6 g,用无水乙醇溶解,并定容至100 mL容量瓶中。

十六烷基三甲基溴化铵溶液:1.0×10-4mol·L-1。

所用试剂均为分析纯,试验用水为二次蒸馏水。

1．2 试验方法
在10 mL比色管中,分别加入1.0×10-4mol·L-1奈替米星溶液1.0 mL,1.0×10-
4mol·L-1水杨基荧光酮溶液1.0 mL,1.0×10-4mol·L-1十六烷基三甲基溴化铵溶液0.8 mL,用乙醇-水(1+1)溶液稀释至刻度,摇匀。

于室温下放置5 min,用1 cm比色皿,以试剂空白作参比,在波长512 nm处测量吸光度。

2．1 吸收光谱
以试剂空白作参比,在400～600 nm内进行光谱扫描,测量奈替米星溶液的吸光度,结果见图1。

由图1可知:水杨基荧光酮在波长450 nm处有最大吸收;奈替米星和水杨基荧光酮生成的络合物在波长512 nm处有最大吸收,红移了62 nm。

试验选择测定波长为512 nm。

2．2 反应条件的选择
2．2．1 稀释剂
选用二次蒸馏水和无水乙醇混合溶液作为稀释剂,在室温(20 ℃)下,于10 mL比色管中加入1.0×10-4mol·L-1奈替米星溶液、水杨基荧光酮溶液各1.0 mL,再分别加入1,2,3,4,5,6,7,8 mL无水乙醇,用水定容,在波长512 nm处测量吸光度,结果表明:加入无水乙醇4 mL时,效果最好,即乙醇-水(1+1)溶液。

试验选择乙醇-水(1+1)溶液作为稀释剂。

2．2．2 反应时间
在10 mL比色管中,加入1.0×10-4mol·L-1奈替米星溶液和水杨基荧光酮溶液各1.0 mL,用乙醇-水(1+1)溶液稀释至刻度,分别放置5,10,15,20,25,30,40,50,60 min 后,在波长512 nm处测量吸光度,结果分别为
0.218,0.220,0.219,0.218,0.219,0.221,0.220,0.219,0.220。

表明室温下反应5 mim后显色稳定,稳定时间至少在3 h以上,试验选择反应5 min后测定。

2．2．3 反应温度
在10 mL比色管中,加入1.0×10-4mol·L-1奈替米星溶液和水杨基荧光酮溶液各1.0 mL,用乙醇-水(1+1)溶液稀释至刻度,分别置于20 ℃(室
温),30 ℃,40 ℃,50 ℃,60 ℃的恒温水浴锅中加热20 min,冷却至室温后测量其吸光度,反应温度对吸光度的影响见图2。

由图2可知:20 ℃室温下吸光度最大;温度越高,吸光度反而越小,试验选择反应温度为20 ℃。

2．2．4 显色剂用量
在10 mL比色管中加入1.0×10-4mol·L-1奈替米星溶液1.0 mL,再分别加入
1.0×10-4mol·L-1水杨基荧光酮乙醇溶液0.5,0.8,1.0,1.2,1.5,1.8,
2.0 mL,用乙醇-水(1+1)溶液稀释至刻度,充分反应后,在波长512 nm处测量其吸光度,结果表明:随水杨基荧光酮用量的增加,体系吸光度增加;当用量大于1.0 mL后,吸光度趋于平缓,说明显色剂的用量为1.0 mL时反应即完全,试验选择显色剂的用量为1.0 mL。

2．2．5 增敏剂及用量
试验考察了表面活性剂十二烷基苯磺酸钠(SDBS)、十二烷基硫酸钠(SDS)、十六烷基三甲基溴化铵对反应体系的增敏作用,其中十六烷基三甲基溴化铵有明显的增敏作用,试验选择十六烷基三甲基溴化铵作为增敏剂。

按试验方法配制溶液后,分别加1.0×10-4mol·L-1十六烷基三甲基溴化铵溶液
0.5,0.6,0.7,0.8,1.0 mL,用乙醇-水(1+1)溶液稀释到刻度,充分反应后,在波长512 nm处测量吸光度,结果表明:当十六烷基三甲基溴化铵溶液的用量为0.8 mL时,增
敏效果最好,试验选择1.0×10-4mol·L-1十六烷基三甲基溴化铵溶液的用量为0.8 mL。

2．3 络合物组成
应用饱和法和等摩尔连续变化法测定络合物的组成[8],确定络合物的组成为1比1。

水杨基荧光酮是一个很强的平面型的π电子受体,而奈替米星是一种半合成氨基糖
苷类抗生素,富含电子,可以提供电子与水杨基荧光酮形成物质的量之比为1比1的络合物。

2．4 干扰试验
试验考察了一些常见离子及药物赋形剂对测定的干扰情况,当相对误差为±5%时,各共存物质的允许量(以μmol·L-1计):K+、Ca2+、Na+、淀粉、葡萄糖
(50),Mg2+(40),Fe3+(5)。

2．5 标准曲线及检出限
按试验方法对奈替米星标准溶液系列进行测定,结果表明:奈替米星的浓度在
5.0×10-6～1.0×10-4mol·L-1范围内与吸光度呈线性关系,表观摩尔吸光率为
8.04×103L·mol-1·cm-1。

线性回归方程为y=0.016 9 x+0.054 3,相关系数为
0.997 4。

方法的检出限为(3S/N)为4.2×10-6mol·L-1。

2．6 精密度试验
按试验方法平行测定8份1.0×10-4mol·L-1奈替米星溶液,其测定值的相对标准偏差(RSD)为1.1%。

2．7 样品分析
称取市售硫酸奈替米星0.100 0 g,用乙醇-水(1+1)溶液稀释至100 mL,再移取
1.00 mL稀释10倍,配制成100 mg·L-1(1.39×10-4mol·L-1)
溶液,平行配制3份,充分反应后测量其吸光度,奈替米星的计算结果见表1。

2．8 回收试验
移取3份1.39×10-4mol·L-1奈替米星溶液1.00 mL,分别加入不同浓度水平的奈替米星标准溶液1.00 mL,按试验方法平行测定3次,计算其平均回收率为95.2%～98.9%,结果见表2。

本工作建立了荷移分光光度法测定奈替米星的含量,方法准确、简便、快捷,重现性和选择性较好,可用于市售硫酸奈替米星含量的测定,并可作为该制剂质量控制的方法。

【相关文献】
[1] 江虹,湛海粼,何树华,等.奈替米星-刚果红分光光度法测定奈替米星[J].分析化学,
2007,35(4):575-578．
[2] 江虹,刘绍璞,胡小莉,等.曲利本红分光光度法测定氨基糖苷类抗生素[J].理化检验-化学分册, 2005,41(7):486-489．
[3] 李文龙,李念兵,罗红群.酸性磺酞类染料共振瑞利散射光谱法测定奈替米星[J].西南大学学报:自然科学版, 2011,33(11):71-75．
[4] 刘承伟,徐勤,张丹,等.高效液相色谱-共振瑞利散射光谱法测定大鼠血清中的奈替米星[J].色谱, 2011,29(2):157-161．
[5] 张锁西,张福珍.高效液相色谱-反向离子测定注射用硫酸奈替米星含量[J].江西中医学院学报, 2004,16(6):88-92．
[6] 盛成德.薄层色谱法测定注射用硫酸奈替米星有关物质[J].广东药学, 2003,5(2):55-59．
[7] 包丽颖,顾峻岭,车宝泉.高效毛细管电泳法对4种抗生素的定量分析[J].北京理工大学学报, 2001,21(2):68-72．
[8] 尚永辉,张帆,李晓娟,等.氯醌酸荷移分光光度法测定克拉霉素片中克拉霉素[J].理化检验-化学分册, 2015,51(2):242-244．。