mTmG报告小鼠介绍

mTmG报告小鼠介绍
系统命名：B6.129(Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4(ACTB-tdTomato,-EGFP)Luo/J
普通命名：mT/mG , mTmG
mT/mG小鼠品系描述：
mT/mG 突变纯合的小鼠可存活且可繁育。

该品系在膜定位的tdTomato (mT) 盒两侧具有 loxP 位点，并在检测的所有组织和细胞类型中表达强红色荧光。

尾部或全身荧光足以区分mT/mG 小鼠和野生型小鼠。

在与表达Cre 重组酶的小鼠杂交时，获得的后代在表达cre 的组织中敲除了 mT 盒，允许表达位于下游的膜定位的 EGFP (mG) 盒。

捐赠者报告，与单独的内源性 Gt(ROSA) 位点相比，ACTB 启动子允许更强和持续的荧光蛋白表达（特别是在成体细胞中）。

该双荧光系统允许重组和非重组细胞以单细胞分辨率直接活体成像，为Cre 诱导的嵌合突变体的表型分析提供内部对照，并为谱系追踪应用提供第二标记物。

此外，荧光蛋白定位到膜结构反应了细胞形态的轮廓，并允许分辨精细的细胞过程。

这些 mT/mG 小鼠可用作 Cre 报告基因品系，在广泛的细胞和组织类型中，Cre 介导的重组之前表达红色荧光，之后表达绿色荧光。

mT/mG小鼠品系建立：
mT/mG（膜-Tomato/膜-GFP）靶向载体设计为包含CMV 增强子/鸡β 肌动蛋白核心启动子 (pCA) 驱动表达 loxP 侧翼、N 端膜标记、tdTomato 蛋白序列后出现多聚腺苷酸化信号（tdT omato 是非寡聚化DsRed 变体，具有 12 个残基接头，融合 2 个拷贝的蛋白（串联二聚体））。

在第二个 loxP 下游是 N 端膜标记的增强绿色荧光蛋白 (EGFP) 序列本身，然后是多聚腺苷酸化信号。

在表达载体的远端也有一个frt 侧翼的 neo 盒。

通过电穿孔 (129X1/SvJ x 129S1/Sv) F1 来源的 R1 胚胎干 (ES) 细胞，将整个 mT/mG 载体插入 Gt (ROSA) 26Sor 位点。

将正确靶标的 ES 细胞显微注射到 C57BL/6J 囊胚中。

将嵌合后代与远交系CD-1 小鼠杂交。

获得的突变小鼠进行相互杂交以产生纯合子，
然后送到杰克森实验室。

在到达后，将部分小鼠回交至C57BL/6J 至少 5 代以产生该同源品系。

参考文献: Muzumdar MD; Tasic B; Miyamichi K; Li L; Luo L. 2007. A global double-fluorescent Cre reporter mouse. Genesis 45(9):593-605 PubMed: 17868096 MGI: J:124702。