试剂盒内控参考品构成及检测合格标准

试剂盒内控参考品构成及检测合格标准
5.1 建立内部质控品的试验资料
由于目前尚无HCMV抗原血症国家和国际标准参考品，本研究课题组从医院采集了大批器官移植患者的外周血白细胞，对用荷兰IQ products公司CMV pp65抗原血症检测试剂盒、本试剂盒、荧光定量PCR及病毒分离间接免疫荧光检测证实均为HCMV抗原血症阳性标本或阴性标本（排除荷兰IQ products公司CMV pp65抗原血症检测试剂盒、本试剂盒、荧光定量PCR及病毒分离免疫荧光检测结果不一致标本），筛选确定了10份质控阳性参考品来源和10份阴性参考品来源细胞，细胞计数并将细胞浓度调整至1×106/ml，无菌操作制备一批细胞涂片即为本试剂盒内部质控阳性和阴性参考品。

详见表29。

表29. 部分临床标本检测结果
样本编号荧光定量
PCR检测病毒分离
检测结果
IQ products公司试剂盒
检测结果
本公司试剂盒检测结果阳性/阴性阳性细胞数阳性/阴性阳性细胞数
1 阳性阳性阳性8 阳性8
2 阳性阴性阴性- 阴性-
3 阴性阴性阴性- 阴性-
4 阳性阴性阴性- 阴性-
5 阳性阳性阳性 3 阳性 3
6 阴性阴性阴性- 阴性-
7 阴性阴性阴性- 阴性-
8 阳性阴性阴性- 阴性-
9 阳性阴性阴性- 阴性-
10 阳性阳性阳性60 阳性61
11 阴性阴性阴性- 阴性-
12 阳性阴性阴性- 阴性-
13 阴性阴性阴性- 阴性-
14 阴性阴性阴性- 阴性-
15 阳性阴性阴性- 阴性-
16 阳性阴性阴性- 阴性-
17 阳性阳性阳性128 阳性128
18 阳性阳性阳性27 阳性28
19 阳性阴性阴性- 阴性-
20 阳性阳性阳性48 阳性51
21 阴性阴性阴性- 阴性-
22 阴性阴性阴性- 阴性-
23 阳性阴性阴性- 阴性-
24 阳性阴性阴性- 阴性-
25 阳性阳性阳性124 阳性130
26 阳性阴性阳性 1 阳性 2
27 阳性阳性阳性41 阳性42
28 阳性阴性阳性10 阳性8
29 阴性阴性阴性- 阴性-
30 阴性阴性阴性- 阴性-
31 阴性阴性阳性 2 阳性 3
33 阳性阴性阴性- 阴性-
34 阴性阴性阴性- 阴性-
35 阳性阳性阳性16 阳性15
36 阳性阳性阳性52 阳性49
37 阴性阴性阳性 3 阳性 2
38 阳性阴性阳性 4 阳性 2
39 阳性阳性阳性35 阳性35
40 阴性阴性阴性- 阴性-
根据以上结果，我们采用第1、5、10、17、18、20、25、27、25、26号标本为试剂盒内部质控阳性参考品，第3、6、7、11、13、14、21、22、29、30号标本为试剂盒内部质控阴性参考品。

5.2 内部质控阳性参考品（P1~P10）、阴性参考品（N1~N10）、灵敏度参
考品（L1~L8）和精密度参考品（PC）的建立
为了建立企业内部质控品，用于评价HCMV pp65抗原血症检测试剂盒原材料、半成品及成品试剂盒的质控，我们根据表7一批临床标本筛选结果，选取经荷兰IQ products公司CMV pp65抗原血症检测试剂盒、本试剂盒、荧光定量PCR及病毒分离免疫荧光检测均证实为HCMV抗原血症阳性10份标本（即表7中第1、5、10、17、18、20、25、27、25和第26号标本）做为试剂盒阳性参考品（P1~P10）。

选取经荷兰IQ products公司CMV pp65抗原血症检测试剂盒、本试剂盒、荧光定量PCR及病毒分离免疫荧光检测证实均为HCMV抗原血症阴性10份标本（即表7中第3、6、7、11、13、14、21、22、29和第30号标本）做为试剂盒阴性参考品（N1~N10）。

将其中一份强阳性质控参考品（第17号标本）和与正常人外周血白细胞（经检测乙型肝炎表面抗原、HIV抗原、丙肝抗体、Ⅰ/Ⅱ型HIV抗体均为阴性；同时经本试剂盒检测、荷兰IQ products公司CMV pp65抗原血症检测试剂盒、PCR检测以及经典病毒分离检测HCMV pp65抗原血症结果均为阴性者）分别按1:1、1:2、1：4、1:8、1:16、1:32、1:64比例混合，细胞计数并将细胞浓度调整至1×106/ml，制备细胞涂片作为灵敏度参考品（L1~L8）。

选取经荷兰IQ products公司CMV pp65抗原血症检测试剂盒、本试剂盒、荧光定量PCR及病毒分离免疫荧光检测均证实为HCMV抗原血症阳性1份标本（表7中第39号标本）做为试剂盒精密度参考品（PC）。

5.3内部质控参考品的构成
根据上述试验结果，建立了本产品内控参考品，其构成及检测合格标准见表30。

表30. 内控参考品构成及检测合格标准
名称阳性参考品阴性参考品灵敏度参考品精密性参考品
数量
10份
（P1~P10)
10份
（N1~N10）
8份
（L1~L8）
1份
（PC）
编号P1~P10 N1~N10 L1~L5 PC
检测标准
10/10
（+/+）
10
(-/-)
至少保证
L8
检出阳性
平行测定
不少于5次，
CV＜15%。