A群猪轮状病毒G5型OSU株VP7基因的克隆及其重组杆状病毒的鉴定

A群猪轮状病毒G5型OSU株VP7基因的克隆及其重组杆
状病毒的鉴定
徐宏军;师东方;李一经;王君伟;贾永清
【期刊名称】《中国兽医科技》
【年(卷),期】2002(32)6
【摘要】利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增出A群猪轮状病毒 (PRV)G5型OSU株长度约为 1.0kb的基因片段 ,将其克隆到 pMD 18 T载体上进行测序鉴定 ,证明为该PRV的VP7蛋白基因 ,与已发表的该PRVVP7基因序列的同源性为99.8%。

将该基因黏端克隆至表达载体PblueBAChisC质粒中 ,酶切及PCR鉴定表明获得了PRV VP7蛋白基因与PblueBAChisC质粒的阳性重组子。

纯化该重组质粒并与线性杆状病毒DNA分子Bac N Blue共转染昆虫细胞sf9,5d后收获重组病毒。

通过对重组杆状病毒DNA分子的酶切及PCR鉴定 ,确定PRV VP7基因已正确插入。

将经 3次蚀斑筛选纯化后的该重组杆状病毒接种于sf9细胞大量增殖后 ,获得了重组杆状病毒PRV
【总页数】3页(P18-20)
【关键词】猪轮状病毒;VP7基因;克隆;重组杆状病毒
【作者】徐宏军;师东方;李一经;王君伟;贾永清
【作者单位】东北农业大学动物医学院
【正文语种】中文
【中图分类】S852.659.4
【相关文献】
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