小鼠FABP4基因启动子驱动红色荧光蛋白载体的构建及在牛体细胞中的表达
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Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｒ ／ ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ａ ｓ ｓ ｅ ｔ ｔ ｅ ｏ ｆ ｍｏ ｕ ｓ ｅ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ — ｔ ｙ ｐ ｅ ｆ ａ ｔ ｔ ｙ ａ ｃ ｉ ｄ ｂ ｉ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ（ Ｆ ＡＢ Ｐ ４） ｗａ ｓ
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Ｉ Ｉ Ｂ Ｒ Ｉ Ｃ Ｕ Ｌ Ｔ Ｕ Ｒ Ａ Ｅ 华 北农 学报 ・ ２ ０１ ６， ３ １（ ６）： ２ ６－ ３ ０ Ｂ Ｏ Ｒ Ｅ ｌ ｌ Ｌ Ｉ － Ｓ Ｉ Ｈ Ｉ 嘲
小鼠 Ｆ Ａ
基 因启 动 子 驱 动 红 色 荧 光 蛋 白载 体 的 构 建 及 在 牛 体 细 胞 中 的 表 达
ｗｉ ｄ ｅ ｌ ｙ ｕ ｓ ｅ ｄ ａ ｓ ｔ ｈ ｅ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ｐｅ ｃ ｉ ｉ ｆ ｃ ｅ ｌ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ． Ｔｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｍＦ ＡＢＰ４ ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｒ ｏ ｎ ｇ ｅ ｎ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｂ ｏ — ｖ ｉ ｎｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ， ５． ９ ｋ ｂ ｍＦ ＡＢＰ４ ｐｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｒ ｆ ｒ ａ ｇ ｍｅ ｎ ｔ ｗａ ｓ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｍｏ ｕ ｓ ｅ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｇ ｅ ｎ ｏ ｍｅ ａ ｎ ｄ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｂ ｙ ｄｉ ｇ ｅ ｓ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ
中图分类号 ： Ｑ ７ ８ ２ 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ： １ ０ ０ ０—７ ０ ９ ｌ （ ２ ０ １ ６ ） ０ ６— ０ ０ ２ ６—０ ５
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ７ ６ ６ ８ ／ ｈ ｂ ｎ ｘ ｂ ． ２ ０１ ６ ． ０ ６． ０ ０ ５
Ｃｏ ｎｓ ｔ ｒ ｕｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｒｅ ｄ Ｆｌ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｔ Ｐｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ Ｄｒ ｉ ｖ ｅ ｎ ｂｙ Ｍｏ ｕｓ ｅ ＦＡＢＰ４
Ｐｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｒ ａ ｎｄ Ｅｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ Ｂｏ ｖ ｉ ｎｅ Ｃｅ ｌ ｌ ｓ
ＹＵＥ Ｙｏ ｎ ｇ ｌ ｉ ． ＹＵ Ｈａ ｉ ｑ ｕ ａ ｎ
（ Ｋｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｍｉ ｎ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｅｄ ｕ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ｆ ｏ ｒ Ｍａ ｍｍａ ｌ Ｒｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ａ ｎ ｄ
岳 永莉 ， 于 海泉
（ 内蒙 古 大学 哺 乳 动 物 生 殖 生 物 学 及生 物技 术 教 育部 重 点 实 验 室 ， 内蒙 古 呼 和 浩 特
０ １ ０ ０ ２ １ ）
摘要 ： 小 鼠脂 肪 型 脂 肪 酸 结 合 蛋 白 （ Ｆ Ａ Ｂ Ｐ ４ ） 的启 动 子 ／ 增强子元件是脂 肪组织特异性 启动元件 ， 为 了 鉴 定 该 元 件
在 牛 体 细 胞 中 的启 动 效 果 ， 首 先 以 小 鼠肝 脏 Ｄ Ｎ Ａ为 模 板 ， 通过 Ｐ Ｃ Ｒ克隆得到 ５ ． ９ ｋ ｂ的 Ｆ Ａ Ｂ Ｐ ４基 因启 动 子 片段 ， 连 入 ｐ ＭＤ １ ９ 一 Ｔ载 体 后 进 行 酶 切 及 测 序 鉴 定 ， 经Ｅ ｃ ｏ Ｔ ２ ２ Ｉ 酶 切 去 除 非 核 心 启 动 子 区后 精 简 为 ２ ． ３ ｋ ｂ的 片 段 ， 通过 Ｓ ａ ｃ Ｉ Ｉ 酶 切将 ５ ． ９ ｋ ｂ片 段 和 ２ ． ３ ｋ ｂ片 段 的 启 动 子 连 入 红 色 荧 光 蛋 白 载 体 ｐ Ｄ ｓ — Ｒ ｅ ｄ ２ － ｌ的 多 克 隆 位 点 ， 构 建 为 表 达 质 粒 ｐ ＭＦ ５ ． ９ － Ｒ ｅ ｄ 和ｐ Ｍ Ｆ ２ ． ３ － Ｒ ｅ ｄ ， 利用脂质体法将上 述载体分别转染牛脂肪问充质干细胞及牛胎儿 成纤维 细胞 ， ２ ４ ｈ后 实 时定量 Ｐ Ｃ Ｒ检 测 红 色 荧 光 蛋 白转 录水 平 。结 果 表 明 ， 克隆得到 的 ５ ． ９ ｋ ｂ小 鼠 Ｆ Ａ Ｂ Ｐ ４启 动 子 片 段 酶 切 及 测 序 结 果 正 确， 与 红 色荧 光 蛋 白载 体 相 连 的 载 体 ｐ ＭＦ ５ ． ９ － Ｒ ｅ ｄ和 ｐ ＭＦ ２ ． ３ 一 Ｒ ｅ ｄ酶 切 结 果 与 预 期 相 符 ， 表达 载体 构建 成 功 ， 实 时定 量 Ｐ Ｃ Ｒ 结 果 显 示 以上 ２种 细 胞 在 转 染 后 ２ ４ ｈ红 色 荧 光 蛋 白均 有 表 达 ， 且ｐ Ｍ Ｆ ２ ． ３ ． Ｒ ｅ ｄ的转 录水 平 是 ｐ ＭＦ ５ ． ９ 一 Ｒ ｅ ｄ的 ２倍 以上。成功构建了小鼠 Ｆ Ａ Ｂ Ｐ ４启 动 子 驱 动 红 色 荧 光 蛋 白表 达 载 体 ｐ Ｍ Ｆ ５ ． ９ － Ｒ ｅ ｄ和 ｐ ＭＦ ２ ． ３ － Ｒ ｅ ｄ ， ５ ． ９ ｋ ｂ片 段 和 ２ ． ３ ｋ ｈ 片段 均 可驱 动外 源 基 因 在 牛 体 细 胞 中 转 录 ， 且２ ． ３ ｋ ｂ 片段启动效率 高于 ５ ． ９ ｋ ｂ片 段 。 关键词 ： 小鼠Ｆ Ａ Ｂ Ｐ ４启 动 子 ； 载体构建 ； 牛体 细胞
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｒ ／ ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ａ ｓ ｓ ｅ ｔ ｔ ｅ ｏ ｆ ｍｏ ｕ ｓ ｅ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ — ｔ ｙ ｐ ｅ ｆ ａ ｔ ｔ ｙ ａ ｃ ｉ ｄ ｂ ｉ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ（ Ｆ ＡＢ Ｐ ４） ｗａ ｓ
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Ｉ Ｉ Ｂ Ｒ Ｉ Ｃ Ｕ Ｌ Ｔ Ｕ Ｒ Ａ Ｅ 华 北农 学报 ・ ２ ０１ ６， ３ １（ ６）： ２ ６－ ３ ０ Ｂ Ｏ Ｒ Ｅ ｌ ｌ Ｌ Ｉ － Ｓ Ｉ Ｈ Ｉ 嘲
小鼠 Ｆ Ａ
基 因启 动 子 驱 动 红 色 荧 光 蛋 白载 体 的 构 建 及 在 牛 体 细 胞 中 的 表 达
ｗｉ ｄ ｅ ｌ ｙ ｕ ｓ ｅ ｄ ａ ｓ ｔ ｈ ｅ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ｐｅ ｃ ｉ ｉ ｆ ｃ ｅ ｌ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ． Ｔｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｍＦ ＡＢＰ４ ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｒ ｏ ｎ ｇ ｅ ｎ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｂ ｏ — ｖ ｉ ｎｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ， ５． ９ ｋ ｂ ｍＦ ＡＢＰ４ ｐｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｒ ｆ ｒ ａ ｇ ｍｅ ｎ ｔ ｗａ ｓ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｍｏ ｕ ｓ ｅ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｇ ｅ ｎ ｏ ｍｅ ａ ｎ ｄ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｂ ｙ ｄｉ ｇ ｅ ｓ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ
中图分类号 ： Ｑ ７ ８ ２ 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ： １ ０ ０ ０—７ ０ ９ ｌ （ ２ ０ １ ６ ） ０ ６— ０ ０ ２ ６—０ ５
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ７ ６ ６ ８ ／ ｈ ｂ ｎ ｘ ｂ ． ２ ０１ ６ ． ０ ６． ０ ０ ５
Ｃｏ ｎｓ ｔ ｒ ｕｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｒｅ ｄ Ｆｌ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｔ Ｐｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ Ｄｒ ｉ ｖ ｅ ｎ ｂｙ Ｍｏ ｕｓ ｅ ＦＡＢＰ４
Ｐｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｒ ａ ｎｄ Ｅｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ Ｂｏ ｖ ｉ ｎｅ Ｃｅ ｌ ｌ ｓ
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岳 永莉 ， 于 海泉
（ 内蒙 古 大学 哺 乳 动 物 生 殖 生 物 学 及生 物技 术 教 育部 重 点 实 验 室 ， 内蒙 古 呼 和 浩 特
０ １ ０ ０ ２ １ ）
摘要 ： 小 鼠脂 肪 型 脂 肪 酸 结 合 蛋 白 （ Ｆ Ａ Ｂ Ｐ ４ ） 的启 动 子 ／ 增强子元件是脂 肪组织特异性 启动元件 ， 为 了 鉴 定 该 元 件
在 牛 体 细 胞 中 的启 动 效 果 ， 首 先 以 小 鼠肝 脏 Ｄ Ｎ Ａ为 模 板 ， 通过 Ｐ Ｃ Ｒ克隆得到 ５ ． ９ ｋ ｂ的 Ｆ Ａ Ｂ Ｐ ４基 因启 动 子 片段 ， 连 入 ｐ ＭＤ １ ９ 一 Ｔ载 体 后 进 行 酶 切 及 测 序 鉴 定 ， 经Ｅ ｃ ｏ Ｔ ２ ２ Ｉ 酶 切 去 除 非 核 心 启 动 子 区后 精 简 为 ２ ． ３ ｋ ｂ的 片 段 ， 通过 Ｓ ａ ｃ Ｉ Ｉ 酶 切将 ５ ． ９ ｋ ｂ片 段 和 ２ ． ３ ｋ ｂ片 段 的 启 动 子 连 入 红 色 荧 光 蛋 白 载 体 ｐ Ｄ ｓ — Ｒ ｅ ｄ ２ － ｌ的 多 克 隆 位 点 ， 构 建 为 表 达 质 粒 ｐ ＭＦ ５ ． ９ － Ｒ ｅ ｄ 和ｐ Ｍ Ｆ ２ ． ３ － Ｒ ｅ ｄ ， 利用脂质体法将上 述载体分别转染牛脂肪问充质干细胞及牛胎儿 成纤维 细胞 ， ２ ４ ｈ后 实 时定量 Ｐ Ｃ Ｒ检 测 红 色 荧 光 蛋 白转 录水 平 。结 果 表 明 ， 克隆得到 的 ５ ． ９ ｋ ｂ小 鼠 Ｆ Ａ Ｂ Ｐ ４启 动 子 片 段 酶 切 及 测 序 结 果 正 确， 与 红 色荧 光 蛋 白载 体 相 连 的 载 体 ｐ ＭＦ ５ ． ９ － Ｒ ｅ ｄ和 ｐ ＭＦ ２ ． ３ 一 Ｒ ｅ ｄ酶 切 结 果 与 预 期 相 符 ， 表达 载体 构建 成 功 ， 实 时定 量 Ｐ Ｃ Ｒ 结 果 显 示 以上 ２种 细 胞 在 转 染 后 ２ ４ ｈ红 色 荧 光 蛋 白均 有 表 达 ， 且ｐ Ｍ Ｆ ２ ． ３ ． Ｒ ｅ ｄ的转 录水 平 是 ｐ ＭＦ ５ ． ９ 一 Ｒ ｅ ｄ的 ２倍 以上。成功构建了小鼠 Ｆ Ａ Ｂ Ｐ ４启 动 子 驱 动 红 色 荧 光 蛋 白表 达 载 体 ｐ Ｍ Ｆ ５ ． ９ － Ｒ ｅ ｄ和 ｐ ＭＦ ２ ． ３ － Ｒ ｅ ｄ ， ５ ． ９ ｋ ｂ片 段 和 ２ ． ３ ｋ ｈ 片段 均 可驱 动外 源 基 因 在 牛 体 细 胞 中 转 录 ， 且２ ． ３ ｋ ｂ 片段启动效率 高于 ５ ． ９ ｋ ｂ片 段 。 关键词 ： 小鼠Ｆ Ａ Ｂ Ｐ ４启 动 子 ； 载体构建 ； 牛体 细胞