医学微生物-医学微生物学实验3PPT课件
合集下载
医学微生物学PPT医学课件
宿主细胞 衣 原 体 大量繁殖 抑制 细胞代谢
主要外膜蛋白阻止吞噬体与溶酶体的融合 超敏反应
免疫性 免疫力不强
第2节 主要致病性衣原体
• 一、沙眼衣原体
• 致病性与免疫性 • 传播途径 眼 —— 眼、眼 —— 手 —— 眼、性 接触传播、产道感染和呼吸道感染
所致疾病
• 沙眼 沙眼亚种A、B、Ba和C血清型 • 感染眼结膜上皮细胞→增殖，包涵体→局 部炎症→早期流泪、有粘液脓性分泌物、 结膜充血及滤泡增生→后期结膜瘢痕、眼 睑内翻、倒睫以及角膜血管翳引起的角膜 损害→影响视力或致盲
一、生物学特性
形态结构
• 体积微小，一般为0.2～0.3µm。无细胞壁, 呈多形性，有球形、杆状、丝状、分枝状 等多形态。革兰染色阴性。姬姆萨染色呈 淡紫色。。 • 繁殖方式多样，以二分裂 繁殖为主。
• 培养
• 营养要求高，在含有20%血清、酵母浸膏及 胆固醇的培养基中，生长缓慢，3～10天 （甚至2～3周）后才形成荷包蛋样微小菌 落。菌落中央厚而隆起，周边薄而扁平。 用低倍镜观察清楚。适宜温度为35℃。 •
第2节 主要致病性立克次体
• 一、普氏立克次体
传染源：病人 传播媒介：体虱
人 人虱 人虱 人
流行性斑疹伤寒传播方式
二、莫氏立克次体
地方性斑疹伤寒（鼠型斑疹伤寒）传播方式
鼠 鼠蚤 鼠虱 鼠蚤 人
鼠
三、恙虫病立克次体
• 传播媒介，储存宿主:恙螨 卵
鼠 幼虫
成虫
稚虫
第二代幼虫 人（恙虫病）
稚虫
成虫
卵
第14章 放线菌
第1节 放线菌属
主要致病菌——衣氏放线菌（A. israelii)
一、生物学性状
G+、非抗酸性丝状菌 培养困难，厌氧或微需氧 硫磺样颗粒（菌落） 压片或组织切片，显微镜下可见颗 粒呈菊花状
主要外膜蛋白阻止吞噬体与溶酶体的融合 超敏反应
免疫性 免疫力不强
第2节 主要致病性衣原体
• 一、沙眼衣原体
• 致病性与免疫性 • 传播途径 眼 —— 眼、眼 —— 手 —— 眼、性 接触传播、产道感染和呼吸道感染
所致疾病
• 沙眼 沙眼亚种A、B、Ba和C血清型 • 感染眼结膜上皮细胞→增殖，包涵体→局 部炎症→早期流泪、有粘液脓性分泌物、 结膜充血及滤泡增生→后期结膜瘢痕、眼 睑内翻、倒睫以及角膜血管翳引起的角膜 损害→影响视力或致盲
一、生物学特性
形态结构
• 体积微小，一般为0.2～0.3µm。无细胞壁, 呈多形性，有球形、杆状、丝状、分枝状 等多形态。革兰染色阴性。姬姆萨染色呈 淡紫色。。 • 繁殖方式多样，以二分裂 繁殖为主。
• 培养
• 营养要求高，在含有20%血清、酵母浸膏及 胆固醇的培养基中，生长缓慢，3～10天 （甚至2～3周）后才形成荷包蛋样微小菌 落。菌落中央厚而隆起，周边薄而扁平。 用低倍镜观察清楚。适宜温度为35℃。 •
第2节 主要致病性立克次体
• 一、普氏立克次体
传染源：病人 传播媒介：体虱
人 人虱 人虱 人
流行性斑疹伤寒传播方式
二、莫氏立克次体
地方性斑疹伤寒（鼠型斑疹伤寒）传播方式
鼠 鼠蚤 鼠虱 鼠蚤 人
鼠
三、恙虫病立克次体
• 传播媒介，储存宿主:恙螨 卵
鼠 幼虫
成虫
稚虫
第二代幼虫 人（恙虫病）
稚虫
成虫
卵
第14章 放线菌
第1节 放线菌属
主要致病菌——衣氏放线菌（A. israelii)
一、生物学性状
G+、非抗酸性丝状菌 培养困难，厌氧或微需氧 硫磺样颗粒（菌落） 压片或组织切片，显微镜下可见颗 粒呈菊花状
医学检验微生物ppt课件完整版x
个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
医学检验微生物ppt课件完 整版x
目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查
完整版医学微生物学ppt课件
01医学微生物学概述Chapter医学微生物学的定义与任务定义任务01020304包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌等不同类型的细菌。
细菌包括DNA 病毒、RNA 病毒等不同类型的病毒。
病毒包括酵母菌、霉菌等不同类型的真菌。
真菌包括原虫、蠕虫等不同类型的寄生虫。
寄生虫古代时期文艺复兴时期19世纪20世纪至今02细菌的基本形态与结构Chapter细菌的大小与形态细菌的大小细菌的形态01020304细胞壁细胞质细胞膜核质荚膜鞭毛菌毛芽孢03细菌的生理与遗传Chapter细菌的形态与结构细菌的理化特性细菌的分类与命名030201细菌的理化性质细菌的生长繁殖与代谢细菌的营养类型细菌的生长繁殖细菌的代谢细菌的遗传与变异细菌的遗传物质细菌的变异类型细菌遗传变异的机制细菌遗传变异的意义04细菌的分类与命名Chapter细菌的分类方法数值分类法传统分类法利用细菌的多种特性，通过计算机进行数值分析，确定细菌之间的相似性和差异性，从而进行分类。
分子分类法常见病原菌的分类与命名葡萄球菌属包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等，引起皮肤和软组织感染、败血症等。
链球菌属包括肺炎链球菌、化脓性链球菌等，引起呼吸道感染、脑膜炎、心内膜炎等。
肠杆菌科包括大肠杆菌、沙门氏菌等，引起肠道感染、泌尿道感染等。
观察细菌的形态、大小、排列方式等特征进行初步鉴定。
形态学鉴定生理生化鉴定免疫学鉴定分子生物学鉴定利用细菌对营养物质的需求、代谢产物的产生以及某些酶的活性等特性进行鉴定。
利用特异性抗体与细菌抗原的结合反应进行鉴定，如凝集试验、沉淀试验等。
基于细菌基因序列的分析和比较，采用PCR 技术、基因芯片技术等手段进行快速、准确的鉴定。
细菌的鉴定与识别05病毒的基本形态与结构Chapter病毒的大小与形态病毒的大小病毒的形态病毒形态各异，常见的有球形、杆状、砖形、丝状、蝌蚪状等。
这些形态与病毒的基因组类型、外壳蛋白的结构以及感染宿主的方式有关。
病毒的基本结构核衣壳包膜病毒的分类与命名病毒的分类病毒的命名06病毒的复制与遗传Chapter病毒的复制周期病毒通过特异性受体吸附于宿主细胞表面，然后将核酸注入细胞内。
医学微生物学ppt课件完整版
病毒缺乏独立的代谢和能量系统 ，必须利用宿主细胞的酶系统、 原料和能量进行复制。
形态多样 结构简单 寄生生活
严格细胞内寄生
病毒粒子形态各异，有球形、杆 状、砖形、蝌蚪形等。
病毒必须寄生在活细胞内才能复 制和增殖。
病毒的复制与变异
复制周期
包括吸附、注入、脱壳、生物合 成、组装与释放等步骤。
变异机制
病毒的变异机制包括错误复制、 基因重组和基因重配等。
通过接种疫苗可以预防某些由微生物引起的疾病，如麻疹、流感等 。
微生物与药物的关系
微生物是药物的重要来源
许多抗生素、抗真菌药物等都来源于微生物或其代谢产物。
微生物在药物生产中的应用
利用微生物发酵技术可以生产多种药物，如青霉素、维生素等。
微生物与药物相互作用
某些药物可以影响微生物的生长和代谢，同时微生物也可以影响药 物的吸收、分布和代谢。
06
实验诊断与防治原则
Chapter
实验诊断方法与技术
细菌学诊断方法
包括细菌培养、生化反应、血 清学试验等，用于鉴定细菌种
类和检测细菌感染。
病毒学诊断方法
包括病毒分离、病毒抗原检测 、病毒核酸检测等，用于鉴定 病毒种类和检测病毒感染。
免疫学诊断方法
包括抗原抗体反应、免疫荧光 技术、酶联免疫吸附试验等， 用于检测病原体特异性抗原或 抗体。
03
人类通过培养有益微生物和消灭有害微生物来维护自身健康，
如疫苗接种、消毒灭菌等。
02
细菌学
Chapter
细菌的形态与结构
细菌的基本形态
球菌、杆菌、螺形菌
细菌的结构
细胞壁、细胞膜、细胞质、核质
特殊结构
荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢
形态多样 结构简单 寄生生活
严格细胞内寄生
病毒粒子形态各异，有球形、杆 状、砖形、蝌蚪形等。
病毒必须寄生在活细胞内才能复 制和增殖。
病毒的复制与变异
复制周期
包括吸附、注入、脱壳、生物合 成、组装与释放等步骤。
变异机制
病毒的变异机制包括错误复制、 基因重组和基因重配等。
通过接种疫苗可以预防某些由微生物引起的疾病，如麻疹、流感等 。
微生物与药物的关系
微生物是药物的重要来源
许多抗生素、抗真菌药物等都来源于微生物或其代谢产物。
微生物在药物生产中的应用
利用微生物发酵技术可以生产多种药物，如青霉素、维生素等。
微生物与药物相互作用
某些药物可以影响微生物的生长和代谢，同时微生物也可以影响药 物的吸收、分布和代谢。
06
实验诊断与防治原则
Chapter
实验诊断方法与技术
细菌学诊断方法
包括细菌培养、生化反应、血 清学试验等，用于鉴定细菌种
类和检测细菌感染。
病毒学诊断方法
包括病毒分离、病毒抗原检测 、病毒核酸检测等，用于鉴定 病毒种类和检测病毒感染。
免疫学诊断方法
包括抗原抗体反应、免疫荧光 技术、酶联免疫吸附试验等， 用于检测病原体特异性抗原或 抗体。
03
人类通过培养有益微生物和消灭有害微生物来维护自身健康，
如疫苗接种、消毒灭菌等。
02
细菌学
Chapter
细菌的形态与结构
细菌的基本形态
球菌、杆菌、螺形菌
细菌的结构
细胞壁、细胞膜、细胞质、核质
特殊结构
荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢
医学微生物学实验三
• 用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面 ，一旦纸片贴上，不能移动，每两个药敏纸片间隔20mm， 距边缘10mm。
• 盖上平板的盖子，做好标记，放置培养箱内孵育16~18h。
• 下次实验课找到自己的药敏结果，量取抑菌环直径，根据 CLSI（clinical and laboratory standards institute ）标准， 报告细菌对该抗生素敏感(susceptible,S)、耐药(resistant,R) 、中介(intermediate,I)。
MIC：在与微生物生长速率有关的特定时间 间隔内，通常是18－24小时，能够抑制被测菌生 长的最低药物浓度。
抑菌环
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ药物效果越好，抑菌环直径越大；效果越差，抑菌环直径越小。
操作方法
• 无菌挑取孵育16～24h的血平板上4个菌落,沿4个方向均匀抹 无菌M-H琼脂表面，使菌液均匀分布，最后再取一个菌落沿 平板内缘环形涂抹均匀。
直接
涂片镜检 （革兰染色）
接种 血琼脂平板
菌落观察
血浆凝固酶试验
革兰染色
药敏试验 诊断报告
一、脓汁标本中化脓性球菌的鉴定
直接涂片镜检
• 取标本直接涂片，均匀涂成菌膜，自然干 燥，固定后革兰染色，油镜观察。
金黄色葡萄球菌
革兰染色镜检
─────────
形态
排列 染色性
乙型溶血性链球菌
细菌分离培养
• 取一号和二号脓标本，分别接种于血琼脂 平板上，划线分离，37℃培养18~24h后， 观察菌落特征，取单个菌落进行再次革兰 染色镜检。
– 保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏 – 抵抗吞噬细胞的吞噬和消化 – 使感染局限化和形成血栓
游离血浆凝固酶
• 盖上平板的盖子，做好标记，放置培养箱内孵育16~18h。
• 下次实验课找到自己的药敏结果，量取抑菌环直径，根据 CLSI（clinical and laboratory standards institute ）标准， 报告细菌对该抗生素敏感(susceptible,S)、耐药(resistant,R) 、中介(intermediate,I)。
MIC：在与微生物生长速率有关的特定时间 间隔内，通常是18－24小时，能够抑制被测菌生 长的最低药物浓度。
抑菌环
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ药物效果越好，抑菌环直径越大；效果越差，抑菌环直径越小。
操作方法
• 无菌挑取孵育16～24h的血平板上4个菌落,沿4个方向均匀抹 无菌M-H琼脂表面，使菌液均匀分布，最后再取一个菌落沿 平板内缘环形涂抹均匀。
直接
涂片镜检 （革兰染色）
接种 血琼脂平板
菌落观察
血浆凝固酶试验
革兰染色
药敏试验 诊断报告
一、脓汁标本中化脓性球菌的鉴定
直接涂片镜检
• 取标本直接涂片，均匀涂成菌膜，自然干 燥，固定后革兰染色，油镜观察。
金黄色葡萄球菌
革兰染色镜检
─────────
形态
排列 染色性
乙型溶血性链球菌
细菌分离培养
• 取一号和二号脓标本，分别接种于血琼脂 平板上，划线分离，37℃培养18~24h后， 观察菌落特征，取单个菌落进行再次革兰 染色镜检。
– 保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏 – 抵抗吞噬细胞的吞噬和消化 – 使感染局限化和形成血栓
游离血浆凝固酶
医学微生物学：实验三 微生物的代谢产物及致病作用
绿）1个/人 二、示教 1.菌落色素、溶血现象观察：金葡 、铜绿在血平板 2.葡萄糖、乳糖、硫化氢试验的结果观察（各1支/大组） 3.靛基质试验：加入靛基质试剂后观察结果（已加试剂）（1支/大组）
医学微生物学 实验三
微生物的代谢产物及致病作用
分解代谢产物—生化反应 糖发酵试验 H2S产生试验 接种生化管、结果示教 靛基质试验
合成代谢产物 内毒素的致病作用: 2只家兔/班 细菌溶血、产色素现象---示教
细菌的分解代谢
细菌的生化反应： 原理：不同细菌具有不同的酶，对营养物质 的分解能力亦不同，因而代谢产物有别。通 过检测细菌的代谢作用和代谢验内容
一、操作 1.糖发酵试验：葡萄糖、乳糖（各1支/人）
接种菌种：大肠或沙门菌 2.靛基质试验：蛋白胨（1支/人）
接种菌种：大肠或沙门菌 3.硫化氢试验：硫化氢（1支/人）
接种菌种：大肠或沙门菌 4.细菌的鞭毛变异现象观察
接种变形杆菌至SS平板和普通琼脂平板（点种） 5.平板划线：血平板（接种金葡或铜绿）1个/人，普平（接种金葡或铜
结果：上层玫瑰红色“+”
硫化氢试验
原理：细菌分解含硫氨基酸 (胱aa、半胱aa)生成H2S， 遇Pb2+或Fe2+形成黑色 PbS或FeS沉淀
培养基：硫化氢培养基
结果：培养基变黑“+”
+-
I M Vi C 试验 大肠埃希菌 + + - 产气肠杆菌 - - + +
细菌的合成代谢产物
热原质、毒素与侵袭性酶、抗生素、 细菌素、维生素、色素
1、溶血素
有的细菌能产生溶 血素，使血平板中 的红细胞溶解，在 菌落周围出现溶血 环。
观察：金黄色葡萄 球菌、铜绿假单胞 菌在血平板上的溶 血环
医学微生物学 实验三
微生物的代谢产物及致病作用
分解代谢产物—生化反应 糖发酵试验 H2S产生试验 接种生化管、结果示教 靛基质试验
合成代谢产物 内毒素的致病作用: 2只家兔/班 细菌溶血、产色素现象---示教
细菌的分解代谢
细菌的生化反应： 原理：不同细菌具有不同的酶，对营养物质 的分解能力亦不同，因而代谢产物有别。通 过检测细菌的代谢作用和代谢验内容
一、操作 1.糖发酵试验：葡萄糖、乳糖（各1支/人）
接种菌种：大肠或沙门菌 2.靛基质试验：蛋白胨（1支/人）
接种菌种：大肠或沙门菌 3.硫化氢试验：硫化氢（1支/人）
接种菌种：大肠或沙门菌 4.细菌的鞭毛变异现象观察
接种变形杆菌至SS平板和普通琼脂平板（点种） 5.平板划线：血平板（接种金葡或铜绿）1个/人，普平（接种金葡或铜
结果：上层玫瑰红色“+”
硫化氢试验
原理：细菌分解含硫氨基酸 (胱aa、半胱aa)生成H2S， 遇Pb2+或Fe2+形成黑色 PbS或FeS沉淀
培养基：硫化氢培养基
结果：培养基变黑“+”
+-
I M Vi C 试验 大肠埃希菌 + + - 产气肠杆菌 - - + +
细菌的合成代谢产物
热原质、毒素与侵袭性酶、抗生素、 细菌素、维生素、色素
1、溶血素
有的细菌能产生溶 血素，使血平板中 的红细胞溶解，在 菌落周围出现溶血 环。
观察：金黄色葡萄 球菌、铜绿假单胞 菌在血平板上的溶 血环
医学微生物学PPT课件 细菌感染与免疫 细菌感染与致病机制
超抗原 2：细菌侵入数量 3：细菌侵入部位
侵袭过程
• 黏附与定植 • 侵入 • 繁殖与扩散
黏附与定植
• 黏附现象：单个散在吸附
微菌落 细菌生物膜
• 黏附物质：普通菌毛/荚膜 • 黏附机制：静电吸引/疏水作用/
阳离子桥联作用/配体受体相互结合
• 黏附的组织趋向性
E. coli fimbriae
细菌的外毒素多数为A-B型分子结构，外毒 素的作用机制类型
• 5、其他梭菌外毒素：艰难梭菌可产生毒素 A（肠毒素）和毒素B（细胞毒素）。毒素 A和B的靶分子是Rho，其作用机制尚不清 楚。
• 外毒素的分子结构不是A—B型模式的尚有： （1）损伤细胞膜的毒素
• （2）激素样作用的毒素
内毒素
是G-在死亡裂解之后，释放出来的菌体成分
内毒素内毒素作用于肝枯否细胞、 中性粒细胞 等使之释放内源性热原, 再刺激下丘脑体温调节 中枢所致。
(B)白细胞数目改变
早期白细胞减少，以后增加。减少可能与大量白细胞粘 附于毛细血管壁有关;继之白细胞数增多, 则与骨髓受内 毒素刺激后, 使白细胞大量释放入血有关。但伤寒菌内 毒素是例外, 始终使血循环中的白细胞数减少。
• 1、具腺苷二磷酸核糖基转移酶活性的 毒素：这类毒素都为A-5B结构，即每 一外毒素分子由1个A亚单位和5个B亚 单位组成。包括有霍乱肠毒素、大肠 埃希菌不耐热肠毒素、百日咳毒素等。
细菌的外毒素多数为A-B型分子结构，外毒 素的作用机制类型
• 2、RNA糖基化酶毒素：这类毒素的分子结构式 为A-5B。例如痢疾志贺菌产生的志贺毒素和大肠 埃希菌0157：H7产生的Vero毒素。
Type 1
mannose
P
• galactose – glycolipids – glycoproteins
侵袭过程
• 黏附与定植 • 侵入 • 繁殖与扩散
黏附与定植
• 黏附现象：单个散在吸附
微菌落 细菌生物膜
• 黏附物质：普通菌毛/荚膜 • 黏附机制：静电吸引/疏水作用/
阳离子桥联作用/配体受体相互结合
• 黏附的组织趋向性
E. coli fimbriae
细菌的外毒素多数为A-B型分子结构，外毒 素的作用机制类型
• 5、其他梭菌外毒素：艰难梭菌可产生毒素 A（肠毒素）和毒素B（细胞毒素）。毒素 A和B的靶分子是Rho，其作用机制尚不清 楚。
• 外毒素的分子结构不是A—B型模式的尚有： （1）损伤细胞膜的毒素
• （2）激素样作用的毒素
内毒素
是G-在死亡裂解之后，释放出来的菌体成分
内毒素内毒素作用于肝枯否细胞、 中性粒细胞 等使之释放内源性热原, 再刺激下丘脑体温调节 中枢所致。
(B)白细胞数目改变
早期白细胞减少，以后增加。减少可能与大量白细胞粘 附于毛细血管壁有关;继之白细胞数增多, 则与骨髓受内 毒素刺激后, 使白细胞大量释放入血有关。但伤寒菌内 毒素是例外, 始终使血循环中的白细胞数减少。
• 1、具腺苷二磷酸核糖基转移酶活性的 毒素：这类毒素都为A-5B结构，即每 一外毒素分子由1个A亚单位和5个B亚 单位组成。包括有霍乱肠毒素、大肠 埃希菌不耐热肠毒素、百日咳毒素等。
细菌的外毒素多数为A-B型分子结构，外毒 素的作用机制类型
• 2、RNA糖基化酶毒素：这类毒素的分子结构式 为A-5B。例如痢疾志贺菌产生的志贺毒素和大肠 埃希菌0157：H7产生的Vero毒素。
Type 1
mannose
P
• galactose – glycolipids – glycoproteins
医学微生物学实验
详细描述
无菌操作技术是微生物学实验中的基本技能之一，包括无菌操作前准备、无菌操作过程和无菌操作后处理三个 环节。无菌操作前应对实验室和仪器进行消毒处理，穿戴专用的实验服和手套，实验过程中应避免直接接触样 品和培养基，使用过的器械应及时清洗和消毒。
细菌染色技术
总结词
了解细菌染色的原理和方法，掌握常用的细菌染色技术和应用场景。
详细描述
病毒分离与鉴定技术是医学微生物学实验中 重要的研究方向之一，通过对病毒的分离和 鉴定可以了解病毒的生物学特性和致病机制 ，为疾病的预防和治疗提供科学依据。常用 的病毒分离与鉴定技术包括细胞培养法、动 物接种法、分子生物学方法等，不同的方法
具有不同的优缺点和应用范围。
THANKS
谢谢您的观看
灭菌方法
采用高压蒸汽灭菌法，将培养基放入高压锅中加热至121℃保持20-30分钟， 以杀灭培养基中的所有微生物。
真菌的分离和纯化
样品采集
从临床样本、环境样本等采集真菌，使用无菌技 术进行操作。
分离方法
将采集的样本接种于真菌培养基上，观察菌落的 形态和颜色等特征，分离出不同的真菌菌落。
纯化方法
采用划线分离法或稀释分离法，将菌落纯化至单 个菌落，获得纯培养物。
02
通过病毒在特定细胞系或动物模型中的感染、复制和致病特点
，进一步确定病毒的种类和亚型。
分子生物学鉴定
03
利用病毒基因组的特异性序列，通过PCR、测序等技术对病毒
进行分子水平的鉴定。
病毒的致病性和防治措施
致病性
不同病毒的致病性各不相同，可引起急性或慢性感染，甚至 导致死亡。了解病毒的致病机制有助于预防和治疗。
总结词
细菌学检查是通过培养、分离、鉴定病原体，为临床诊断和 治疗提供依据。
无菌操作技术是微生物学实验中的基本技能之一，包括无菌操作前准备、无菌操作过程和无菌操作后处理三个 环节。无菌操作前应对实验室和仪器进行消毒处理，穿戴专用的实验服和手套，实验过程中应避免直接接触样 品和培养基，使用过的器械应及时清洗和消毒。
细菌染色技术
总结词
了解细菌染色的原理和方法，掌握常用的细菌染色技术和应用场景。
详细描述
病毒分离与鉴定技术是医学微生物学实验中 重要的研究方向之一，通过对病毒的分离和 鉴定可以了解病毒的生物学特性和致病机制 ，为疾病的预防和治疗提供科学依据。常用 的病毒分离与鉴定技术包括细胞培养法、动 物接种法、分子生物学方法等，不同的方法
具有不同的优缺点和应用范围。
THANKS
谢谢您的观看
灭菌方法
采用高压蒸汽灭菌法，将培养基放入高压锅中加热至121℃保持20-30分钟， 以杀灭培养基中的所有微生物。
真菌的分离和纯化
样品采集
从临床样本、环境样本等采集真菌，使用无菌技 术进行操作。
分离方法
将采集的样本接种于真菌培养基上，观察菌落的 形态和颜色等特征，分离出不同的真菌菌落。
纯化方法
采用划线分离法或稀释分离法，将菌落纯化至单 个菌落，获得纯培养物。
02
通过病毒在特定细胞系或动物模型中的感染、复制和致病特点
，进一步确定病毒的种类和亚型。
分子生物学鉴定
03
利用病毒基因组的特异性序列，通过PCR、测序等技术对病毒
进行分子水平的鉴定。
病毒的致病性和防治措施
致病性
不同病毒的致病性各不相同，可引起急性或慢性感染，甚至 导致死亡。了解病毒的致病机制有助于预防和治疗。
总结词
细菌学检查是通过培养、分离、鉴定病原体，为临床诊断和 治疗提供依据。
医学微生物学实验综合性实验三
❖ 可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。 ❖ 分别取1ml注入直径9cm的灭菌平皿内。 ❖ 倾注46℃营养琼脂培养基大约15ml，混合均
匀。琼脂完全凝固以后，37℃培养48小时。 ❖ 选择菌落数在30～300之间的平板作为菌落总
数测定标准。 ❖ 将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出
cfu/g(ml)。
医学微生物学实验 综合性实验三
❖ 空气细菌学检查结果分析
❖ 手指皮肤细菌学检查结果分析
空气的细菌学检查
组号
时间(min)
地点
菌落形成单位(CFU)
1
15
2
15
3
15
4
15
5
15
6
15
7
15
8
15
9
15
10
15
CFU /m3 ＝ 50,000N÷AT ≈86N(直径7cm平板）
N：平板上的菌落数
A：平板面积(38.5cm2)
Ⅲ级区
200～ 500
一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、 按摩室、盥洗室、手术室浴室
我国公共场所空气卫生细菌学标准 （GB9663～9673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）
撞击法 沉降法 cfu/m3 个/皿
适用范围
≤1000 ≤10 3～5星级宾馆、饭店
≤1500 ≤20 ≤2500 ≤30 ≤4000 ≤40 ≤7000 ≤75
❖ 形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。
❖ 边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。
❖ 表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、 湿润或干燥。
❖ 溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不 透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。
匀。琼脂完全凝固以后，37℃培养48小时。 ❖ 选择菌落数在30～300之间的平板作为菌落总
数测定标准。 ❖ 将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出
cfu/g(ml)。
医学微生物学实验 综合性实验三
❖ 空气细菌学检查结果分析
❖ 手指皮肤细菌学检查结果分析
空气的细菌学检查
组号
时间(min)
地点
菌落形成单位(CFU)
1
15
2
15
3
15
4
15
5
15
6
15
7
15
8
15
9
15
10
15
CFU /m3 ＝ 50,000N÷AT ≈86N(直径7cm平板）
N：平板上的菌落数
A：平板面积(38.5cm2)
Ⅲ级区
200～ 500
一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、 按摩室、盥洗室、手术室浴室
我国公共场所空气卫生细菌学标准 （GB9663～9673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）
撞击法 沉降法 cfu/m3 个/皿
适用范围
≤1000 ≤10 3～5星级宾馆、饭店
≤1500 ≤20 ≤2500 ≤30 ≤4000 ≤40 ≤7000 ≤75
❖ 形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。
❖ 边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。
❖ 表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、 湿润或干燥。
❖ 溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不 透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。
医学微生物学实验三 细菌的人工培养
4. 培养基的制备
调配成分
溶解
灭菌
质量检查 和保存
分装
矫正pH
基
本
知
过滤澄清
识
（一）细菌人工培养的基本知识
5. 细菌培养方法
需氧培养法
基
本
知
二氧化碳培养法
识
厌氧培养法
（一）细菌人工培养的基本知识
5. 细菌培养方法
需氧培养法
基
本
知
二氧化碳培养法
识
厌氧培养法
电热恒温培养箱
二氧化碳培养箱
（一）细菌人工培养的基本知识 5. 细菌培养方法
（二）细菌人工培养操作 2. 材料
实 验 材 料
普通平板培养基 (2-3%琼脂)
斜面培养基 (2-3%琼脂)
半固体培养基 (0.2-0.5%琼脂)
（二）细菌人工培养操作
3. 操作流程
领取菌种及培养基
操
分别进行平板、斜面及半固体培养基接种， 然后贴上标签。
作 流 程
37度恒温箱培养18～24小时后观察结果。
靛 基 质 （ 吲 哚 ） 试 验
阳性 (+）
阴性 （-)
（三）实验操作内容
3. 硫化氢试验
（1）原理
硫
含硫氨基酸
酶
+铁离子
化 氢
或+铅离子
试
培养基中加入含
验
硫氨基酸、铅离
子、铁离子
（三）实验操作内容 3. 硫化氢试验 （2）结果判断
硫 化 氢 试 验
+
分组
两人一组
操作内容
细菌的人工培养
细菌的生化反应
糖 发
酵
（培养基含葡萄糖、
医学微生物实验3：细菌的分离与纯化
实验3 微生物的纯种分离培养微生物广泛地分布在自然界的土样、水体、空气、动植物体表及人体、动物体的排泄物中。
它们以单个的菌体、无性孢子和芽孢的形式存在。
由于单一的自然界环境并不能完全满足微生物对水、空气、营养物质、温度、pH的综合要求，它们往往以“散居”的状态出现，而不能形成人们肉眼可直接观察到菌落。
不同的自然环境中，微生物的种类和数量差异很大。
肥沃的土壤，富养化的水体，是许多微生物麇集、孳生的场所，在这里存活着能分解淀粉、蛋白质、脂肪、纤维素、木质素、果胶、农药、含磷有机物（卵磷脂、肌醇、核酸等）、石油以及溶解铜矿的细菌、放线菌、真菌等多种类的微生物，如何根据微生物的生理要求，按照人类的需求，将它们从自然界中分离出来，获得纯种，发挥微生物的特长为人类的生产和生活服务，是微生物研究中最基础的实验技术。
一、实验目的：1．学会将混杂的各种微生物分离成纯种，统计分析样品中微生物的种类和数量的方法。
2．学会从菌落及培养特征区分细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。
3．学会好氧微生物平板及斜面培养的方法。
二、实验原理：在自然界中，微生物的种类很多，数量很大，为了获得单个菌体，首先必须把要分离的材料进行适当的释放，按其生长所需要的条件，使其在平板上，由一个菌体繁殖成单个菌落，这样，就能从中挑选出所需要的纯种，由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同，利用不同的培养基制成平板进行分离，然后从菌落形态上的差异，可以把细菌、放线菌和霉菌三大类群区分并可计算出其数量，分别接种到试管斜面上，然后，在平板上反复进行分离培养，最后可获得纯种。
三、实验材料和用具：1．材料（1）土壤样品（2）培养基：①牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨培养基（%）牛肉膏0.3-0.5g蛋白胨 1.0gNaCl 0.5g琼脂2.0g蒸馏水100mLpH 7.2-7.4，0.1Mpa 压力，灭菌20-30分钟。
配制液体培养基时不加琼脂；半固体培养基加0.3-0.5%琼脂。
医学微生物学微生物实验PPT免疫试验3
转化率﹦
转化的淋巴细胞数(过渡型、淋巴母细胞、有丝分裂相)
×100%
转化的+未转化的淋巴细胞数
正常成人转化率为：60%~80%，﹤50%视为降低
淋巴细胞转化实验
T细胞
PHA
刀豆素A (ConA） 美洲商陆（PWM）
淋巴母细胞
（体积增大，形态不整齐，核 大，松散，有核仁，胞浆变宽，
出现空泡）
Ag刺激T淋巴细胞转化各期形态
常用的丝裂原:
植物血凝素（PHA） 刀豆素A(ConA) 美洲商陆(PWM)
方法： 1.分离外周血淋巴细胞
方法：
2.将分离的血淋巴细胞+PHA→混匀，37℃孵育72
小时→低速离心取培养液涂片染色、镜检，分别
计数转化淋巴细胞（淋巴母细胞、过渡型母细胞
和核有丝分裂相细胞）和成熟的淋巴细胞，共计
数200个细胞。并计算转化率。
Ab 载 体
反应结果
有 不需要
无
凝 集 素
需要 （致敏颗粒）
肉眼可见 凝集块
有 无
需要
无
（致敏颗粒）
有
报告方 式
阳性 阴性 阳性 阴性 阳性 阴性
反应名称
支撑物的 特点
观察现象
意 义
双扩
琼脂凝胶
中不含抗 沉淀线
沉 对流电泳
体
定 性
淀
反
应
单扩
沉淀圈
琼脂凝胶
定
中含抗体
量
火箭电泳
沉淀峰
扩散条件 37℃~36h
2、毒素中和试验
细菌毒素与抗毒素中和试验。 常见用于诊断风湿病抗“O”试验。
原理：
乙型溶血性链球菌产生的溶血毒素“O” （SLO ）能 刺激机体产生抗O抗体（ASO），于感染后2～3周至病愈 后数月到一年可检出高于正常值的SLO抗体（1：400以 上）。SLO与相应抗体作用时会因毒性被中和而失去溶血 活性。因此，可通过该方法测定ASO。
医学微生实验 本科实验三细菌致病性及病原性球菌-PPT文档
上次实验结果观察
平板划线分离及菌落观察
菌落形态观察： 菌落的色泽、大小; 表面光滑或粗糙、边缘整齐否; 隆起度、透明度等 不同形态菌落代表不同的细菌
斜面移种法及色素观察
观察细菌在斜面上所形成的菌苔。 绿脓杆菌产生水溶性色素，使整个培养基变绿。 金葡菌产生脂溶性色素，培养基不变色。
存在部位
细胞壁成分、细菌裂解释出
活菌分泌或细菌溶解散出
化学成分
脂多糖
蛋白质
稳定性
好、160℃ 2-4h 破坏
差、60-80℃ 30min 破坏
毒性作用
弱、各种内毒素作用大致相同，引起休克，发热，等
强、对机体组织器官有选择性， 引起特殊临床表现
抗原性
弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素
链球菌 G+链状 甲链 不完全溶血 条件致病菌 乙链 完全溶血 致病菌 丙链 不溶血 不致病
肺炎球菌 G+成双 不完全溶血 胆汁溶菌试验 胞外 、荚膜
镜下 培养 毒力及鉴别实验
脑膜炎 G-成双 巧克力平板 球菌 胞内 CO2
细菌生化反应结果分析
H2S产生试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
硫酸亚铁半固体
乙型副伤寒
黑色沉淀物
细菌生化反应结果分析
葡萄糖发酵试验 乙型副伤寒（产酸产气） 培养基红→黄色，有气泡 史氏痢菌（产酸不产气） 培养基红→黄色，无气泡
细菌生化反应结果分析
吲哚试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
内毒素检测方法——鲎试验
试剂：鲎试剂 内毒素、生理盐水 试验结果观察： 鲎试验(+)：出现凝固
外毒素的毒性作用
实验试剂：破伤风杆菌培养物 破伤风抗毒素 实验动物：小白鼠 试验结果观察： 细菌培养物→小鼠强直性痉挛
平板划线分离及菌落观察
菌落形态观察： 菌落的色泽、大小; 表面光滑或粗糙、边缘整齐否; 隆起度、透明度等 不同形态菌落代表不同的细菌
斜面移种法及色素观察
观察细菌在斜面上所形成的菌苔。 绿脓杆菌产生水溶性色素，使整个培养基变绿。 金葡菌产生脂溶性色素，培养基不变色。
存在部位
细胞壁成分、细菌裂解释出
活菌分泌或细菌溶解散出
化学成分
脂多糖
蛋白质
稳定性
好、160℃ 2-4h 破坏
差、60-80℃ 30min 破坏
毒性作用
弱、各种内毒素作用大致相同，引起休克，发热，等
强、对机体组织器官有选择性， 引起特殊临床表现
抗原性
弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素
链球菌 G+链状 甲链 不完全溶血 条件致病菌 乙链 完全溶血 致病菌 丙链 不溶血 不致病
肺炎球菌 G+成双 不完全溶血 胆汁溶菌试验 胞外 、荚膜
镜下 培养 毒力及鉴别实验
脑膜炎 G-成双 巧克力平板 球菌 胞内 CO2
细菌生化反应结果分析
H2S产生试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
硫酸亚铁半固体
乙型副伤寒
黑色沉淀物
细菌生化反应结果分析
葡萄糖发酵试验 乙型副伤寒（产酸产气） 培养基红→黄色，有气泡 史氏痢菌（产酸不产气） 培养基红→黄色，无气泡
细菌生化反应结果分析
吲哚试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
内毒素检测方法——鲎试验
试剂：鲎试剂 内毒素、生理盐水 试验结果观察： 鲎试验(+)：出现凝固
外毒素的毒性作用
实验试剂：破伤风杆菌培养物 破伤风抗毒素 实验动物：小白鼠 试验结果观察： 细菌培养物→小鼠强直性痉挛
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Chemical 2020年10月2日 agents
3
Hot-air sterilizer
– 55-60C for 30-60min
– 160-170C for 2 hours----spores
– Glass petri dishes and pipettes
Autoclaving
– 15 pounds(1.05kg/cm2), 121C for 15-20min
汇报人：XXX 汇报日期：20XX250-260nm – Quite lethal but does not penetrate glass, dirt
films, water, and other substances very effectively. – To sterilize the air and any exposed surfaces – Can burn the skin and damage eyes
2020年10月2日
2
Methods for control of microorganisms
Physical methods
Heat Hot-air sterilizer
Autoclaving
Radiation
Filtration
Ultrasound
Dryness
Low temperature
2020年10月2日 第一课件网网站
4
2020年10月2日
5
演讲完毕，谢谢观看！
Thank you for reading! In order to facilitate learning and use, the content of this document can be modified, adjusted and printed at will after downloading. Welcome to download!
医学微生物学实验
第一课件网网站
2020年10月2日
1
第三次 外界因素对细菌的影响与细菌的变异
1. 热力灭菌（高压、干烤），紫外线杀菌作用（操作） 2. 碘酒酒精对皮肤的消毒作用，空气细菌培养（每室一套） 3. 药敏试验（操作，抗生素对细菌作用及耐药变异） 4. 观察噬菌体的特异溶菌现象，变形杆菌的迁徙现象及对照 5. 接种脓汁标本接种血平板（每组一个，下次实验用）