临床生化检验参考方法
生化检验项目临床意义5
序号：４１
英文缩写：UA
检验方法：尿酸酶法
计量单位：μmol/L
参考值：儿童：120～320男：210～410女：150～350
临床意义：尿酸增高：常见于痛风、子痫、白血病、红细胞增多症、多发性骨髓瘤、急慢性肾小球肾炎、重病肝病、铅及氯仿中毒等。
尿酸降低：常见于恶性贫血、乳糜血及肾上腺皮质激素等药物治疗后。
计量单位：U/L
参考值：酶法：8～40
临床意义：此酶增高：常见于心肌梗塞发病期、急慢性肝炎、中毒性肝炎、心功能不全、皮肌炎。
名称：血清丙氨酸氨基转移酶测定
序号：５７
英文缩写：ALT或GPT
检验方法：速率法
计量单位：U/L
参考值：酶法：5～40
临床意义：此酶增高：常见于急慢性肝炎、药物性肝损害、指肪肝、肝硬化、心肌梗塞、心肌炎及胆道疾病等。
名称：血清碱性磷酸酶测定
序号：６０
英文缩写：ALP或AKP
检验方法：速率法
计量单位：U/L
参考值：婴儿：50～240儿童：20～220成人：20～110
临床意义：碱性磷酸酶增高：常见于肝癌、肝硬化、阻塞性黄疸、急慢性肝炎、骨细胞瘤、骨转移癌、骨折恢复期。另外，少年儿童在生长发育期骨骼系统活跃，可使碱性磷
检验方法：改良J.G法
计量单位：μmo1/L
参考值：0～8.6
临床意义：直接胆红质增高：常见于阻塞性黄疸、肝癌、胰头癌、胆石症等。
名称：血清间接胆红质测定
序号：４４
英文缩写：IBIL
检验方法：计算法
计量单位：μmo1/L
参考值：1.7～11.97
临床意义：间接胆红质增高：常见于溶血性黄疸、新生儿黄疸、血型不符的输血反应。
生化检验各项目参考范围及临床意义
生化检验各项目参考范围及临床意义目录一、生物化学检验 (2)1.1 血糖测定 (4)1.2 血脂测定 (5)1.3 电解质测定 (6)1.4 血清铁蛋白测定 (7)1.5 肌酐测定 (8)1.6 尿素氮测定 (9)1.7 胆红素测定 (10)二、免疫学检验 (11)2.1 肝功能检查 (12)2.2 乙肝病毒表面抗原测定 (13)2.3 丙肝病毒抗体测定 (14)2.4 甲状腺功能测定 (15)2.5 肿瘤标志物测定 (16)三、分子生物学检验 (17)3.1 基因检测 (18)3.2 药物代谢酶测定 (19)3.3 病毒抗体测定 (20)四、血液学检验 (22)4.1 血细胞计数 (23)4.2 出血时间测定 (24)4.3 血块收缩时间测定 (25)4.4 血小板计数 (25)五、尿液检验 (26)5.1 尿液常规分析 (27)5.2 尿沉渣分析 (29)5.3 尿液生化分析 (30)六、体液检验 (31)6.1 脑脊液检验 (32)6.2 精液检验 (34)6.3 阴道分泌物检验 (35)七、其他生化检验项目 (36)7.1 血清蛋白电泳 (38)7.2 免疫球蛋白测定 (39)7.3 血清酶学测定 (41)一、生物化学检验生物化学检验是指通过检测人体内的生化指标，如酶、蛋白质、糖类、脂质、电解质等，来了解人体生理功能和病理变化的一种检验方法。
生物化学检验在临床诊断中具有重要的参考价值，可以帮助医生判断患者的病情、制定治疗方案以及评估治疗效果。
酶是生物体内催化生化反应的重要物质，其活性水平的异常可能反映出机体的病理变化。
常见的酶类指标包括：谷丙转氨酶(ALT):主要存在于肝细胞，当肝细胞受损时，ALT会释放到血液中，其水平升高提示肝损伤。
谷草转氨酶(AST):同样主要存在于肝细胞，当肝细胞受损时，AST 也会释放到血液中，其水平升高也提示肝损伤。
乳酸脱氢酶(LDH):存在于各种组织细胞中，其水平升高可能与组织坏死、缺氧、炎症等有关。
临床生化检验参考方法
RELA-2007
比对样品：A、B两水平，每水平个5瓶。 比对结果：2008年5月中旬报告
血清尿素
方法
（1）以[13C,15N2]尿素为内标 （2）用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白类物质 （3）依次使用丙二醛-二甲基缩醛和N-甲基-(三甲 基硅烷基)-三氟乙酰胺（MSTFA）将尿素衍生成 为三甲基硅烷氧基嘧啶 （4）用GC/MS分析衍生产物，以包括法定量
临床生化检验参考方法 建立的工作进展
张天娇 卫生部临床检验中心
工作背景
检验结果的准确性和可比性已受到广泛的重视，
提高和保证检验结果的准确性和可比性的有效手 段是开展量值溯源工作，而检验量值溯源的基础 是参考系统。
临床检验参考系统包括参考方法、参考物质和参
考实验室，其中参考方法是关键，参考物质由参 考方法定值，参考实验室是运行参考方法的实验 室。
血清肌酐
拟参加相关国际比对：RELA-2008
其他重要项目参考方法的建立
血清胆固醇
HPLC法 ID-GC/MS法 ID-LC/MS/MS法 血清总甘油三酯 HPLC法 ID-LC/MS/MS法 脂蛋白类 超速离心-HPLC法 酶学 无机离子：血清钠 ICP-MS 法
总结
已基本完成参考方法建立的项目
美国国家标准和技术研究所 NIST 中国计量科学研究院 NIM/NRCCRM 德国国家计量研究院 PTB 日本国家计量研究院 NMIJ 韩国标准与科学研究所 KRISS 新西兰惠灵顿医院 Wellington Hospital，New Zealand
比对样品
• 冰冻人血清（每种5ml×4瓶） 男性血清：正常成年男性 女性血清：正常成年、非绝经期女性 •每种血清中的3瓶供正式测定 余下1 瓶用于预实验或结果的验证
临床生化检验
光谱分析技术：在一定条件下，相同物质的发射和吸收光谱与该物质呈正比，因此可对该物质进行定性、定量分析。
透射比浊法）、散射光谱（散射比浊法）比色杯：由无色透明，耐腐蚀，耐酸碱的玻璃或石英组成玻璃杯：可见光；石英杯：紫外光光径：0.1cm--10cm, 常用为：1.0cm分光光度计的光源：可见光：钨灯波长360-1000nm；紫外光：氘灯，波长200-340nm常用抗凝剂：草酸钾—氟化钠：是血糖测定标本常用的抗凝剂，25℃可稳定24小时，4℃可稳定48小时肝素：常用于血气分析和部分生化项目的测定1g/L的肝素溶液0.5ml可抗凝5ml血液EDTA：适用于一般血液学检测枸橼酸钠：浅蓝（浓度3.2%-3.8%比例1:9适用于凝血）黑色（浓度3.2%比例1:4适用于血沉）防腐剂：浓盐酸：0.5-1ml浓盐酸/100ml尿液，适用于24小时儿茶酚胺、秀草扁桃酸、17-羟皮质类固醇、17-酮类固醇等检测甲苯：尿液表面形成薄膜，防止细菌繁殖。
1-2ml/100ml尿液，适用于肌酐、尿糖、蛋白质、丙酮等生化项目测定冰醋酸：5-10ml/24小时尿，适用于尿醛固酮测定麝香草酚：抑制细菌生长，适用于钾、钠、氯、钙、氨基酸、糖、尿胆原、胆红素的测定特殊标本采集：临床医生采3个于无菌试管中，第一个做细菌检查，第二个做生化检查，第三个做细胞计数恒定系统误差：与被测物质浓度无关，与干扰物浓度相关；比例系统误差的绝对量与被测物浓度呈正比影响检验结果的生物学因素：婴儿CK、GGT、AST升高，胆红素生理升高但不很少高于85umol/L，血脂低，血钾可达7mmol/L,碱性磷酸酶活性高。
新生儿血糖浓度低老年人肾浓缩能力、肌酐清除率、肾糖阈下降，血尿素升高干燥剂：CaCl2吸收水和酒精；CaO吸收水和酸；硅胶只吸收水（蓝色有效，粉红色无效）玻璃仪器清洁剂配置：重铬酸钾50g，浓硫酸900ml，水100ml 红棕色有效，变绿效力降低，黑色不可使用实验室方法评估指标和实验：指标包括：精密度、准确度、检测能力评估试验：重复性试验、回收实验、干扰试验，方法比较试验实验室全面质控的内容：1有专人负责全面质控工作；2对工作人员进行医德医风教育和业务培训，普及质控知识；3 科学的管理和严格的规章制度是质控方案可以试试的保证；4有标准化的操作规程；5 有分析前和分析后的质量控制程序；6仪器量器的定期鉴定，校正和正确使用；7实验用水、试剂、质控品及校准品的质量符合要求；8采用的各种测定方法的准确度，精密度等技术性能良好；9 选择合适的室内质控方法，常规开展室内质控，对失控结果及时采取相应的处理措施；10参加实验室室间的质量评价活动或能力比对检验，认真分析回报结果，对失控的项目及时检查原因，采取相应的改正措施CILA88的PT方案主要内容要求：每年至少进行3次PT调查，每次调查至少包括5个不同的指控标本，即在一年的时间内对任意一项目至少可得15个测定，对某个特定的分析结果如落于规定限内则判断为接受结果，对某一个接受结果，不再进行优略分级，S1和S2均应＞80，否则判断为不满意，如果在S1或S2连续2次不满意或有2次以上不满意，判断为失败。
临床常用生化检验项目参考区间
临床常用生化检验项目参考区间在医学检验中，生化检验是一个重要的组成部分，它的重大意义在于可以帮助医生诊断和监测疾病，并判断治疗的效果。
与其他医学检验不同，生化检验的结果是根据实验者设定的参考区间来评估的，而不是定性结果或定量结果。
参考区间是指一组数据经过各种统计分析找出的在健康人群中某一指标的最常见的数值范围。
它的定义通常是指两个值，即上限和下限，表示为X1-X2，其中X1是上线，X2是下线。
生化检查的参考区间受到许多因素的影响，例如性别、年龄、季节、季节性影响等，因此一般针对某些检测项目会提供不同的参考区间，以确保参考区间的准确性。
为了确保结果的准确性，一般建议采用国家批准的参考区间指标，以确保检验数据的准确性。
临床常用生化检验项目有肝功能检测、肾功能检测、血脂检测、血气检测、电解质检测等，它们的参考区间分别如下：1）肝功能检测：ALT、AST、GGT、TBIL、DBIL等，参考区间为正常人的ALT指标为9-45 U/L，AST指标为8-48 U/L，GGT指标在4-51 U/L，TBIL指标在3-21 umol/L，DBIL指标在0-5 umol/L。
2）肾功能检测：SCr指标在62-106 umol/L，BUN指标在3-7.2 mmol/L，CrCle指标在90-150 ml/min，白蛋白指标在35-85 g/L。
3）血脂检测：总胆固醇指标为3.2-5.2 mmol/L，甘油三酯指标为0.5-2.2 mmol/L，高密度脂蛋白指标为1.1-1.9 mmol/L，低密度脂蛋白指标为2.50-3.20 mmol/L。
4）血气检验：pH指标在7.35-7.45之间，PaCO2指标在4.7-6.0 kPa，HCO3-指标在24-32 mmol/L。
5）电解质检验：氯化物指标为97-107 mmol/L，钾指标为3.5-5.3 mmol/L，钠指标为135-145 mmol/L，钙指标为2.2-2.6 mmol/L，磷指标为0.8-1.5 mmol/L，磷指标为1.5-1.9 mmol/L。
临床常用生化检验项目参考区间 第4部分
临床常用生化检验项目参考区间第4部分（原创实用版）目录一、范围与规范性引用文件二、血清总胆红素、直接胆红素参考区间三、临床意义与应用四、检验方法与注意事项五、结论正文一、范围与规范性引用文件本文主要介绍了临床常用生化检验项目参考区间的第四部分，即血清总胆红素、直接胆红素参考区间。
本标准规定了中国成人血清总胆红素、直接胆红素的参考区间及其应用，适用于医疗卫生机构临床实验室总胆红素、直接胆红素检验结果的报告和解释。
有关体外诊断产品生产厂商也可参照使用。
本部分参考区间的规定主要依据《临床常用生化检验项目参考区间》（WS/T 404）和《卫生行业标准》（WS）。
二、血清总胆红素、直接胆红素参考区间1.血清总胆红素参考区间- 男性：5.1～21.0 μmol/L（0.3～1.2 mg/dL）- 女性：5.1～19.5 μmol/L（0.3～1.1 mg/dL）- 儿童：参考成人值，但需考虑年龄、性别、生理状态等因素2.直接胆红素参考区间- 男性：0.6～6.8 μmol/L（0.04～0.4 mg/dL）- 女性：0.6～6.8 μmol/L（0.04～0.4 mg/dL）- 儿童：参考成人值，但需考虑年龄、性别、生理状态等因素三、临床意义与应用血清总胆红素、直接胆红素是评估肝功能和黄疸程度的重要指标。
总胆红素升高可能提示肝脏损害、胆道梗阻、溶血性疾病等；直接胆红素升高可能提示肝细胞损害、胆道梗阻等。
临床实验室应按照本标准规定的参考区间进行检测和报告，并结合患者临床表现和病史进行综合分析，为临床诊断和治疗提供依据。
四、检验方法与注意事项1.检验方法：采用酶联免疫法、化学发光法、比色法等方法进行检测。
2.注意事项：- 检测前应充分了解患者的病史、临床表现和相关实验室检查结果。
- 采集血清样本时，应尽量减少红细胞破裂，避免溶血。
- 检测过程中应严格控制实验条件，避免温度、湿度等因素对结果的影响。
- 检测结果应结合其他相关实验室检查结果进行综合分析。
临床常用生化检验项目参考区间 第4部分
临床常用生化检验项目参考区间第4部分摘要：一、引言二、临床生化检验项目概述1.常规生化检验项目2.特殊生化检验项目三、参考区间及其意义1.参考区间的定义2.参考区间的应用3.参考区间的划分四、我国常用生化检验项目参考区间标准1.血清生化指标参考区间2.尿液生化指标参考区间3.唾液生化指标参考区间五、临床应用实例1.血清生化指标在疾病诊断中的应用2.尿液生化指标在疾病诊断中的应用3.唾液生化指标在疾病诊断中的应用六、检验结果的解读与分析1.单一指标异常的解读2.多项指标异常的解读3.异常结果的临床意义七、检验过程中的质量控制1.样本采集与处理2.仪器与试剂的选择3.检验操作规范八、总结与展望正文：一、引言临床生化检验是现代医学诊断和监测疾病的重要手段之一。
众多的生化检验项目为临床医生提供了丰富的诊断依据。
然而，如何正确理解和应用这些检验结果，避免误诊和漏诊，成为了临床医生关注的问题。
本文将对临床常用生化检验项目参考区间进行详细阐述，以期为广大临床工作者提供参考。
二、临床生化检验项目概述1.常规生化检验项目常规生化检验项目包括血清生化指标、尿液生化指标和唾液生化指标等。
这些指标可以反映人体器官和系统的功能状态，为临床诊断提供依据。
2.特殊生化检验项目特殊生化检验项目包括免疫生化、酶学、遗传代谢等方面，具有较高的专业性和针对性。
特殊生化检验项目的应用有助于临床医生对疾病进行精准诊断。
三、参考区间及其意义1.参考区间的定义参考区间是指在正常人群中，某一生化指标的分布范围。
合理的参考区间有助于临床医生判断检验结果的异常与否。
2.参考区间的应用参考区间在临床检验中具有重要意义，可以帮助医生识别异常指标，进一步进行疾病诊断和治疗。
3.参考区间的划分划分参考区间时，需充分考虑年龄、性别、生活习惯等因素，以确保检验结果的准确性。
四、我国常用生化检验项目参考区间标准1.血清生化指标参考区间血清生化指标包括血糖、血脂、肝功能、肾功能等。
(整理)检验医学专业实验IV临床生物化学检验部分
自动生化分析仪实际K值测定实际K值：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是ε的影响。
ε在波长和温度等不同时有所不同，故有必要获得用户所用分析仪的实际ε，再计算K值，此为~。
一、340nm波长实际K值测定【实验原理】：通过有NAD+（NADP+）参与的反应途径，用NADH或NADPH标准液来校正仪器。
用己糖激酶（HK）方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。
葡萄糖有标准纯品，当反应达到终点时，NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。
在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数，计算出实际K值。
【注意事项】1．减少偶然误差重复测定10次，当CV>5％时，则重新测定10次。
2．减少系统误差使用实际K值计算酶活性。
3．如果实际ε值与理论ε值偏差过大，需对仪器检修和校正。
二、405nm波长实际K值测定【实验原理】：许多酶活性测定时，以人工“色素原”为底物，经酶作用后可释放出在405nm 波长具有吸收峰有色的反应产物，如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。
他们在405nm波长时的理论ε分别为18 700、9 870、9 490。
可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε，计算出实际K值。
以ALP实验(产物为4-NP) 为例测定实际K值。
【注意事项】1．4-NP标准品纯度要求较高，必要时需纯化。
2．其他注意事项参见340nm K值校正。
三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下，测定某标准品的含量，若测得的结果偏低，则需要把测得的结果调整至原标准品的含量，此时调整的数值称为校正因子，则校正K值=理论（实际）K值×校正因子=理论（实际）K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为：L-乳酸+ NAD+（LD）→丙酮酸+ NADH + H+在反应过程中，乳酸被氧化生成丙酮酸，同时NAD+还原为NADH。
临床生物化学检验
临床生物化学检验：既是一门研究人体健康和疾病时的医学基础理论学科，又是一门应用各种技术和方法检验机体健康和疾病的医学应用学科。
量值溯源：用参考测量程序或参考物质建立或验证常规检验结果的准确性。
实验室信息管理系统：是对实验室日常工作、科室管理、学科建设和实验发展等方面所产生及所需求的信息，通过计算机收集、处理、存储、输送和应用的系统。
临床诊断试验：是指临床上用于确定或排除疾病的方法或项目。
临床生物化学诊断试验：是指临床生物化学实验室中用于疾病诊断、筛查和监测的方法或项目。
参考值区间：指所有参考值剔除离群值并补充数据后在95%的分布范围。
金标准：指当前为临床医学界公认的诊断某种疾病最可靠的诊断方法，可通过活检、尸检、外科手术、随访等所作出的决定性诊断，又称确诊试验。
临界值：指划分诊断试验结果正常与异常的界值，又称阈值、分界值等。
医学决定水平：临床上按照不同病情给予不同处理的指标阈值。
ROC曲线：以真阳性率为纵坐标，假阴性率为横坐标，将相对应的各临界值连接起来的折线图。
国际单位（IU）:是指在特定条件下，将1min 内能转化1umol底物的酶量定为一个国际单位。
定时法：是将酶与底物在特定条件下孵育一定时间后，用终止夜终止反应，通过化学或生物化学的方法测出底物或产物的总变化量，除以时间后，计算出底物消耗速度或产物生成速度。
连续监测法：是将酶与底物在特定条件下孵育，每隔一定时间连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化，从而计算出每分钟的信号变化速率。
最适条件：是指能满足酶发挥最大催化效率所需的条件。
代谢物酶法分析技术：是指用酶法分析的方法来测定人体内的代谢物或代谢产物的技术。
酶法分析：是以酶为试剂测定酶促反应的底物、辅酶、辅基、激活剂或抑制剂，以及利用酶偶联法测定酶活性的一类方法。
肿瘤标志物：是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或是由机体对肿瘤反应而异常产生和升高的，反映肿瘤存在和生长的一类物质。
临床化学分析方法选择与评价
临床化学分析方法选择与评价本文将就临床生化检测中的试剂选择，试验方法的选择，以及实验结果的评价方法进行简单的阐述。
使大家对试验方法的各种评价指标和评价方法有充分的了解，同时能让大家充分认识到实验室的检测方法评价的重要性。
一、对试剂及试剂盒的选择（一）对试剂的要求为了保证一定质量，对生化试剂的要求，首先实验室使用的检验试剂应通过国家食品药品监督管理局 SFDA 的批准，拿到批准文号；第二，产品的名称，应参照 SFDA 颁布的“体外诊断试剂分类目录”确定产品的名称；三，规格型号，应规定可进行测试的次数，也可用包装规格表示。
（二）对试剂盒的要求对试剂盒的要求都有哪些？第一，检测原理，即方法学原理，简单扼要说明测定原理及名称；第二，试剂组份，要明确说明试剂中组份，组成成份的数量、比例及浓度，应采用国际标准或法定单位；第三，所用校准品应该符合国家食品药品监管管理局（ SFDA ）的标准和要求；第四，试剂的稳定性，应该标明试剂盒的贮存条件与有效期，同时还要注意开瓶后试剂的贮存条件与有效期。
有特殊要求时应该明确说明；第五，检测程序，包括校准和质控的程序；第六，参考区间及其参考人群的说明，实验室给临床发报告时候，必须要给出参考区间，结果的参考区间切忌不要直接使用国外人群的参考值，不能代表中国人群的实际情况。
第七，诊断性试剂的性能评估，它的准确性对临床诊治疾病非常重要。
评估包括试剂的敏感性、特异性、精密度、线性范围或可报告范围、抗干扰能力、准确性、溯源性、方法对比结果等；第八，注意事项，应该注明是体外诊断用，以及化学品危害的说明等。
二、实验方法和标准品的选择实验方法根据准确度与精密度的不同，可以分为三级，即：决定性方法（一级参考方法）、参考方法（二级参考方法）和常规方法（厂家选定方法和终用户实验室常规方法）。
（一）标准品的分级标准品可以分为一级标准品（一级参考物质）、二级标准品（二级参考物质）和校准品，前两级是国家认可的，它有标准物质证书。
临床生物化学检验-第5章 常用分析技术
(affinity chromatography)
19
离子交换层析 (ion exchange chromatography, IEC)：是依据各种离子或离子 化合物与固定相离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的方法。
色谱技术 ，发现了液-液即分配色谱法
固定相-
流动相-
20世纪60年代高效液相色谱，high performance liquid chromatography即HPLC
16
1. 按流动相种类分类
气相层析
液相层析
超临界流体 层析 电层析
气体
液体
超临界流体 缓冲溶液、 电场
挥发性有机物
可以溶于水或 有机溶剂中的 各种物资
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高效液相层析法 (high performance liquid chromatography，HPLC)： 是在经 典液相色谱和气相色谱的基础上发展起来的分析技术。 由于高效固定相填料颗粒小而 均匀（1.7~10μm） ，会引起高阻力（小颗粒具有高柱效），因此采用高压输液泵输送 流动相 ，可大大加快分析速度 ，故又称高压液相层析法。
临床应用：作为参考方法测定钙、镁定值或建立新常规方法作比较试验。 优点： 灵敏度高、选择性好、分析速度快。 缺点：需校准物、分析条件要求高、操作较复杂、测定每一种元素需特 定的空心阴极灯、有些反应的显色剂本身的颜色会影响测定的专一性。
8
1. 校准曲线法：以校准物浓度（系列浓度）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线 ，在相同条件 下测定待测样品 ，然后在标准曲线上查找待测物质浓度。影响因素较多 ，每次需绘制新标准曲线。
生化检验专科第三章临床生物化学检验常用技术
吸收光谱分析技术：紫外、可见光分光光度法，原子吸收分光光
度法和红外光谱法
散射光谱分析技术：比浊法
5
一、吸收光谱分析法
吸收光谱：物质由基态跃迁至激发态时，对辐 射能选择性吸收而得到的原子或分子光谱。
由于分子吸收紫外-可见光区的电磁辐射， 分子中价电子（或外层电子）的能级跃迁
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离子选择电极分析法（ion selective electrode，ISE） 是利用电极电位和离子活度的关系来测定被测离子 活度的一种电化学分析法。
33
1.离子选择电极（ISE）的基本结构 离子选择电极
电极腔体
内参比 电极
内参比 溶液
敏感膜
特点：仅对溶液中特定离子有选择性响应。 34
2. 电极电位 膜内外被测离子活度的不同而产生电位差。
（3）其它分析方法
包括差示法、多组份混合物分析和利用摩尔吸光系数分
析等方法。
20
二、发射光谱分析法
发射光谱：分子、原子或离子在辐射能作用下，由
基态或低能级态跃迁到激发态，当返回基态或低能级
态时，以辐射形式释放能量，产生的光谱为发射光谱。
包括：原子发射光谱、原子或分子荧光光谱、分子磷
光光谱等。
M * 发光释放能量 M h 发射光谱
7
（一）分光光度法的基本原理 利用物质对光的 吸收作用对物质进行定性或定量分析。
1. 吸光度与透光度
当光线通过溶液时，一部分光被散射；
一部份光被吸收；
另有一部分光透过溶液。
设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透光 度，表示透过光强度与入射光强度的比值即：
T = I/I0
临床常用生化检验项目参考区间第4部分
临床常用生化检验项目参考区间第4部分临床常用生化检验项目参考区间第4部分1. 介绍在临床医学中，生化检验是一项重要的诊断工具。
通过对人体生理和病理状态下的生物标志物进行定量分析，可以帮助医生评估患者的健康状况、确定疾病的类型和程度，并监测治疗的效果。
然而，仅有生化指标的数值是不足以做出准确诊断的，还必须将其结果与正常参考区间进行比较。
2. 什么是参考区间参考区间是指某一生化指标在正常人群中的数值范围。
通过对大量正常人群进行统计分析，可以确定出该指标的上限值和下限值。
在临床实践中，医生将患者的检验结果与参考区间进行对比，进而判断其健康状态。
3. 临床常用生化检验项目参考区间的意义临床常用生化检验项目参考区间的确定对于诊断和监测疾病非常重要。
参考区间的建立依赖于大样本的统计分析，能够较为准确地反映出正常人群的生化指标水平范围。
如果患者的检测结果超出参考区间，可能意味着其健康出现问题。
4. 临床常用生化检验项目参考区间的制定方法临床常用生化检验项目参考区间的制定过程相对复杂。
需要收集一定数量的正常人群的生化检验数据。
然后通过统计学方法，计算出各指标的上下限值。
通过多中心研究的验证，确定最终的参考区间范围。
5. 临床常用生化检验项目参考区间的应用临床医生根据参考区间可以判断患者的生化指标是否正常。
如果患者的生化指标超出了参考区间的范围，可能意味着患者存在潜在的健康问题。
此时，医生可以进一步分析患者的病史、临床表现和其他检查结果，以确定是否需要进一步的诊断和治疗。
6. 个人观点和理解在我看来，临床常用生化检验项目参考区间对于现代医学的发展起到了重要的推动作用。
通过对大量正常人群的数据进行分析，参考区间的制定使得医生可以准确、客观地评估患者的健康状态。
参考区间的应用也有助于提高医疗资源的利用效率，将更多的关注点放在异常数值的患者身上，从而提高诊断的准确性和效率。
总结回顾：临床常用生化检验项目参考区间是衡量患者生化指标正常与否的重要依据。
兽医临床常用生化检验
取约10mL新鲜清晰尿液于一耐热大试管内，将试管斜置在火 焰上，煮沸上部尿液。滴加稀醋酸（冰醋酸5mL加水100mL配 制而成）3～4滴，再煮沸后，在黑色背景下对光观察结果。 如有浑浊或沉淀，提示尿内含有蛋白质。浑浊程度越高，表 示蛋白质含量越高，可用1~4个“+”号表示之。
磺基水杨酸法
临诊意义： 尿酸含量增高可作为痛风的诊断依据。
常规检查 （血常规、尿常规、粪便常规）
临床兽医学教研室内诊组
内容
1 2 3 4
实验目的与要求 血常规 尿常规 粪便常规
目的与要求
掌握血红蛋白测定、红细胞及白细胞计 数的操作方法与注意事项。
掌握尿液化学检查方法。
掌握粪便酸碱度及粪便潜血检查的方法。
0ห้องสมุดไป่ตู้5
0.5
0.5
氯化亚锡应用液
0.25
0.25
0.25
蒸馏水
3.25
3.25
3.25
混合后，放置10分钟，用620nm波长比色，以空白管调零，读取各管 光密度.
计算：
测定管光密度 标准管光密度
* 0.01 * 100 0.1
磷mg/100ml
注意事项：
1.采血后尽早分离血清，血清不能溶血，否则红细胞内的 磷脂移入血清，被血清中的磷酸酯酶水解，将使含磷量 明显升高。
4、计算方法：
每升血液内白细胞总数= 四个大方格白细胞数÷4×10×20×106
单位：个/升
5、注意事项：
初学者容易把尘埃异物与白细胞混淆，可用高倍镜 观察，白细胞有细胞核的结构，而尘埃异物的形状不规 则，无细胞结构。
5、正常参考值（附后表）
6、临床意义
临床常用生化检验项目参考区间 第4部分
临床常用生化检验项目参考区间第4部分（原创版）目录1.引言2.临床常用生化检验项目参考区间的范围和应用3.规范性引用文件4.参考区间的验证5.结论正文1.引言在医疗卫生机构临床实验室中，生化检验项目是常用的一种检验方法，其检验结果的准确性和可靠性对于诊断和治疗疾病具有重要意义。
为了保证生化检验项目的质量，我国制定了一系列参考区间标准，本文主要介绍临床常用生化检验项目参考区间第 4 部分：血清三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素、促甲状腺激素。
2.临床常用生化检验项目参考区间的范围和应用本标准规定了中国成人血清甲状腺相关激素的参考区间及其应用。
本标准适用于医疗卫生机构临床实验室血清三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素、促甲状腺激素检验结果的报告和解释，有关体外诊断产品生产厂商也可参照使用。
3.规范性引用文件本标准的制定参考了以下文件：- WST 402-2012 临床实验室检验项目参考区间的制定- NCCLS-C28-A2 关于临床实验室如何确定和建立生物参考区间4.参考区间的验证参考区间的验证是一个复杂的过程，包括精密度、正确度、线性和可报告范围的验证。
验证参考区间的过程需要使用明确标准选择的参考个体进行检验，从参考人群中选择足够数量的个体组成参考样本组，通过对参考样本组进行检验获得参考值，然后对参考值进行分布分析，根据分布参数建立参考限，最后确定参考区间。
5.结论本标准规定了临床常用生化检验项目参考区间第 4 部分：血清三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素、促甲状腺激素的参考区间及其应用，为临床实验室检验结果的报告和解释提供了参考。
临床生化检验方法与试剂盒评价 医学课件
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（二）检测系统比对的实施步骤
①制订分析质量目标 ②仪器性能评价
③确定对比检测系统 ④初步评价检测系统
⑤比对
步内 骤容
可接受性判断
第23页
允许不精密度、允许 偏倚和允许总误差
准确度和精密度
参考系统或 公认的测定系统
性能指标
40-100例
测定系统的关键要素
第19页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
2.对仪器性能进行评价 保证仪器处于良好 的工作状态，具备可接受的精密度和准确 度。 3. 确定对比检测系统 比如具有溯源文件 的HK法测定血糖的配套检测系统，并对该 检测系统的性能进行验证，核实其准确度 和精密度。
第20页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
第29页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
三 方法学评价实验
美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）于2005年更 名为临床和实验室标准研究院（CLSI）。制订了一系列评 价方案（evaluation protocols，EP），包括: 临床化学设备精密度评价（EP5-A） 定量分析方法的线性评价（EP6-A） 干扰试验（EP7-A） 方法对比评价及偏差评估（EP9-A2） 定量方法的初步评价（EP10-A2） 定性方法的评价（EP12-A） 基质效应评价（EP14-A）、。 EP不仅可用来评价临床生物化学检验方法性能，也可用以 评价试剂盒和分析仪器的性能。
标准计量局、参考实验室、试剂盒供应
商、临床实验室
3
保证仪器良好的工作状态、严格的操作
规程和质量控制、实验室内部测定系统
的比对、实验室间的比对
第25页
临床生化实验方法的选择和评价
引起原因：
方法误差：最严重、最难避免的误差，是 方法的分析性能所固有的缺陷所致。可通 过方法的选择和评价来减少。
仪器和试剂误差：常见仪器波长未校准， 量器不准，试剂质量差等。
2）随机误差（random error，RE）：
试验形式与方法 (1)批内重复性试验：用同一份标本在短时间内用候选 方法作多次(一般20次)重复测定。 (2)日内重复性试验：在一天内对一个或数个标本作数批 重复测定。 ( 3)日间重复性试验：将同一标本分成数份，按方法每
3）灵敏度：化学反应中能检出的最小量。
4）特异性：分析测定中只对某一成分起反应， 其他物质对反应毫无影响或基本无影响。
5）线性范围：实验方法所能检测标本中某物质 的浓度范围。
（二）方法评价实验 1、重复性实验：实验的目的是检测候选方法的随机误 差。方法是对同一材料(标准液、质控液、标本等)分成 数份试验标本进行多次分析测定
2、实验误差 实验误差：测定值与真值之差 1）系统误差（systematic error， SE） ：一系列分析测 定的结果对真值或靶值存在有同一倾向的偏差。一般 由恒定因素引起，重复测定，重复出现，消除系统误 差可提高测定的准确度。 分为：
恒定误差：由干扰物引起的使测定值与真值存在的误 差，与干扰物浓度相关，与被测物浓度无关。
火焰光度法 火焰光度法 免疫化学法 双缩脲法 离子交换层析法 尿素酶法 尿酸酶法（紫外法） 重氮反应法 己糖激酶法
Abell-Kendall法，胆固醇氧化酶法
酶法 MDH-NADH法 LDH-NADH法 连续监测产物生成法 NAD+偶联法
2、标准品的分级
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回收试验的回收率范围为99.37～100.95%。 （3）参考物质分析：
分析美国国家标准和技术研究院（NIST）2个水平的 血清标准物质SRM909b，测定结果与靶值的偏差小于 0.2%
3.15 2.891 2.74 2.88 2.806 2.799 2.85 2.834
标准 不确定度 （ng/g）
0.12 0.0846
0.04 0.04 0.035
0.038 0.031 0.038
扩展 不确定度 （ng/g）
0.23 0.1861
0.09 0.08 0.07
0.076 0.063 0.085
临床生化检验参考方法 建立的工作进展
张天娇 卫生部临床检验中心
工作背景
检验结果的准确性和可比性已受到广泛的重视， 提高和保证检验结果的准确性和可比性的有效手 段是开展量值溯源工作，而检验量值溯源的基础 是参考系统。
临床检验参考系统包括参考方法、参考物质和参 考实验室，其中参考方法是关键，参考物质由参 考方法定值，参考实验室是运行参考方法的实验 室。
比对样品
• 冰冻人血清（每种5ml×4瓶） 女性血清：正常成年、非绝经期女性
• 每种血清中的3瓶供正式测定 余下1 瓶用于预实验或结果的验证
比对结果
参与实验室
测定结果 （ng/g）
CENAM（墨西哥） KRISS（韩国） LGC（英国） NIM（中国） NIST(美国) NMI（澳大利亚） NMIJ（日本） PTB（德国）
未报回数据
NMIJ（日本）
未报回数据
Wellington Hospital (新西兰)
0.063
\
\
免疫分析法
KRISS（韩国）
未报回数据
比对结果— — 女性血清
比对结果— — 男性血清
CCQM-K66b
2007年进行，由美国NIST发起，参加机构包括 美国国家标准和技术研究所 NIST 中国计量科学研究院 NIM/NRCCRM 德国国家计量研究院 PTB 日本国家计量研究院 NMIJ 英国政府化学家实验室 LGC 墨西哥国家计量科学研究院 CENAM 澳大利亚国家计量科学研究院 NMIA
血清孕酮
方法学评价 （1）精密度：
血清孕酮测定的总变异系数为0.69%～2.12% （2）回收率：
平均分析回收率为98.3%～100.1%。 （3）参考物质分析:
分析血清孕酮标准物质ERM-DA347，测定结 果 与靶值得偏差小于1.5% 。
血清孕酮
参加国际比对的情况
CCQM-P77b（与中国计量科学研究院合作） CCQM-K63b（与中国计量科学研究院合作） RELA-2007
加样回收试验的回收率范围为99.09%～101.13%。 （3）参考物质分析：
分析两种参考物质SRM 909b和SRM 967b，测定结果 与认定值的偏差小于0.4%。
血清肌酐
拟参加相关国际比对：RELA-2008
其他重要项目参考方法的建立
血清胆固醇 HPLC法 ID-GC/MS法 ID-LC/MS/MS法
血清总甘油三酯 HPLC法 ID-LC/MS/MS法
脂蛋白类 超速离心-HPLC法
酶学 无机离子：血清钠
ICP-MS 法
总结
已基本完成参考方法建立的项目
1、代谢物类：胆固醇、甘油三酯、葡萄糖、肌酐、尿酸、尿素 2、离子类：钠、钾、氯、钙、镁 3、酶学类：丙氨酸氨基转移酶、-谷氨酰转移酶、天门冬氨酸
（共约24项）
同位素稀释/色谱/质谱联用技术
目前国际公认的可准确测定小分子化合物的方法 可用于一级参考测量过程的测量原理
同位素内标 “理想”的内标物，与待测物没有结构上的差异
色谱/质谱联用测定系统 高特异性 高灵敏性
色谱/质谱联用测定系统
气相色谱/质谱联用系统 Agilent 6890 N /5974瓶） 男性血清：正常成年男性 女性血清：正常成年、非绝经期女性
•每种血清中的3瓶供正式测定 余下1 瓶用于预实验或结果的验证
比对结果— — 女性血清
参与实验室
测定结果 标准不确定度 扩展不确定度 （ng/g） （ng/g） （ng/g）
分析方法
NIST（美国）
国际计量局物质量咨询委员会（CCQM）
•由国际计量局（BIPM）国际计量委员会于1993年成立 包括35个会员和观察员组织
•下设7个工作组 ，每年召开两次工作会议 •针对不同领域，每年开展多项国际间比对活动
CCQM-P77b
2006年进行，由美国NIST发起，参加的机构包括 美国国家标准和技术研究所 NIST 中国计量科学研究院 NIM/NRCCRM 德国国家计量研究院 PTB 日本国家计量研究院 NMIJ 韩国标准与科学研究所 KRISS 新西兰惠灵顿医院 Wellington Hospital，New Zealand
1.876
0.023
0.047
ID-LC/MS/MS
NIM（中国）
1.90
0.02
0.04
ID-GC/MS
PTB（德国）
1.946
0.025
0.061
ID-GC/MS
NMIJ（日本）
2.26
0.043
0.087
ID-LC/MS/MS
Wellington Hospital (新西兰)
1.75
KRISS（韩国）
血清尿素
方法 （1）以[13C,15N2]尿素为内标 （2）用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白类物质 （3）依次使用丙二醛-二甲基缩醛和N-甲基-(三甲
基硅烷基)-三氟乙酰胺（MSTFA）将尿素衍生成 为三甲基硅烷氧基嘧啶 （4）用GC/MS分析衍生产物，以包括法定量
血清尿素
H2N CO
H2N
\
\
未报回数据
免疫分析法
比对结果— — 男性血清
参与实验室
NIST（美国） NIM（中国）
测定结果 标准不确定度 扩展不确定度 （ng/g） （ng/g） （ng/g）
分析方法
0.0402 0.0032
0.0063 ID-LC/MS/MS
0.045
0.003
0.006 ID-GC/MS
PTB（德国）
NIM KRISS CENAM
RELA-2007
2003年，国际临床化学联合会（IFCC）为配合检验医学 溯源联合会（JCTLM）的工作，与德国临床化学会 （DGKL）共同发起的环形比对试验（Ring-trial），每年 进行一次。
参加2007-RELA激素类比对
RELA-2007
比对样品：A、B两水平，每水平个5瓶。 比对结果：2008年5月中旬报告
氨基转移酶、肌酸激酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶 4、非肽激素类：T3、T4、孕酮、雌二醇、皮质醇 5、脂蛋白类：高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇
下一步工作计划
完成血清葡萄糖、尿酸参考方法的建立 完成血清甲状腺素、雌二醇、皮质醇参考
方法的建立 参考方法的应用工作
谢谢！
色谱/质谱联用测定系统
液相色谱/串联质谱系统
高效液相色谱仪Agilent 1200和串联三重四极杆质谱仪API 4000
血清孕酮
方法 （1）以[3,4-13C2]孕酮为内标，用正己烷提取血清 （2）以羟丙基-β-环糊精水溶液对提取液作净化处理 （3）用七氟丁酸酐对孕酮进行衍生化 （4）用气相色谱分离衍生产物，质谱选择离子监测模
血清尿素
参加国际比对 RELA-2007
血清肌酐
方法 （1）以[2H3]肌酐为内标， （2）用无水乙醇沉淀血清中的蛋白质 （3）用氯仿纯化 （4）用液相色谱串联质谱（LC/MS/MS）分离测定 （5）以包括法定量。
血清肌酐
图 肌酐和内标一级全扫描质谱图和主要相关离子图
血清肌酐
图 肌酐[M+H]+离子（母离子）二级全扫描质谱图和主要子离子图
工作背景
国家“十一五”科技支撑计划资助项目 （2007BAI05B09）
国家863计划资助项目 (2006AA020909)
工作背景
检验项目 1、代谢物类：胆固醇、甘油三酯、葡萄糖、肌酐、尿酸、尿素 2、离子类：钠、钾、氯、钙、镁 3、酶学类：丙氨酸氨基转移酶、-谷氨酰转移酶、天门冬氨酸 氨基转移酶、肌酸激酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶 4、非肽激素类：T3、T4、孕酮、雌二醇、皮质醇 5、脂蛋白类：高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇
a：肌酐；b：内标 图 LC/MS/MS分析肌酐和内标的色谱图
血清肌酐
与干扰物质肌酸的分离
a：肌酸；b：肌酐 图4 LC/MS/MS测定肌酐与肌酸的色谱图
血清肌酐
方法学评价
（1）精密度： 批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.57%（范
围0.52%～0.61 %）、0.43%（范围0.11 %～0.59 %）和 0.73%(范围0.62%～0.83 %)。 （2）回收率：
式检测孕酮与内标的特定碎片离子 （5）包括法定量
血清孕酮
CH3 CO
HFBA
CH3 CO
O
(Ⅰ)
O F7C3 C O
(Ⅱ)
(Ⅰ) 孕酮(孕甾－4烯-3，20－二酮) (Ⅱ) 孕酮衍生产物（孕甾-3，5-二烯-20-酮-3-七氟丁酸酯）
图：孕酮和内标的衍生化
血清孕酮
1. 孕酮 2.内标 图3同位素稀释/气相色谱/质谱法测定血清孕酮（A）和内标（B）色谱图
分析方法