实验氨基酸分离鉴定

溶剂前沿 层析点
原点
3、平衡：点样好的滤纸卷成圆筒状用线缝好 与盛有平衡剂的小烧杯，置于密闭的层析 缸中，平衡1-2小时。
4、扩展：将盛有约20ml左右扩展剂的培养皿 迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立 于培养皿中，密闭好层析缸。待溶剂上升 到15—20cm时即取出滤纸，立即用铅笔描 出溶济前沿，吹风机或烘箱干燥。
纸? 影响 Rf值的因素有哪些？
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
图1-2 滤纸缝合示意图
5、显色：用喷雾器均匀喷上0.1% 的茚三酮 正丁醇溶液，干燥。
6、计算：用铅笔描出各层析斑点的轮廓， 并计算各氨基酸的Rf 值。
图谱显示
化学方法：显色剂不与滤纸起反应，挥 发性小，易于去除，含水量少。
物理方法 微生物方法 同位素和放射自显影法
注意事项：
1、要保证层析滤纸不被污染，特别是 从点样线到溶剂前沿的部分。
2、各氨基酸样品点样时量要均匀。 3、在缝滤纸时，纸的两边不能接触。 4、点样的一端朝下，扩展剂的液面需
低于点样线1cm。
六、实验结果
样品aa 赖aa 脯aa 缬aa 苯丙aa 亮aa
标样Rf 混合aaRf 差值
七、分析讨论
八、思考题
做好本实验的关键是什么？ 实验过程中，为何不能用手直接接触滤
实验一、氨基酸的分离鉴定
——纸层析法
一、实验目的
通过氨基酸的分离，学习 纸层析法的基本原理及操作 技术。
二、实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层 析法。利用不同物质在两种互不相溶的溶剂中的 分配系数不同而得到分离。
展层剂由有机溶剂与水组成。在纸上，水被 吸附在纤维素的纤维之间形成固定相，当有机相 沿纸流动经过层析斑点时，层析点上的溶质就在 有机相和水相之间进行分配。当有机相不断流动 时，溶质就沿着有机相流动方向移动，不断进行 分配，溶质中各组分的分配系数不同，移动速率 不同，因而彼此分开。
物质结构与性质
物质的极性大小决定了物质在水和有机 相之间的分配情况，其极性的大小主要 取决于物质所具有的极性基团的性质和 数量，在极性基团不改变情况下，非极 性基团成分越多，则分子极性越低等。
展层方式
上行法 下行法 环形法 (辐射法）
三、器材
层析缸、毛细管（用钢笔代替）、 喷雾器、培养皿、层析滤纸（新 华一号）
各组分由于移动速度不同，物质被分离后在层 析纸上的位置也不同，可用Rf 值来表示：
原点到层析点中心距离 Rf ＝ ———————————
原点到溶剂前沿的距离
在一定的条件下某物质的Rf值是常数，可作为 定性分析的依据。 Rf 值大小与样品物质的结构性质、 溶剂系统、层析滤纸的质量及展层方式、温度、样 品溶液中的 杂质等因素有关。
五、操作
1、取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2-3cm处用铅 笔画一条直线，在此线上每间隔2cm作一记号（即 原点）如图。
2、点样：用钢笔或毛细管将氨基酸样品分别点在这6 个位置上，干后再点一次。每点在纸上扩散的直径 不超3mm。点样量应根据样品的性质及滤纸的长度 来决定，一般点样量为5—30ug 。
四、试剂
1、扩展剂：按体积4:1:3的正丁醇：冰醋酸：水
混合后倒入分液漏斗中，充分振荡，静置后
分层排出水相
80 ml /组
2、平衡剂：取漏斗中的扩展剂5ml 于烧杯中作 平衡剂。
3、氨基酸：0.5%赖、脯、缬、苯丙、亮氨酸溶 液及各组分的混合氨基酸各5ml。
4、显色剂： 0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。 200ml 全班