实验氨基酸分离鉴定
实验氨基酸分离鉴定
——纸层析法
一、实验目的
通过氨基酸的分离,学习纸 层析法的基本原理及操作技 术.
二、实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层 析法.利用不同物质在两种互不相溶的溶剂中的分 配系数不同而得到分离.
展层剂由有机溶剂与水组成.在纸上,水被吸附 在纤维素的纤维之间形成固定相,当有机相沿纸流 动经过层析斑点时,层析点上的溶质就在有机相和 水相之间进行分配.当有机相不断流动时,溶质就沿 着有机相流动方向移动,不断进行分配,溶质中各组 分的分配系数不同,移动速率不同,因而彼此分开.
四、试剂
1、扩展剂：按体积4:1:3的正丁醇：冰醋酸：水
混合后倒入分液漏斗中,充分振荡,静置后分层
排出水相
80 ml /组
2、平衡剂：取漏斗中的扩展剂5ml 于烧杯中作 平衡剂.
3、氨基酸：0.5%赖、脯、缬、苯丙、亮氨酸溶 液及各组分的混合氨基酸各5ml.
五、操作
1、取层析滤纸一张,在纸的一端距边缘23cm处用铅笔画一条直线,在此线上每间 隔2cm作一记号〔即原点〕如图.
物质结构与性质
物质的极性大小决定了物质在水和有机 相之间的分配情况,其极性的大小主要取 决于物质所具有的极性基团的性质和数 量,在极性基团不改变情况下,非极性基团 成分越多,则分子极性越低等.
展层方式
上行法 下行法 环形法 <辐射法〕
三、器材
层析缸、毛细管〔用钢笔代 替〕、喷雾器、培养皿、层 析滤纸〔新华一号〕
图1-2 滤纸缝合示意图
5、显色：用喷雾器均匀喷上0.1% 的茚三酮 正丁醇溶液,干燥.
6、计算：用铅笔描出各层析斑点的轮廓,并 计算各氨基酸的Rf 值.
图谱示
化学方法：显色剂不与滤纸起反应,挥发 性小,易于去除,含水量少.
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究生物化学和生物学具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定是了解其性质和结构的关键步骤之一。
本实验旨在通过纸层析法对混合氨基酸溶液进行分离和鉴定，以探究纸层析法在氨基酸分析中的应用。
实验步骤：1. 实验前准备：准备好混合氨基酸溶液、纸层析纸、色谱槽和色谱溶液。
2. 制备纸层析纸：将纸层析纸剪成适当大小的长方形，用铅笔在距离底部1.5cm处画一条水平线，再在该线上距离左边1cm处画一个小点。
3. 装置纸层析槽：将纸层析纸的底端浸入色谱槽中，确保纸层析纸上方的溶液不超过纸层析纸的底端。
4. 样品加载：用微量吸管将混合氨基酸溶液滴在纸层析纸上的小点上，尽量避免溶液滴到纸层析纸以下的溶液中。
5. 开始分离：将色谱槽盖好，待溶液上升至纸层析纸的顶端时，取出纸层析纸，迅速标记各个斑点的位置。
6. 斑点分析：将纸层析纸放入紫外灯下观察，记录各个斑点的颜色和位置。
结果与讨论：通过纸层析法，我们成功地将混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
在紫外灯下观察，我们可以清晰地看到在纸层析纸上出现了多个斑点。
根据斑点的颜色和位置，我们可以初步判断其中的化合物。
在本次实验中，我们使用的混合氨基酸溶液包含了苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸三种氨基酸。
根据实验结果，我们可以看到在纸层析纸上出现了三个主要的斑点。
根据颜色和位置的初步判断，我们可以推测第一个斑点为苏氨酸，第二个斑点为甘氨酸，第三个斑点为丙氨酸。
然而，仅凭颜色和位置的初步判断还不足以确定化合物的身份。
为了进一步确认各个斑点的化合物，我们可以利用已知标准物质进行对照。
通过比较已知标准物质的斑点与实验样品的斑点，我们可以准确地鉴定各个斑点所代表的氨基酸。
结论：通过纸层析法，我们成功地对混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
根据初步判断，我们可以推测出混合溶液中的苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸的存在。
实验七 氨基酸的分离鉴定
实验七氨基酸的分离鉴定——纸层析法一、目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法。
惰性支持物是新华一号滤纸，其上含有很多的羟基，与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物。
水相因此称为静止相（固定相），有机溶剂称为流动相。
展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成，它们互相混合时便分成两相：一相是以水饱和了的有机相，另一相是以有机溶剂饱和了的水相。
分配系数(α)＝溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
当用滤纸进行分配层析时，流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使氨基酸在两相之间不断分配而得以分离。
不同的氨基酸在一定的条件下，有其一定的Rf值，故可根据Rf值定性鉴定氨基酸，但通常用已知的标准氨基酸层析作对照，本实验就是如此。
●纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
●层析溶剂由有机溶剂和水组成●物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移值）来表示的：Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、材料与方法（1）、材料：层析缸；毛细管；喷雾器；培养皿；层析滤纸；正丁醇；冰醋酸；分液漏斗；烧杯；培养皿；赖氨酸；脯氨酸；氨酸；苯丙氨酸；亮氨酸；茚三酮（2）操作步骤1. 配置层析液置于密闭的层析缸中。
2．准备滤纸：取层析滤纸一张。
在纸的一端距边缘2cm处用铅笔划一直线，在直线上每间隔2cm做一记号，标出5个原点。
3．点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5个原点上，用量10～20μl，每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm，边点样边用电吹风吹干，越小越好。
干后再点一次。
4．扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告嘿，大家好！今天咱们聊聊一个特别有趣的实验，那就是氨基酸的分离鉴定纸层析法。
听起来高大上吧？别急，咱们一步一步来，轻松愉快地聊聊这玩意儿。
什么是氨基酸呢？简单来说，氨基酸就像是构成蛋白质的小积木，是咱们身体里不可或缺的营养成分。
它们在咱们的饮食中扮演着超级重要的角色，没了它们，咱们可真是没法“搭建”身体啦。
那这个实验就是要从一堆混合的氨基酸中，把它们一个个分开来，看看每种氨基酸都长啥样。
这就好比一群朋友在聚会上，咱们要找出每一个人的名字和特点。
纸层析法，乍一听是不是觉得有点复杂？它就像一场化学界的“寻宝游戏”。
我们准备一些特殊的纸，涂上一层薄薄的吸附剂，然后把混合好的氨基酸样品放在纸上，接着让溶剂在纸上慢慢爬。
这就像在纸上画一幅画，溶剂就像水彩笔，慢慢把氨基酸分开。
哎呀，那个过程可是精彩极了，等溶剂跑到纸的顶端，咱们就能看到不同的颜色带，像极了彩虹，五颜六色的，真让人眼前一亮。
在实验开始之前，咱们得先准备一些材料。
准备好氨基酸混合物、溶剂、吸附剂，当然还有那张神奇的层析纸。
哎呀，别忘了安全第一哦，实验室里的化学品可得小心翼翼。
准备好一切后，咱们就可以开始“探险”了。
把样品点在纸上，别点得太多，得掌握好量，太多可就闹笑话。
点好后，咱们把纸条放进装有溶剂的容器里，让它们开始亲密接触。
此时，你就得耐心等待，静静看着溶剂爬升。
这个过程有点像看电影，心里总有些小期待，究竟哪种氨基酸会最先出来，哪个又会拖拖拉拉。
等到溶剂爬到纸的顶端，咱们小心翼翼地把纸拿出来，哇，简直像一幅美丽的艺术作品！不同的氨基酸形成了不同的斑点，有些淡淡的，有些鲜艳的，就像小精灵在纸上跳舞。
咱们得计算一下每种氨基酸的Rf值，这个值可以帮助咱们确定它们的身份。
Rf值计算起来其实也不复杂，记住，Rf值就是迁移距离除以溶剂前沿的距离。
简单吧？计算的时候得集中精神，别让自己的小脑袋跑偏了。
在整个过程中，最有趣的莫过于跟同学们讨论结果了。
氨基酸的分离与鉴定
实验一氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法目的要求（1）通过实验，了解氨基酸滤纸层析法的原理。
（2）掌握氨基酸滤纸层析的操作方法。
原理滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析（它也并存着吸附和离子交换作用）。
滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
有机溶剂自上而下流动称为下行层析，自下而上流动称为上行层析。
流动相流经支持物时，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。
溶质在滤纸上的移动速率用R f值表示：溶质结构、溶剂系统物质组成与比例、pH值、选用滤纸质地和温度等因素都会影响R f 值。
此外，样品中的盐分、其他杂质以及点样过多皆会影响样品的有效分离。
无色物质的纸层析图谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定。
氨基酸纸层析图谱常用的显色剂为茚三酮或吲哚醌，本实验采用茚三酮为显色剂。
本实验用单向上行层析法作标准氨基酸的标准曲线，用双向上行纸层析法作几种已知氨基酸的层析图谱。
然后将其中的谷氨酸和天冬氨酸加以定量测定。
试剂和器材一、试剂（1）8×10-3mol/L谷氨酸和8×10-3mol/L天冬氨酸混合液。
（2）谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸和丙氨酸混合液（已知氨基酸混合液）。
将以上氨基酸分别配制成8×10-3mol/L的浓度，然后混合之。
（3）茚三酮重结晶方法：茚三酮有时由于包装不好或放置不当常带微红色，需重结晶方可使用。
5g茚三酮溶于15mL热水，加入0.25g活性炭轻轻搅动，若溶液太浓不易操作，可酌量加5—10mL热水，加热30min后趁热过滤（用热滤漏斗，以免茚三酮遇冷结晶而损失），滤液置冰箱内过夜，次日晨即见黄白色结晶出现，过滤，再以1mL冷水洗涤结晶，置于干燥器中干燥，最后装入棕色瓶内保存。
（4）0.1%硫酸铜（CuSO4·5H2O）：75%乙醇=2 ：38硫酸铜难溶于乙醇，将硫酸铜直接用75%乙醇溶解不能得到澄清溶液，如将硫酸铜溶液和乙醇混合后，放置过久则会有沉淀析出，因此，必须在临用前按比例混合。
实验七-氨基酸的分离鉴定
实验七-氨基酸的分离鉴定实验七氨基酸的分离鉴定——纸层析法一、目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法。
惰性支持物是新华一号滤纸，其上含有很多的羟基，与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物。
水相因此称为静止相（固定相），有机溶剂称为流动相。
展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成，它们互相混合时便分成两相：一相是以水饱和了的有机相，另一相是以有机溶剂饱和了的水相。
分配系数(α)＝溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
当用滤纸进行分配层析时，流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使氨基酸在两相之间不断分配而得以分离。
不同的氨基酸在一定的条件下，有其一定的Rf值，故可根据Rf值定性鉴定氨基酸，但通常用已知的标准氨基酸层析作对照，本实验就是如此。
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
●层析溶剂由有机溶剂和水组成●物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移值）来表示的：Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、材料与方法（1）、材料：层析缸；毛细管；喷雾器；培养皿；层析滤纸；正丁醇；冰醋酸；分液漏斗；烧杯；培养皿；赖氨酸；脯氨酸；氨酸；苯丙氨酸；亮氨酸；茚三酮（2）操作步骤1. 配置层析液置于密闭的层析缸中。
2．准备滤纸：取层析滤纸一张。
在纸的一端距边缘2cm处用铅笔划一直线，在直线上每间隔2cm做一记号，标出5个原点。
3．点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5个原点上，用量10～20μl，每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm，边点样边用电吹风吹干，越小越好。
干后再点一次。
4．扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定纸层析法——氨基酸的分离与鉴定⼀、实验⽬的1、了解纸层析法的使⽤原理。
2、掌握⽤纸层析法分离蛋⽩质的操作步骤。
⼆、实验原理1、纸层析法是以滤纸作为惰性⽀持物的分配层析⽅法，滤纸上的纤维具有羟基，是亲⽔基团，滤纸吸附⽔作为固定相，其上流经的有机溶剂即展层剂作为流动相。
当展层剂流经固定相时，固定相上的样品由于亲⽔、疏⽔能⼒不同，在两相之间不断分配，疏⽔能⼒强的多溶于流动相，随流动相移动距离较远，亲⽔能⼒强的移动距离则较近。
2、所有的氨基酸的α碳上均连接⼀个氢原⼦和两个亲⽔基团羧基（—COOH）与氨基（—NH2），唯⼀的不同则在于R基团。
因此R基团在氨基酸的亲⽔疏⽔能⼒对⽐中起到了决定性的作⽤。
本实验采⽤丙氨酸，苯丙氨酸，天冬氨酸，其R基团分别是—CH3，—CH2—C6H5，—CH2—COOH，其亲⽔疏⽔能⼒迥异，能在滤纸上明显分开。
3、Rf值表⽰原点中⼼⾄显⾊斑点中⼼的距离与原点中⼼⾄流动相前沿的距离⽐。
在⼀定条件下，Rf值为定值，其影响的因素有物质本⾝的性质，溶剂的性质，PH值，温度，滤纸的性质等等，本实验不予探究。
在测量原点中⼼⾄显⾊斑点中⼼的距离时，由于斑点的形状不规范（近似圆形），所以，⼀般取斑点的重⼼，测量出重⼼与起点的距离即可。
4、显⾊原理：茚三酮在弱碱性溶液中与α—氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氧，脱羧反应，最后茚三酮与反应产物——氨和还原茚三酮发⽣作⽤⽣成紫⾊物质。
三、试剂（⼀）提前配制试剂8*10-3mol/L丙氨酸溶液：精确称取0.356g晶体，溶解后定容到500ml。
8*10-3mol/L苯丙氨酸溶液：精确称取0.661g晶体，溶解后定容到500ml。
8*10-3mol/L天冬氨酸溶液：精确称取0.532g晶体，溶解后定容到500ml。
（将上述三种溶液装于⼩瓶中实验时，每两组共⽤⼀组试剂）正丁醇88%甲酸蒸馏⽔茚三酮晶体注：实验时，以上试剂均为每两组同学共⽤⼀组试剂。
实验七 氨基酸的分离鉴定
（二）实验器具
锥形瓶 、碱式滴定管、移液管洗耳球、天平
容量瓶、试剂瓶、量筒、玻棒与烧杯
实用文档
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四、操作步骤
1、取5只50ml锥形瓶，按下表加入试剂。
锥形瓶编号 1
2
3
4
试剂
0.1mol/L甘氨酸溶液 0 /mL
1
1
0
中性甲醛溶液/mL 1
1
1
1
水/mL
3
2
2
2
0.5%酚酞酒精溶液 （滴）
4
4
4
一次。尽量点成圆形，并在各点表上样品名。
3 手通过纸将滤纸卷成圆筒形，并用针缝，共3针。每缝一针打
个结，第三针的线留长一点。
4 将缝好的纸（装入）垂直放入装有扩展剂的层析缸内（点样的
一端朝下，滤纸不应碰到缸壁）
5 约2个小时后，将滤纸取出，拆掉线后，放入烘干机内烘干，约 10分 钟后取出即显色。
6 画出溶液前沿线，确立个实层用析文点档中心，计算各氨基酸的Rf值
实用文档
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若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴 定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨 基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基 酸的含量。 脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致 滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结 果偏高。
实用文档
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三、材料、试剂与器具
（一）试剂
实验七 氨基酸的分离鉴定
——纸层析法
实用文档
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一 目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法
二 原理 纸层析法是利用各物质不同的分配系数，使混合物随流动相时而得
到分离的方法。 纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的。滤纸纤维与水亲和力较强，
实验十二氨基酸的分离鉴定-纸层析法
原 到 析 心 距 点 层 中 的 离 = 原 到 剂 沿 距 点 溶 前 的 离
实验步骤: 三.实验步骤 实验步骤
1. 扩展剂的制备
20ml正 醇 丁 15ml → →分液漏斗 充分振→ 5ml冰 酸 醋
取 上层（油层） 扩展剂 5ml→层析缸→密闭，备用 → 静置分层→ 下层（水层） 弃掉 →
2. 纸层析操作 纸层析操作:
取层析滤纸,并画一条底线 用铅笔 取层析滤纸 并画一条底线(用铅笔 并画一条底线 用铅笔) 直线每隔１ 作标 用点样器点样 直线每隔１cm作标 记 缝线成筒状 扩展至上升 9~11cm 取出滤纸, 取出滤纸 并用铅笔描前沿 线 吹干 喷茚三酮 吹干显色 计算Rf值 计算 值
实验十三 氨基酸的分离鉴定 --------纸层析法 纸层析法
一.实验目的 实验目的: 实验目的 通过氨基酸的分离,学习纸层析法的 基本原理及操作方法
二.实验原理 实验原理: 实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分 配层析法.不同的氨基酸在滤纸上的移动 速度不同,最终层析的位置也不同,从而可 根据这个位置来确定各类氨基酸的比移 值Rf. Rf
四.数据记录及处理
1. 原点到溶剂前 沿的距离a= 2.原点到层析点中 心的距离b=
五. 分析讨论
1、氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。
层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。
如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。
纸层析属于分配层析法。
分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。
纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。
水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。
在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
三、操作 1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。 2、取层析滤纸（长18—20厘米，宽14厘米）一张。在垂直 于纸的纹路一端距边缘2—3厘米处用铅笔划一条直线，在此 直线上每间隔2厘米作一记号，作为点样位置，并用铅笔在点 样点下端写出所点氨基酸的名称。 3、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这5个位置上，干 后再点一次，共点三次。每点在纸上扩散的直径，最大不超 过3mm。 4、扩展 用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不 能接触。将盛有约20 mL扩展剂的培养皿迅速 置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿 中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点 样线1 cm)。待溶剂上升15―20 cm时即取出 滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用 吹风机热风吹干。
5、显色 用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液，然后置 烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点 6、用铅笔轻轻描出各显色斑点的形状，用直尺量出各斑点中 心与原点的距离以及溶剂前沿与原点的距离，求出各氨基酸 的Rf值，将各显色斑点的Rf 值与标准氨基酸的Rf 值比较，可 得知该斑点的准确成分。 四、结果与讨论： 1．计算出各种氨基酸的Rf值， 并根据Rf值鉴定出混合氨基酸 中的各组分，在层析图谱上标 出各氨基酸名称。 2．对氨基酸移动快慢的原因 给予简要分析。
实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法
一、目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法 在一定的条件下，一个物质在某溶剂系统中的分配系数， 在一定的温度下是一个常数。纸层析是以滤纸作为惰性支持 物的分配层析，滤纸纤维上的-OH基具有亲水性，因此能吸附 一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶 剂自上而下流动，称为下行层析；自下而上流动，称为上行 层析。流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使物质 在两相之间不断分配而得到分离。
氨基酸的分离鉴定薄层层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定薄层层析法实验报告1. 引言嘿，大家好！今天我们来聊聊氨基酸的分离和鉴定，特别是通过一种叫薄层层析法的实验。
你可能会想，这玩意儿跟我有什么关系？其实，它不仅在实验室里大显身手，还能帮助我们理解生命的基本构件——氨基酸。
就像是咱们的身体要有砖头才能建房子，氨基酸就是咱们身体的“砖头”！这次实验就像一场侦探游戏，我们要通过一些小技巧，把氨基酸找出来，真是让人兴奋。
2. 实验准备2.1 材料首先，咱们得准备一些材料。
我们需要一片薄层层析板，它就像咱们的舞台，氨基酸在上面展现风采。
还有些溶剂，通常是醇和水的混合物，像是给我们的“演员”们准备的背景音乐。
然后，当然少不了氨基酸的样品，可能是牛奶、蛋白质粉什么的，没错，这些都是天然的氨基酸来源。
2.2 设备接下来是设备。
我们得有一个显微镜，得让我们看到更细小的东西；还有一个小瓶子，用来装溶剂；最后，一些基本的实验器材，比如量筒、烧杯等。
这些东西就像是咱们的“战斗装备”，没有它们可不行哦！3. 实验步骤3.1 制备层析板好了，实验要开始啦！首先，我们得把薄层层析板裁剪成适合的大小，就像是准备一块巧克力蛋糕，切得太大了吃不下，切得太小了也不够分。
然后，用铅笔在板上划出一条线，别用墨水哦，毕竟咱们不想让它变得花里胡哨。
3.2 点样和展开接下来，就是点样啦。
我们用微量吸管把氨基酸样品一滴滴地放在铅笔线的上面，就像撒盐一样，讲究均匀。
点完样后，把层析板放到盛有溶剂的小瓶里，溶剂开始往上爬，就像是在攀登高峰。
等到溶剂爬到顶端，咱们就可以拿出来了。
3.3 观察和记录现在最期待的时刻来了！我们把层析板放在显微镜下观察，哇塞！这些氨基酸就像是舞台上的明星，一个个跳出来，各自展示自己的风采。
不同的氨基酸在层析板上会跑到不同的位置，真是好不热闹！我们赶紧记录下每个氨基酸的位置，简直像是在写一本明星榜单。
4. 结果分析4.1 数据整理看完之后，我们就得整理数据。
根据氨基酸在层析板上的位置，计算它们的Rf值，简单说就是它们“跑”的远近。
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
实验原理
• 茚三酮的显色原理 氨基酸与茚三酮水合物在弱酸条件下共加热时， 氨基酸被氧化脱氨、脱羧，而茚三酮水合物被 还原，其还原物可与氨基酸加热分解产生的氨 结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化 合物，称为罗曼紫（Ruhemann's purple）。
实验试剂与仪器
• 试剂 纯净的赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸 8×10E-3mol/L溶液；四种氨基酸混合溶液（每 种浓度与对应纯净溶液一致）；2.5%茚三酮丙 酮溶液；酸性展层剂（正丁醇：88%甲酸：水 =60：17：8）。 • 仪器 钟罩×1、培养皿×1、小烧杯10ml×1、层析 柱×1、小漏斗×1、新华一号滤纸 （14cm×17cm）×1、电吹风、烘箱、毛细管、 订书机，及其他常用仪器。
实验结果及分析
——图像实例
实验结果及分析
——各氨基酸比移值Rf
氨基酸
Rf
赖氨酸
0.2294
天冬氨酸
0.3814
丙氨酸
0.5771
亮（白）氨酸
0.8609
在同一实验条件下，比移值Rf主要取决于分配系数，不同的物质分配 系数不同，也就有不同的Rf 。此外，溶剂的溶质的性质、滤纸的性质、展 层的温度和p H值均会影响比移值Rf。 实验中，Rf值与个人操作及具体实验条件息息相关，存在一定波动， 但总体趋势相同。
• 纸层析 纸层析法属于分配层析，层析滤纸为载体， 流动相是指层析液，在毛细拉力作用下， 层析液能不断由下向上流动。固定相是指 被吸附在滤纸纤维之间的水分。由于纤维 素上的羟基具亲水性使这部分水束缚在纤 维素周围，不易扩散而成为固定相。
实验原理
• 在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用 下，上升流经滤液滴点时，滴点上的氨基 酸就相继融入层析液，随着层析液上升， 并发生在分配，即有一部分色素从层析液 分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分 配系数的不同，那些分配系数大的氨基酸 分子，随层析液向上移动得快，形成的斑 点集中在滤纸的上部；而分配系数小的氨 基酸分子，随层析向上移动得慢，形成的 斑点集中在滤纸的下面。
氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。
层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。
如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。
纸层析属于分配层析法。
分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。
纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。
水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。
在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。
氨基酸的分离鉴定实验报告
氨基酸的分离鉴定实验报告
《氨基酸的分离鉴定实验报告》
实验目的：通过对氨基酸的分离和鉴定实验，掌握氨基酸的分离技术和鉴定方法，提高实验操作能力和数据分析能力。
实验原理：氨基酸是生命体系中的重要有机分子，它们是蛋白质的组成单位。
在实验中，我们将利用离心分离、薄层色谱等技术，对氨基酸进行分离和鉴定。
实验步骤：
1. 将混合氨基酸样品溶解在适量的溶剂中，得到氨基酸溶液。
2. 利用离心技术，将氨基酸溶液中的杂质分离出来，得到纯净的氨基酸溶液。
3. 将纯净的氨基酸溶液加载到薄层色谱板上，进行薄层色谱分离。
4. 根据薄层色谱结果，对氨基酸进行鉴定和定量分析。
实验结果：
经过离心分离和薄层色谱分离，我们成功地分离出了混合氨基酸样品中的各种
氨基酸，并且得到了它们的定量数据。
通过比对标准氨基酸的色谱图谱，我们
成功地鉴定出了样品中的各种氨基酸成分。
实验结论：
通过本次实验，我们掌握了氨基酸的分离技术和鉴定方法，提高了实验操作能
力和数据分析能力。
同时，我们对氨基酸的结构和性质有了更深入的了解，为
今后的科研工作打下了坚实的基础。
总结：氨基酸的分离鉴定实验是一项重要的生物化学实验，通过本次实验，我
们不仅掌握了氨基酸的分离技术和鉴定方法，还提高了实验操作能力和数据分
析能力，为今后的科研工作提供了有力支持。
氨基酸的分离鉴定实验报告
氨基酸的分离鉴定实验报告实验室的氨基酸分离鉴定实验，哎呀，听起来就很专业对吧？做起来也不复杂，咱们先把氨基酸这玩意儿搞清楚。
氨基酸是咱们身体的“小工人”，它们负责合成蛋白质，咱们吃的各种食物，都是它们的材料。
所以，搞清楚氨基酸的种类和特性，简直是给自己补充营养的第一步。
在实验开始之前，先准备好需要的材料。
比如说，咱们得有氨基酸样品、缓冲液、色谱柱之类的玩意儿。
嘿，你可能会问，色谱柱是什么？简单来说，就是咱们分离氨基酸的小工具，像个细长的管子，里面填满了能“吸附”氨基酸的材料。
听起来是不是很神奇？然后，咱们得把样品溶解在缓冲液里，记住，这一步很重要，得搅拌均匀。
咱们可不能把氨基酸“丢”到水里就完事，得让它们彻底溶解，像小鱼在水里游得自在那样。
把溶液慢慢倒入色谱柱，哇，真是“万事开头难”，这时你就得耐心等待，看看氨基酸们是如何排队出场的。
每种氨基酸在柱子里都有不同的“出场时间”，就像参加选秀节目一样，个个都想争当“明星”。
当氨基酸一一流出时，咱们得用“紫外光检测器”来识别。
这个小家伙可是非常聪明，能识别每种氨基酸的“身份证”。
你知道吗？有些氨基酸在紫外光下会发光，就像明星在舞台上闪闪发光一样。
每当看到一个个氨基酸冒泡，真是让人激动得像打了鸡血！咱们得记录每种氨基酸的出现时间和浓度。
这就像做日记，记下每个小细节，越详细越好。
然后，咱们就能把这些数据分析出来，画出一张“氨基酸分布图”。
说实话，这一过程还真是考验耐心，有时候还得来几次“复测”，才能确保结果的准确性。
不过，别担心，结果一出来，绝对让你心里美滋滋的。
咱们得对实验结果进行讨论。
这一步也很重要，得看看咱们的分离结果和理论结果是否一致。
氨基酸的分离效果可能不如预期，别灰心，科学就是这么神奇，有时候让你意想不到。
你还会发现一些不常见的氨基酸，简直就像在挖宝一样，兴奋得不得了。
大家肯定好奇，这些氨基酸到底有什么用。
氨基酸可不是“吃了就算”，它们在咱们的身体里起着举足轻重的作用，比如促进新陈代谢、修复组织等等。
氨基酸的分离鉴定实验报告
氨基酸的分离鉴定实验报告氨基酸的分离鉴定实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对于生物体的正常生长和发育至关重要。
因此，了解氨基酸的性质和分离鉴定方法对于生物化学研究具有重要意义。
本实验旨在通过一系列实验手段，对氨基酸进行分离和鉴定。
实验一：氨基酸的提取首先，我们选择了一种常见的食物来源——鸡蛋，作为提取氨基酸的样品。
将鸡蛋清与硫酸钠混合，用醋酸钠调节酸碱度，然后用乙醇沉淀蛋白质，最后用氯化钠溶液洗涤沉淀。
通过这一步骤，我们成功地将氨基酸从鸡蛋中提取出来。
实验二：氨基酸的分离接下来，我们使用离心管中的层析柱进行氨基酸的分离。
将提取得到的氨基酸溶液注入层析柱，通过不同溶剂的渗透作用，不同的氨基酸会以不同的速率通过层析柱，从而实现分离。
通过观察溶液的颜色变化，我们可以初步判断不同氨基酸的分离程度。
实验三：氨基酸的鉴定为了进一步确定分离得到的氨基酸的类型，我们使用了二氯化二硼试剂进行鉴定。
将分离得到的氨基酸溶液与二氯化二硼试剂混合，观察溶液的颜色变化。
不同氨基酸与二氯化二硼反应后会产生不同的颜色，从而可以鉴定氨基酸的类型。
结果与讨论：通过实验一，我们成功地从鸡蛋中提取出氨基酸，并得到了一定浓度的氨基酸溶液。
实验二中，我们使用层析柱对氨基酸进行了初步分离，观察到溶液中出现了不同颜色的带状区域，表明氨基酸已经分离开来。
在实验三中，通过与二氯化二硼试剂的反应，我们进一步确定了分离得到的氨基酸的类型。
根据颜色的变化，我们可以推断出溶液中存在的氨基酸种类。
结论：通过本实验，我们成功地提取、分离和鉴定了氨基酸。
这一系列实验手段为我们深入了解氨基酸的性质和结构提供了基础。
在今后的研究中，我们可以利用这些方法来分析不同食物中的氨基酸成分，进一步探索氨基酸在生物体内的功能和作用机制。
总结：氨基酸的分离鉴定实验是生物化学领域中非常重要的一部分。
通过本实验，我们不仅学习到了提取、分离和鉴定氨基酸的实验技术，还对氨基酸的性质和结构有了更深入的了解。
实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法
实验报告
实验报告是学生实验研究结果的记录和总结，同时也是评价 学生实验课成绩的重要依据。
实验报告的格式： 一、实验目的 二、实验原理 三、仪器和试剂 四、实验方法与步骤 五、实验结果与分析 六、讨论、心得
注意 讨论部分不是对结果的重述，而是实验结果、实验方
法和实验异常结果的分析和讨论，以及对实验设计的认识、体 会及建议。
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基础生物化学实验课评分标准
实验课中迟到或早退者其实验过程成绩须扣分。 无故不做实验的学生其实验项目成绩评为零分。 实验课缺勤超过1/3的学生其实验总成绩评为不及 格。 在规定的时间内不能按时交实验报告的学生其实 验报告成绩须扣分。 实验成绩占基础生物化学考试成绩的20℅。
8
实验一 氨基酸的分离鉴定（纸层析法）
【实验目的】
通过实验，掌握纸层析法的一般原理和操作技术。 掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的一般过程。
9
【实验原理】
层析技术 是一种物理的分离方法，利用混合物中各 组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度 分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此 相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而 达到分离的目的。 可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷
12名称操作方式固定相流动相分离依据分配层析纸层析薄层层析液体液体溶解度离子交换层析离子交换柱层析固体液体带电性静电引力吸附层析吸附薄层层析气体吸附层析固体液体气体吸附力亲合层析酶与底物抗原与抗体固体液体配体专一性凝胶层析凝胶过滤固体液体分子大小实验原理实验原理层析的分类层析的分类13分配层析分配层析是利用不同物质在两种不相溶的溶剂中的分配系数不同而达到分离的一种技术
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【仪器和试剂】
实验仪器
1.电热鼓风干燥箱 2.培养皿、青霉素小瓶、毛细管、小型喷雾器 3.层析滤纸、滤纸芯
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五、操作
1、取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2-3cm处用铅 笔画一条直线，在此线上每间隔2cm作一记号（即 原点）如图。
2、点样：用钢笔或毛细管将氨基酸样品分别点在这6 个位置上，干后再点一次。每点在纸上扩散的直径 不超3mm。点样量应根据样品的性质及滤纸的长度 来决定，一般点样量为5—30ug 。
溶剂前沿 层析点
原点
3、平衡：点样好的滤纸卷成圆筒状用线缝好 与盛有平衡剂的小烧杯，置于密闭的层析 缸中，平衡1-2小时。
4、扩展：将盛有约20ml左右扩展剂的培养皿 迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立 于培养皿中，密闭好层析缸。待溶剂上升 到15—20cm时即取出滤纸，立即用铅笔描 出溶济前沿，吹风机或烘箱干燥。
四、试剂
1、扩展剂：按体积4:1:3的正丁醇：冰醋酸：水
混合后倒入分液漏斗中，充分振荡，静置后
分层排出水相
80 ml /组
2、平衡剂：取漏斗中的扩展剂5ml 于烧杯中作 平衡剂。
3、氨基酸：0.5%赖、脯、缬、苯丙、亮氨酸溶 液及各组分的混合氨基酸各5ml。
4、显色剂： 0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。 200ml 全班
实验一、氨基酸的分离鉴定
——纸层析法
一、实验目的
通过氨基酸的分离，学习 纸层析法的基本原理及操作 技术。
二、实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层 析法。利用不同物质在两种互不相溶的溶剂中的 分配系数不同而得到分离。
展层剂由有机溶剂与水组成。在纸上，水被 吸附在纤维素的纤维之间形成固定相，当有机相 沿纸流动经过层析斑点时，层析点上的溶质就在 有机相和水相之间进行分配。当有机相不断流动 时，溶质就沿着有机相流动方向移动，不断进行 分配，溶质中各组分的分配系数不同，移动速率 不同，因而彼此分开。
各组分由于移动速度不同，物质被分离后在层 析纸上的位置也不同，可用Rf 值来表示：
原点到层析点中心距离 Rf ＝ ———————————
原点到溶剂前沿的距离
在一定的条件下某物质的Rf值是常数，可作为 定性分析的依据。 Rf 值大小与样品物质的结构性质、 溶剂系统、层析滤纸的质量及展层方式、温度、样 品溶液中的 杂质等因素有关。
图1-2 滤纸缝合示意图
5、显色：用喷雾器均匀喷上0.1% 的茚三酮 正丁醇溶液，干燥。
6、计算：用铅笔描出各层析斑点的轮廓， 并计算各氨基酸的Rf 值。
图谱显示
化学方法：显色剂不与滤纸起反应，挥 发性小，易于去除，含水量少。
物理方法 微生物方法 同位素和放射自显影法
注意事项：
1、要保证层析滤纸不被污染，特别是 从点样线到溶剂前沿的部分。
纸? 影响 Rf值的因素有哪些？
物质结构与性质
物质的极性大小决定了物质在水和有机 相之间的分配情况，其极性的大小主要 取决于物质所具有的极性基团的性质和 数量，在极性基团不改变情况下，非极 性基团成分越多，则分子极性越低等。
展层方式
上行法 下行法 环形法 (辐射法）
三、器材
层析缸、毛细管（用钢笔代替）、 喷雾器、培养皿、层析滤纸（新 华一号）
2、各氨基酸样品点样时量要均匀。 3、在缝滤纸时，纸的两边不能接触。 4、点样的一端朝下，扩展剂的液面需
低于点样线1cm。
六、实验结果
样品aa 赖aa 脯aa 缬aa 苯丙aa 亮aa
标样Rf 混合aaRf 差值
七、分析讨论
八、思考题
做好本实验的关键是什么？ 实验过程中，为何不能用手直接接触滤