复方雄蚕蛾胶囊中总多糖和蛋白质含量测定_耿耘

27第13卷 第8期 2011 年 8 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 13 No. 8 Aug .，2011复方雄蚕蛾胶囊中总多糖和蛋白质含量测定耿耘，马超英，李子阳，杨超，罗丽勤（西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 610031）收稿日期：2011-05-18基金项目：四川省科技厅支撑计划资助项目（2008SZ0141）；四川省中医药管理局科技专项资助项目（2008-31）作者简介：耿耘（1959-）,女，河北石家庄人，教授，硕士，研究方向：中药药理学。

复方雄蚕蛾胶囊是由雄蚕蛾、枸杞子等3味药食两用中药组成的保健食品，临床应用证明其具有补肾壮阳、改善免疫及抗疲劳等功效，主要用于中老年人阳气亏虚、阴精不足或抗病能力下降、易疲劳等症者。

为了有效地控制其质量，我们根据该保健食品中药物组成中的有效成分，采用检测该胶囊中多糖和蛋白质的含量来保证质量。

多糖含量测定采用苯酚-硫酸法，蛋白质含量测定采用凯氏定氮法。

现报道如下。

1 材 料UV-265型紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；微量定氮蒸馏仪一套（深圳三利仪器）；复方雄蚕蛾胶囊（由西南交通大学中药研究所提供，规格0.5g/粒，批号080915）；D-无水葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所，批号110833200503）。

2 方法与结果2.1 多糖含量测定2.1.1　对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品25mg，置250mL 量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，配制成每毫升中含无水葡萄糖0.1mg 的对照品溶液。

2.1.2　标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分别置具塞试管中，加水至2.0mL，各精密加入5%苯酚溶液1mL，摇匀，迅速精密加入硫酸5mL，摇匀，放置10min，置40℃水浴中保温15min，取出后迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白。

照紫外分光光度法，在490nm 波长处测定吸收度，以吸收度A 为纵坐标，对照品溶液质量浓度C(g ·L -1)为横坐标，得回归方程:Y=0.0141X+0.1642，r =0.9984，结果表明，无水葡萄糖在0.02~0.1g ·L -1范围内，其质量浓度与吸收度线性关系良好。

2.1.3　供试品溶液的制备取6颗胶囊，将其内容物置于三角瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀超声待糖全溶后，将杂质过滤，滤液置旋转蒸发仪中蒸发，蒸发完全后用无水乙醇溶解超声溶解充分，滤掉杂质，然后将滤液置旋转蒸发仪中蒸发，再用蒸馏水溶解，溶液移至250mL摘 要：目的：建立复方雄蚕蛾胶囊质量控制的定性定量方法。

方法：总多糖含量测定采用苯酚-硫酸显色法[1]，在490nm 波长处测定吸收度，在0.02~0.1g·L -1范围内，其质量浓度与吸光度线性关系良好（r =0.9984）；蛋白质含量测定采用凯氏定氮法[2]。

结果：复方雄蚕蛾胶囊中总多糖的平均含量为5.9%，蛋白质平均含量为51.3%。

结论：该方法操作简便、快速、灵敏度高和重复性好，可以作为复方雄蚕蛾胶囊的质量控制的定性定量方法。

关键词：复方雄蚕蛾胶囊；总多糖；蛋白质；含量测定中图分类号：R-322 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2011) 08- 0027- 02Determination of Total Polysaccharides Content and Protein Content in Bombycidae Hung CapsuleGENG Yun，MA Chao-ying，LI Zi-yang，YANG Chao，LUO Li-qin（College of Life Science and Engineering of Southwest JiaotongUniversity，Chengdu 610031，Sichuan，China）Abstract：Objective ：To study the quality standard of bombycidae hung capsule. Method ：The contents of Total Polysaccharides were determined by phenol-sulfuric method [1],the detection wavelength was 490nm,from 0.02~0.1g ·L -1，The Linear Relationship was good between Concentrations and Absorbency of Total Polysaccharides（r =0.9984）；The content of Protein were determined by Micro - Kjeldahl method [2]. Result :The average contents of Total Polysaccharides was determined 5.9%，the average content of Proteinin was determined 51.3%，from Bombycidae hung Capsule. Conclusion ：The above method for the quantification was proved to have the advantages of simple operation, rapidity, high sensitivity and fine repetition, and it should be helpful for monitoring the quality control methods of Bombycidae hung Capsule.Key words：bombycidae hung capsule；total polysaccharides；protein；determination辽宁中医药大学学报13卷容量瓶中加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，按组号给容量瓶标号1~5号。

精密量取0.1mL加水至2mL（即稀释20倍），置具塞的干燥试管中，按组号给试管标号1~5号，分别向各试管中加5%苯酚溶液1mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5mL，振摇5min，置沸水中水浴15min，再冷却至室温25℃，30min，即得。

2.1.4　精密度试验取同一样品溶液测定5次，按“2.1.3”项下方法同时制备样品溶液，按照“2.1.2”项下的方法测定吸收度。

结果表明方法的精密度良好，RSD为2.56%（n=5）。

2.1.5　重现性实验按多糖的提取及含量测定方法对同一批样品重复测定5次，分别按“2.1.3”项下方法同时制备样品溶液，按照“2.1.2”项下的方法测定吸收度。

RSD=0.47%(n=3)，重复性好。

2.1.6　稳定性试验精密吸取按“2.1.3”项下方法同时制备样品溶液，按照“2.1.2”项下的方法每隔0.5h测定1次吸收度，连续4h，考察其稳定性。

结果表明，样品溶液在4h内显色稳定，可进行测定。

2.1.7　样品中多糖的含量测定按“2.1.3”项下方法制备样品溶液，按照“2.1.2”项下的方法测定吸收度，计算多糖含量(以葡萄糖计)，结果见表1。

用空白溶液（即“对0”号）在490nm波长下校正两个吸光池后，先进行对照品溶液的测定，再测定1~5组样品。

过程中仔细记录了各组的吸光度。

各试管中的溶液连续测定吸光度2次，取其平均值。

表1 实验各组的多糖含量测定结果试管号（标准品） 吸光度 试管号（样品）吸光度对0010.298对1 0.300 2 0.292对2 0.44530.287对30.59640.289对40.73950.282对50.859平均吸光度0.2896将数值带入回归曲线Y=0.0141X+0.1642得浓度为8.89μg/mL，又因为在制备过程中体积变大80倍（5mL硫酸、1mL苯酚、2mL样品共8mL），所以原溶液浓度为711.2μg/mL，最后得每颗胶囊的含糖量为0.0296g，按每颗胶囊内容物为0.5g计算多糖平均含量为5.9%。

2.2蛋白质含量测定2.2.1 硝化称取雄蚕蛾胶囊内容物，移入干燥的100mL 凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为硝化液。

试剂空白硝化：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。

2.2.2 硝化液的碱化蒸馏与蒸馏液的滴定结果硝化液的碱化蒸馏：量取硼酸试剂20mL于三角瓶中，加入混合指示剂2~3滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，准确吸取10mL样品消化液，由小漏斗流入反应室，并以10mL蒸馏水洗涤进样口流入反应室，棒状玻塞塞紧。

使10mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，用少量水冲洗立即将玻塞盖坚，并加水于小玻杯以防漏气，开始蒸馏。

通入蒸汽蒸腾10min后，移动接收瓶，液面离开凝管下端，再蒸馏2min。

然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下三角瓶，准备滴定。

蒸馏液的滴定0.05mol/L盐酸标准溶液滴定至灰色为终点。

记录盐酸溶液体积的消耗量,平行做3次,取平均值；同时做一空白对照。

雄蚕蛾胶囊滴定所消耗的盐酸量，内容物为0.5234、0.4976、0.5048g，消耗的盐酸量（平均值）分别为3.16、2.86、3.06mL。

计算得到结果分别为48%、52%、54%，平均51.3%。

3 讨 论苯酚-硫酸比色法测定多糖的原理是多糖成分在浓硫酸的作用下,水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物,与苯酚缩合成有色化合物,再用分光光度法测定其多糖含量。

实验证明用紫外分光光度法测定复方雄蚕蛾胶囊总多糖含量, 此法操作简便、易行，适用于总多糖成分的测定且该法灵敏度高、重现性好、结果准确, 适宜作为该制剂质量控制的指标之一。

凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理是因为蛋白质是含氮的有机化合物。

蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化后分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。

然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。