常用分子生物学试剂的选择-中文-
分子生物学实验室常用试剂配方
分子生物学实验室常用试剂配方：医药观察之我见2. 常用试剂配方（Prescriptions of Ordinary Reagents）（高媛）. (217)(1) PBS (217)(2) 胰酶Trypin (217)(3) Tris-NH4Cl (217)(4) Running buffer (218)(5) Washing buffer (218)(6) 湿转液 (218)(7) LB培养基 (218)(8) LB培养板 (218)PBS:PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。
主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。
配置方法：NaCl : 320g 优级纯Na2HPO4. 12H2O 61.44gKCl 8gKH2PO4 8g三蒸水4L烧杯溶解后用HCl调PH为7.2-7.4，细胞用需要高温灭菌，放于超净台冷却，贴上封口膜及标签。
胰酶：Trypsin 一种胰蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离。
细胞消化胰酶常用工作浓度为0.25%，PH为7.2-7.4，储存液放在-20冻存，使用液放在4度。
Tris-NH4Cl :红细胞裂解液，是一种从人，鼠及其他哺乳动物等体内烦人组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，应用低渗的原理，改变红细胞渗透压，使得红细胞胀大破裂。
配置方法：2L 体系：NH4Cl : 14.94g 溶于1800mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤Tris : 5.15g 溶于200mL ddH2O3L体系NH4Cl : 22.41g 溶于2700mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤Tris : 7.725g 溶于300mL ddH2ORunning buffer: 4L （5X）Tris: 60.6gGly: 288.3gSDS: 20gddH2O 3.78LWashing buffer: 4L (10X)Tris : 48.6gNaCl : 116.9gTween 20 : 40mLddH2O: 3.9L湿转液：4L (10X)Tris: 121.4gGly: 576.6gddH2O 3.57LLB液体培养基：名字来源于英语lysogeny broth 即溶菌肉汤，应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
分子生物学实验常用试剂、缓冲液的配制方法
实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl7.4 约70mL7.6 约60mL8.0 约42mL4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl（pH8.8）□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500 mM EDTA（pH8.0）20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠（pH5.2）□配制量100mL□配置方法1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
分子生物学实验常用试剂配制
分子生物学实验常用试剂配制分子生物学实验常用试剂配制(1) 0.01M PBS缓冲液：一袋粉制PBS缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。
0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。
(2) 0.01M枸橼酸盐缓冲液：一袋粉制枸橼酸盐缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。
0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g。
(3)1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl 调至pH8.0,加水至1000ml。
(4) 1‰DEPC水：1mlDEPC加入1000ml新鲜三蒸水中，剧烈震荡20分钟使充分混匀，37o C至少放置2h或过夜，HIRAYAMA HV-50高压灭菌器高温高压30分钟降解DEPC，4℃保存。
(5) 1%琼脂糖凝胶：取琼脂糖0.2g置烧杯中，加入20ml的1×TAE缓冲液，封闭锥形瓶口，放入微波炉内加热，不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，待琼脂糖全部熔化后取出摇匀，冷却至60℃左右，加入10mg/ml溴化乙锭（EB）1μl，EB的终浓度为0.5μg/ ml，充分混匀。
将温热的凝胶倒入已经放好梳子的凝胶槽中，厚度约为3-5mm，注意不要有气泡，将凝胶放置室温待其自然凝固。
凝固后从胶槽中轻轻取出梳子。
(6)0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0，加水至1000ml。
(7) 50×TAE缓冲液：Tris碱242g，17.4mol/L冰乙酸57.1ml，0.5mol/L EDTA (PH8.0)100ml加蒸馏水至1000ml。
分子生物学常用试剂的配制分子生物学常用试剂的配制LBLuria
分子生物学常用试剂的配制分子生物学常用试剂的配制1．LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入：细菌培养用酵母提取物（bacto-yeastextract）5g细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，在15 1bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min。
LB 琼脂平板的配制：先按上述配方配制液体培养基，临高压灭菌前加入琼脂糖15g /L，同法高压蒸汽灭菌20min。
从高压灭菌器取出培养基时应轻轻旋动以使熔解的琼脂糖能均匀分布于整个培养基溶液中，应使培养基降温至50℃时，加入抗生素等不耐热的物质。
为避免产生气泡，混匀培养基时应采取旋动的方式，然后可直接从烧瓶中倾出培养基铺制平板。
90mm直径的培养皿约需30－50ml培养基，培养基完全凝结后，应倒置平皿并贮存于4℃备用。
2．琼脂糖凝胶的配制根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解，加入适量EB 混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。
3．P1、P2、P3的配制P1 的配制：在800ml 去离子水中溶入Tris 碱6.06g，Na2EDTA·2H2O 3.72g，用HCl 调整pH 至8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。
P2 的配制：在950ml 去离子水中溶入NaOH 8.0g，20％SDS 50ml，调整容积至1 升。
P3 的配制：在500ml 去离子水中溶入醋酸钾294.5g，用冰醋酸调整pH 值至5.5，用去离子水调整容积至1升。
分子生物学实验室常用试剂配方-ProbeGene2015(精)
分子生物学常用试剂配制与保存一 . 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine :溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。
分装成小份贮存于 -20℃。
1mol/L精胺(Spermine :溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。
分装成小份贮存于 -20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate:将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白 (BSA :加 100mg 的牛血清蛋白 (组分 V 或分子生物学试剂级,无 DNA 酶于 9.5ml 水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到 10ml ,然后分装成小份贮存于 -20℃。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate:溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml 。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate:溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中, 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml 。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液 (0.5mol/L , 混合后形成 EDTA 的三钠盐。
或称取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O和 20g 的 NaOH ,并溶于水中,定容至 1L 。
1mol/L HCl:加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。
25mg/ml IPTG:溶解 250mg 的 IPTG (异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷于 10ml 水中, 分成小份贮存于 -20℃。
100mmol/L PMSF:溶解 174mg 的 PMSF (苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中, 定容到 10ml 。
分子生物学实验室常用试剂配制方法
分子生物学实验室常用试剂配制方法（转）/experient/Molecular_Biology/20487.html一. 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA 酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
分子生物学常用试剂配制表
LB 培养基PBS 缓冲液1x 10x 胰蛋白胨Tryptone 10g/L液体Na2HPO4（8mM/L ）1.14g/L11.36g/L酵母提取物Yeast extract 5g/L Nacl(136mM/L)7.95g/L 79.56g/L氯化钠Nacl10g/L KH2PO4(2mM/L)0.27g/L 2.72g/L 琼脂20g/L固体Kcl(2.6mM/L)0.2g/L 1.94g/L ddWater 至1L 至1LSDS-PAGE 电泳缓冲液5X NaOH 调节pH 至7.4-7.6Tris 15.1g 用前稀释TBS 缓冲液1X 10X甘氨酸94g Tris 2.42g/L 24.2g/L SDS 5g氯化钠Nacl 8g/L 80g/L ddWater 至1L ddWater 至1L 至1LHcl 调节pH 至7.4-7.6WB 湿转转膜液10X 加500ul Tween-20/L 得PBST/TBST Tris 30.3g/用前稀释甘氨酸144g/L细胞破碎缓冲液ddWater 至1L Kcl(300mM)22.37g/L WB 湿转转膜液使用KH2PO4(50mM) 6.81g/L 10X Trans Buffer 100mlEDTA(1mM)0.292g/L 甲醇200ml ddWater 至1L pH8.0ddWater 700ml 10%SDS 50℃加热可促溶解IPTG （1mM/L ）1ul+1ml 菌液SDS 10g IPTG 2.38g10XddWater 至100ml 灭菌ddWater 至10ml稀释10倍后10ul+1ml 菌液10%过硫酸铵APS3周内使用过硫酸铵APS0.2g Amp （50-100ug/ml ）10X1ul+1ml 菌液ddWater 2ml Amp 1g 灭菌ddWater至10ml1.5MTris-Hcl pH 8.8Hcl 调至8.8稀释10倍后10ul+1ml 菌液Tris 18.8g ddWater 至100ml考马斯亮蓝染色液过滤后可循环使用1M Tris-Hcl pH6.8Hcl 调至6.8甲醇500ml Tris 12.12g 乙酸100ml ddWater 至100ml R-250考马斯亮蓝0.5gddWater 至1L考马斯亮蓝脱色液乙醇比例越高脱色越快3705ZZL甲醇/乙醇100-500ml 乙酸50ml ddWater 至1LTAE 50X ELISA 包被液Tris 242g 先溶解再加乙酸后定容Na2CO3 1.59g pH9.6Na2EDTA·2H2O 37.2g NaHCO3 2.93g ddWater 800ml灭菌ddWater 至1L 乙酸57.1ml ddWater 至1L 生理盐水0.9%氯化钠Nacl 9g 灭菌使用SDS 分离胶浓度分离范围ddWater 1L6%50-150kd 8%30-90kd 鲜血培养基10%20-80kd 培养基100ml 约37℃加血12%12-60kd 鲜血5ml 15%10-40kd巧克力培养基同样5%鲜血于≥90℃时加入琼脂糖凝胶琼脂糖1XTAE 1%核酸染料透析袋处理0.2g 20ml 6/8/11孔1ul 2%(W/V)碳酸氢钠+1mmol/L ED TA(pH 8.0)煮沸10min 0.3g 30ml 13孔 1.5ul 0.4g 40ml 18/25孔2ul 0.3g 20ml 1.5%1ul ddWater 清洗0.4g20ml2%1ul1mmol/LEDTA(pH 8.0)煮沸10min包涵体溶解液包涵体洗涤液磷酸钠（20mm ） 3.27g Hcl 调至pH 7.4EDTA （0.5mM ）0.146g Hcl 调至pH8.0氯化钠(300mM)17.53g Nacl （100mM ） 5.844g 咪唑（10mM ）0.68g Tris （50mM ） 6.06g 尿素（8M ）484.8g TritonX-100（1%）10mlddWater 至1L ddWater 至1L 加入后超声10min ，离心20min 0.1M 氯化钙CaCl2感受态用蛋白复性缓冲液CaCl2 1.1g 照紫外灭菌Nacl （100mM ） 5.85g Hcl调至pH8.灭菌ddWater 10mlTris （50mM ） 6.06g甘油（5-10%）50ml枸橼酸钠抗凝剂109mM/LGSH （2mM)0.6gNa3C6H5O7·2H2O 32.05g 灭菌后用，以实际分子量计算用量GSSG(0.2mM)0.1gddWater 至1L 尿素(6/4/2/0M)计算1：9血使用ddWater 至1L尿素6-4-2-0梯度分别1LELISA 终止液（2mM/L ）H2SO43705ZZL浓硫酸（98%）21.7ml酸入水中！ddWater 178.3ml。
高中生物常用试剂及其作用
高中生物常用试剂及其作用1.斐林试剂：用于检测还原糖。
成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。
用法：将斐林试剂甲液和乙液等量混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，现配现用，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。
2.双缩脲试剂：用于检测蛋白质或者多肽（注意：氨基酸不和其发生作用）。
成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。
用法：向待测液中先加入1ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，（先A后B，A大于B）。
摇匀。
如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。
3.苏丹Ⅲ：用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄色苏丹Ⅳ：用于检测脂肪。
可将脂肪染成红色4.碘液：用于鉴定淀粉的存在。
遇淀粉变蓝。
遇糖原变红5.二苯胺：用于鉴定DNA。
在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
6.班氏试剂：由A液（CuSO4溶液）B液（柠檬酸钠和NaCO3溶液）配制而成。
作用及检测原理与斐林试剂相似，但班氏试剂可长期使用。
7.甲基绿和吡罗红：甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。
8.健那绿：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色，而细胞质接近无色。
活体染色剂9.龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈深蓝色，后者呈红色10.改良苯酚品红染液：检测染色体，红色11.溴麝香草酚蓝水溶液：检测CO2，由蓝变绿再变黄12.酸性重铬酸钾溶液：检测酒精，橙色变为灰绿色13.二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。
14.碳酸钙：研磨绿色叶片时加入，可中和有机酸，防止色素受破坏。
15.丙酮：用于提取叶绿体中的色素16.层析液：(成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油)可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开17.0.3g/mL的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液，比植物细胞液的浓度大，可用于质壁分离实验。
分子生物学实验问答题答案中文名称(1)
.中文名称：重组DNA技术。
英文名称：recombinant DNA technique;recombinant DNA technology定义1：用人工手段对DNA进行改造和重新组合的技术。
包括对DNA分子的精细切割、部分序列的去除、新序列的加入和连接、DNA分子扩增、转入细胞的复制繁殖、筛选、克隆、鉴定和序列测定等等，是基因工程技术的核心。
重组DNA技术（recombinantDNAtechnique）又称遗传工程，在体外重新组合脱氧核糖核酸（DNA）分子，并使它们在适当的细胞中增殖的遗传操作。
这种操作可把特定的基因组合到载体上，并使之在受体细胞中增殖和表达。
因此它不受亲缘关系限制，为遗传育种和分子遗传学研究开辟了崭新的途径。
2.列出分子生物学常用仪器的名称，用途。
答：①恒温气浴摇床：常用于液体摇匀以培养微生物、细菌和细胞等。
注意要依据不同的用途设置不同的参数。
②超净工作台：常用于为微生物学实验提供无菌操作环境。
注意操作时关掉紫外灯，避免给人类带来伤害。
③低温台式高速离心机：常用于分离纯化蛋白、病毒、细胞等。
使用时不能随便移动离心机或打开盖子；离心机运行时要处于锁定状态；离心管的放置要处于平衡状态。
④微量移液管：用于计量和转移微量液体的专用仪器。
操作时注意避免枪头的污染；调节刻度时不宜超过最大量程；使用完后将刻度调到最大收藏。
⑤电泳仪：可对不同物质进行定性或定量分析，或将一定混合物进行组分分析或单个组分的提取制备。
操作时不可把导线极性接反；当电泳仪进入工作状态后，避免人体与其各部分的接触，不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行；若使用时出现异常，要立刻切断电源。
⑥PCR仪：用于扩增DNA片断。
操作时应注意盖子要盖紧，按正确步骤进行。
⑦高压高温灭菌锅：用于杀菌消毒。
使用时应严格按照规程操作，避免发生安全事故。
3. 如何正确使用微量移液器。
一、标准操作适用的液体：水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液。
分子生物学常用试剂配制抗生素溶液配制
分子生物学常用试剂配制抗生素溶液配制分子生物学常用试剂配制方法庆大霉素盐酸壮观霉素1．称取1g粉末置于10ml塑料离心管中。
2．加入9ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至10ml。
3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。
100ml培养基加100ul。
（在培养基中浓度为100ug/ml）Ampicillin(氨苄青霉素)﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素﹡配制量 50ml﹡配制方法1．称取5g Ampicillin置于50ml塑料离心管中。
2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。
3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。
100ml培养基加100ul。
（Amp在培养基中浓度为100ug/ml）Kanamycin（卡那霉素）﹡组分浓度 50mg/ml卡那霉素﹡配制量 50ml﹡配制方法 1．称取2.5g 卡那霉素置于50ml塑料离心管中。
2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。
3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。
100ml培养基加100ul。
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)﹡组分浓度 24mg/ml IPTG﹡配制量 50ml﹡配制方法 1．称取1.2g IPTG置于50ml塑料离心管中。
2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。
3．用0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。
X-Gal (20 mg/ml)﹡组分浓度 20mg/ml X-Gal﹡配制量 50ml﹡配制方法 1．称取1g X-Gal置于50ml塑料离心管中。
2．加入40ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解之后定容至50ml。
3．小份分装（1ml一管）后，置于-20℃避光保存。
RNase A ﹡组分浓度 10mg/ml RNase A﹡配制量 50ml﹡配制方法 1．取0.5g RNase A置于50ml塑料离心管中。
(精心整理)高中生物实验常用的试剂
生物学中常用的试剂：(乙液)。
用法：将1.斐林试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4斐林试剂甲液和乙液混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。
2.班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。
和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。
用于尿糖的测定。
(乙液)。
用法：向3.双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。
如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。
4.苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。
用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色)。
5.二苯胺：用于鉴定DNA。
DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色。
6.甲基绿：用于鉴定DNA。
DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。
吡罗红：检测RNA，呈红色7、50%的酒精溶液：用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。
8、70%的酒精溶液：用于医学临床上的消毒灭菌。
9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。
11.龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈深蓝色，后者呈红色改良苯酚品红染液：检测染色体，红色健那绿：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色12.20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。
（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。
14.碘液：用于鉴定淀粉的存在。
遇淀粉变蓝。
遇糖原变红15.丙酮：用于提取叶绿体中的色素16.层析液：(成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油)可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。
17.二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。
分子生物学实验常用实验试剂配制(2019.4.7)
分子生物学实验常用实验试剂配制（一）溶液I（TEG缓冲液）：使用浓度为（25mmol/L Tris-HCl, 10mmol/L EDTA, 50mmol/L葡萄糖，pH8.0）。
1、先称取0.3g Tris加入0.1mol/L HCl溶液14.6mL，配制成pH8.0 Tris-HCl 缓冲液100mL；（1mol/L HCl溶液：即取8.6毫升36%的盐酸加水、搅拌、定容至100毫升即可；或37% 的HCL相当于约12mol/L，即稀释12倍）2、再加入0.37g EDTA·Na2·2H2O和[0.99g（Glucose.H2O，分子量198.17）或0.9g Glucose，分子量180.1572]葡萄糖，灭菌后4℃保存备用。
（二）溶液II （碱裂解液）：使用浓度为（0.2 mmol/L NaOH, 1% SDS）。
配制母液：0.4M NaOH 称1.6g NaOH 定溶于100 mL蒸馏水；2% SDS 称2 g定溶于100 mL蒸馏水。
常温保存，使用时等体积混合。
（三）溶液III（乙酸钾溶液）：使用浓度（pH8.0, [K +]=3mol/L, [Ac -]=5mol/L）。
1、先配制60mL 5 mol/L KAc；称g KAc 定容至60 mL。
2、再加入11.5mL冰乙酸和28.5mL蒸馏水。
4℃保存备用。
（四）LB培养基配制：LB（液体）：称取0.5g 氯化钠，0.5g腋蛋白胨，0.25g酵母提取粉，加水50ml。
LB（固体）：称取0.5g 氯化钠，0.5g腋蛋白胨，0.25g酵母提取粉，0.75g琼脂粉，加水50ml。
（五）琼脂糖凝胶：琼脂糖凝胶的配制是分子实验室比较基本的操作，大体流程如下：称量、熔胶、倒胶、拔梳。
1.称量：我们通常所说的0.8%、1%的胶都是指的质量体积分数，即所称取的琼脂糖粉的质量（g）比所加的TBE缓冲液的体积（mL）即胶的浓度。
缓冲液的体积根据胶板的大小而定。
分子生物学之常用试剂配制二
分⼦⽣物学之常⽤试剂配制⼆三抗⽣素类简介1.抗⽣素溶液的配置⼀般⽤⽆菌⽔或醇类充当溶剂。
2.以⼄醇为溶剂的抗⽣素溶液⽆须除菌处理，⽤⽆菌⽔配的⽤0.45或0.22um⽆菌过滤器过滤除菌（个⼈经验，只要将盛装抗⽣素溶液的容器灭菌处理后可不⽤过滤除菌）。
3.所有抗⽣素溶液均应放于不透光的容器保存，也可⽤锡箔纸包裹。
4.镁离⼦是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使⽤不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
5.抗⽣素配制出以后4可保存3个⽉，-20可保存⼀年。
6.配制完成后注意分装。
常⽤抗⽣素1.氨苄青霉素（Amp）（100mg/mL）⽆菌⽔中，最后定容⾄10mL，必要时可以⽤0.45或0.22um⽆菌过滤器过滤。
分装成⼩份于-溶解1g氨苄青霉素钠盐于⾜量的⽆菌⽔20可贮存⼀年，4可贮存3个⽉。
常以25ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于⽣长培养基。
2.羧苄青霉素（Car）（50mg/mL）溶解0.5g羧苄青霉素⼆钠盐于⾜量的⽔中，最后定容⾄10mL。
分装成⼩份于-20贮存。
常以25ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于⽣长培养基。
3.甲氧西林（Met）（100mg/mL）溶解1g甲氧西林钠于⾜量的⽔中，最后定容⾄10mL。
分装成⼩份于-20贮存。
常以37.5ug/mL终浓度与100ug/mL氨苄青霉素⼀起添加于⽣长培养基。
4.硫酸卡那霉素（kan）（10mg/mL）溶解100mg卡那霉素于⾜量的⽆菌⽔中，最后定容⾄10mL。
分装成⼩份于-20贮存。
常以10ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于⽣长培养基。
5.氯霉素（Chl）（25mg/mL）溶解250mg氯霉素⾜量的⽆⽔⼄醇中，最后定容⾄10mL。
分装成⼩份于-20贮存。
常以12.5ug/mL～25ug/mL的终浓度添加于⽣长培养基。
6.链霉素（streptomycin）（50mg/mL）溶解0.5g链霉素硫酸盐于⾜量的⽆⽔⼄醇中，最后定容⾄10mL。
分子生物学实验室常用试剂配方-ProbeGene2015（精）
分子生物学实验室常用试剂配方-ProbeGene2015（精）第一篇：分子生物学实验室常用试剂配方-ProbeGene2015(精) 分子生物学常用试剂配制与保存一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine : 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine : 溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate: 将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA :加 100mg 的牛血清蛋白(组分 V 或分子生物学试剂级,无 DNA 酶于 9.5ml 水中(为减少变性, 须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml ,然后分装成小份贮存于-20℃。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate: 溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate: 溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中, 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml。
0.5mol/L EDTA: 配制等摩尔的Na2EDTA 和NaOH 溶液(0.5mol/L , 混合后形成EDTA 的三钠盐。
或称取186.1g 的Na2EDTA·2H2O和 20g 的 NaOH ,并溶于水中,定容至 1L。
1mol/L HCl: 加8.6ml 的浓盐酸至91.4ml 的水中。
25mg/ml IPTG: 溶解 250mg 的 IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷于 10ml 水中, 分成小份贮存于-20℃。
100mmol/L PMSF: 溶解 174mg 的 PMSF(苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中, 定容到 10ml。
常用分子生物学试剂的选择-英文
－ 热启动 Taq酶
产品名称 产品性能
•Hale Waihona Puke 天为时代: HotStart Taq
化学修饰
• Roche : FastStart Taq • Abgene: Thermo-start® DNA Polymerase • Stratagene: SureStart™ Taq
• Invitrogen： AccuPrimeTM Taq
Promega
高保真 ＋ 高扩增效率
原 理
用 途
• 混合酶 －高扩增效率 － 3’－5’核酸外切
• 超长片段扩增
－测序 －构建基因图谱
• 复杂模板扩增
－GC含量高 －二级结构
High Fidelity
＋
高扩增效率
性 能
特 点
产 品
高扩增效 •天为时代：Taq Plus • TaKaRa：Ex TaqTM 率 高保真
特 点
• 特异性强 • 稳定性好
降低PCR反应的要求，增强特异性 长期放置活性无改变
• 大规模基因检测 • 目的基因拷贝数极低的样本
适用范围
• GC含量高,有二级结构的模板 • 复杂基因组样本 • 可直接检测菌落，基因点突变检测, 或者阳性克隆的筛选。
New England Biolabs(NEB)
常用分子生物学试剂的选择
赵秋伟
如何选择最合适的DNA聚合酶
• DNA 聚合酶的特性
• PCR 实验的不同需求
如何选择最合适的DNA聚合酶 －－ DNA 聚合酶的特性
纯 度 稳定性 酶活性
如何选择最合适的DNA聚合酶 －－ PCR 实验的不同需求
特 异 性
保 真 性
(推荐)分子生物学常用仪器介绍
医学领域
• 疾病基因检测 / 遗传病的产前诊断 • 致病病原体的检测 • 肿瘤治疗中癌基因的检测
会推广到大部分疾病治疗前的检测
• DNA指纹、个体识别、亲子关系鉴别、 法医物证
• 其他: 动、植物检疫（转基因动植物检测）
PCR具有极高的灵敏度
污染是PCR实验的常见问题。只要实验室里曾经扩增过某个 片段，就有可能以后的实验中发生污染。
• 3－ 待测样品中有相当含量的杂质。A260/A280 和 260/A230是DNA 纯度的指示值，纯度好的DNA，在 pH7-8.5下其比值应该在2.0 或2.5，A230 是多肽、芳香 基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A280 是蛋白 质的吸光度
• 答：产生四个加号的原因是因为测量的数值超过 了测量上限>3.0A，请检查
DNA酶的活性，防止PCR扩增产物降
解
33
核酸电泳的指示剂
• 指示剂：ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
– 溴酚兰 – 二甲苯青
• 溴酚兰：在碱性液体中呈紫兰色 • 二甲苯青：水溶液呈兰色 • 电泳时，其迁移速率与双链线性
DNA大致相当
34
载样缓冲液
• 指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成 载样缓冲液
• 作用： – ①增加样品密度，使其比重增加，以确保 DNA均匀沉入加样孔内 – ②在电泳中形成肉眼可见的指 示带，可预测核酸电泳的速度和位置 – ③使样品呈色，使加样操作更方便
13
原位PCR扩增
• 在PCR仪上增加原位PCR模块就 可以在玻片上进行原位PCR扩增，
14
多槽式高通量PCR仪
• 随着基因组高通量研究的需求的提高
• MJ有一种一拖四，就是1个主机带4个扩增槽， 每个槽可以独立控温，一次可以作96x4个样品的 PCR，不过一旦出现问题4个都不能用了。
常用生化试剂品名
常用生化试剂品名Tris：Tris(Hydroxymethyl)aminomethane 三羟甲基氨基甲烷分子式: NH2C(CH2OH)3 分子量: 121.14 TRIS 是一种最常用的生物缓冲液，常配成PH 值为 6.8，7.4，8.0，8.8。
其PH 值随温度变化很大。
一般来说，温度每升高一度，PH 值下降0.03。
EDTA：Ethylene Diamine Tetraacetic Acid 乙二胺四乙酸分子式: C10H16N2O8 分子量: 292.248 EDTA 是化学中一种良好的配合剂，它有六个配位原子，形成的配合物叫做鳌合物，EDTA 在配位滴定中经常用到，一般是测定金属离子的含量。
尿素：（脲碳酰胺; 碳酰二胺脲）尿素：脲; 碳酰胺碳酰二胺脲）Urea （分子式: CH4N2O 分子量: 60.05 尿素易溶于水，在20℃时100 毫升水中可溶解105 克。
SDS：dodecyl sulfate, sodium salt 十二烷基硫酸钠：分子式: C12H25SO4Na 分子量: 288.38 溶解性：溶于水，微溶于醇，不溶于氯仿、醚。
健康危害：对粘膜和上呼吸道有刺激作用，对眼和皮肤有刺激作用。
可引起呼吸系统过敏性反应。
SDS 是一种已知的能够使蛋白质变性的去污剂。
它用于确定蛋白分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳。
它也可以用于核酸抽提操作中破坏细胞壁及裂解核酸：蛋白复合物。
在乳液聚合反应中，可充当两相溶液的乳化剂。
DTT：DL-Dithiothreitol二硫苏糖醇分子式为C4H10O2S2，分子量为154.25 常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。
DTT 和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT 的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。
DTT 的用途之一是作为巯基化DNA 的还原剂和去保护剂。
巯基化DNA 末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。
这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA 在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA 溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA 的二聚化。
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PvunitsII 37 ℃ 5’ … G-C-T-C-A-G-OH 3’ … C-G-A-G-T-C-P P-C-T-G-G-A-G … 3’ OH-G-A-C-C-T-C … 5’
影响限制性核酸内切酶活性的因素
DNA样品的纯度：
蛋白质、苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、SDS、NaCl等
措施： 加大酶的用量，1 mg DNA 用 10units 酶 加大反应总体积 延长反应时间
割位置不一致
可变酶：识别序列中的一个或几个核苷酸是可变的 Sunitsbset酶：一种酶的识别序列包含于另一些酶 的识别序列之中
酶切反应注意事项
价格昂贵的酶
决不能用水稀释,以免变性失活。
预先加入除酶以外的所有其他试剂。
取酶立即放于冰上。分装小份避免反复冻融。
使用无菌的新吸头。
少加水,使体积最小,•但保证酶液体积不超过总体积的10％,否
OH P
PstI等产生的3’粘性末端
5’ … G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G … 3’
3’ … C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
PstI 37 ℃ 5’ … G-C-T-C-T-G-C-A-OH 3’ … C-G-A-G-P P-G-G-A-G … 3’ OH-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
3’ … C-G-A-C-T-T-A-A-P
5’ … G-C-T-G-OH
OH-G-C-T-C … 5’
P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 退火 4-7 ℃
OH P
5’ … G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3’ … C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
则酶液中的甘油会抑制酶活性。
常用内切酶的单位价格比较
产品名称 公司 N 规格 5000 2000 2500 1000 500 价格 280 120 260 280 120 单位价格 0.056 0.06 0.104 0.28 0.24
BamH I
T P N
Bgl II
T
P
N
500
500
228
310
H i n d III
同一菌株中含多个不同的限制性核酸内切酶,表示在该菌株中发现这种酶的先后次序。
限制性核酸内切酶
II 型限制性核酸内切酶的基本特性
识别双链DNA分子中4 - 8对碱基的特定序列 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧 识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构
EcoR I的切割位点
EcoR I的识别序列
用于分子克隆的工具酶
限制性核酸内切酶
DNA聚合酶
DNA连接酶
核酸酶
核酸修饰酶
如何选择最合适的限制性内切酶
限制性核酸内切酶的生物功能 影响限制性核酸内切酶活性的因素
限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的生物功能
• 主要存在于原核细菌中，帮助细菌限制外来DNA的入侵
• 识别双链DNA分子中的特定序列，并切割DNA双链 • 细菌的限制与修饰作用
0.456
0.62
Dpn I
T P N 200 5000 3000 5000 2000 400 500 384 280 120 156 310 200 741 1.9175 0.056 0.04 0.03 0.115 0.5 1.482
5’ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3’ … C G A C T T A A G C T C … 5’
EcoRI等产生的5’粘性末端
5’ … G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
3’ … C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
EcoRI 37 ℃
退火 4-7 ℃
OH P
5’ … G-C-T-C-T-G-C-A G-G-A-G … 3’ 3’ … C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
OH P
PvunitsII等产生的平头末端
5’ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G … 3’ 3’ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C … 5’
星号活性
在非标准反应条件下,也能切割一些与
其特异识别序列类似的序列。在酶的
名称右上角加一个星号(*)表示,•如
EcoRⅠ*。
必须采用规范的实验步骤,坚持应用推
荐的反应条件。
同裂酶(isoschizomer)或异源同工酶:不同来源的限
制酶可切割同一靶序列 同尾酶(isocaunitsdiners)：来源不同、识别序列 不同，•但产生相同粘性末端的酶。 远距离裂解酶(distant cleavage)：识别位点与切
• hsd R：编码限制性核酸内切酶 • hsd M：编码限制性甲基化酶 • hsd S：编码限制性酶和甲基化酶的协同表达
限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的类型
主要特性
限制修饰 蛋白结构 辅助因子 识别序列
I型
多功能 异源三聚体 ATP Mg2+ SAM TGAN8TGCT AACN6GTGC
II 型
单功能 同源二聚体 Mg2+ 旋转对称序列
III 型
双功能 异源二聚体 ATP Mg2+ SAM
GAGCC
切割位点
距识别序列1kb处 随机性切割
识别序列内或附近 特异性切割
距识别序列下游 24-26bp处
限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的命名
属名 种名 株名
Haemophilunitss influnitsenzae d 嗜血流感杆菌d株
影响限制性核酸内切酶活性的因素
DNA样品的甲基化程度：
大肠杆菌中的dam甲基化酶在5‘GATC3’序列中的腺嘌呤 N6位引入甲基，受其影响的酶有Bcl I、MboI等，但
BamH I、 Bgl II、Saunits3A I不受影响
大肠杆菌中的dcm甲基化酶在5‘CCAGG3’或5‘CCTGG3’ 序列中的胞嘧啶C5位上引入甲基，受其影响的酶有 EcoR II等 哺乳动物中的甲基化酶在5‘CG3’序列中的C5位上引入甲基
影响限制性核酸内切酶活性的因素
核酸内切酶的缓冲液性质：
高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值 等，会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特 异性，即所谓的Star activity现象
EcoR I在正常条件下识别并切割5‘GAATTC3’序列，但在甘 油浓度超过5%（v/v）时，也可切割 5‘PunitsPunitsATPyPy3’或者5‘AATT3’