用微生物挑战性试验评价化妆品防腐剂效果_林惠芬
化妆品微生物挑战试验
化妆品微生物挑战试验刘树葆臧跃扬桂菊（天津化妆品科学技术研究皖有强公司）摘要：本文参照美国化妆品、盥洗用品和香精协会（ＣＴＦＡ）推荐的防腐体系效能评价方法，研究了不同产品在相同防腐条件下，微生物挑战试验结果的差异性。
关键词：防腐体系，微生物挑战试验，膏霜，乳液，水剂。
目前，化妆品琳琅满目，产品配方复杂多样，通常包含多种成分，尤其许多化妆品中的营养成分非常适合微生物的生长，而微生物存在于我们生活着的世界的每一个角落，从而为化妆品的生产和保存带来困难。
微生物污染将导致产品在气味、颜色、粘度、性能上都会发生改变。
因此化妆品微生物污染对产品质量、正常使用以及使用者健康来说是一个极大的冒险“’。
为防止微生物污染，就对产品的防腐提出了挑战，所以必须建立很好的防腐体系，以保证产品的安全、稳定性“’，为消费者提供安全和高品质的产品。
评价化妆品质量的～个重要指标就是微生物是否达到化妆品卫生规范的要求，本实验参照美国化妆品、盥洗用品和香精协会（ＣＴＦＡ）推荐的防腐体系效能评价方法。
’，对相同防腐体系不同功能的膏霜、乳液及水剂产品进行微生物挑战试验，以指导配方师合理添加防腐剂。
１．实验方法ｉ．Ｉ．ＣＴＦＡ推荐的防腐单次挑战试验ＣＴＦＡ推荐的经典的为期２８天的防腐单次挑战实验，是将防腐剂混入配方基质中，然后～次性接入若干种类、～定数量的微生物进行挑战，将样品存放于适当的温度下，定期抽样检测其中残存的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样品的抗菌效果。
１．２试验仪器恒温培养箱：霉菌培养箱：显微镜：灭菌平皿：直径为９ｃｍ；ｐＨ计；高压灭菌锅；酒精灯：锥形烧瓶；量筒：灭菌刻度吸管：ｌＯｍｌ、２ｍｌ、ｉｍｌ；试管。
Ｉ．３．培养基和试剂生理盐水：ＳＣＤＬＰ液体培养基：卵磷脂、吐温８０一营养培养基：乳糖胆盐培养基：蛋白胨水：靛基质试剂：十六烷三甲基溴化铵培养基；绿脓菌素测定用培养基：硝酸盐蛋白胨水培养基：普通琼脂斜面培养基：血琼脂培养基；甘露醇发酵培养基：血浆：孟加拉红培养基。
用微生物挑战性试验考察化妆品防腐剂效果
摘要：为了考察 2010 年化妆品风险监测抽验样品的防腐效果，参考 《中国药典》（2010 年版附录） 对 3 种
化妆品进行菌落计数方法学验证，选取回收率达到 70%以上的 3 种化妆品进行微生物挑战性试验。通过对 3
类化妆品进行挑战性试验研究，结果表明，选择的 3 种化妆品均能通过挑战性试验。通过此次考察，可以
祛斑类 金黄色葡萄球菌 1.5×106
lg6.18 1.4×105 lg5.15
＜10 ＜lg1
＜10 ＜lg1 ＜10 ＜lg1
铜绿假单胞菌 1.6×106
lg6.20 1.4×102 lg2.15
10
lg1
＜10 ＜lg1 ＜10 ＜lg1
大肠埃希菌
2.3×106
lg6.36 1.6×106 lg6.20
2 结果与讨论
2.1 结果 受试的 3 种类型的化妆品在检测时间内细菌和真
菌的防腐能力见表 1。从表 1 结果看，选取的 3 种类 型的化妆品，14 天细菌菌数下降不少于 2.0 lg，14 天～ 28 天细菌菌数未增加；与初始值比，14 天和 28 天真 菌数均未增加，受试的 3 种类型的化妆品均能够通过 挑战性试验。为了考察化妆品的防腐效力，本次试验 所选取的 3 种类型的产品都是经过微生物验证过的， 将 3 种类型的产品按照 《中国药典》 微生物限度检查 方法 （常规法） 进行验证，结果 3 种产品经过验证 后，各验证菌的回收率均能达到 70%，且该 3 种样 品按照化妆品卫生规范 （2007 年版） 方法进行检验 为无菌产品。因此，选择这 3 种样品作为供试品代表 进行研究，通过本次试验初步对 2010 年化妆品风险 监测抽验样品的防腐效果进行了考察，为消费者选择 健康的化妆品提供可靠依据。 2.2 讨论
化妆品中防腐剂的选择与效果评估
化妆品中防腐剂的选择与效果评估随着人们对美的追求和对个人形象的重视，化妆品在我们的日常生活中扮演着越来越重要的角色。
然而，化妆品作为一种具有保护、改善肌肤功能的产品，不可避免地会受到微生物的侵害。
为了延长化妆品的保质期限，防止细菌滋生，防腐剂成为了不可或缺的配方之一。
本文将探讨化妆品中防腐剂的选择与效果评估的相关问题。
一、防腐剂的重要性化妆品中的防腐剂是为了保证产品的品质和安全性，防止微生物滋生，增加化妆品的使用寿命。
在化妆品中，常见洁肤露、面霜、粉底液等会直接接触到皮肤的产品，如果没有适当的防腐剂，很容易被细菌污染，导致皮肤问题的发生。
二、防腐剂选择的原则在选用防腐剂时，应该遵循以下几个原则：1. 高效性：防腐剂应具备对广谱微生物的杀菌能力，能够有效抑制或杀死细菌、真菌和酵母等。
2. 稳定性：防腐剂应具备较好的化学稳定性，在不同ph值、温度和光照条件下都能发挥作用。
3. 低副作用：防腐剂应尽量选择对皮肤和健康无刺激、低过敏性的成分。
4. 合法合规：防腐剂的使用应符合国家和地区的相关法规和标准。
三、常见化妆品防腐剂类别根据成分和功能的不同，常见的化妆品防腐剂主要包括有机酸盐类、醇类、酮类、酚类、醚类、氨基酸盐类等。
1. 有机酸盐类：如山梨酸钾、苯甲酸钠等，具有抑菌作用，对酵母和霉菌也有一定效果。
2. 醇类：如苯醇、辛醇、乙醇等，具有广谱的抗菌作用，但部分醇类有一定的刺激性。
3. 酮类：如丙酮、乙二醇等，具有一定的抗菌效果，但对病毒无效。
4. 酚类：如对羟基苯甲酸、对甲羟基苯甲酸等，具有广谱的抗菌作用，但存在致敏风险。
5. 醚类：如苯氧基乙醇、苯氧基乙二醇等，具有抑菌作用，但对病毒无效。
6. 氨基酸盐类：如丙氨酸钠、甘氨酸钠等，具有保湿作用的同时，也可以一定程度上抑制微生物生长。
四、防腐效果评估方法为了评估不同防腐剂的抑菌效果，常常使用以下方法进行研究和测试：1. 石蜡扩散法：将防腐剂加入石蜡中，通过扩散的方法来评估其抑菌作用。
防腐剂浓度对化妆品配方的防腐挑战试验结果对比
广州美尔生物科技有限公司，广州欣浪生物化工有限公司防腐剂浓度对化妆品配方的防腐挑战试验结果对比防腐剂是化妆品中必不可少的成分，防腐剂的种类与含量对于化妆品来说非常重要。
化妆品防腐体系是否能迎接由化妆品自身、使用者污染及环境污染滋生菌等方面产生的挑战至关重要，防腐体系必须有助于防止微生物污染物的增长，保护产品不变质或损害其预期的效果。
添加防腐剂或防腐剂组合的效果取决于其与产品的独特成分配方的相互作用。
正是由于这一原因，很难完全根据化妆品成分列表选择出适当的防腐剂。
评价化妆品中防腐体系是否具有足够的防腐能力，需通过对完整的化妆品配方进行防腐挑战试验来实现。
防腐挑战试验通过给化妆品样品添加细菌和真菌，并在测试期内定期评估其受污染程度。
对于防腐挑战测试结果显示防腐功效不足的产品，将通过调整产品的配方来达到防腐性能，对于化妆品配方优化具有重大的意义。
本文从“防腐剂浓度对化妆品配方的防腐挑战试验结果的影响”切入，从而阐述这一防腐性能评价方法。
实验用细菌选取金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）；真菌选取白假丝酵母（白色念珠菌）、黑曲霉作为测试菌种。
分别培养，实验选取第4-10代菌株。
分别配制混合细菌悬液或混合真菌悬液，分别接种到精华及膏霜样品中，使细菌初始浓度为1x106cfu/mL，真菌初始浓度为1x105cfu/mL，细菌和真菌分别在37℃和28 ℃下培养进行培养。
分别于0h、1d、7d，14d时取样稀释，通过平板计数法计算每g/mL样品中菌数目，过程中可另外选取时间点进行更精细的计数。
本次实验挑战用菌选取真菌，对同防腐剂浓度的精华及膏霜体系进行防腐挑战试验，结果如下：注：①体系防腐剂均使用Esonal OSM-308，为辛酰羟肟酸的复配物，为欣浪生化防腐剂单位：cfu/mL②＜10表示无菌生长结果显示，3h时，随着防腐剂浓度的增大，菌浓度减小；1d时0.8%精华及1.0%精华完全杀灭；7d时0.5%精华完全杀灭；14d时0.3%依然有菌生长，浓度还出现反弹。
细菌防腐剂挑战性实验
摘要：对建立化妆品防腐体系的各种要素进行了分析，就国内外有代表性的微生物挑战试验的评价方法进行了比较，提出了符合实践情况并适用于我国化妆品行业的化妆品防腐体系的效能测试方法的评价标准，还为化妆品防腐体系筛选过程的快速判定提供了经验依据。
关键词：化妆品；防腐剂；防腐体系；微生物挑战试验大多数化妆品富含微生物生长所需的养分，环境中的微生物一俟进入，即可迅速繁殖，破坏产品的感官品质，损害消费者的健康。
因此，一个良好的防腐体系，对于化妆品产品来说是必不可少的。
1 化妆品的防腐体系化妆品的防腐体系实际上是由若干种防腐剂（和助剂）按一定比例构建而成。
防腐体系的基本要素是防腐剂，但其效能大小又与其用量和使用对象的剂型（液态、粉状、乳状、膏霜状等）特性、组成（是否含碳水化合物、蛋白质、动植物抽提物等）、pH值、可能污染的微生物种类和数量等密切相关。
1.1化妆品防腐剂早期使用的防腐剂有：尼泊金脂类、苯甲醇、烷基二甲基苄基铵氯化物、对氯间二甲酚、苯氧基乙醇、布罗波尔（Bronopol，2-溴-2-硝基丙烷-1，3-丙二醇）、道维希尔200（Dowicil-200,六亚甲基四胺衍生物）、杰马-115(Germall-115，咪唑烷基脲)、脱氢醋酸、甲醛、山梨酸等。
这些防腐剂至今很多仍在使用。
近期推广商品化的化妆品防腐剂见表1。
至于复配而成的防腐剂商品更是数不胜数。
防腐剂对微生物的最低抑制浓度（cmc）是判断一种防腐剂效果的首先考虑的基本指标，MIC值越小，表明其效力越高。
表2是某些化妆品防腐剂对主要测试微生物的MIC。
表1一些化妆品防腐剂商品及化学成分商品名称化学成分Enxylk400 甲基二溴戊二腈和苯氧乙醇Biopure100 咪唑烷基脲Nipaguard DMDMH 二甲基二羟基乙内酰脲Nipaguard TCC N-（4-氯苯基-N-3，4-二氯苯基）脲Nipacide PX (PCMX) 对氯间二甲苯酚GERMALLⅡ双咪唑烷基脲GERMALL PLUS 双咪唑烷基脲和碘丙炔基氨基甲酸丁酯（IPBC）ALLANTOIN 乙醛双酰脲SUTTOCIDE A 羟甲基甘氨酸钠华科-98、凯松CG、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-2甲基-4-异JX-515、YN-H3 噻唑啉-3-酮GLYDANT 二甲基二羟基乙内酰脲GLYDANT PLUS DMDM和IPBCIRGASAN DP300（玉洁新DP-300）、2，4，4’-三氯-2’-羟基二苯醚Oletron1.2化妆品的防腐体系的构建1.2.1防腐剂的复配一种万能的防腐剂是不存在的。
化妆品防腐挑战评价标准
化妆品防腐挑战评价标准
化妆品防腐挑战评价标准主要涉及以下几个方面：
1. 防腐效能试验：这是评价化妆品防腐性能的关键环节。
通过在化妆品样品中加入微生物（如细菌、酵母和霉菌等），观察防腐剂对微生物的生长和繁殖的抑制效果。
常用的方法有一次加菌法和多次加菌法等。
2. 挑战性试验：这是模拟化妆品在生产、储存和使用过程中可能遇到的微生物污染情况。
通过在样品中加入定量已知菌种，定期检测微生物的数量变化，以评估防腐剂的防腐效果。
3. 评价标准：化妆品防腐挑战评价标准通常包括微生物数量、防腐剂浓度、试验周期等指标。
例如，在挑战性试验中，如果样品在特定时间内（如第7天、第14天和第28天）的微生物数量均控制在一定范围内，说明防腐剂的防腐效果较好。
4. 参考国际标准：在评价化妆品防腐挑战时，可以参考国际通用的标准和方法，如欧盟和美国的相关法规和指南。
同时，对于防腐体系相同且配方近似的产品，可以参考已有的实验数据和资料进行评价。
5. 实验周期：化妆品防腐挑战试验的周期通常至少为33天，以确保在试验过程中充分评估防腐剂的性能。
化妆品防腐挑战评价标准主要关注防腐效能试验、挑战性试验、评价指标、国际标准和实验周期等方面，以确保化妆品在生产、储存和使用过程中具备可靠的防腐性能。
化妆品防腐挑战测试 标准
化妆品防腐挑战测试标准化妆品是现代女性日常护肤和美容的必备品，但其中存在着一些挑战和问题，其中之一就是防腐挑战。
化妆品中的防腐剂是为了延长其使用寿命和防止细菌滋生而添加的。
然而，随着消费者对天然和无添加化妆品的追求，防腐剂成为了消费者关注的热点问题之一。
防腐剂的存在是确保化妆品的质量和安全。
化妆品中含有水分和营养成分，这些成分很容易被细菌污染，导致产品腐败和滋生细菌。
为了在使用过程中保证化妆品的安全，防腐剂的添加是必要的。
合理的添加防腐剂可以有效杀灭细菌，保持化妆品的新鲜和卫生。
防腐剂也存在一些潜在的危害和副作用。
一些常见的防腐剂如苯酊、对羟基苯甲酸酯等被怀疑与致敏、激素干扰等问题有关。
这些问题引发了消费者对防腐剂的担忧和对天然无添加化妆品的追求。
同时，长期使用含有一定剂量防腐剂的化妆品是否对人体有潜在风险，也是化妆品行业需要重视的问题。
面对这一挑战，化妆品行业需要采取措施来解决。
首先，对防腐剂进行严格的临床评估和安全性测试是十分重要的。
只有通过科学合理的方法来确定防腐剂的使用剂量和安全性，才能为消费者提供真正的安全化妆品。
其次，化妆品企业应该加强对消费者的教育和宣传工作，提高消费者的安全意识，避免被不合理的宣传误导。
最后，行业监管部门应该加强对化妆品市场的监管，加强对防腐剂使用的限制和标准，确保化妆品真正安全可靠。
除了以上的努力，化妆品行业还可以探索其他替代方案。
一些天然防腐剂如茶树精油、桉树精油等，被认为具有天然的抗菌和防腐特性，可以用于替代传统的合成防腐剂。
此外，包装技术的进步也可以有效延长化妆品的保质期，减少防腐剂的使用。
例如，采用气密式包装，可以有效隔绝外界空气和细菌的进入；采用泵装设计可以减少手部接触，减少污染的机会。
综上所述，化妆品防腐挑战是一个需要行业共同努力解决的问题。
在确保化妆品质量和安全的前提下，可以通过严格的安全评估和监管来提高防腐剂的使用合理性；通过加强消费者教育来提高安全意识；通过研发更安全的替代方案和改进包装技术来降低防腐剂的使用。
化妆品防腐效能评价方法的现状与发展趋势
上． 经培养后能旺盛生长 ． 若培养基平板 ｒ －
防腐体系的效能与多种独立因素密切相 放有 经防腐 剂处理 的滤纸 圆片 防腐 剂向
可形成抑菌圈。 量出抑菌圈直径的大 ｌ．其 他 化 妆 品 细 菌 总 数 不 得 大 于 关 因此我们很 难直接从 配方 中所用的 防腐剂 渗透 ， １
维普资讯
化妆品防腐效能评价方法的现状
上 海 家化联 合 有 限公 司 裘倩 倩 宁岭 林 惠芬 林欣 荣
随着市 场竞争 的 日益激烈 消费者对 产品
由于大多数 化妆品富含微生
质量 的要 求越来越高 ．对于化妆 品来说 ，保证 物生长 所需 的养 分 ． 果产 品中 如 其微生物安全性是保 证其品质的一个重要 方面。 微 生物是生物 界 中一群 体形微 小 ， 结构 简 没有建 立合理 的防腐体 系 ． 境 环
降到 １０ Ｆ ／ （Ｆ ／ ） 以下 ，在 ２ ０ Ｃ Ｕｇ Ｃ Ｕｍ１ ８天内
行测试 而且可同步评估多种样品。该方法的
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
接种 方式 可 以采 用单菌 接 种或混合 接种 。
Ｕｇ Ｃ Ｕｍ１ Ｃ 以上优 点使得 它在近年来被越来 越 多的中外化 单菌接种工 作量大 、费时 ，但是 有助于研究 各 全 部降至 ０ Ｆ ／ （Ｆ ／ ） 那 么视 为 防腐 妆品企业所 接受和推 行。 特 定挑战 用菌株的单独 数据 ，混合 接种工作 量 效 果优秀 ，通过挑 战试验 ：如 果在 第 ７ 时下 天
国标严格 。
度 。ＭＩ 越小 ，表 明防腐剂抑茵 能 力越 ： Ｃ值 在通 过抑菌 圈试验 、 Ｃ ＭＩ 试验 初步反
１． 防腐效能评价方法的现状
腐 效果 后 ， 需要进 一步评价 防腐体 系在 以
化妆品防腐效能评价方法操作程序2020
附录3化妆品防腐效能评价方法操作程序微生物挑战性实验可采用单一培养或混合培养方式。
单一培养即分别接种每种测试菌株的菌悬液于测试化妆品中，在接种后的一定时间内对化妆品中的微生物进行平板计数，以此判断防腐剂的防腐效能。
混合培养为将几种细菌或真菌的混合液接种于化妆品中，在接种后一定时间内，测定化妆品的菌落数，以此判断防腐剂的防腐效能。
化妆品防腐效能评价者可根据实际情况选择培养方式。
微生物挑战性实验测试菌株的选用原则为：1.包括革兰氏阳性和阴性细菌；2.酵母菌和霉菌至少各一种；3.测试菌株对各种常用防腐剂抵抗性能代表化妆品高危污染微生物对该防腐剂的抵抗性；4.可根据化妆品的性质，生产、使用环境等增加菌株。
一般较常用的菌株为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白假丝酵母菌和巴西曲霉等。
检测时间：一般为在化妆品中加入微生物时（根据加入菌液浓度和化妆品质量/体积计算的理论浓度），以及第1、7、14、21、28天检测化妆品中的菌落数。
检测方法：参考《规范》第五章微生物检验方法。
判定标准：细菌于第7天时菌落总数下降99.9%，至第28天时无增长；真菌于第14天下降99.0%，至28天时无增长，判断为防腐效果良好。
对于能够保证化妆品产品微生物质量合格，且在使用过程中不存在二次污染的化妆品可以不进行微生物挑战性实验。
化妆品防腐效能评价方法1．定义微生物挑战性实验：将一定量的微生物加入到化妆品中，每隔一定时间检测微生物增减的数量，以此来判断防腐剂防腐效能的实验方法。
2．仪器设备2.1 生物安全柜2.2 高压蒸汽灭菌器2.3 冰箱2.4 恒温培养箱2.5 均质器2.6天平3.试剂和培养基3.1 0.85%生理盐水3.2 含0.05%吐温80的生理盐水3.3 改良的LETHEEN 肉汤3.4水解大豆琼脂培养基（TSA）3.5萨布罗右旋糖琼脂培养基(SDA)4.实验菌株4.1细菌：金黄色葡萄球菌ATCC6538，大肠杆菌ATCC8739，铜绿色假单胞菌ATCC9027等。
化妆品防腐剂抑菌和微生物污染关系的研究
[作者简介]许雅(1963-),女,学士,副教授,主要从事微生物检验教学和研究工作。
=论著>化妆品防腐剂抑菌和微生物污染关系的研究许雅,曾转萍,吴宪毅,陈榕,蔡旭玲(广东药学院流行病学教研室,广州510224)[摘要]目的:了解化妆品防腐剂抑菌和微生物污染之间关系。
方法:在化妆品使用前、使用14d、使用28d3个使用时段,用纸片法对60份化妆品进行防腐剂抑菌效果检测,按5化妆品微生物标准检验检测方法6进行微生物污染情况检测。
结果:防腐剂对金黄色葡萄球菌的抑菌效果优于大肠杆菌(P<0105);3个使用时段,对金黄色葡萄球菌不明显抑菌的分别为5617%、8510%、8614%,部分抑菌的分别为3117%、813%、618%,明显抑菌的分别为1116%、617%、618%;对大肠杆菌不明显抑菌的分别为9117%、9510%、10010%,部分抑菌的分别为813%、510%、010%,明显抑菌的均为010%;3个使用时段的细菌总数超标率分别为617%、4510%、6611%,金黄色葡萄球菌检出率分别为010%、117%、314%,粪大肠菌群检出率分别为010%、117%、117%,铜绿假单胞菌未检出;随着使用时间的增长,化妆品防腐剂抑菌效果则呈减弱趋势(P<0105),而细菌总数超标率呈增加趋势(P<0105)。
结论:化妆品防腐剂抑菌的效果与微生物受污染的程度有着密切的联系。
[关键词]化妆品;防腐剂;抑菌;微生物污染[中图分类号]TS97411[文献标识码]A[文章编号]1004-8685(2005)10-1201-03 Investiga tion of r ela tion between bacter iostasis of antisep tic and m icroorgan is m pollution of cos m eticsXu Y a,Zeng Zhua n2pi ng,Wu Xian2yi,Chen Rong,Ca iXu2li ng(Depart m ent of Epidem iol ogy,Guangdong College of P harmacy,Guangzho u510224,China)[Ab str act]O b jective:To evalua te t he relati onsh i p bet w een the cos m etic m icro organis m poll utio n and the antisep tic bacter i osta2 si s1M ethod s:Sa m ples were coll ected i n3stages,which were ori gina,l used14days and28days1Further more,disc-paper as2 saywas used to exa m i ne bacteriostasi s effect of antisepti c and a standa rd m ethod stated i n c H ygien ic Standard f or Cos me ti cs c was used to exa m i ne t he m icroorgan is m poll uti on of60cos me ti cs1R es u lts:In three usi ng periods,the ra tes of an tiseptic of S1a ureus i n 3different bacteriostas i s effects which were non-o bvi ous contro,l pa rtly control and o bvi ous control were5617%,8510%, 8614%;3117%,813%,618%;1116%,617%,618%respecti ve l y1To E1coli,the ra tes were9117%,9510%,10010%;813%, 510%,010%;010%,010%,010%respecti ve l y1Further m ore,t he overstandard ra tes of the tota l co unts of bacter i a were617%, 4510%and6611%1The pos itive ra tes of S1aureus we re010%,117%,314%and t he positi ve rates of feca l colifor m were010%, 117%,117%1Moreover,the lo nger cos me ti cs were used,t he m ore of bacter i a would be detected(P<0105)1H o wever,the e ffect of the bac teriostasi s of antisepti c was decreased by ti m e1C on clusion:There are c l osely relatio nsh i p bet ween t he m icroorgan is m poll utio n of cos m e ti c and the bacte ri ostasis of anti septic1[K ey wor ds]Cos m eti c;Antisepti c;Bacte ri ostasis;M icroorgan is m poll uti on化妆品易受微生物的污染,故常在产品中添加防腐剂以抑制微生物的生长繁殖。
化妆品防腐性能挑战性试验及评价标准
化妆品防腐性能挑战性试验及评价标准化妆品防腐挑战性试验及评价标准投产前对产品防腐体系的可靠性做效能测试是十分必要的，目前，国内外配方设计时普遍采用防腐挑战性试验评价防腐剂的有效性。
防腐挑战性试验更接近实际应用，该方法能够模拟化妆品生产和使用过程中受到高强度的微生物污染的潜在可能性和自然界中微生物生长的最适宜条件，从而避免由微生物污染造成的损失和为消费者健康提供可靠的保证。
1.CTFA推荐的一次加菌防腐挑战性试验及评价标准CTFA的方法初始的霉菌和细菌的接种量分别为10000cfu/g（ml）和1000000cfu/g （ml）（CFU为菌落单位），要求在第7天时霉菌降低90%，细菌降低99.9%，并且在28天内菌数持续下降。
美国在CTFA评价方法的基础上提出更为严格的标准，即，若单菌接种的三个平行试验中任何一种微生物数量的平均值，在第七天时下降到100 cfu/g （ml）以下，28天全部为0，则视为效果优良通过挑战试验；若第七天时下降到1000 cfu/g（ml）以下，则视为勉强通过；若单菌接种的任何一种微生物，任何一个平行样达不到上述标准，也达不到CTFA的要求，防腐体系则评定为无效。
2.国内参照CTFA加菌防腐挑战性试验及评价标准初始接种细菌量1000000 cfu/g（mL）（1）第28天时，样品中含细菌或霉菌＞1000cfu/g（mL）该样品不能通过微生物攻击的挑战试验，表明样品的防腐体系不能有效地志到抑制微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。
（2）第28天时，样品中含细菌或霉菌在100 cfu/g-1000 cfu/g（mL），该样品有条件地通过挑战试验，即当产品中蛋白质或其他动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防霉体系可以使用，否则不能。
化妆品中防腐剂的安全性评估
化妆品中防腐剂的安全性评估在追求美丽的道路上，化妆品成为了我们日常生活中不可或缺的一部分。
然而，在享受化妆品带来的种种好处时，我们也不能忽视其中一个重要的成分——防腐剂。
防腐剂在化妆品中起着防止微生物滋生、保持产品稳定性和延长保质期的关键作用。
但与此同时，消费者对于防腐剂安全性的担忧也日益增加。
那么，化妆品中防腐剂的安全性究竟如何评估呢？首先，我们需要了解防腐剂在化妆品中的作用机制。
防腐剂通过抑制微生物的生长和繁殖来保持化妆品的质量。
常见的防腐剂包括苯氧乙醇、对羟基苯甲酸酯类（如甲酯、乙酯、丙酯等）、咪唑烷基脲等。
它们能够破坏微生物的细胞膜、干扰其代谢过程或者抑制其酶的活性，从而达到杀菌或抑菌的效果。
接下来，评估防腐剂的安全性需要考虑多个因素。
其中一个重要的方面是使用浓度。
一般来说，防腐剂在化妆品中的添加量是经过严格控制的，并且遵循相关法规和标准。
只要在规定的浓度范围内使用，大多数防腐剂被认为是相对安全的。
但如果使用浓度过高，就可能对皮肤产生刺激、过敏等不良反应。
皮肤的敏感性也是评估防腐剂安全性的一个关键因素。
不同的人皮肤状况各异，有些人的皮肤可能比较敏感，对某些防腐剂更容易产生过敏反应。
例如，对羟基苯甲酸酯类防腐剂在一些敏感皮肤人群中可能会引发接触性皮炎。
因此，对于皮肤敏感的人群，选择化妆品时需要更加谨慎，关注产品中防腐剂的种类和含量。
除了浓度和皮肤敏感性，防腐剂的毒性也是需要重点关注的。
一些研究表明，某些防腐剂可能具有潜在的毒性，如长期接触可能对人体健康产生不利影响。
但这并不意味着所有的防腐剂都是有害的，关键在于其在化妆品中的使用是否符合安全标准。
另外，防腐剂的协同作用也会影响其安全性。
在一些化妆品中，可能会同时使用多种防腐剂，它们之间可能会产生协同、相加或者拮抗的作用。
这就需要对这些防腐剂的组合进行深入研究和评估，以确保其整体的安全性。
为了评估化妆品中防腐剂的安全性，相关的科学研究一直在进行。
化妆品防腐效能评价方法操作指南-中国食品药品检定研究院
化妆品防腐效能评价方法操作指南化妆品防腐效能评价比较常用的方法是微生物挑战性实验。
其基本原理是：将一定量的微生物加入到化妆品中，每隔一定时间检测微生物增减的数量，以此来判断防腐剂的防腐效能。
通过该方法既可以评价防腐剂的效能，又能在安全剂量内确定化妆品使用的防腐剂的最低浓度。
微生物挑战性实验可采用单一培养或混合培养方式。
单一培养即分别接种每种实验菌株的菌悬液于测试化妆品中，在接种后的一定时间内对化妆品进行平板计数（APC），以此判断防腐剂的防腐效能。
混合培养为将几种细菌或真菌的混合液接种于化妆品中，在接种后一定时间内，测定化妆品的APC，以此判断防腐效能。
可根据实际情况选择培养方式挑战性实验测试菌株的选用原则为：尽量覆盖革兰氏阳性、阴性细菌，酵母菌和霉菌至少各一种，并且对各防腐剂抵抗性较高，能代表化妆品中可能污染的微生物对防腐剂的抵抗性的菌株。
可根据化妆品的性质，生产、使用环境等增加菌株。
一般较常用的菌株为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉等。
检测时间：一般为在样品中加入微生物时，以及第1、7、14、21、28天检测化妆品中的菌落数。
判定标准：推荐采用《欧洲药典》的结果评定标准，即细菌于第7天时菌落总数下降99.9%，至第28天时无增长；真菌于第14天下降99.0%，至28天时无增长，判断为防腐效果良好。
对于能够保证化妆品产品微生物质量合格，且在使用过程中不存在二次污染的化妆品可以不进行微生物挑战性实验。
化妆品防腐效能评价方法1.定义微生物挑战性实验：将一定量的微生物加入到化妆品中，每隔一定时间检测微生物增减的数量，以此来判断防腐剂的防腐效能的实验方法。
2仪器设备2.1 生物安全柜2.2 高压蒸汽灭菌器2.3 冰箱2.4 恒温培养箱2.5 均质器2.6 旋涡振荡器2.7天平2.8 灭菌培养皿2.9 灭菌试管2.10灭菌刻度吸管2.11 灭菌试剂瓶2.12 玻璃珠3.试剂和培养基3.1 生理盐水3.2 含0.05%吐温80的生理盐水3.3 改良的LETHEEN 肉汤3.4水解大豆琼脂培养基（TSA培养基）3.5马铃薯葡萄糖培养基（PDA）3.6萨布罗右旋糖琼脂培养基(SDA)4.实验菌株4.1细菌：金黄色葡萄球菌A TCC6538，大肠杆菌A TCC8739，铜绿色假单胞菌ATCC9027。
化妆品防腐剂的安全性评估
化妆品防腐剂的安全性评估在当今追求美丽与呵护肌肤的时代，化妆品成为了我们日常生活中不可或缺的一部分。
然而，在化妆品的成分中，防腐剂的存在引发了不少关注和担忧。
人们对于防腐剂是否安全存在着诸多疑问。
那么，化妆品防腐剂究竟安不安全呢？这就需要我们对其进行深入的安全性评估。
首先，我们来了解一下化妆品中为什么要添加防腐剂。
化妆品在生产、储存和使用过程中，很容易受到微生物的污染。
微生物如细菌、真菌等一旦在化妆品中滋生，不仅会影响产品的质量和稳定性，还可能对使用者的皮肤造成感染和损害。
为了防止这种情况的发生，防腐剂就被加入到化妆品中，以抑制微生物的生长和繁殖，延长产品的保质期，确保其在使用过程中的安全性和有效性。
常见的化妆品防腐剂有很多种类，比如对羟基苯甲酸酯类（Parabens）、苯氧乙醇、咪唑烷基脲、甲基异噻唑啉酮等。
这些防腐剂在化妆品中的使用都受到严格的监管和限制。
对羟基苯甲酸酯类防腐剂是使用较为广泛的一类。
它们具有良好的抗菌效果和稳定性，但也有研究指出，长期大量使用可能会对内分泌系统产生一定的影响。
不过，需要注意的是，化妆品中这类防腐剂的使用浓度通常较低，且通过皮肤吸收进入人体的量极少，一般在正常使用情况下不太可能对健康造成显著危害。
苯氧乙醇是一种相对温和的防腐剂，常用于化妆品和个人护理产品中。
它的安全性较高，但在高浓度下可能会引起皮肤刺激和过敏反应。
咪唑烷基脲和甲基异噻唑啉酮等防腐剂也有其自身的特点和潜在的风险。
咪唑烷基脲在某些敏感皮肤人群中可能会引发过敏，而甲基异噻唑啉酮则因为可能导致皮肤过敏的案例增多，其使用受到了更严格的限制。
那么，如何评估化妆品防腐剂的安全性呢？这需要从多个方面进行考虑。
一方面，要关注防腐剂的毒性研究。
通过动物实验和细胞实验等方法，评估防腐剂对生物体的急性毒性、慢性毒性、生殖毒性、遗传毒性等。
这些实验数据可以为判断防腐剂的安全性提供重要依据。
另一方面，要考虑防腐剂的使用浓度和暴露量。
化妆品防腐挑战测试 标准
化妆品防腐挑战测试标准摘要：一、化妆品防腐挑战测试概述二、化妆品防腐挑战测试标准的重要性三、化妆品防腐挑战测试的具体标准四、我国化妆品防腐挑战测试的标准发展五、总结正文：一、化妆品防腐挑战测试概述化妆品防腐挑战测试是一种通过模拟化妆品在实际使用过程中可能遇到的微生物污染、温度变化、ph值变化等环境，评估化妆品防腐系统性能的实验方法。
这种测试旨在确保化妆品在保质期内保持安全、有效，并为消费者提供优质的产品。
二、化妆品防腐挑战测试标准的重要性化妆品防腐挑战测试标准对于化妆品行业具有重要意义。
首先，它可以确保化妆品在生产、储存、运输和销售过程中不受到微生物污染，降低消费者使用过程中出现过敏、感染等风险。
其次，通过防腐挑战测试，可以提升化妆品企业的产品质量，提高市场竞争力。
最后，化妆品防腐挑战测试标准还有助于规范我国化妆品市场，保障消费者权益。
三、化妆品防腐挑战测试的具体标准化妆品防腐挑战测试的具体标准包括以下几个方面：1.测试方法：常用的化妆品防腐挑战测试方法包括振荡法、点滴法、薄膜法等。
企业可根据产品特点和需求选择合适的测试方法。
2.测试时间：通常为28天，期间模拟化妆品在实际使用过程中的各种环境条件。
3.测试指标：包括微生物生长情况、产品外观变化、ph值变化等。
通过观察这些指标，评估化妆品的防腐性能。
4.评价标准：根据测试结果，判断化妆品是否达到预设的防腐性能要求。
评价标准包括抑制微生物生长、防止产品变质等。
四、我国化妆品防腐挑战测试的标准发展近年来，我国化妆品行业蓬勃发展，消费者对产品质量的要求也越来越高。
为此，我国在化妆品防腐挑战测试方面不断完善标准，包括制定相关法规、技术规范和指导原则，以确保化妆品的安全性和有效性。
同时，我国还积极参与国际化妆品防腐挑战测试标准的制定，与国际接轨，为国内化妆品企业提供更加明确的发展方向。
五、总结化妆品防腐挑战测试标准是保障化妆品产品质量的重要手段。
通过严格的防腐挑战测试，可以确保化妆品在保质期内安全、有效，为消费者带来优质的产品体验。
508批化妆品微生物检验结果及方法的初步研究
29广东省药品检验所，广东广州 510663……………………………………曹婷婷 江艳芳 林铁豪#508批化妆品微生物检验结果及方法的初步研究为了了解化妆品的卫生质量，并对化妆品的微生物检验方法进行初步考察，按 《化妆品安全技术规范》（2015版）对508批化妆品进行微生物检验，并参考 《中国药典》（2015版）控制菌方法适用性试验，添加阳性对照菌，对化妆品微生物控制菌检查方法进行考察。
结果表明化妆品卫生质量较好，合格率为98.23%，不合格化妆品主要表现为菌落总数超标，不合格样品均为护理类化妆品。
添加阳性对照菌后，有18.50%的大肠埃希氏菌阳性对照未生长，有11.42%的金黄色葡萄球菌阳性对照未生长，清洁类、美容/修饰类化妆品阳性对照未生长率较高。
建议加强对化妆品微生物检验控制菌检验方法的方法学研究。
化妆品 微生物检验 检验方法Preliminary Study on Microbiological Inspection Results and Methods of 508 Batches of Cosmetics CAO Tingting JIANG Yanfang LIN Tiehao #(Guangdong Institute for Drug Control, Guangzhou 510663, Guangdong, China)Abstract ： To understand the hygienic quality of cosmetics and finish a preliminary study on the microbiological inspection methods of cosmetics, according to the Safety and Technical Standards for Cosmetics (2015 edition), 508 batches of cosmetics were tested. Referring to Chinese Pharmacopoeia (2015 edition), Escherichia coli , Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa were used as positive control bacteria to investigate the efficacy of the methods. The results showed that the hygienic quality of cosmetics were good with a pass rate of 98.23%, the unqualified cosmetics mainly showed that the total number of bacterial colonies exceeded that of standard, and the unqualified samples were all care cosmetics. After adding the positive bacteria, 18.50% of E. coli positive controls did not grow, 11.42% of S. aureus positive controls did not grow by using conventional method. Positive controls did not show higher growth rate in cleaning and makeup cosmetics. So it is suggested to strengthen the methodological research on the inspection of microbial control bacteria in cosmetics.Keywords ：cosmetics microbiological inspection test method作者简介曹婷婷 （1982—），女，研究生学历，硕士，主管药师，主要从事微生物检验研究。
用微生物挑战性试验考察化妆品防腐剂效果
用微生物挑战性试验考察化妆品防腐剂效果牛振东;江志杰;张光华;孙伟;高春【期刊名称】《日用化学品科学》【年(卷),期】2012(035)003【摘要】According to the 2010 edition of Chinese Pharmacopoeia Appendix,total plate count method was used to assess the preservative effect of 3 types of cosmetic which were Beijing Drug Administration cosmetic risk survey testing samples in 2010.Three cosmetic samples with recovery rate over 70% were selected to carry out the microbial challenge test.The results showed that all of three kinds of cosmetics passed the challenge test.It not only provided the scientific basis for cosmetic manufacturers to improve preservative efficiency,but also good reference to guarantee consumer health.%为了考察2010年化妆品风险监测抽验样品的防腐效果,参考《中国药典》（2010年版附录）对3种化妆品进行菌落计数方法学验证,选取回收率达到70%以上的3种化妆品进行微生物挑战性试验。
通过对3类化妆品进行挑战性试验研究,结果表明,选择的3种化妆品均能通过挑战性试验。
通过此次考察,可以为化妆品生产企业提高防腐工艺提供科学的依据,为消费者的健康提供参考。
如何评价防腐剂的防腐抑菌能力
如何评价防腐剂的防腐抑菌能力近年来，化妆品工业使用的天然原料和各种功能性添加剂日趋增多，产品更容易被微生物所侵蚀，化妆品防腐问题越来越受到重视，防腐剂成为化妆品中必不可少的成分。
那么怎样选择一款合适的防腐剂？一款好的防腐剂应该具备良好的防腐抑菌能力。
国际上普遍使用三种方法去评价防腐抑菌性能：测定最小抑菌浓度（MIC ）、防腐挑战试验、线性回归法。
①最小抑菌浓度（MIC ）MIC 是最常用的一种防腐性能评价方式，测定方法包括肉汤稀释法和琼脂稀释法。
图1 微量肉汤稀释法所用的96孔板MIC 数值越小，抑菌能力越强。
效果好的防腐剂与效果差的MIC 值相差上百倍。
国外文献建议配方中的添加量一般是最大MIC 的2-4倍（视具体情况）。
常用的防腐剂和一些无添加防腐剂的MIC 数据如下表：表1 各种防腐剂和无添加防腐剂MIC注1%=10000ppm 注②：尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、苯氧乙醇MIC 数据来源于《化妆品化学与工艺技术大全》；1,2-己二醇、1,2-戊二醇、对羟基苯乙酮MIC 数据来自德之馨(Symrise)；Atdf ®pf -95为己脒定二(羟乙基磺酸)盐， MIC数据来自巴斯夫(BASF)；Prese®WS-61为5%包合己脒定二(羟乙基磺酸)盐，MIC数据来源于微生物研究所报告；Esonal®OSM-303为对羟基苯乙酮的复配物，为欣浪生化防腐剂。
②防腐挑战实验在防腐剂样品中，加入定量的微生物（细菌、真菌混合液）。
在此后的0/7/14/21/28天，通过测量样品中微生物的含量来评价防腐性能，实验周期长达28天。
③线性回归法线性回归法与防腐挑战实验方法很类似，但其所花费的时间比较短，周期为一周。
线性回归法通过D值（配方中的微生物菌群90%失活所需要的时间）判断配方是否通过防腐实验。
标准为：致病微生物D值≤4h，非致病细菌、酵母菌和霉菌D值≤28h。
D值越小，防腐性能越好。
探究微生物检验在化妆品质量检测中的应用
探究微生物检验在化妆品质量检测中的应用发布时间：2021-12-02T06:19:14.817Z 来源：《建筑实践》2021年第22期作者：郭卫华[导读] 化妆品中大多含有水、碳源及营养物质，在合适的温度和pH条件下，给微生物生长繁殖创造了有利条件郭卫华广州美塑生物科技有限公司广东广州 511356 摘要：化妆品中大多含有水、碳源及营养物质，在合适的温度和pH条件下，给微生物生长繁殖创造了有利条件。
化妆品质量不合格，其中的微生物含量不符合质量检验标准就会导致化妆品变色、气胀、出现酸味、乳化体破坏或分层等产品质量问题。
因此，对化妆品进行严格的微生物检验，是确保化妆品质量合格的基础保障。
本文就将基于此问题展开分析和探讨。
关键词：微生物检验；化妆品；质量检测；应用引言：时尚美妆行业要想保证自身的持续稳定发展，最为重要的就是需要保证产品质量，重视产品质量监督检验、风险评估检验以及科技成果鉴定检验工作，对消费者的权益加以保护。
其中微生物检验能尽可能规避化妆品中微生物超标的问题发生，保证消费者的人身安全及基本权益，在质量控制工作中尤其重要。
本文对微生物检验在化妆品检验中的应用现状和实践关注点进行经验总结，以期对我国社会和谐和行业的稳定发展有所帮助。
1、化妆品微生物检验的主要方法首先，是微生物检验来源和制备。
一般来说，微生物检验往往是通过抽样调查的方式，将市场上存在的化妆品进行抽样微生物检验。
检验的化妆品需要确认没有过期，并且在使用之前开展微生物检验工作，分析化妆品的成分以及微生物含量。
另外，是微生物检验方法。
根据《化妆品安全技术规范》中的相关规定，化妆品的微生物检验需要按照具体的规格、步骤以及标准，才能得到科学可靠的结果与指标。
在检验过程中，要重视检测化妆品中菌落的综述、铜绿假单胞菌、霉菌、酵母菌等等，在化妆品微生物检测的过程中，如果有任何一项指标不符合《规范》中的标准，就表明了改化妆品不合格。
其检测重点主要包括以下三个方面：第一，对化妆品中总微生物含量进行检测。
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( 3) 防腐效果差( P) , 即三次加菌后, 在每次加 菌后的第 7 天或 14 天时, 存活菌量 > 1000 个/ g 或 mL 样品( 不通过测试) 。 2 结果
受试样品一次加菌和 3 次加菌后, 在检测时间内 细菌和霉菌的抗腐能力见表 1～4。根据两种方法评 判标准, 将 8 种防腐体系的防腐效果评判列于表 5。 从结果看, 两种加菌方法对防腐体系的评判结果基本 一致, 三次加菌还可对有效的防腐体系作出程度之区 别: 防腐优良( W: Well pr eser vative) 和防腐尚可( M : M ar ginal preserv at ive) 。此外, 在一次加菌后 1～2 周 内能将样品中含菌量降低至加入菌量的 0. 1% , 可通 过 3 次加菌实验, 如防腐体系 5 和 8 对细菌的防腐 力; 但若大于 0. 1% , 即使在以后的测试时间内有逐 渐下降至 0 的趋势, 可能亦很难通过 3 次加菌实验, 如防腐体系 7 对细菌的防腐力。
关键词 微生物挑战性试验 化妆品防 腐 评价
防腐剂是化妆品工业中非常重要的部分[ 1, 2] 。随
着化妆品种类和剂型的繁多, 及高科技生物原料应用 的增加, 许多化妆品公司都在积极研究防腐剂问题 ( 包括其品种和使用浓度) , 并不断建立新的防腐体 系。在评价防腐剂的实际效果中, 应用最为广泛和经 典 的 研 究 手 段 是 微 生 物 挑 战 性 试 验 ( m icrobial challeng e t est ing ) [ 3～6] 。这种测试方法是根据化妆品 生产和消费者使用中可能存在的污染( 一次污染和二 次污染) , 人为地将一定量的微生物( 细菌和霉菌) 加 入到产品中, 然后间隔一定时间分析该产品中防腐剂 对微生物的作用, 按检测期间加菌产品的含菌量来评 判防腐剂的防腐效果与否或大小, 这种方法在评价防 腐剂防腐效果上有很高的参考价值。
第一作者简介: 林惠芬, 女, 1953 年生, 1976 年毕业于上海医科大学, 医学博士, 基础研究室主任, 上海市金沙江路 1275 号
·43·
分析与检测
日 用 化 学 工 业
1999 年第 4 期
1. 2. 3 重复 3 次加菌的微生物挑战试验 此方法参照国际 CT F A( 国际化妆品、香精和洗
3. 3×103
0
9. 0×102
5. 8×104 1. 0×105 4. 4×104
7. 2×104 4. 5×104 2. 0×104
5. 0×104 1. 0×103 1. 0×103
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
表 4 重复三次 加霉菌的微生物挑战试验结果 ( 菌落数/ g 样品)
防腐体系 第一次加菌
编号 7 天后 14 天后
( 加菌量)
3. 2×105
1
0
0
2
0
0
3
0
0
4
0
0
5
0
0
6
2. 6×104 5. 2×104
7
0
0
8
0
0
第二次加菌
第三次加菌
7 天后 14 天后 14 天后
3. 95×105
3. 9×105
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
5. 1×104 3. 0×104 4. 6×104
1. 0×102
0
0
2. 0×102
涤剂协会) 推荐的微生物挑战性试验。称取受试样品 30g , 每隔 2 周加菌一次( 即实验的第 1、3 和 5 周) , 每 次加细菌量为 1×106～1×107 个/ g 样品和霉菌 1× 105 个/ g～1×106 个/ g 样品。在加菌后的 0 天、7 天 和 14 天( 后一次加菌前) 采样分析样品中含菌量, 方 法同前。此方法可将受检样品分为三类:
分析与检测
3 讨论 在化妆品工业中, 由于化妆品具有一些特殊原
因, 如原料易污染、产品中的营养成份、配方和生产的 复杂性、安全性对防腐剂使用的限制及其它问题, 化 妆品防腐剂的研究, 包括防腐剂的品种、使用剂量及 合理配伍等, 一直是十分重要的研究领域。而研究手 段, 以最终都是对产品进行直接地防腐效果评价最为 客观和重要, 如微生物挑战性实验。
·44·
表 2 28 天微生物( 霉 菌) 挑战性试验结果( 菌落数/ g 产品)
防腐体系
编号
0
1
1. 3×105
2
1. 0×105
3
1. 6×105
4
1. 1×105
5
1. 4×105
6
3. 8×105
7
2. 5×105
8 空白 空白
1. 0×105 2. 4×106 1. 0×105
检测时间( 加菌后天数)
1. 2. 1 受试用微生物 测试用细菌和霉菌均由上海工业微生物研究所
提供。
细菌包括: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆 菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。霉菌包括: 黑曲霉、黄曲 霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊 叶芽枝霉、球毛壳 霉、绿色木霉。
实验 前, 将各 菌种 接种于 合适 的培 养基中, 于 37℃( 细菌) 或 28℃( 霉菌) 下培养。细菌培养在 2 天 后, 霉菌培养在 5 天后, 挑选适量菌落于灭菌的生理 盐水中, 制成一定浓度的混合细菌( 1×108 个/ mL ) 或 混合霉菌悬液( 1×107 个/ mL ) , 置于 4℃贮放备用。 1. 2. 2 一次加菌的 28 天微生物挑战试验
0. 1% , 可预计该防腐体系防腐效果的优良与否。
参考文献 1 Daniel K . Brannan; Cosm et ic preser vat ion. Cosm et ics & Toilet ries ,
1996( 111): 69～83 2 张延, 谢京燕译 . 化妆品的防腐 . 日用化学工业译丛, 1994( 4 ) : 29
微生物挑战性实验在人为加菌方面, 有一次性或 多次加菌。为探讨和开展这方面的工作并提供一些经
验, 我们尝试了两种加菌方法的微生物挑战性实验, 对几种防腐剂体系的防腐力进行了研究。
1 材料与方法 1. 1 化妆品中常用的防腐体系[ 6]
选择了 8 种化妆品中常用的防腐体系按常规方 法加入膏霜内, 同时设 2 个对照膏霜( 不含任何防腐 剂) 。防腐体系 1 是 0. 1% 国产菌霉克星; 体系 2 是 0. 1% 国产菌霉克星、0. 2% 尼泊金甲酯、0. 1% 尼泊金 丙 酯; 体 系 3 是 0. 04% 国 产 CY-1; 体 系 5 是 国产 CY-1、0. 2% 尼泊 金甲酯、0. 1% 尼泊金 丙酯; 体 系 5 是传统的尼泊金甲酯和丙酯与极美Ⅱ配伍; 防腐体系 6、7 和 8 是含同种防腐剂, 体系 6 为低 浓度, 体系 7 是高浓度, 体系 8 是高浓度与其它防腐剂配伍。 1. 2 微生物挑战性实验
0
0
表 5 两种微生物挑 战性实验对受试防腐体系效果评判
防腐 体系 编号
1 2
3
4
5
6
7
8
一次加菌微生物挑战性实验
抗细菌
抗霉菌
无效
有效
无效
有效
无效
有效
无效
有效
有效
有效
无效
无效
有效
有效
有效
有效
三次加菌微生物挑战性实验
抗细菌
抗霉菌
P
W
P
W
P
W
P
W
W
W
P
P
P
W
M
W
第4期 1999 年 8 月
林惠芬等: 用微生物挑战性试验评价化妆品防腐剂效果
第4期 1999 年 8 月
分析与检测
日 用 化 学 工 业
China Surfactant Det ergent & Cosm et ics
分析与检测
用微生物挑战性试验评价化妆品防腐剂效果
林惠芬 李 斌 方惠英 ( 上海凤凰日用化学有限公司, 上海市日用化学工业研究所, 上海市, 200062)
摘要 微生物挑战性试验是目前评价防 腐剂效果的最为广泛和经典的检测方法。我们利用此方 法对几种防腐剂 的防腐效果进行了研究, 为指导实际使用提供了依据。
8
3. 5×104 2. 2×104
第二次加菌
第三次加菌
7 天后 14 天后 14 天后
5. 6×106
2. 1×106
1. 1×105 6. 3×104 3. 2×104
1. 0×105 7. 5×104 3. 3×104
1. 8×105 6. 7×104 6. 8×104
6. 4×104 5. 3×104 3. 5×104
7
14
21
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1. 7×103 3. 7×103 2. 2×104
0
0
0
0
0
0
5. 0×106 2. 1×106 2. 5×106 5. 0×104 6. 0×104 1. 2×105
28 0 0 0 0 0 5. 4×104 0 0 3. 2×106 2. 8×106
表 3 重复三次 加细菌的微生物挑战试验结果 ( 菌落数/ g 样品)
此方法参照美国药典( 第 21 版) 上微生物挑战性 试验检测防腐剂效果的方法。称取各受试样品 30g, 加入混合细菌或混合霉菌悬液, 每克受检膏霜最终含 菌量分别为 5×106 个细菌和 3×105 个霉菌。然后充 分混匀, 置于 28℃下。在接菌的 0、7、14、21 和 28 天 取样分析: 准确称取 3g 样品, 加到含有玻璃小珠的灭 菌锥形瓶内, 加入 27m L 灭菌生理盐水, 充分震荡混 匀, 此悬液为 1∶10 稀释液; 然后再用灭菌生理盐水 按 10 倍依次稀释。按平板倾注法计数受试品中含菌 量, 细菌培养是 37℃下 24h～48h, 霉菌培养为 28℃ 下 3～5 天。此实验用以评判防腐剂的有效与否。评 判标准为: 当每克样品中一次接菌( 1×106 细菌和 1 ×105 霉菌) 后, 在第 14 天存活菌量减少至不高于起 始浓度的 0. 1% , 以后逐渐减少, 在 28 天为 0。符合标 准为防腐剂有效( 通过测试) , 不符合为防腐剂无效 ( 不通过测试) 。