气相色谱和红外光谱对金针菇多糖的分析研究_李健

物质为止。将水相真空浓缩至原体积的 5 = 8 ， 加入 > 倍体积的无水乙醇沉淀后冷冻干燥， 得成品多糖。 56762$ 肌醇六乙酰酯的制备方法 $ 称取 -; 肌醇， 加 入 568; 盐酸羟胺、 58?@ 醋酸酐和 2?@ 吡啶， 在 A4B 水浴中反应 7C 并不时摇动， 待溶液中无不溶物后， 将反应液 置 于 冰 水 中， 使 肌 醇 六 乙 酰 酯 结 晶 析 出。 滤出晶体用 74?@ 蒸馏水洗涤， 544B 烘干备用。气 相色谱检测肌醇六乙酰酯为单峰。 5676>$ 标准单糖样品的衍生化 $ 精密称取标准单糖 54?; 于 54?@ 安 培 瓶 中， 加 入 54?; 盐 酸 羟 胺 和 564?; 内标肌 醇 六 乙 酰 酯， 加 入 吡 啶 468?@， 振荡混 匀， 放入 A4B 水浴中加热反应 24?() 。取出后冷却至 室温， 加入 468?@ 醋酸酐， 在 A4B 下继续反应 24?() 进行乙酰化， 反应完成后将水解液用氮气吹干， 加入 5?@ 氯仿重新溶解， 用微量进样器， 取 468 !@ 进行气
$%&’()*) +, !"#$$#"%&# ’(")*%+(, -+’()&../&0*12 3( 4&) ./0+5&6+40&-/( &%1 *%,0&021 )-2.60&
! !" #$%&! ， ’()*+ ’,-: .$&/! ， ， 0(1* (-$%
（ !"1;<<,/, ;= 1>,?@A.< BC/@C,,D@C/， 1>.C/A>EC FC@-,D+@GH ;= I,A>C;<;/H， 1>.C/A>EC !#$$!% ， 1>@C.； %"JA>;;< ;= JA@,CA,+， K>,L@.C/ JA@:I,A> FC@-,D+@GH， M.C/N>;E #!$$!& ， 1>@C.） $3)60&.6： !"#$$#"%&# ’(")*%+(, !"#$%&’’(&)*+, （ -./ ）0&% "12&*3,+ 1$ ,2(&3"# !),’*!*2&2*"3" 4(, !)"2,*3 0&% ),5"6,+ 7%*38 %,6&8 5,2("+" !"#$$#"%&# ’(")*%+(, ,9": !"#$%&’’(&)*+, &3+ *32)"!"#$%&’’(&)*+, 0,), &3&#$:,+ 1$ 8&% ’()"5&2"8)&!($ （ ;<） &3+ *3=)&),+ %!,’2)& （ >? ） " 4(, ),%7#2% %("0,+ 2(&2 2(, 5"3"%&’’(&)*+, ’"5!"%*2*"3 "= !"#$$#"%&# ’(")*%+(, ,9": !"#$%&’’(&)*+, 0,), )(&53"%,， &)&1*3"%,， 9$#"%,， 5&33"%,， 8#7’"%, &3+ 8&#&’2"%, 0*2( 2(, 5"#&) !,)’,32&8, "= 4"$5 @ ， &"78 @ ， !5"95 @ ， %%"94 @ ， %!"58 @ ， %4"9& @ " 4(, 5"3"%&’’(&)*+, ’"5!"%*2*"3 "= !"#$$#"%&# ’(")*%+(, *32)"!"#$%&’’(&)*+, 0,), )(&53"%,， &)&1*3"%,， 9$#"%,， 5&33"%, &3+ 8#7’"%, 0*2( 2(, 5"#&) !,)’,32&8, "= !"&& @ ， %"&% @ ， 9"$$ @ ， %!"%5 @ ， 48"$4 @ " 4(, >? ),%7#2% %("0,+ 2(&2 2(,), 0,), !$)&3 &3+ =7)&3 )*38 ,9*%2*38 *3 !"#$$#"%&# ’(")*%+(, ,9": !"#$%&’’(&)*+, &3+ *32)"!"#$%&’’(&)*+," 72( 8+01)： !"#$$#"%&# ’(")*%+(, !"#$%&’’(&)*+, （ -./ ） ； 8&% ’()"5&2"8)&!($（ ;< ） ；*3=)&),+ %!,’2)&（ >? ） ； 5"3"%&’’(&)*+, ’"5!"%*2*"3； %2)7’27)&# &3&#$%*% 中图分类号： IJ%$!"% O #’ ’ ’ ’ 文献标识码： P’ ’ ’ ’ 文 章 编 号： !$$%:$#$4 （ %$!$ ） $8:$!57:$# ’ ’ 多糖是自然界内分布极广的一种生物聚合物， 一般由 !$ 个以上的单糖通过糖苷键连接而成， 在高
56768$ 金针菇多糖的水解和衍生化 $ 金针菇多糖的 水解： 精密称取金针菇胞外及胞内多糖样品各 54?; 放入 54?@ 安培瓶中， 加入 >?,- ・ @ E 5 的三氟乙酸溶 振 荡 使 多 糖 溶 解， 充 入 *7 后 封 口， 置于 液 5?@， 554B 烘箱中 水 解 57C 。水 解 完 成 后， 取 出 用 *7 吹 干， 加入 568?@ 甲醇溶解， 再减压蒸干， 重复 2 次以除 尽残余的三氟醋酸。加入 5?@ 氯仿重新溶解， 用微 量进样器， 取 468 !@ 进行气相色谱分析。 金针菇多糖的衍生化： 方法同标 准 单 糖 样 品 的 乙酰化。 5676<$ 气相色谱条件 $ 气 相 色 谱 仪 配 备 %0F"0* GHE I(- 8 GJ 毛 细 管 柱 （ 78? K 4682??， 液膜厚 4678 !?） ， !"# 检测器， 检测温度为 784B ， 进样口温 度为 734B ， 高纯 *7 作载气。柱温采用程序升温， 初 始柱温 554B ， 维持 8?() ， 后以 2B ・ ?() E 5 的速度升 至 5D4B ， 维持 8?() ， 最后以 8B ・ ?() E 5 的速度升至 774B 维持 54?() 。 56763$ 红外光谱分析$ 将 54?; 干 燥 多 糖 样 品 与 544?; 溴化钾混合研磨压片， 在 >444 L >44+? E 5 区间
$ !"#
监测器 （ !"# ） $ 美国 %&’(&) 公司； *(+,-./ 01&/&’ 234 型红外光谱仪$ 美国 *(+,-./ 公司。
756>AM ， 7<68DM ， 检测出一种未知单糖； 胞内多糖由 鼠李糖、 阿拉伯糖、 木糖、 甘露糖和葡萄糖， 摩尔百分 比比为 56DDM ， 76D7M ， 8644M ， 7567>M ， <A64<M ， 检测 出两种未知单糖。
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2010.09.101
! 李! 健" ， 张竹青"， ， 陈! 辉# （ !" 长春工业大学化学工程学院， 吉林长春 !#$$!% ； %" 浙江理工大学理学院， 浙江杭州 #!$$!& ）
摘’ 要： 采用乙醇沉淀得到金针菇多糖 （ ()*） ， 用 +,-./ 法除去蛋白后采用气相色谱 （ 01） 和红外光谱 （ 23） 对得到的金 针菇胞外及胞内多糖进行分析。结果表明， 金针菇胞外多糖中含有鼠李糖、 阿拉伯糖、 木糖、 甘露糖、 葡萄糖、 半乳糖， 其摩尔百分比为 4"$56 ， &"786 ， !5"956 ， %%"946 ， %!"586 ， %4"9&6 ； 胞内多糖中含有鼠李糖、 阿拉伯糖、 木糖、 甘露糖和 葡萄糖， 其摩尔百分比为 !"&&6 ， %"&%6 ， 9"$$6 ， %!"%56 ， 48"$46 。红外光谱分析金针菇胞外和胞内多糖中存在吡喃环 和呋喃环。 关键词： 金针菇多糖 （ ()*） ， 气相色谱 （ 01） ， 红外光谱 （ 23） ， 单糖组成， 结构分析
［D ］ 相色谱分析 。
图 5$ 混合标准单糖衍生化气相色谱图 注： 56 鼠李糖； 76 阿拉伯糖； 26 木糖； >6 甘露糖； 86 葡萄糖； <6 半乳糖； 36 内标。
图 7$ 金针菇胞外多糖衍生化气相色谱图 注： 56 鼠李糖； 76 阿拉伯糖； 26 木糖； >6 未知单糖； 86 甘露糖； <6 葡萄糖； 36 半乳糖； D6 内标。
#$ 结果与讨论
#"!$ 金针菇多糖的单糖组成分析
混合标准单糖的气相色谱分析如图 5 ， 金针菇胞 外和胞内多糖的气相色谱分析如图 7 和图 2 。气相 色谱表明， 金针菇胞外多糖和胞内多糖的单糖组成 和比例存在 一 定 的 差 异。金 针 菇 胞 外 多 糖 由 鼠 李 糖、 阿拉伯糖、 木糖、 甘露糖、 葡萄糖、 半乳糖组成， 其 摩 尔 百 分 比 为 <64>M ， D63AM ， 5>68>M ， 7768<M ，
代谢水平， 提 高 肝 脏 的 解 毒 能 力， 促进蛋白质的合 成， 有助于损伤细胞的修复， 对延缓细胞衰老具有很
［# ］ 高的研究价值 。一般来说， 多糖所具有的药理活性
收稿日期： %$$8:!$:!4’ !通讯联系人 作者简介： 李健 （ !8&9: ） ， 女， 硕士研究生， 研究方向： 微生物发酵及废 水的生物治理。
［! ］ 等植物、 藻类、 菌类及动植物体内均有存在 。金针 ［5 ］ 与其结构是密切相关的 。因此， 在研究多糖功效时 需要对多糖进行结构方面的研究。气相色谱法和红
外光谱法可对多糖中各种单糖的种类及组成比例和 所具有的官能团进行分析和了解， 在研究多糖组分 和结构分析中具有较强的优势。
菇 （ !"#$$#"%&# ’(")*%+(,） 是较为常见的食用菌类， 金 针菇多糖 （ !"#$$#"%&# ’(")*%+(, Q;<H+.AA>.D@R, ， ()* ）
!"#$ 实验方法
56765$ 金针菇胞外及胞内多糖的提取 $ 提取方法见 。 文献 ［8］ 56767$ 金针菇多糖的分离与纯化 $ 取氯仿、 正丁醇，
［< ］ 按体积比 895 的比例混合配制 :.1&; 溶液 。取多糖
粗制品溶于水中， 加入多糖溶液体积 5 = 8 的 :.1&; 溶
［3 ］ 液 ， 剧烈混匀， 反复多次至两相界面无白色粘稠状
［% ］ 具有很强的抗菌活性和抗肿瘤作用 ， 可调节机体的
"! 材料与方法
"9"! 材料与设备
金针菇多糖、 肌醇六乙酰脂 ’ 实验室自制； 鼠李 糖、 阿拉伯糖、 木糖、 甘露糖、 葡萄糖、 半乳糖标准品 ’ 上海海伯奥生物科技有限公司， 色谱纯； 肌醇 ’ 国 产生化试剂， 分 析 纯； 甲 醇、 乙 醇、 三氟乙酸 （ I(P ） 、 醋酸酐、 盐酸羟胺和吡啶’ 国产， 分析纯。 )P32PS 1*:#&$$ 型气相色谱仪配备离子火焰
［5 ］ 进行红外光谱扫描， 观察谱峰情况 。
图Байду номын сангаас2$ 金针菇胞内多糖衍生化气相色谱图 注： 56 鼠李糖； 76 阿拉伯糖； 26 木糖； >、 86 未知单糖； <6 甘露糖； 36 葡萄糖； D6 内标。
#"#$ 金针菇多糖的红外光谱分析
金针菇胞外多糖和胞内多糖的红外光谱图分别 如图 > 和图 8 。在红外光谱图 > 和图 8 中， 22D2+? E 5 和 2>4>+? E 5 处峰值是由多糖中 NE O 的伸缩振动引 起的， 形宽而钝， 得知羟基在分子间发生缔合， 不是 游离的羟基； 7A75+? E 5 处是由多糖中 GE O 的伸缩振 动引起的； 5<8D+? E 5 和 5<53+? E 5 处的吸收峰是 E GON 的 G P N 的伸缩振动引起的， 为肽链上酰胺碳基的吸 收峰； 5>5> 、 52D< 、 52D4 、 527>+? E 5 处是由多糖中 GE O 的变角振动引起的； 555D+? E 5 和 54DD+? E 5 处是由多 糖中的 GE NE G 、 GE NE O 的伸缩振动引起的； DD3+? E 5 和 DD7+? E 5 处是由 " E 吡喃环中 GE O 的变角振动引 起的； D>3+? E 5 处为 # E 吡喃环中 G5 E O 的变角振动吸 收峰。D53 、 D45+? E 5 处是由呋喃环中 G5 E O 的变角振 动引起的。由以上分析可知， 金针菇多糖具备 典 型 多糖物质的吸收峰， 且多糖中存在吡喃环和呋喃环。