酶偶联法测定血清血管紧张素转换酶

中华医学检验杂志

CHINESE JOURNAL OF MEDICAL LABORATORY

SCIENCES

1998年 第6期 No.6　November 科技期刊酶偶联法测定血清血管紧张素转换酶

金化民　张茨　陈葳　陈谦

【摘要】　目的　建立一种测定血管紧张素转换酶(ACE)的酶偶联法。方法　血清与底物马尿酸双甘肽(Hip-Gly-Gly)混合温育30分钟，生成马尿酸(Hip)与双甘肽(Gly-Gly)，再加入L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(GGCN)和γ-谷氨酰基转移酶(GGT)，催化GGCN与Gly-Gly偶联，产生的3-羧基-4-硝基苯胺于410 nm波长测定其吸收度。结果　当底物pH8.0，GGCN1.0 mmol/L，GGT 6.7 kU/L时，ACE活性与吸收度值有良好线性。55份健康人血清ACE(±s)289±83 U/L，CV：批内4.6%；批间4.8%。10份肉样瘤患者血清ACE(±s)748±34.9 U/L，批内CV3.9%，回收率96%～103%。结论　酶偶联法测定ACE活性具有操作简便、迅速、重复性好，适用于手工操作或自动化分析，可用于诊断早期肺损伤和人类免疫缺陷病毒感染。

【关键词】　酶偶联法 γ-谷氨酰基转移酶 血管紧张素转换酶 活性

Determination of serum angiotensin-converting enzyme by enzyme coupling spectrophotometry Jin huamin Zhang Ci, Chen Wei, et al. First Affiliated Hospital ， Hubei Medical University, Wuhan 430060

【Abstract 】　Objective To establish a new method to measure ACE activity using the coupled reaction which is catalyzed by γ-glutamyl-transferase (GGT). Methods GGT was added as catalyts after the mixture of serum and substrate hippurylglycyl-glycine had been incubated for 30 minutes at 37℃, it participated from as receptor substrate

for a γ-glutamyl group transfered from a donor substrate, L-γ-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide was measured at 410 nm. Results The ACE activity and absorptance was linearly related when pH was 8.0, GGCN was 1.0 mmol/L, and GGT was 6.7 U/L. The mean value (±s) of serum ACE in 55 normal and 10 sarcoid specimens was 289±83 U/L, and 748±34.9 U/L respectively, and the within-run and between-run CV was 4.6% and 4.8% respectively. The later within-run CV was 3.9%, and the recovery rate was 96%～103%. Conclusion ECS is a simple, quick, and reliable method, and it can be used for early detection of the infection of HIV and the damage of the lung.

【Key words 】　Enzyme coupling spectrophotometry Gamma-glutamyltranspeptidase Angiotensin-converting enzyme Activity

血管紧张素转换酶(Angiotensin-Converting Enzyme, ACE∶EC为3.4∶15.1)，又名激肽酶Ⅱ，按系统命名法为肽酰二肽水解酶，属于羧基外肽酶。它的生理功能是催化血管紧张素Ⅰ(ATⅠ)水解成为血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)，释放出组-亮二肽；也可水解缓激肽，释放出苯丙-精二肽。

ACE是一种血管内膜细胞核膜糖蛋白，在体内分布很广，几乎遍布人体各个脏器，归纳起来分为血管内和血管外两类。血管内ACE主要分布在肺血管床；血管外ACE主要分布在肾近曲小管和小肠绒毛的刷状缘。在某些疾病，一些由单核细胞分化而来的细胞可产生大量的ACE并释放入血，引起血清ACE活性升高，在临床上具有诊断意义。国外已将ACE测定列为结节病上皮样肉芽肿，高雪病的诊断和预后估计的常规项目［1］。血清ACE活性变化在诊断急性肺损伤及人类免疫缺陷病毒(HIV)感染方面已受到极大重视。相继建立了荧光光度法、放射性同位素法、高效液相色谱法和分光光度法。这些方法都是基于ACE水解基质马尿酸-组氨酰-亮氨酸或马尿酸双甘肽(Hip-Gly-Gly)，产生马尿酸(Hip)和组氨酰亮氨酸或双甘肽(Gly-Gly)，然而这些方法有的要用有机溶剂提取［2］，有的需要衍化或去除血清蛋白，还有的需要特殊设备或接触放射性试剂［3］，因而推广应用受到限制。近年来，Groff等［4］报告一种由γ-谷氨酰基转移酶(GGT)作指示酶的酶偶联法测定血清ACE，认为是目前测定ACE的理想方法。该法操作简单，重复性好，既可用于手工操作，又可用于自动化分析。我们根据国内条件作了一些改进和探讨，报告如下。

材料与方法

一、试剂

1.HEPES缓冲液(50 mmol/L)：取HEPES(Sigma产品)1.191 g加双蒸水100 ml溶解，用于配制GGT、GGCN和基