试管苗的继代增殖培养
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第二节 继代增殖培养应注意的问题
一、分化再生能力衰退现象 1、经多次继代后，会逐渐减少或丧失愈伤组 织中含有从外植体启动分裂时就包括进来的 成器官中心（分生组织），导致维管束难以 形成，只能保持无组织的细胞团。
也有人认为在继代过程中，逐渐消耗了母体 中原有与器官形成有关的特殊物质。
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（二）改善培养环境条件：
1、温度。大多数植物最适的培养温度在23～ 32℃之间,常用25℃±2℃的温度。一般低于 15℃培养的组织生长出现停顿，而高于35℃ 对生长也不利。
2、光照。一般认为1 000～5 000Lx即可满足其 需要，
3、湿度。一般要求70%∽80%的相对湿度，过低 应洒水，过高应通风除湿。
有时还加入低浓度的GA3（赤霉素），以促 进Baidu Nhomakorabea芽的伸长。
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2、诱导不定芽的形成与生长调节物质。
诱导外植体形成不定芽时，一般使用细胞分 裂素的浓度高于生长素浓度的配比，但也经 常采用细胞分裂素和生长素浓度的比值接近 于1的配比。
常用的细胞分裂素是BA、KT和玉米素，浓度 在0.1∽10.0 mg.L-1。有的还加入低浓度的2， 4-D才能诱导不定芽的产生
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除细胞分裂素以外，培养基中还经常加入低 浓度的生长素，以促进腋芽的生长，但要防 止愈伤组织化。常用和生长素是NAA（萘乙 酸）、IBA（吲哚丁酸）、IAA（吲哚乙酸）， 浓度在0.1∽1.0mg.L-1。
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培养基中还经常加入低浓度的生长素，以促 进腋芽的生长，但要防止愈伤组织化。常用 的生长素是NAA、IBA、IAA，浓度在 0.1∽1.0mg.L-1。
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三、玻璃化现象
（一）玻璃苗的特征和发生的因素 离体繁殖中出现的玻璃化芽苗，过度含水化，
叶片肿胀，呈透明或半透明，水浸状，失绿， 脆弱易碎； 玻璃化可能是培养基渗透势不当所致。 有人发现琼脂和蔗糖浓度与玻璃化成负相关. 培养基中的植物激素也和玻璃化程度有关。 玻璃苗是培养瓶内气体与外界交换不畅造成 的，
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（二）控制和克服玻璃苗的措施
1、适当提高培养基中蔗糖含量或加入渗透 剂，降低培养基中的渗透势；
2、适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉 素的浓度；
3、增加自然光照； 4、改善培养器皿的气体交换状况； 5、在培养基中加入间苯三、多效唑、矮壮
素、活性炭、对防止产生玻璃化有良好作用。
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第五章 试管苗的继代增殖培养
第一节 试管苗的繁殖 一、试管苗快速繁殖的类型 二、提高增殖率的方法 第二节 继代增殖培养应注意的问题 一、分化再生能力衰退现象 二、驯化现象 三、玻璃化现象…
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第一节 试管苗的繁殖
一、试管苗快速繁殖的类型 （一）无菌短枝型：将待繁殖的材料剪成带
一叶的单芽茎段，转入成苗培养基，一定时 间后可成苗，再剪成带一叶的单芽茎段，继 代又可成苗。 （二）丛生芽增殖型：从芽到芽。 （三）器官发生型：分为直接和间接两种形 式，直接的器官发生是指较少发生或不发生 愈伤组织而直接从外植体表面再生不定芽。
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二、提高增殖率的方法
（一）选用最佳的培养基 1、促进腋芽形成与生长调节物质。 促进芽丛生长的培养基：加入0.1～10.0
mg·L-1的细胞分裂素，偶然也用较高浓度。 应用最多的是6-苄基氨基嘌呤（BA），其次 是激动素（6-糠基腺嘌呤，KT）和2-异戊烯 基腺嘌呤（2ip），玉米素（ZT）用的较少；
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（四）胚状体发生型
从植物叶片、子房、花药、未成熟胚等诱导 体细胞发生。
其发生和成苗过程类似合子胚或种子。这种 胚状体具有数量多、结构完整、易成苗和繁 殖速度快的特点，是植物离体无性繁殖最快 的方法，
是人工种子和细胞工程的前提，受到国内外 的普遍重视。
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（五）原球茎型
原球茎是一种类胚组织，培养兰花类的茎尖 或腋芽可直接产生原球茎，可以分化成植株。
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3、促进胚状体的形成和增殖与生长调节 物质。
由体细胞形成的胚状体叫体细胞胚 （Somatic embryo）。
生长素在体细胞胚胎发生中起着重要作用。 一般是在含有丰富还原氮的培养基上，加有 生长素，特别是2，4-D以诱导胚状体的发生， 然后转移到降低浓度或没有生长素的培养基 上使其成熟、萌发和生长。
2、衰退可能也与内源生长调节物质的减少 或丧失有关。
3、可能是细胞不正常染色体聚集导致形态 发生能力的丧失。
4、植物材料 5、培养基及培养条件 6、继代培养次数 7、季节：
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二、驯化现象
在植物组织培养中，发现一些植物组织经长 期继代培养，发生了一些变化。开始继代培 养要加入生长调节物质，其后加入少量或不 加入生长调节物质就可以生长、这种现象称 为“驯化”（acclimation）。
第二节 继代增殖培养应注意的问题
一、分化再生能力衰退现象 1、经多次继代后，会逐渐减少或丧失愈伤组 织中含有从外植体启动分裂时就包括进来的 成器官中心（分生组织），导致维管束难以 形成，只能保持无组织的细胞团。
也有人认为在继代过程中，逐渐消耗了母体 中原有与器官形成有关的特殊物质。
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（二）改善培养环境条件：
1、温度。大多数植物最适的培养温度在23～ 32℃之间,常用25℃±2℃的温度。一般低于 15℃培养的组织生长出现停顿，而高于35℃ 对生长也不利。
2、光照。一般认为1 000～5 000Lx即可满足其 需要，
3、湿度。一般要求70%∽80%的相对湿度，过低 应洒水，过高应通风除湿。
有时还加入低浓度的GA3（赤霉素），以促 进Baidu Nhomakorabea芽的伸长。
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2、诱导不定芽的形成与生长调节物质。
诱导外植体形成不定芽时，一般使用细胞分 裂素的浓度高于生长素浓度的配比，但也经 常采用细胞分裂素和生长素浓度的比值接近 于1的配比。
常用的细胞分裂素是BA、KT和玉米素，浓度 在0.1∽10.0 mg.L-1。有的还加入低浓度的2， 4-D才能诱导不定芽的产生
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除细胞分裂素以外，培养基中还经常加入低 浓度的生长素，以促进腋芽的生长，但要防 止愈伤组织化。常用和生长素是NAA（萘乙 酸）、IBA（吲哚丁酸）、IAA（吲哚乙酸）， 浓度在0.1∽1.0mg.L-1。
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培养基中还经常加入低浓度的生长素，以促 进腋芽的生长，但要防止愈伤组织化。常用 的生长素是NAA、IBA、IAA，浓度在 0.1∽1.0mg.L-1。
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三、玻璃化现象
（一）玻璃苗的特征和发生的因素 离体繁殖中出现的玻璃化芽苗，过度含水化，
叶片肿胀，呈透明或半透明，水浸状，失绿， 脆弱易碎； 玻璃化可能是培养基渗透势不当所致。 有人发现琼脂和蔗糖浓度与玻璃化成负相关. 培养基中的植物激素也和玻璃化程度有关。 玻璃苗是培养瓶内气体与外界交换不畅造成 的，
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（二）控制和克服玻璃苗的措施
1、适当提高培养基中蔗糖含量或加入渗透 剂，降低培养基中的渗透势；
2、适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉 素的浓度；
3、增加自然光照； 4、改善培养器皿的气体交换状况； 5、在培养基中加入间苯三、多效唑、矮壮
素、活性炭、对防止产生玻璃化有良好作用。
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第五章 试管苗的继代增殖培养
第一节 试管苗的繁殖 一、试管苗快速繁殖的类型 二、提高增殖率的方法 第二节 继代增殖培养应注意的问题 一、分化再生能力衰退现象 二、驯化现象 三、玻璃化现象…
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第一节 试管苗的繁殖
一、试管苗快速繁殖的类型 （一）无菌短枝型：将待繁殖的材料剪成带
一叶的单芽茎段，转入成苗培养基，一定时 间后可成苗，再剪成带一叶的单芽茎段，继 代又可成苗。 （二）丛生芽增殖型：从芽到芽。 （三）器官发生型：分为直接和间接两种形 式，直接的器官发生是指较少发生或不发生 愈伤组织而直接从外植体表面再生不定芽。
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二、提高增殖率的方法
（一）选用最佳的培养基 1、促进腋芽形成与生长调节物质。 促进芽丛生长的培养基：加入0.1～10.0
mg·L-1的细胞分裂素，偶然也用较高浓度。 应用最多的是6-苄基氨基嘌呤（BA），其次 是激动素（6-糠基腺嘌呤，KT）和2-异戊烯 基腺嘌呤（2ip），玉米素（ZT）用的较少；
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（四）胚状体发生型
从植物叶片、子房、花药、未成熟胚等诱导 体细胞发生。
其发生和成苗过程类似合子胚或种子。这种 胚状体具有数量多、结构完整、易成苗和繁 殖速度快的特点，是植物离体无性繁殖最快 的方法，
是人工种子和细胞工程的前提，受到国内外 的普遍重视。
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（五）原球茎型
原球茎是一种类胚组织，培养兰花类的茎尖 或腋芽可直接产生原球茎，可以分化成植株。
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3、促进胚状体的形成和增殖与生长调节 物质。
由体细胞形成的胚状体叫体细胞胚 （Somatic embryo）。
生长素在体细胞胚胎发生中起着重要作用。 一般是在含有丰富还原氮的培养基上，加有 生长素，特别是2，4-D以诱导胚状体的发生， 然后转移到降低浓度或没有生长素的培养基 上使其成熟、萌发和生长。
2、衰退可能也与内源生长调节物质的减少 或丧失有关。
3、可能是细胞不正常染色体聚集导致形态 发生能力的丧失。
4、植物材料 5、培养基及培养条件 6、继代培养次数 7、季节：
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二、驯化现象
在植物组织培养中，发现一些植物组织经长 期继代培养，发生了一些变化。开始继代培 养要加入生长调节物质，其后加入少量或不 加入生长调节物质就可以生长、这种现象称 为“驯化”（acclimation）。