西红花主要活性成分含量变异规律_施林妹_徐象华_朱波_潘永年
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( 1. 丽水职业技术学院，浙江 丽水 323000; 2. 丽水市农业科学研究院，浙江 丽水 323000)
［摘要］ 目的： 提示西红花中主要活性成分的变异规律。方法： 采用高效液相色谱法测定西红花苷含量，并分析了产地、 施肥方式、采收时间、遮覆方式、叶形态特征、产量性状与西红花苷含量的关系。结果： 不同产地种源、施肥方式、遮覆方式的 西红花中西红花苷含量存在显著差异（ P ＜ 0. 05） ，西红花苷含量与柱头重、种球重、叶片数、叶长呈负相关性，与采收时间没有 显著的关系。结论： 西红花主要活性成分含量存在一定的变异规律，覆草不遮阴、配合施用有机肥与无机肥有利于西红花苷 含量积累，针对产量筛选优良品系时，应优先考虑在叶较长、叶片少的品系中选择，本文的研究为西红花优质栽培与优良品系 筛选提供了依据。
［Key words］ Crocus sativus； crocin contents； variation
西红花又名藏红花、番红花，具有养血、通经活 血、生新化瘀等功效，是治疗心、脑血管及妇科疾病 的良药［1-2］。西红花苷 Ⅰ 和 西 红 花 苷 Ⅱ 是 西 红 花 药
［收稿日期］ 20130704（ 007） ［基金项目］ 浙江省公益性技术应用项目（ 2011C22089） ［第一作者］ 施林妹，教 授，从 事 中 药 材 化 学 成 分 分 析 研 究，
5 日与 3 月 5 日进行。各处理组中，有机肥基肥为
油菜饼肥，追 肥 为 人 尿，无 机 肥 基 肥 与 追 肥 均 为 尿
素，CK 为 45% 硫酸钾复合肥 （ N-P-K 15% ∶ 15% ∶
15% ） ，详见表 1。
表 1 不同施肥方式肥料配比设计
kg·km － 2
施肥方式
基肥（ 60% ）
［Abstract］ Objective： To study the variation of the main active ingredient contents in Crocus sativus． Method： The crocin contents in C． sativus were determined by high performance liquid chromatography （ HPLC） ， after which the relationships between contents and origins，fertilization mode，picking time，covering methods， morphological character of leaves，yield character were studied． Ｒesult： It showed that there was an obviously difference between contents in C． sativus from different origins，fertilization mode and covering methods． Besides， there was a negative correlation between contents and weight of stigma and seed，number and length of leaves． The picking time had no obvious correlation with contents． Thus it was founf that covering grass with no shade and cooperation application of organic and inorganic fertilizer could improve the crocin contents． Thus，to select high yield line in C． sativus，priority should be given to the line with longer and less leaves． Conclusion： The study has laid a foundation for high quality cultivation and superior line selection in C． sativus．
第 20 卷第 13 期 2014 年 7 月
中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 13 Jul． ，2014
西红花主要活性成分含量变异规律
施林妹1 ，徐象华2 ，朱波2* ，潘永年2
1525 型高效液相色谱仪 （ 美国 Waters 公司） ，
SWB5200 型超声清洗 机 （ 上 海 必 能 信 超 声 有 限 公
司） ，Milli-QAcademic 型超纯水仪（ 美国 MilliPore 公
司） ，FA1104 型分析天平（ 上海天平仪器厂） ，冲压
成型电子台秤（ 无锡鼎恒计量衡器有限公司） ，AＲ-
E-mail： shilinmei2004@ 126. com ［通讯作者］ * 朱波，博 士，从 事 中 药 材 育 种、化 学 分 析 研 究，
E-mail： aurora0119@ 163. com
材的主要活性成分，具有凉血解毒，解郁安神，提高 免疫力，抗动脉硬化，降低血液黏稠度，降血脂等功 效［3-6］。目前，国内外报道西红花研究主要 在 栽 培 技术［7-8］、活性成分含量测定［9-10］与药理研究［11-13］等 方面，少量报道［14-15］涉及了单因素指标与活性成分 含量关系。但上述报道均只停留在单一变量上，综 合评价形态特征、产量性状、栽培方式等多因素与西 红花苷含量积累关系并揭示其规律的文献尚未见报 道。本文研究不同产地种源、施肥方式、采收时间、 遮覆方式、叶形态特征与西红花主要活性成分含量
813A 型照度计（ 上海申雨洋实业有限公司） ，DHG-
9240 型电热鼓风干燥箱（ 上海精宏实验设备有限公
司） ，TPJ-21 型土壤温 度 记 录 仪 （ 北 京 合 众 博 普 公
司） 。西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ对照品（ 批号分别
为 Must-11071108，Must-11091002，成都曼斯特生物
统计海门、南汇、建德、青田 4 个产地种球叶片 ·114·
数，用直尺测量叶长，电子台称称量种球鲜质量，电 子分析天平称量花柱上部与柱头干质量。采收时间 分别为 2012 年 4 月 18 日，4 月 26 日，5 月 4 日。各 试验组采收后置于室内，待花开后采花柱上部与柱 头［3］，烘干待测。 2. 3 西红花苷含量测定 2. 3. 1 色谱条件 Agligent ZOＲBX SB-C18 色谱柱 （ 4. 6 mm × 150 mm，5 μm ） ，流 动 相 甲 醇-水 （ 45∶ 55） ，流速 1. 0 mL·min － 1 ，检测波长 440 nm，柱 温 30 ℃ ，进样量 10 μL，采用等梯度洗脱程序，时间 35 min。 2. 3. 2 对照品溶液的配制 精密称取对照品西红 花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ，置于 25 mL 棕色量瓶中，用 50% 乙醇溶解并稀释至刻度，得 0. 96 g·L － 1 西红花 苷Ⅰ和 0. 70 g·L － 1 西红花苷Ⅱ对照品溶液。 2. 3. 3 供试品溶液的配制 取本品粉末约 10 mg， 置 25 mL 棕色量瓶中，加 50% 乙醇适量，30 ℃ 超声 处理 30 min，放至室温，加 50% 乙醇稀释至刻度，摇 匀，经 0. 45 μm 微孔膜滤过，即得。 2. 3. 4 标准曲线与线性关系的考察 分别取对照 品西红花苷Ⅰ（ 0. 96 g·L － 1 ） 与西红花苷Ⅱ（ 0. 70 g· L － 1 ） ，移 取 0. 1，0. 2，0. 4，0. 6，0. 8，1. 0 mL 置 于 10 mL棕色量瓶中，加 50% 乙醇稀释，在 2. 3. 1 色谱 条件下测定。以西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ对照品溶 液的质量浓度为纵坐标 Y，峰面积为横坐标 X 绘制 标准曲线。计算得西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ线性范 围分别为 9. 6 ～ 96，2. 8 ～ 28 mg·L － 1 ，回归方程及相 关系数分别为Y = 63. 22X + 56. 13（ r = 0. 999 9） ，Y = 74. 73X + 13. 57（ r = 0. 999 9） 。 2. 3. 5 精密度试验 取同一对照品，在 2. 3. 1 色谱 条件下连续进样 5 次，测得西红花苷Ⅰ的色谱峰面 积 ＲSD 0. 23% ，西 红 花 苷 Ⅱ 的 色 谱 峰 面 积 ＲSD 1. 06% ，表明仪器精密度良好。 2. 3. 6 重复性试验 取同一样品 5 份，按 2. 3. 3 供 试品溶液的制备操作，2. 3. 1 的色谱条件测定含量。 西 红 花 苷 Ⅰ 的 平 均 含 量 为 13. 38% ，平 均 ＲSD 1. 89% ，西 红 花 苷 Ⅱ 的 平 均 含 量 为 4. 58% ，平 均 ＲSD 3. 61% ，试验重复性良好。 2. 3. 7 稳定性试验 取某样品制备供试品溶液，置 于室温避光保存，分别置于 0，1，2，4，6，8，12，24 h 进样，测定峰面积，计算得西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ 峰面积的 ＲSD 分别为 0. 74% ，2. 06% ，表明供试品 溶液室温保存 24 h 内稳定。 2. 3. 8 加样回收率试验 取某已知含量样品 9 份，
追肥（ 40% ） 第1次 第2次 第3次
无机肥
450
105
90
105
有机肥 p
450
105
90
105
无机肥 + 有机肥 225 + 225 52. 5 + 52. 5 45 + 45 52. 5 + 52. 5
CK
450
105
90
105
2. 2 遮 覆 方 式、产 量 性 状、叶 形 态 特 征 与 采 收 时 间 遮 覆 试 验 分 4 个 处 理，分 别 为 遮 阴、覆 草、 遮阴 + 覆草、CK，遮阴采用双层遮阳网，覆草为干燥 稻草。选取 3 月份为温度测量月，随机选取 5 个天 气良好日，从早上 7 点到晚上 7 点每隔 2 h 测量土 层温度与光照强度。
·113·
第 20 卷第 13 期 2014 年 7 月
中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Leabharlann Baidu
Vol． 20，No． 13 Jul． ，2014
的关系，揭示西红花苷含量的变异规律，为西红花优
质栽培与优良品系筛选提供依据。
科技 有 限 公 司 ） ，水 为 去 离 子 水，其 他 试 剂 为 分
析纯。
2 方法
2. 1 施 肥 方 式 设 计 按 照 纯 氮 肥 总 量 750 kg· hm － 2 设计，基肥施用量为总量的 60% ，追肥为总量
的 40% ，追肥共 3 次，分别于 2012 年 1 月 5 日、2 月
1 材料
2011 年 6 月收集浙江建德、青田、江苏海门、上
海南汇 4 个产地西红花资源，其中，产地试验组种球
为原产地直接取样，其他试验组种球统一购买于丽
水市中药材交易市场，经浙江农林大学斯金平教授
鉴定为西红花 Crocus sativus L． ，同年 11 月全部种植
于丽水职业技术学院中药材基地。
［关键词］ 西红花； 西红花苷； 变异规律 ［中图分类号］ Ｒ284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903（ 2014） 13-0113-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014130113
Variation of Main Active Ingredient Contents in Crocus sativus
SHI Lin-mei1 ，XU Xiang-hua2 ，ZHU Bo2* ，PAN Yong-nian2 （ 1. Lishui Vocational ＆ Technical College，Lishui 323000，China； 2. Lishui Academy of Agricultural Sciences，Lishui 323000，China）
［摘要］ 目的： 提示西红花中主要活性成分的变异规律。方法： 采用高效液相色谱法测定西红花苷含量，并分析了产地、 施肥方式、采收时间、遮覆方式、叶形态特征、产量性状与西红花苷含量的关系。结果： 不同产地种源、施肥方式、遮覆方式的 西红花中西红花苷含量存在显著差异（ P ＜ 0. 05） ，西红花苷含量与柱头重、种球重、叶片数、叶长呈负相关性，与采收时间没有 显著的关系。结论： 西红花主要活性成分含量存在一定的变异规律，覆草不遮阴、配合施用有机肥与无机肥有利于西红花苷 含量积累，针对产量筛选优良品系时，应优先考虑在叶较长、叶片少的品系中选择，本文的研究为西红花优质栽培与优良品系 筛选提供了依据。
［Key words］ Crocus sativus； crocin contents； variation
西红花又名藏红花、番红花，具有养血、通经活 血、生新化瘀等功效，是治疗心、脑血管及妇科疾病 的良药［1-2］。西红花苷 Ⅰ 和 西 红 花 苷 Ⅱ 是 西 红 花 药
［收稿日期］ 20130704（ 007） ［基金项目］ 浙江省公益性技术应用项目（ 2011C22089） ［第一作者］ 施林妹，教 授，从 事 中 药 材 化 学 成 分 分 析 研 究，
5 日与 3 月 5 日进行。各处理组中，有机肥基肥为
油菜饼肥，追 肥 为 人 尿，无 机 肥 基 肥 与 追 肥 均 为 尿
素，CK 为 45% 硫酸钾复合肥 （ N-P-K 15% ∶ 15% ∶
15% ） ，详见表 1。
表 1 不同施肥方式肥料配比设计
kg·km － 2
施肥方式
基肥（ 60% ）
［Abstract］ Objective： To study the variation of the main active ingredient contents in Crocus sativus． Method： The crocin contents in C． sativus were determined by high performance liquid chromatography （ HPLC） ， after which the relationships between contents and origins，fertilization mode，picking time，covering methods， morphological character of leaves，yield character were studied． Ｒesult： It showed that there was an obviously difference between contents in C． sativus from different origins，fertilization mode and covering methods． Besides， there was a negative correlation between contents and weight of stigma and seed，number and length of leaves． The picking time had no obvious correlation with contents． Thus it was founf that covering grass with no shade and cooperation application of organic and inorganic fertilizer could improve the crocin contents． Thus，to select high yield line in C． sativus，priority should be given to the line with longer and less leaves． Conclusion： The study has laid a foundation for high quality cultivation and superior line selection in C． sativus．
第 20 卷第 13 期 2014 年 7 月
中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 13 Jul． ，2014
西红花主要活性成分含量变异规律
施林妹1 ，徐象华2 ，朱波2* ，潘永年2
1525 型高效液相色谱仪 （ 美国 Waters 公司） ，
SWB5200 型超声清洗 机 （ 上 海 必 能 信 超 声 有 限 公
司） ，Milli-QAcademic 型超纯水仪（ 美国 MilliPore 公
司） ，FA1104 型分析天平（ 上海天平仪器厂） ，冲压
成型电子台秤（ 无锡鼎恒计量衡器有限公司） ，AＲ-
E-mail： shilinmei2004@ 126. com ［通讯作者］ * 朱波，博 士，从 事 中 药 材 育 种、化 学 分 析 研 究，
E-mail： aurora0119@ 163. com
材的主要活性成分，具有凉血解毒，解郁安神，提高 免疫力，抗动脉硬化，降低血液黏稠度，降血脂等功 效［3-6］。目前，国内外报道西红花研究主要 在 栽 培 技术［7-8］、活性成分含量测定［9-10］与药理研究［11-13］等 方面，少量报道［14-15］涉及了单因素指标与活性成分 含量关系。但上述报道均只停留在单一变量上，综 合评价形态特征、产量性状、栽培方式等多因素与西 红花苷含量积累关系并揭示其规律的文献尚未见报 道。本文研究不同产地种源、施肥方式、采收时间、 遮覆方式、叶形态特征与西红花主要活性成分含量
813A 型照度计（ 上海申雨洋实业有限公司） ，DHG-
9240 型电热鼓风干燥箱（ 上海精宏实验设备有限公
司） ，TPJ-21 型土壤温 度 记 录 仪 （ 北 京 合 众 博 普 公
司） 。西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ对照品（ 批号分别
为 Must-11071108，Must-11091002，成都曼斯特生物
统计海门、南汇、建德、青田 4 个产地种球叶片 ·114·
数，用直尺测量叶长，电子台称称量种球鲜质量，电 子分析天平称量花柱上部与柱头干质量。采收时间 分别为 2012 年 4 月 18 日，4 月 26 日，5 月 4 日。各 试验组采收后置于室内，待花开后采花柱上部与柱 头［3］，烘干待测。 2. 3 西红花苷含量测定 2. 3. 1 色谱条件 Agligent ZOＲBX SB-C18 色谱柱 （ 4. 6 mm × 150 mm，5 μm ） ，流 动 相 甲 醇-水 （ 45∶ 55） ，流速 1. 0 mL·min － 1 ，检测波长 440 nm，柱 温 30 ℃ ，进样量 10 μL，采用等梯度洗脱程序，时间 35 min。 2. 3. 2 对照品溶液的配制 精密称取对照品西红 花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ，置于 25 mL 棕色量瓶中，用 50% 乙醇溶解并稀释至刻度，得 0. 96 g·L － 1 西红花 苷Ⅰ和 0. 70 g·L － 1 西红花苷Ⅱ对照品溶液。 2. 3. 3 供试品溶液的配制 取本品粉末约 10 mg， 置 25 mL 棕色量瓶中，加 50% 乙醇适量，30 ℃ 超声 处理 30 min，放至室温，加 50% 乙醇稀释至刻度，摇 匀，经 0. 45 μm 微孔膜滤过，即得。 2. 3. 4 标准曲线与线性关系的考察 分别取对照 品西红花苷Ⅰ（ 0. 96 g·L － 1 ） 与西红花苷Ⅱ（ 0. 70 g· L － 1 ） ，移 取 0. 1，0. 2，0. 4，0. 6，0. 8，1. 0 mL 置 于 10 mL棕色量瓶中，加 50% 乙醇稀释，在 2. 3. 1 色谱 条件下测定。以西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ对照品溶 液的质量浓度为纵坐标 Y，峰面积为横坐标 X 绘制 标准曲线。计算得西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ线性范 围分别为 9. 6 ～ 96，2. 8 ～ 28 mg·L － 1 ，回归方程及相 关系数分别为Y = 63. 22X + 56. 13（ r = 0. 999 9） ，Y = 74. 73X + 13. 57（ r = 0. 999 9） 。 2. 3. 5 精密度试验 取同一对照品，在 2. 3. 1 色谱 条件下连续进样 5 次，测得西红花苷Ⅰ的色谱峰面 积 ＲSD 0. 23% ，西 红 花 苷 Ⅱ 的 色 谱 峰 面 积 ＲSD 1. 06% ，表明仪器精密度良好。 2. 3. 6 重复性试验 取同一样品 5 份，按 2. 3. 3 供 试品溶液的制备操作，2. 3. 1 的色谱条件测定含量。 西 红 花 苷 Ⅰ 的 平 均 含 量 为 13. 38% ，平 均 ＲSD 1. 89% ，西 红 花 苷 Ⅱ 的 平 均 含 量 为 4. 58% ，平 均 ＲSD 3. 61% ，试验重复性良好。 2. 3. 7 稳定性试验 取某样品制备供试品溶液，置 于室温避光保存，分别置于 0，1，2，4，6，8，12，24 h 进样，测定峰面积，计算得西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ 峰面积的 ＲSD 分别为 0. 74% ，2. 06% ，表明供试品 溶液室温保存 24 h 内稳定。 2. 3. 8 加样回收率试验 取某已知含量样品 9 份，
追肥（ 40% ） 第1次 第2次 第3次
无机肥
450
105
90
105
有机肥 p
450
105
90
105
无机肥 + 有机肥 225 + 225 52. 5 + 52. 5 45 + 45 52. 5 + 52. 5
CK
450
105
90
105
2. 2 遮 覆 方 式、产 量 性 状、叶 形 态 特 征 与 采 收 时 间 遮 覆 试 验 分 4 个 处 理，分 别 为 遮 阴、覆 草、 遮阴 + 覆草、CK，遮阴采用双层遮阳网，覆草为干燥 稻草。选取 3 月份为温度测量月，随机选取 5 个天 气良好日，从早上 7 点到晚上 7 点每隔 2 h 测量土 层温度与光照强度。
·113·
第 20 卷第 13 期 2014 年 7 月
中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Leabharlann Baidu
Vol． 20，No． 13 Jul． ，2014
的关系，揭示西红花苷含量的变异规律，为西红花优
质栽培与优良品系筛选提供依据。
科技 有 限 公 司 ） ，水 为 去 离 子 水，其 他 试 剂 为 分
析纯。
2 方法
2. 1 施 肥 方 式 设 计 按 照 纯 氮 肥 总 量 750 kg· hm － 2 设计，基肥施用量为总量的 60% ，追肥为总量
的 40% ，追肥共 3 次，分别于 2012 年 1 月 5 日、2 月
1 材料
2011 年 6 月收集浙江建德、青田、江苏海门、上
海南汇 4 个产地西红花资源，其中，产地试验组种球
为原产地直接取样，其他试验组种球统一购买于丽
水市中药材交易市场，经浙江农林大学斯金平教授
鉴定为西红花 Crocus sativus L． ，同年 11 月全部种植
于丽水职业技术学院中药材基地。
［关键词］ 西红花； 西红花苷； 变异规律 ［中图分类号］ Ｒ284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903（ 2014） 13-0113-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014130113
Variation of Main Active Ingredient Contents in Crocus sativus
SHI Lin-mei1 ，XU Xiang-hua2 ，ZHU Bo2* ，PAN Yong-nian2 （ 1. Lishui Vocational ＆ Technical College，Lishui 323000，China； 2. Lishui Academy of Agricultural Sciences，Lishui 323000，China）