姬姆萨染色液(10×Giemsa stain)
吉姆萨染色原理
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吉姆萨染色的原理吉姆萨〔Giemsa〕染色法:吉姆萨染液由天青,伊红构成。
染色原理和结果与瑞特染色法根真同样。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青联合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可联合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。
细胞各样成分均不蛋白质,因为蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增加,易与伊红联合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青联合,染色偏蓝。
所以细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片一定洁净,无酸碱污染。
配制顼特液一定用优良甲醇,稀释染色一定用缓冲液,冲刷用水应近中性,否那么可致使各样细胞染色反应异样,致使辨别困难,甚至造成错误。
一般性操作技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊疗;染色不良;瑞特〔Wright〕染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH 对细胞染色的影响;甲醇;吉姆〔Giemsa〕染色法春季要常用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰富维生素a,常用可加速皮肤血液循环,剌激面部细胞分泌,有效改良皮肤生理环境,减少天气对皮肤的危害。
第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的根本方法,临床上应用极为宽泛,特别是关于各样血液病的诊疗拥有重要的价值,最近几年来血细胞剖析仪的宽泛应用,血涂片的察看也可作为判断仪器结果的简略方法。
比台察看10个高倍视线血涂片中白细胞和血小板数大概预计血内这些细胞的数目,借以作为仪器结果剖析后质控的参照。
但积压涂片制备和染色不良,常使细胞鉴识发生困难,甚至致使错误结论。
比如,血膜过厚细胞重叠减小,血膜太薄白细胞多集中于边沿,细胞散布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异样。
因皮制备厚薄适合,散布平均,染色优秀的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。
瑞氏-吉姆萨染液配法
![瑞氏-吉姆萨染液配法](https://img.taocdn.com/s3/m/e23346d358f5f61fb73666eb.png)
英文拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料,溶于甲醇。
后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。
使用方法瑞氏(Wright's staim;美蓝-伊红Y)染色:1.瑞氏染料是由碱性染料美蓝(Methvlem blue)和酸性染料黄色伊红(Eostm Y)合称伊红美蓝染料即瑞氏(美蓝-伊红Y)染料。
2.用甲醇作瑞氏染料溶剂,即成瑞氏染液。
甲醇是瑞氏染料良好溶剂,有两种作用:(1)甲醇使瑞氏染料中美蓝(M)与伊红(E)在溶液中离解,可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
甲醇ME(瑞氏染料)----→M+ + E-在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青,美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色,但不能使胞浆染为蓝色,多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色,染色主要是化学作用,是离子彼此结合的反应。
(2)甲醇具有强大的脱水力,可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积,提高细胞对染料吸收作用,同时由于甲醇吸附染色液中的水,使染色液升温,加速染色反应。
染液配制(1) 瑞氏染液配制:瑞氏染料 830gm或1g甲醇(AR)500ml或600ml○先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内,用乳棒轻轻敲碎染料成粉末,再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末,加少许甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸内显“一面镜”光泽,而无染料粉粒沉着。
○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮,静置片刻,将上层液体倒入一清洁储存瓶内(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重复数次,至乳钵内染料及甲醇用完为止,摇匀,密封瓶口。
○存室温暗处,储存愈久,则染料溶解、分解就越好,一般储存3个月以上为佳。
(2) 缓冲液:●缓冲液作用:○染色对氢离子浓度是十分敏感的,据观察pH值的改变,可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。
○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定,PBS的pH 一般在6.4~6.8,○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用,偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用,使pH恒定。
瑞氏-吉姆萨染液配法
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英文拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料,溶于甲醇。
后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。
使用方法瑞氏(Wright's staim;美蓝-伊红Y)染色:1.瑞氏染料是由碱性染料美蓝(Methvlem blue)和酸性染料黄色伊红(Eostm Y)合称伊红美蓝染料即瑞氏(美蓝-伊红Y)染料。
2.用甲醇作瑞氏染料溶剂,即成瑞氏染液。
甲醇是瑞氏染料良好溶剂,有两种作用:(1)甲醇使瑞氏染料中美蓝(M)与伊红(E)在溶液中离解,可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
甲醇ME(瑞氏染料)----→M+ + E-在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青,美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色,但不能使胞浆染为蓝色,多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色,染色主要是化学作用,是离子彼此结合的反应。
(2)甲醇具有强大的脱水力,可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积,提高细胞对染料吸收作用,同时由于甲醇吸附染色液中的水,使染色液升温,加速染色反应。
染液配制(1) 瑞氏染液配制:瑞氏染料 830gm或1g甲醇(AR)500ml或600ml○先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内,用乳棒轻轻敲碎染料成粉末,再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末,加少许甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸内显“一面镜”光泽,而无染料粉粒沉着。
○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮,静置片刻,将上层液体倒入一清洁储存瓶内(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重复数次,至乳钵内染料及甲醇用完为止,摇匀,密封瓶口。
○存室温暗处,储存愈久,则染料溶解、分解就越好,一般储存3个月以上为佳。
(2) 缓冲液:●缓冲液作用:○染色对氢离子浓度是十分敏感的,据观察pH值的改变,可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。
○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定,PBS的pH 一般在6.4~6.8,○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用,偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用,使pH恒定。
吉姆萨染色的原理
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吉姆萨染色的原理之五兆芳芳创作吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成.染色原理和结果与瑞特染色法基底细同.嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉白色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质.PH对细胞染色有影响.细胞各类成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性情况中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性情况中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝.因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染.配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,不然可导致各类细胞染色反响异常,以致识别困难,甚至造成错误.一般性操纵技巧血涂片制备;细胞染色;显微查抄;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春天要经常使用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰厚维生素a,经常使用可放慢皮肤血液循环,剌激面部细胞排泄,有效改良皮肤生理情况,削减气候对皮肤的危害.第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微查抄是血液细胞学查抄的根本办法,临床上应用极其普遍,特别是对于各类血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞阐发仪的普遍应用,血涂片的不雅察也可作为判断仪器结果的简略单纯办法.比台不雅察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估量血内这些细胞的数量,借以作为仪器结果阐发后质控的参考.但积存涂片制备和染色不良,常使细胞辨别产生困难,甚至导致错误结论.例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多集中于边沿,细胞散布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反响异常.因皮制备厚薄适宜,散布均匀,染色良好的血涂片是血液学查抄的重要革本技巧之一.血涂片制备办法及注意事项将在实习指导中详细介绍. 1.瑞特(Wright)染色法:为发不雅察细胞内部结构,识别各类细胞及其异常变更,血涂片必须嘲行染色.血涂片的各类染色办法大多是罗氏染色法衍变来的.目前经常使用瑞特染色法.(1)瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料.亚甲蓝为四甲基硫堇染料,有对醌型和邻醌型两种结构.通常为氯盐,即氯化美蓝.美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料.市售美蓝中部分已被氧化为天青.伊红通常为钠盐.即伊红和伊混杂后,产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀,即瑞特染料.(2)细胞的染色既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用,各类细胞成分化学性质不合,对各类染料的亲和力也不一样.因此,用本染料液染色后,在同一血片上,可以看到各类不合的色彩,例如血红蛋白,嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉白色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质. (3)PH对细胞染色有影响.细胞各类成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性情况中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性情况中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝.因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染.配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,不然可导致各类细胞染色反响异常,以致识别困难,甚至造成错误.新鲜配制的染料偏碱,须在室温或是37℃下贮存一定时间,待染料成熟,主要是美蓝逐渐转变成天青B后才干使用,贮存时愈久,染色效果愈好.EAM GILLILAND等采取吸光度比值作为顼特染液的质量规格.rA测定办法如下:取瑞特染液15-25μl(视染液浓度而定),加甲醇10ml稀释,混匀后以甲醇为空折管,辨别以波长650nm和25nm比色.Ra=a650/a525.因为美蓝吸收峰小组长为650nm,伊红吸收峰波长为525nm ;天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半.所以新配染料rA接近2,随着美蓝逐渐氧化为天青B,RA也相应下降.RA下降到1.3±0.1时便可使用.瑞特染液贮存进程中,必须塞严,以避免甲醇挥发和被氧化成甲酸.有人主张在配方中参加甘油30ml,避免甲醇挥发,关可合细胞染色清晰.甲醇必须纯净,如甲醇中丙酮含量过量,染色偏酸,使白细胞着色不良.2.吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成.染色原理和结果与瑞特染色法基底细同.但本法对细胞核和寄生虫着色较好,结构显示更不清晰,而胞质和中性颗粒则着色较差.为统筹两者之长,可用复合染色法.即以稀释吉姆萨液代替缓冲液,按瑞特染色法染10min.或先用瑞特染色法染色后,再用稀释吉姆萨复染.。
吉姆萨染色的原理
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吉姆萨染色的道理吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红构成.染色道理和成果与瑞特染色法基底细同.嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红成果,染粉红色,称为嗜酸性物资;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青联合,染紫蓝色,称为嗜碱性物资;中性颗粒呈等电状况与伊红和美蓝均可联合,染淡紫色,称为中性物资.PH对细胞染色有影响.细胞各类成分均不蛋白质,因为蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性情况中下在电荷增多,易与伊红联合,染色偏红;在偏三性情况中负电荷增多,易与美蓝或天青联合,染色偏蓝.是以细胞染色对氢离子浓度十分迟钝,染色用正经片必须干净,无酸碱污染.配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,不然可导致各类细胞染色反响平常,乃至辨认艰苦,甚至造成错误.一般性操纵技巧血涂片制备;细胞染色;显微检讨;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附感化;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春天要经常运用润肤剂,它含有松喷鼻油脂酸和丰硕维生素a,经常运用可加速皮肤血液轮回,剌激面部细胞排泄,有用改良皮肤心理情况,削减气象对皮肤的伤害.第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检讨是血液细胞学检讨的根本办法,临床上运用极为普遍,特殊是对于各类血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞剖析仪的普遍运用,血涂片的不雅察也可作为断定仪器成果的简略单纯办法.比台不雅察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估量血内这些细胞的数目,借以作为仪器成果剖析后质控的参考.但积存涂片制备和染色不良,常使细胞辨别产生艰苦,甚至导致错误结论.例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多分散于边沿,细胞散布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反响平常.因皮制备厚薄合适,散布平均,染色优越的血涂片是血液学检讨的重要革本技巧之一.血涂片制备办法及留意事项将在练习指点中具体介绍.1.瑞特(Wright)染色法:为发不雅察细胞内部构造,辨认各类细胞及其平常变更,血涂片必须嘲行染色.血涂片的各类染色办法大多是罗氏染色法衍变来的.今朝经常运用瑞特染色法.(1)瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝构成有复合染料.亚甲蓝为四甲基硫堇染料,有对醌型和邻醌型两种构造.平日为氯盐,即氯化美蓝.美蓝轻易氧化为一.二.三甲基硫堇等次级染料.市售美蓝中部分已被氧化为天青.伊红平日为钠盐.即伊红和伊混杂后,产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀,即瑞特染料. (2)细胞的染色既有物理的吸附感化,又有化学的亲和感化,各类细胞成分化学性质不合,对各类染料的亲和力也不一样.是以,用本染料液染色后,在统一血片上,可以看到各类不合的颜色,例如血红蛋白,嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红成果,染粉红色,称为嗜酸性物资;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青联合,染紫蓝色,称为嗜碱性物资;中性颗粒呈等电状况与伊红和美蓝均可联合,染淡紫色,称为中性物资.(3)PH对细胞染色有影响.细胞各类成分均不蛋白质,因为蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性情况中下在电荷增多,易与伊红联合,染色偏红;在偏三性情况中负电荷增多,易与美蓝或天青联合,染色偏蓝.是以细胞染色对氢离子浓度十分迟钝,染色用正经片必须干净,无酸碱污染.配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,不然可导致各类细胞染色反响平常,乃至辨认艰苦,甚至造成错误.新颖配制的染料偏碱,须在室温或是37℃下贮存一准时光,待染料成熟,主如果美蓝逐渐改变成天青B后才干运用,贮存时愈久,染色后果愈好.EAM GILLILAND等采取吸光度比值作为顼特染液的质量规格.rA测定办法如下:取瑞特染液15-25μl(视染液浓度而定),加甲醇10ml稀释,混匀后以甲醇为空折管,分离以波长650nm和25nm比色.Ra=a650/a525.因为美蓝接收峰小组长为650nm,伊红接收峰波长为525nm ;天青B接收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半.所以新配染料rA接近2,跟着美蓝逐渐氧化为天青B,RA也响应降低.RA降低到1.3±0.1时即可运用.瑞特染液贮存进程中,必须塞严,以防止甲醇挥发和被氧化成甲酸.有人主意在配方中参加甘油30ml,防止甲醇挥发,关可合细胞染色清楚.甲醇必须纯净,如甲醇中丙酮含量过多,染色偏酸,使白细胞着色不良.2.吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红构成.染色道理和成果与瑞特染色法基底细同.但本法对细胞核和寄生虫着色较好,构造显示更不清楚,而胞质和中性颗粒则着色较差.为统筹二者之长,可用复合染色法.即以稀释吉姆萨液代替缓冲液,按瑞特染色法染10min.或先用瑞特染色法染色后,再用稀释吉姆萨复染.。
吉姆萨染色的原理
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吉姆萨染色的原理吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成。
染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。
细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。
因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染。
配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误。
一般性操作技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春天要常用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰富维生素a,常用可加快皮肤血液循环,剌激面部细胞分泌,有效改善皮肤生理环境,减少气候对皮肤的危害。
第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法,临床上应用极为广泛,特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞分析仪的广泛应用,血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。
比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量,借以作为仪器结果分析后质控的参考。
但积压涂片制备和染色不良,常使细胞鉴别发生困难,甚至导致错误结论。
例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多集中于边缘,细胞分布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。
因皮制备厚薄适宜,分布均匀,染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。
血涂片制备方法及注意事项将在实习指导中详细介绍。
giemsa染色原理
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giemsa染色原理Giemsa染色原理引言:Giemsa染色是一种常用的细胞染色方法,广泛应用于医学领域、生物学研究和临床诊断中。
本文将介绍Giemsa染色的原理、步骤以及其在实验室和临床中的应用。
一、Giemsa染色原理Giemsa染色是一种特殊的染色技术,基于甲苯胺基甲基苯胺(Dye A)和甲苯胺基苯甲酸(Dye B)的混合物,通过与细胞中的DNA、RNA和染色体结合,使其呈现出特定的颜色。
Giemsa染色的原理主要有以下几个方面:1. 细胞膜渗透性:Giemsa染色剂具有良好的细胞膜渗透性,能够迅速进入细胞内,与细胞中的核酸结合。
2. 核酸结合:Giemsa染色剂中的甲苯胺基甲基苯胺和甲苯胺基苯甲酸分子具有碱性,能够与DNA和RNA中的负电荷结合形成盐桥,从而染色。
3. 染色体结合:Giemsa染色剂对于染色体有较强的亲和力,能够与染色体上的蛋白质结合,使其呈现出特定的颜色。
二、Giemsa染色步骤Giemsa染色通常包括以下几个步骤:1. 固定:将待染细胞或组织进行固定,常用的固定剂有乙醇、甲醛等。
固定可以保持细胞或组织的形态结构,避免在染色过程中发生破坏。
2. 染色:将固定的细胞或组织浸入Giemsa染色液中,一般染色时间为10-30分钟。
染色时间过短会导致染色不均匀,时间过长则会导致过度染色。
3. 洗涤:染色结束后,需要用缓冲液或蒸馏水对细胞或组织进行洗涤,以去除多余的染色剂。
4. 干燥:洗涤完毕后,将细胞或组织放置于通风处晾干,或使用干燥机进行加速干燥。
5. 观察与分析:使用显微镜观察染色后的细胞或组织,根据染色的颜色和形态特征进行分析和判断。
三、Giemsa染色的应用Giemsa染色在医学和生物学领域有着广泛的应用,主要包括以下几个方面:1. 血液学研究:Giemsa染色可以用于观察和鉴定血液中的各类细胞,包括红细胞、白细胞和血小板等。
通过染色后的细胞形态和颜色特征,可以帮助医生进行血液疾病的诊断。
吉姆萨配方
![吉姆萨配方](https://img.taocdn.com/s3/m/12a5e49f84868762caaed5f1.png)
吉姆萨染色方法显示X染色质结构吉姆萨粉1 g ,甘油(AR) 66 mL ,甲醇(AR) 66 mL 。
先将吉姆萨粉溶于少量甘油中,用研钵研磨成匀浆,再将全部甘油倒入。
放入56 ℃温箱中2 h ,取出将甲醇加入混匀,即配成原液,于棕色瓶中密封保存备用。
临用时加入pH为6. 8 的磷酸缓冲液( V∶V = 9∶1) 配成吉姆萨染色剂。
(二)吉姆萨染色法此法可将细胞核与胞质同时染色,故便捷快速;但染液配制技术不易准确掌握,效果常不如HE染色稳定。
1.吉姆萨(Giemsa)染液的配制(1)取1.5g吉姆萨粉末放入50ml甘油,置于60℃温箱,约3h后溶解。
(2)取出后倒入50ml中性甲醇,即为母液。
于棕色瓶可长久保存。
需要注意的是,有的甲醇内含醋酸,会使染液中的伊红沉淀出来,不利染色。
(3)将母液与0.1 mol/LPBS(Ph6.9~7.2)按1:9混合即成工作液。
吉姆萨染液对pH极敏感,偏酸时染色过红,偏碱时则过蓝。
所以,工作液宜现用现配,保存时间不超过48h以免被CO2酸化。
瑞氏-姬姆萨染色方法1、试剂配制:原料:A:瑞氏染粉0.8--1克;吉姆萨染粉0.5克B:甘油33mlC:甲醇500ml配法:将A放入研钵中,加入少量B研磨,再加入少量B磨,再加入少量B磨……倒出,将未溶部分,继续加入B磨……>全溶,加入C,或中间加入C 亦可。
2、染色步骤:滴数滴入玻片盖满标本,30秒,再加入双蒸水或PBS2-3倍染1-3分中,倾去染液,水洗……封片。
吉姆萨染色液贮备液配制:吉姆萨粉1g,加甘油60ml,加热并搅拌,待溶解冷却至室温,再加甲醇33ml吉姆萨(Giemsa)氏母液将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油,在研钵内研磨30min以上,至看不见颗粒为止,再将全部(66mL)剩余甘油倒入,于56℃温箱内保温2h。
然后再加入甲醇(66mL),搅匀后保存于棕色瓶中。
母液配制后放入冰箱可长期保存,一般刚配制的母液染色效果欠佳,保存时间越长越好。
吉姆萨染色的原理
![吉姆萨染色的原理](https://img.taocdn.com/s3/m/dd4f88f7f021dd36a32d7375a417866fb84ac0e2.png)
吉姆萨染色的原理吉姆萨染色是一种常用的细胞染色技术,主要用于在细胞中观察和研究细胞结构和功能。
吉姆萨染色主要通过染色剂吉姆萨(Giemsa)在细胞中与特定的分子结合而实现。
它能够显著地染色细胞的核和细胞器,便于观察和分析。
吉姆萨是一种由甲酸、溴化酚和胰蛋白消化产生的溴化物复合物。
它主要通过与细胞中的DNA、RNA和蛋白质等结合,形成吉姆萨染色体,从而在显微镜下直观地显示出核和染色体的结构和形态。
吉姆萨染色通过改变细胞内核和细胞器的颜色,使它们在显微镜下更易于观察和分析,有助于研究细胞的生物学特性和病理学改变。
吉姆萨染色的过程主要包括固定、染色和洗涤等步骤。
首先,细胞需要被固定在载玻片上,以保持细胞的形态结构和细胞器的分布。
固定一般使用乙醛、乙醇或甲醛等试剂进行。
固定后,使用吉姆萨染液将固定的细胞染色剂覆盖在细胞上,染剂很快渗入细胞内,与核酸和蛋白质发生结合反应。
染剂的浓度和染色时间要控制在合适的范围内,以获得明确和清晰的染色效果。
染色结束后,对载玻片进行洗涤,清除掉未结合的染剂和杂质。
洗涤的目的是提高显微观察的分辨率和减少背景干扰。
通常使用缓冲溶液和蒸馏水洗涤多次,确保载玻片表面的纯净化程度。
经过洗涤后,载玻片可以通过显微镜观察。
在显微镜下,吉姆萨染色的细胞呈现出直观的形态和结构,显示出核、染色体、细胞质和其他细胞器等部分。
吉姆萨染色的原理主要是由于吉姆萨染剂和细胞内的核酸以及其他细胞成分的相互作用。
吉姆萨染剂可以在酸性条件下与DNA和RNA结合,形成吉姆萨染色体。
吉姆萨染色体的形成可以改变细胞的颜色,使其在显微镜下更容易观察和分析。
此外,吉姆萨染剂还可以与蛋白质结合,改变蛋白质的结构和性质,从而更好地显示细胞内的细胞器和组分。
吉姆萨染色的应用非常广泛。
在生物学研究中,吉姆萨染色可以用来观察染色体、细胞核和细胞质结构等,研究细胞的形态学和细胞器的功能。
在临床医学中,吉姆萨染色可以用来诊断和鉴别疾病,例如诊断白血病、骨髓生成障碍等。
dna的染色方法 -回复
![dna的染色方法 -回复](https://img.taocdn.com/s3/m/736bf42249d7c1c708a1284ac850ad02de800702.png)
dna的染色方法-回复DNA的染色方法,是指将DNA分子与染色剂结合,使其在显微镜下可见,并能通过颜色变化来研究DNA的组成和结构。
DNA染色是分子生物学和遗传学研究中非常重要的技术手段之一。
本文将一步一步介绍DNA的染色方法,包括常用的吉姆萨染色法、DAPI染色法和荧光原位杂交技术。
首先,吉姆萨染色法(Giemsa staining)是DNA染色的经典方法之一。
该方法可以用于染色体的核型分析、细胞遗传学研究和病原体的检测等。
下面是吉姆萨染色法的具体步骤。
第一步,制备Giemsa染液。
将吉姆萨染液溶于磷酸缓冲液中,浓度通常为5至10。
第二步,处理细胞或染色体。
将需要染色的细胞或染色体进行固定,常用的固定方法包括醋酸甲酯固定、甲醛固定和凝胶固定等。
固定后,用磷酸缓冲液进行洗涤。
第三步,染色。
将固定的细胞或染色体放入Giemsa染液中,在37摄氏度下浸泡20至30分钟,然后用磷酸缓冲液淋洗。
洗净后的细胞或染色体可以直接在显微镜下观察。
其次,DAPI染色法是一种特异性染色方法,主要用于染色DNA分子。
DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吡啶)是一种蓝色荧光染料,可以与DNA分子的腺嘌呤核苷酸结合。
下面是DAPI染色法的步骤。
第一步,制备DAPI染液。
将DAPI溶于磷酸缓冲液中,浓度通常为1微克/毫升。
第二步,处理细胞或组织样本。
将样本进行固定,常用的固定方法包括乙酸溶液和甲醛溶液固定。
固定后,用磷酸缓冲液进行洗涤。
第三步,染色。
将固定的细胞或组织样本放入DAPI染液中,室温下孵育15至30分钟,然后用磷酸缓冲液淋洗。
洗净后的样本可以通过荧光显微镜观察,DAPI染色的DNA呈现出明亮的蓝色荧光。
最后,荧光原位杂交技术(FISH)是一种高分辨率的DNA分子定位方法,可以用于检测染色体异常、确定基因组组装和研究DNA序列的位置等。
下面是FISH技术的步骤。
第一步,准备探针。
选择合适的DNA片段作为荧光标记的探针,可以使用放射性同位素或荧光染料标记。
产品推荐:姬姆萨吉姆萨染液
![产品推荐:姬姆萨吉姆萨染液](https://img.taocdn.com/s3/m/6f67f3cc4431b90d6d85c75e.png)
Absin提供染色效果优异且质量稳定的姬姆萨染液/改良型姬姆萨染液试剂盒产品,仅需简单将对应母液稀释至工作液,即可用于后续细胞核及细胞质染色。一般细胞核被染成紫红色或紫蓝色,而细胞质则被染成浅红色。
姬姆萨染液(Giemsa Staining Solution)由天青和伊红组成。其染色原理和结果与瑞氏染色法(伊红+美蓝)基本相同:嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染色为粉红色;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料天青结合,染色为紫蓝色;中性颗粒呈等电状态与伊红和天青均可结合,染色呈淡紫色。
货号
品名
规格
abs47047618ຫໍສະໝຸດ 姬姆萨染液100ml
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改良型姬姆萨染液
100ml
爱必信生物作为高品质生命科学产品的中国品牌,可提供更多细胞培养用血清、以及更多染色产品如DAB、DAPI和PI等,助力您的相关研究!
货号
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DAPI染色液
10ml
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DAB 显色试剂盒(棕黄色,IHC)
1kit
abs9358
PI染色液
1ml
瑞氏-吉姆萨染液配法
![瑞氏-吉姆萨染液配法](https://img.taocdn.com/s3/m/d9002b16a7c30c22590102020740be1e650ecc62.png)
瑞⽒-吉姆萨染液配法英⽂拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料,溶于甲醇。
后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离⼦。
使⽤⽅法瑞⽒(Wright's staim;美蓝-伊红Y)染⾊:1.瑞⽒染料是由碱性染料美蓝(Methvlem blue)和酸性染料黄⾊伊红(Eostm Y)合称伊红美蓝染料即瑞⽒(美蓝-伊红Y)染料。
2.⽤甲醇作瑞⽒染料溶剂,即成瑞⽒染液。
甲醇是瑞⽒染料良好溶剂,有两种作⽤:(1)甲醇使瑞⽒染料中美蓝(M)与伊红(E)在溶液中离解,可使细胞成分选择性吸附其中的有⾊物质⽽着⾊。
甲醇ME(瑞⽒染料)----→M+ + E-在配制的瑞⽒染液中美蓝如放置过久即可氧化⽽含有天青,美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红⾊,但不能使胞浆染为蓝⾊,多余美蓝就可以使胞浆染成蓝⾊,染⾊主要是化学作⽤,是离⼦彼此结合的反应。
(2)甲醇具有强⼤的脱⽔⼒,可将细胞固定在⼀定形态及增加细胞结构的表⾯积,提⾼细胞对染料吸收作⽤,同时由于甲醇吸附染⾊液中的⽔,使染⾊液升温,加速染⾊反应。
染液配制(1) 瑞⽒染液配制:瑞⽒染料 830gm或1g甲醇(AR)500ml或600ml○先称⼲燥(事先放⼊温箱⼲燥过夜)瑞⽒染料放置乳钵内,⽤乳棒轻轻敲碎染料成粉末,再⾏研磨⾄听不到研芝⿇声即呈细粉末,加少许⽢油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸内显“⼀⾯镜”光泽,⽽⽆染料粉粒沉着。
○再加较多量甲醇研磨呈⼀⾯镜光亮,静置⽚刻,将上层液体倒⼊⼀清洁储存瓶内(最好⽤甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重复数次,⾄乳钵内染料及甲醇⽤完为⽌,摇匀,密封瓶⼝。
○存室温暗处,储存愈久,则染料溶解、分解就越好,⼀般储存3个⽉以上为佳。
(2) 缓冲液:●缓冲液作⽤:○染⾊对氢离⼦浓度是⼗分敏感的,据观察pH值的改变,可使蛋⽩质与染料形成的化合物重新离解。
○缓冲液须保持⼀定的pH使染⾊稳定,PBS的pH ⼀般在6.4~6.8,○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作⽤,偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作⽤,使pH恒定。
吉姆萨染色
![吉姆萨染色](https://img.taocdn.com/s3/m/bfcabe2d915f804d2b16c10b.png)
吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成。
染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。
细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。
因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染。
配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误。
一般性操作技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春天要常用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰富维生素a,常用可加快皮肤血液循环,剌激面部细胞分泌,有效改善皮肤生理环境,减少气候对皮肤的危害。
第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法,临床上应用极为广泛,非凡是对于各种血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞分析仪的广泛应用,血涂片的观察也可作为判定仪器结果的简易方法。
比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量,借以作为仪器结果分析后质控的参考。
但积压涂片制备和染色不良,常使细胞鉴别发生困难,甚至导致错误结论。
例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多集中于边缘,细胞分布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。
因皮制备厚薄适宜,分布均匀,染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。
血涂片制备方法及注重事项将在实习指导中具体介绍。
姬姆萨染色法
![姬姆萨染色法](https://img.taocdn.com/s3/m/9df610ca26fff705cc170aea.png)
吉姆萨染色液说明书【产品名称】吉姆萨染色液【包装规格】货号:DM0002单瓶包装规格分别为:A液吉姆萨染液:20ml、100ml、250ml、500ml;B液磷酸盐缓冲液:250ml、500ml、5000ml;每套/盒包装规格分别为:A液20ml+B液250ml/盒、A液100ml+B液4×250ml/盒、A液250ml+B液5×500ml/盒、A液500ml+B液5000ml/盒。
【预期用途】用于组织细胞学染色从而鉴别骨髓和其他造血组织(淋巴结)中的白细胞,还可用于鉴定某些微生物。
【检验原理】吉姆萨染色原理及结果与瑞氏染色基本相同,吉姆萨染色液(Giemsa stain,又称姬姆萨染色液)对胞浆着色力较强,能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒,着色清晰,但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳,故吉姆萨染色常与瑞氏染色联合使用。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
血细胞染色:吉姆萨染料中含有美蓝和伊红两种染料,前者为碱性,后者为酸性,它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力,从而使其呈现出不同的色调,以便于辨认。
染色体染色:也称G显带,染色体上富舍A-T碱基对的DNA和组蛋白结合紧密,胰酶处理时不易高度抽提,和染料亲和力较强,呈深带;而富含G-C碱基对的区段结合的蛋白质被胰酶抽提,和染料亲和力降低,呈浅带。
【主要组成成分】试剂组成主要成分1、A液吉姆萨染液吉姆萨染料2、B液磷酸盐缓冲液磷酸盐【储存条件及有效期】5℃~35℃环境保存,原包装未开封染色液的有效期为24个月,在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完,每次用后应及时拧紧瓶盖,以免挥发或变质。
吉姆萨染色法的质量控制
![吉姆萨染色法的质量控制](https://img.taocdn.com/s3/m/fee8423953ea551810a6f524ccbff121dc36c57c.png)
吉姆萨染色法的质量控制吉姆萨染色法(Giemsa staining)是一种常用的细胞染色方法。
该方法主要用于细胞质、核、细胞器和细胞核分裂染色等方面的观察分析。
在进行吉姆萨染色法操作之前,需要进行质量控制,以确保染色结果准确可靠。
以下是吉姆萨染色法的质量控制指导内容。
1. 实验设备准备在进行吉姆萨染色法前,需要准备好实验所需设备,如显微镜、玻璃片、染色盘、振荡器以及吉姆萨染色剂等。
对于实验设备进行定期的检查维护和清洁也是保证实验质量的基本要求。
2. 染色剂质量控制吉姆萨染色法的效果与染色剂的质量有很大关系。
因此,在使用染色剂之前,需要对其进行质量控制。
可以通过视察颜色、紫外光谱光谱图和色谱图等方法来确定染色剂的质量。
优质的染色剂具有颜色深度均匀、无色差、紫外吸收能力强、色谱图稳定等特点。
3. 操作规范控制染色操作的规范性对结果的准确性影响很大。
在进行染色操作时,需要严格按照染色步骤和时间,避免操作时间过长或不够等问题对结果产生影响。
同时,注意保持操作环境的干净、无菌,避免杂质交叉污染的可能性。
4. 标本质量控制吉姆萨染色法的质量也与标本的质量有很大关系。
在进行吉姆萨染色前,需要对标本进行检查,避免病理标本脱落、破碎、污染等问题导致染色效果不佳。
同时,还应对标本进行合适的处理和存储,避免标本变质、干燥等情况。
总之,吉姆萨染色法的质量控制非常重要,质量控制的合理有效,不仅能够保证染色效果准确可靠,还可以为科学研究和诊断提供有力支持。
吉姆萨染色的原理
![吉姆萨染色的原理](https://img.taocdn.com/s3/m/3d7c4ecd5727a5e9846a6127.png)
吉姆萨染色的原理之答禄夫天创作吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成。
染色原理和结果与瑞特染色法基底细同。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。
细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。
因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染。
配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误。
一般性操纵技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春天要经常使用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰富维生素a,经常使用可加快皮肤血液循环,剌激面部细胞分泌,有效改善皮肤生理环境,减少气候对皮肤的危害。
第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法,临床上应用极为广泛,特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞分析仪的广泛应用,血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。
比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量,借以作为仪器结果分析后质控的参考。
但积压涂片制备和染色不良,常使细胞鉴别发生困难,甚至导致错误结论。
例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多集中于边沿,细胞分布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。
因皮制备厚薄适宜,分布均匀,染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。
吉姆萨染色方法及结果
![吉姆萨染色方法及结果](https://img.taocdn.com/s3/m/74495105de80d4d8d15a4f24.png)
1.材料
1g的姬姆色素染料加入66ml甘油,混匀,60度保温溶解两小时,再加入66ml甲醇混匀,即配成姬姆色素原液,此原液用前用PBS(6.8)稀释十倍左右就可以使用(此为姬姆萨工作液)。
工作液可保存一个月左右,Camon固定液(3体积乙醇+1体积冰乙酸);
PBS缓冲液配制:在基因工程手册里,网上的不大准确!
2.方法
①涂片的制作与固定:用移液枪吸取10-20μL待检溶液滴在载玻片上,均匀涂布,室温下阴干后,用Camon固定液固定涂片10min。
②染色:置姬姆萨工作液30min。
③洗脱:染色完成后,涂片立即用ddH2O洗脱。
④显微镜观察:用甘油压片,指甲油封固。
在100×油镜下观察。
鸡红细胞的染色原理
![鸡红细胞的染色原理](https://img.taocdn.com/s3/m/49da475af4335a8102d276a20029bd64793e6260.png)
鸡红细胞的染色原理
鸡红细胞染色的原理可以分为两种常用方法:吉姆萨染色法和乌法染色法。
1. 吉姆萨染色法(Giemsa staining):这是一种常用的染色方法,用于显微镜下观察细胞形态和细胞核的染色。
其原理是吉姆萨染料的碱性部分与细胞内酸性的DNA和RNA结合,形成紫蓝色的染色体,而酸性部分与细胞质中碱性的蛋白质结合,形成粉红色的胞浆。
这样就能清晰地区分细胞核和胞浆。
吉姆萨染色还能染色细胞内的线粒体、内质网、高尔基体等细胞器。
2. 乌法染色法(Wright staining):这是一种常用的血液染色方法,用于观察血细胞的形态、细胞计数和分类。
原理是将血涂片与乌法染料溶液接触,乌法染料会与细胞内某些成分结合,产生特定的颜色反应。
乌法染料能染出不同颜色的细胞,比如鸡红细胞染为橙色、核形态染为深蓝紫色,嗜酸性粒细胞染为橙红色等。
这样就可以根据细胞的颜色和形态特征对血涂片中的细胞进行分类和计数。
吉姆萨染色的原理
![吉姆萨染色的原理](https://img.taocdn.com/s3/m/ace4e61aaa00b52acec7ca0c.png)
吉姆萨染色的原理吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成。
染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。
细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。
因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染。
配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误。
一般性操作技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春天要常用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰富维生素a,常用可加快皮肤血液循环,剌激面部细胞分泌,有效改善皮肤生理环境,减少气候对皮肤的危害。
第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法,临床上应用极为广泛,特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞分析仪的广泛应用,血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。
比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量,借以作为仪器结果分析后质控的参考。
但积压涂片制备和染色不良,常使细胞鉴别发生困难,甚至导致错误结论。
例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多集中于边缘,细胞分布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。
因皮制备厚薄适宜,分布均匀,染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。
血涂片制备方法及注意事项将在实习指导中详细介绍。
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姬姆萨染色液(10×Giemsa Stain)
简介:
姬姆萨色素(又称吉姆萨色素)是由天青Ⅱ与伊红混合而成,Giemsa 染色原理和结果与瑞氏染色基本相同,姬姆萨染色液对胞浆着色力较强,能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒,着色清晰,但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳,故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。
Leagene Giemsa Stain 以进口的姬姆萨色素、甲醇为主要原料,含Leagene 特有衬染剂,经研磨配制而成,能呈现出清晰的细胞染色效果,经常用于组织切片、血液和细胞涂片、细菌、染色体显带、原生动物寄生虫等染色。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
Leagene Giemsa Stain(10×)由10×储存液和10×磷酸盐缓冲液组成,混合成工作液后使用;亦可以分开使用,即先用Giemsa Stain 染色液染色,再经磷酸盐缓冲液处理,亦可以得到满意的染色效果。
组成:
自备材料:
1、 载玻片
2、 蒸馏水
3、 甲醇
4、 显微镜
5、 0.1~0.5%乙酸
操作步骤(仅供参考):
(一)一步法涂片染色 1、 Giemsa 工作液的配制:
按试剂(A):试剂(B):蒸馏水=1:1:8混合,即取1份Giemsa Stain(10×)、1份磷酸盐缓冲液(10×)、8份蒸馏水,充分混匀,即为Giemsa 工作液。
Giemsa 工作液为即用型
编号 名称
DM0003
2×100ml DM0003
2×500ml
Storage 试剂(A): Giemsa Stain (10×)
100ml 500ml RT 避光 试剂(B): 磷酸盐缓冲液(10×) 100ml
500ml RT
使用说明书
1份
试剂,不易保存,即用即配。
2、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定
3、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加Giemsa工作液覆盖涂片,室温滴染。
4、用自来水或蒸馏水缓慢从玻片一端冲洗。
5、干燥、镜检。
染色结果:
嗜酸性颗粒粉红色
嗜碱性颗粒紫蓝色
中性颗粒淡紫色
(二)两步法涂片染色
1、Giemsa工作液的配制:
按试剂(A):蒸馏水=1:4配制Giemsa工作液,即取1份Giemsa Stain (10×)加入到4份蒸馏水中充分混匀,即为Giemsa工作液。
Giemsa工作液为即用型试剂,不易保存,即用即配。
2、磷酸盐工作液的配制:
按试剂(B):蒸馏水=1:4配制磷酸盐工作液,即取1份磷酸盐缓冲液(10×)加入到4份蒸馏水中充分混匀,即为磷酸盐工作液。
3、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定1~3min。
4、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加Giemsa工作液覆盖涂片,室温滴染10~
15min。
5、加入等量磷酸盐工作液,轻轻晃动载玻片,室温静置。
6、用自来水或蒸馏水缓慢从玻片一端冲洗。
7、干燥、镜检。
染色结果:
嗜酸性颗粒粉红色
嗜碱性颗粒紫蓝色
中性颗粒淡紫色
(三)组织切片染色
1、Giemsa工作液的配制:
按试剂(A):试剂(B):蒸馏水=1:1:8配制,即取Giemsa Stain(10×)、1份磷酸盐缓冲液(10×)、蒸馏水,充分混匀,即为Giemsa工作液。
Giemsa工作液为即用型试剂,不易保存,即用即配。
2、新鲜组织立即置于Regaud固定液固定,期间应更换1次固定液。
3、重铬酸钾固定1天。
4、流水冲洗。
5、照常规脱水、包埋。
6、切片厚度约为5μm,常规脱蜡至水。
8、蒸馏水清洗2次。
9、入含Giemsa工作液染缸,浸染。
10、蒸馏水稍微清洗。
11、0.1~0.5%乙酸洗。
12、自来水稍微冲洗。
13、用无水乙醇迅速脱水。
14、二甲苯透明,中性树脂封固。
染色结果:
细胞核蓝色至紫色
细胞质淡蓝色
嗜铬细胞胞质黄绿色
结缔组织淡红色
注意事项:
1、血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀,以免影响染色效果。
2、涂片染色中Giemsa染色后,请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。
3、如果染色过深或过浅,应调整染色时间或工作液浓度。
4、涂片染色和组织切片染色中,pH值对染色有一定影响,载玻片应清洁、无酸碱污染,
以免影响染色效果。
5、染色液经稀释后液面应金属光泽则表示染液有染色作用,否则染色液可能失效。
6、组织切片染色中,染色后需用大量0.1~0.5%乙酸急速冲洗,避免浮面沉淀物污染切片
后难以洗脱。
7、0.5%乙酸分化常用于Giemsa组织切片染色,如有必要亦可用于细胞涂片,但其浓度
应适量下调。
0.5%乙酸分化切片时,切片呈粉红色即可终止。
8、Giemsa组织切片染色中,无水乙醇脱水要迅速,否则切片易褪色。
9、涂片染色和组织切片染色中,如需急速获得结果,可按Giemsa Stain储存液(10×):磷酸盐缓冲液=1:1配制Giemsa工作液,充分混匀,即为快速Giemsa染色工作液,将染色液滴加于细胞涂片或组织切片上,加热染色,20~30s后重新加染色液,反复5~10次,其余步骤同上。
10、染色液可重复使用,但不能多次重复,若有沉淀物应过滤后使用。
11、Regaud固定液: 按3%重铬酸钾:甲醛=4:1配制,临用前混匀,1~2天后失效。
12、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:24个月有效。
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