补体溶血实验ppt课件

2%
生理
结果
SRBC 盐水
2
管2
-
0.5
-
2.5
沉淀物
3
管3
0.5
-
沉淀物
-
2.5
4
管4
-
0.5
-
2.5
沉淀物
5 管2上清 -
0.5 0.5
-
液
6 管3上清 0.5
-
0.5
-
液
将上述5支试管放入37℃水浴箱内30min观察有无溶血现 象，并解释原因
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实验结果
溶血：液体呈红色透明 不溶血：呈红细胞混悬液
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（5）免疫调节作用：①C3可参与捕 捉固定抗原，使抗原易被APC处理与 递呈。②补体可与免疫细胞相互作用， 调节细胞的增殖与分化。③参与调节 多种免疫细胞的功能。
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补体激活的途径：
经典途径 旁路途径 MBL途径
相同点：三条途径有共同的末端通路，即 形成膜攻击复合物溶解细胞。
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1、补体经典途径(classical pathway)：是 指以抗原抗体复合物为主要刺激物，使补体 固有成分以C1、C4、C2、C3、C5～C9顺 序发生酶促连锁反应，产生一系列生物学效 应和最终发生细胞溶解作用的补体活化途径。
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思考题
根据所给的条件，请预测哪几管会溶血？ 哪几管不会溶血？请你详细分析溶血和不 溶血的原因。
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三条途径的区别见下表
区别点 激活物
参与成分
经典途径 IgG1～3或IgM
与Ag复合物
C1～C9
旁路途径 脂多糖、酵母多糖、 凝聚的IgA和IgG4
C3，C5～C9， B、 P、D因子
MBL途径
MBL （甘露聚糖结 合凝集素 ）
同经典途径
C3转化酶 C3转化酶
所需离子
C4b2b
C4b2b3b Ca2＋ Mg2＋
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2、替代途径（旁路途径）:是指不经C1、 C4、C2活化，而是在B因子、D因子和P因 子参与下，直接由C3b与激活物结合启动 补体酶促连锁反应，产生一系列生物学效 应和最终发生细胞溶解作用的补体活化途 径。在感染早期可为机体提供有效的防御 机制。其激活物是病原微生物等提供接触 表面
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3、MBL途径：在感染早期，体内分泌甘露 聚糖结合凝集素(MBL)和C反应蛋白。 MBL与细菌表面的甘露糖残基结合，然后 与丝氨酸蛋白酶结合形成MASP（MBL相 关的丝氨酸蛋白酶），MASP继而水解C4 和C2启动后序的酶促连锁反应，产生一系 列生物学效应和最终发生细胞溶解作用的 补体活化途径。激活物（或激活剂）是炎 症期产生的蛋白和病原体。
灭活：56℃加热30min即可灭活
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补体系统的生物学功能
（1）溶菌和溶细胞作用：补体系统激活 后，在靶细胞表面形成MAC，从而导致 靶细胞溶解。
（2）调理作用：补体激活过程中产生的 C3b、C4b、iC3b都是重要的调理素， 可结合中性粒细胞或巨噬细胞表面相应 受体，因此，在微生物细胞表面发生的 补体激活，可促进微生物与吞噬细胞的 结合，并被吞噬及杀伤。
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（3）引起炎症反应：在补体活化过程中 产生的炎症介质C3a、C4a、C5a。它们 又称为过敏毒素，与相应细胞表面的受 体结合，激发细胞脱颗粒，释放组胺之 类的血管活性物质，从而增强血管的通 透性并刺激内脏平滑肌收缩。C5a还是一 种有效的中性粒细胞趋化因子。
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（4）清除免疫复合物：机制为：①补体 与Ig的结合在空间上干扰Fc段之间的作用， 抑制新的IC形成或使已形成的IC解离。② 循环IC可激活补体，产生的C3b与抗体共 价结合。IC借助C3b与表达CR1和CR3的 细胞结合而被肝细胞清除。
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溶血素（抗绵羊红细胞抗体）：是以SRBC 作为抗原免疫家兔所得到的兔抗血清，无 需进一步提纯，但试验前应先56℃加热 30min或者60 ℃3min灭活补体。
溶血反应：由于抗原（红血球）和抗体 （溶血素）进行特异性的结合，在电解质 存在时能发生凝集，若再有补体参与，红 血球则被溶解。
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实验目的
实验三 补体溶血实验
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补体溶血实验
补体：一组存在于人和脊椎动物血清 中及组织液中具有酶样活性，不耐热 和功能上连续反应的糖蛋白，是抗体 发挥溶细胞作用的必要补充条件，在 正常情况下，血清中的补体大多以无 活性酶前体形式存在。
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物理性质：不稳定，易受各种理化因 素的影响，加热，紫外线照射，机械 震荡，酸碱和酒精等因素均可破坏补 体。
C3bBb
C3bnBb Mg2＋
同经典途径 同经典途径
同经典途径
作用
参与特异性免疫在 参与非特性免疫，在 感染后期发作用 感染后期发挥作用
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同经典途径
补体的来源、采集
实验室常用豚鼠、兔的新鲜血清作为补体 的来源。
补体的采集：一般选用3-5只健康未妊娠的 豚鼠或兔子，以无菌操作采集血液，采集 好的血液置4℃冰箱过夜，次日离心分离血 清即可分离到补体。
掌握补体测定方法 加深了解补体的作用和激活条件
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材料与试剂
试剂 1.抗原：2%绵羊红细胞 2.抗体：溶血素 3.补体：实验室常以健康豚鼠血清作为补体 材料:小试管，生理盐水，水浴箱
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实验方法
取试管4支，按下表加入各物
试管号 溶血素 补体 2%SRBC 生理盐水 结果
wk.baidu.com
1
0.5
0.5
0.5
0.5
2
0.5
-
0.5
1.0
3
-
0.5
0.5
1.0
4
0.5 0.5（灭活） 0.5
0.5
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实验方法
将上述试管放在37℃水浴箱内30分钟观察 有无溶血现象。
将不溶血试管离心，3000rpm，5min， 使红细胞沉淀。
将2、3号管上清液分别移入5、6管，按下 表加入试剂
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实验方法
试管号 内容物 溶血素 补体