HE染色和尼氏染色
HE染色概念及定义
He染色介绍苏木精—伊红染色法( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质与细胞外基质中的成分着红色。
染色分类易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )与嗜酸性( acidophilia ) 。
组织内的蛋白质构成蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。
在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞与神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。
而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维与肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。
如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。
所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。
去氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中称蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲与力不同及染色性质不一样。
经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化与弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。
再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。
故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。
染色结果细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。
HE染色资料介绍
普通染色又称常规染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。
它是病理技术中最常用的一种方法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法，以达到准确，完整的病理诊断。
一、染色目的病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同的方法，将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。
例如，HE染色，好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。
清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染色技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，方能提高。
如果染色不好，切片染色一团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染色结果的好坏直接关系到诊断的准确性。
二、染色的作用1．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为碱性。
酸性染料中有染色作用的为阴离子，碱性染料中有染色作用的为阳离子，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。
在染色时，细胞核中的酸性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生作用，由于反应的部位不同，结果着色有异。
2．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。
由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。
一般来说，染色的学说还有许多，但说服力强的仅有上述两种。
但不管怎么样解释，实际上完成的每一种染色，都与上述两种学说分不开，它们的作用是相辅相成，同时存在的。
三、染色方法及步骤1．人工苏木素-伊红染色法（HE法）(1)切片浸入二甲苯中5-10min；(2)切片浸入二甲苯中5-10min；(3)100%酒精1min。
(4)100%酒精1min。
(5)95%酒精1min。
he染色评分标准
he染色评分标准
HE染色评分标准通常用于评估组织或细胞的病理学样本质量，以及在某些情况下，用于量化病变的严重程度。
具体评分标准可能因应用场景和实验室而异，但以下是一个通用的HE染色评分标准，仅供参考：
1. 组织结构：观察组织样本的结构是否清晰，细胞排列是否整齐。
根据组织的完整性，可以给予0-5分的评分，其中0分表示组织结构完全破坏，5分表示组织结构完整且清晰。
2. 细胞核染色：观察细胞核的染色情况，包括染色质分布、核膜清晰度以及核仁是否清晰。
根据染色质量，可以给予0-5分的评分，其中0分表示染色质量极差，5分表示染色质量非常好。
3. 细胞质染色：观察细胞质的染色情况，包括质膜和细胞质的染色质量。
根据染色质量，可以给予0-5分的评分，其中0分表示染色质量极差，5分表示染色质量非常好。
4. 细胞活性：观察细胞的活性状态，包括细胞的代谢活性、增殖能力和形态特征。
根据细胞的活性，可以给予0-5分的评分，其中0分表示细胞活性极差，5分表示细胞活性非常好。
综合以上四个方面，可以对HE染色样本进行全面的评分。
总分为0-20分，其中0分表示样本质量极差，20分表示样本质量非常好。
在病理学诊断中，可以根据实际需要和实验室标准对HE染色评分标准进行调整和优化。
HE染色
H-E染色概述苏木精（Hematoxylin）-伊红（Eosin）染色也称普通染色，简称为H-E染色。
是生物组织学、病理学及细胞学工作必不可少的最常用的染色方法，故又称常规染色H-E染色应该是红蓝相映，层次浓淡均为分明稳恒定优质各种固定、包埋方法所制作的组织切片和冰冻切片等，均可用采用常规染色H-E染色原理组织细胞的不同成分对苏木精染料的亲合力不同，经苏木精染色的组织切片，再利用酸乙醇的分化作用，可使细胞核等酸性成分着色清晰，而其它成分脱色再经伊红染细胞质等碱性成分，则各种组织与病变的一般形态结构均可显示出来一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色到目前为止人类所积累的病理组织学知识，绝大部分是从观察苏木精-伊红染色标本所得来的第一节染液及溶液的配制一、明矾苏木精染液的配制苏木精染液的配法很多，普通、常规染色多用明矾苏木精，常用的有哈瑞（Harris）、埃利希（Ehrlich）、德拉菲而德（Delafield）及迈耶（Mayer）等明矾苏木精染液用钾明矾或铵明矾中的铝离子作为苏木精的媒染剂利用氧化汞等氧化剂进行人工氧化或通过自然氧化成熟的方法，使苏木精具有较强的染色效果还需用冰醋酸作为促染剂，以增强染色能力（一）哈瑞斯（Harris）苏木精染液1．配方（1）甲液苏木精1g无水乙醇10ml（2）乙液钾明矾（硫酸铝钾）20g蒸馏水200ml（3）其他氧化汞0.5～1g冰醋酸0.5～1ml2．配制法分别配制甲、乙液，将乙液（加温并搅拌），待全部溶解后，再加入甲液，混合后煮沸1～2分钟，然后改用小火加温，慢慢加入氧化汞，同时不停地摇荡或搅拌使其充分氧化，当液体变为深紫蓝色时，即迅速将容器放入入冷水中使之迅速冷却，室温静置数小时至一夜。
第二天过滤，每100毫升滤液内加0.5～1毫升冰醋酸，以增强其染色力染色时间为3～15分钟此液为人工氧化剂，配制方便，配后第二天即可应用，且染色时间较短，为临床病理常用之方法，保存时间不能太长，经2～6个月后染色作用渐弱，故现用现配为好，一次不宜配制过多，应按需要量随用随配钾明矾为媒剂，氧化汞为氧化剂，冰醋酸为促染剂二、伊红染液的配制为砖红色粉末状或酱红色结晶，是最常用的胞浆染料伊红有水溶性和醇溶性，黄光（Y）与蓝光（B）之分病理组织学常规染色一般多用水溶性伊红Y伊红染液的一般浓度为0.25％～1％。
组织he染色的原理
组织he染色的原理染色体染色是指通过特定染料对染色体进行染色的过程。
染色体染色的原理主要涉及到染料与染色体之间的相互作用。
染料会通过与染色体上存在的DNA、RNA、蛋白质等分子结构发生特定的相互作用来实现染色作用。
在染色体染色的过程中，通常会使用一种或多种染料，包括核染剂、碱性染料和荧光染料。
1. 核染剂染色原理：核染剂是指能够与DNA结构相互作用的染料。
核染剂主要是通过静电相互作用结合到DNA的底物上。
染色体上的DNA碱基中有高达35%以上的含氮碱基，其中较多的是腺嘌呤(A)和胸腺嘧啶(T)，较少的是鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)。
核染剂通常是阳离子，它们与DNA中的阴离子结合，形成染色体上显著的染色区域。
核染剂通过静电相互作用与DNA结合后，会使染色体在显微镜下呈现颜色，从而实现染色。
2. 碱性染料染色原理：碱性染料是与DNA分子的磷酸含量相互作用的染料。
DNA分子上的磷酸基团带有负电荷，而碱性染料则带有正电荷。
当碱性染料与DNA分子中的磷酸基团相互作用时，由于相互之间的电荷吸引作用，染料会结合到染色体上，从而实现染色。
3. 荧光染料染色原理：荧光染料是指能够发射荧光的染料。
荧光染料通常通过与DNA或RNA分子结合后，发生能级跃迁，从而发出光信号。
荧光染料可以通过荧光显微镜观察到，从而实现染色。
荧光染料常常用于细胞、组织或胚胎中标记特定的DNA、RNA 或蛋白质，以获取有关它们位置和功能的信息。
在染色体染色的实验操作中，需要适当的处理样本，以便染料与染色体有效结合。
通常情况下，样本需要进行固定、脱水、染色等处理步骤。
染色体染色的结果要依赖于染色剂的选择、使用条件、操作技巧等多个因素。
总结来说，染色体染色的原理是通过染料与染色体上存在的分子结构相互作用，实现对染色体的染色。
核染剂通过静电相互作用与DNA结合，碱性染料则与DNA分子中的磷酸基团相互作用，荧光染料则发生能级跃迁并发出光信号。
这些作用使得染色体能够在显微镜下呈现颜色或发出荧光，从而实现染色的效果。
尼氏染色与HE染色区别联系
四 尼氏染色的应用
观察神经元内的细胞结构； 通过尼氏染色后对尼氏体的观察来了解神经元的
损伤； 检验实验动物脑区损毁或埋藏电极的位置
五 尼氏染色步骤
1 切片脱脂，程序如下： 二甲苯I（5min）---二甲苯II （5min）---100%酒精I （2min）---100%酒精II （2min）---95%酒精 （2min）---80%酒精（2min）---70%酒精（2min）
碱性染料染色，发现神经元胞体中的尼氏体。
二 神经细胞的尼氏体
尼氏体（Nissl body）：是胞质内的一种嗜碱性物质， 广泛见于各种神经元，但其形状大小和数量则各有 差异。
在电镜下观察，尼氏体主要由平行排列的粗面内质 网和多聚核糖体组成。尼氏体的主要功能是合成蛋 白质，作为神经活动时所需，如细胞中的某些成分 的更新以及产生神经递质有关的蛋白质和酶类。轴 突端的蛋白质大都来自胞体的尼氏体。神经元在兴 奋传导过程中，不断消耗某些蛋白质物质，尼氏体 可合成新的蛋白质以补充这种消耗。
三 尼氏染色的优势
以往显示神经元尼氏体多采用苏木精-伊红染色方法, 此法虽然也能观察到胞质中嗜碱性颗粒,但结构不甚 清晰,胞核、核仁、尼氏体颗粒模糊,分界不清,轴突、 树突难以辨认。
在尼氏染色中尼氏体清晰可辨,胞核、核仁也非常清 晰,而且很容易区分轴突和树突,收到了既可辨认器官 又可同时观察细胞质特殊结构的效果。尼氏染色中尼 氏体受染后呈块状(形如虎斑) 或颗粒状,核周围尼氏 体颗粒较大,近边缘处较小而细长,如在生理情况下,尼 氏体大而数量多,反映神经细胞合成蛋白质的功能较 强,在神经元受损时,尼氏体的数量可减少甚至消失。
尼氏染色中尼氏体受染后尼氏体大而数量多反映神经细胞合成蛋白质的功能较强在神经元受损时尼氏体的数量可减少甚至消失
HE染色和尼氏染色
HE染色一．HE染色简介：苏木精— 伊红染色法( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。
经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。
再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。
故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。
二．实验步骤：1.脱蜡：将石蜡切片在65℃烘箱中烘烤40-60分钟，后用二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）浸泡，各15min；2.水化：无水酒精（100%乙醇）2min，下行至90%、80%、70%酒精各2min，蒸馏水（Ⅰ）、（Ⅱ）各2min；3．染色：石蜡画圈，用滴管滴加苏木素在脑片上，放湿盒40s；（苏木素需要回收）4.流水浸洗：把玻片装入玻片铁架子里，在1L烧杯里用自来水对玻片进行流水浸洗；（脑片不要对着水流直接冲）5.1%盐酸酒精分化：快速提拉2-3下，用时3-5s左右；6.流水浸洗：自来水洗3次，每次20min；7.伊红染色：时间15min；8.流水浸洗；9.脱水：先在通风橱外的70%酒精浸没，时长2-3s，以颜色适宜为准，再放入通风橱中脱水，70%、80%、90% 2-3s，100%酒精Ⅰ、Ⅱ1min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ2min；10．封片：上述处理好的玻片，取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下去，避免发生气泡三．结果的判断：3.1实验结果：细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。
细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。
胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
组胚名词解释与简答题答案整理
组胚串讲课件名词解释与简答题答案整理1.HE染色：将能组织或细胞内的酸性物质染成紫蓝色的苏木清和将组织或细胞内的碱性物质染成粉红色的伊红两种染色法简称为：HE 染色3.内皮：衬贴在心、血管和淋巴管腔面的单层扁平上皮。
4.间皮：分布在胸膜、腹膜和心包膜的单层扁平上皮。
5.肌节：在偏振光显微镜下，明带呈单折光为各向同性：暗带呈双折光，为各向异性。
暗带中央有一条暗色的窄带。
明带中央有一条深色的细线成为Z线。
相邻的两条Z线之间的一段肌原纤维成为肌节。
6.横小管：是肌膜向肌质内凹陷的管状结构。
其走向与肌纤维长轴垂直。
7. 三联体：每一条横小管与其两者的终池共同组成8.闰盘：盘心肌纤维的连接处，在HE染色的标本中呈着色较深的横行或阶梯状粗线。
9.尼氏体：为嗜碱性物质，又称嗜染质，为光镜下可见的嗜碱性小体或颗粒。
在一些大型的运动神经元，尼氏体大而多，宛如虎皮花纹，又称虎斑小体。
电镜下，尼氏体由大量平行排列的粗面内质网和其间的游离核糖体构成。
是神经元合成蛋白质的部位。
10.神经原纤维：是神经细胞质内的丝状纤维结构。
在银染标本切片中，呈棕褐色细丝，交织成网，并向轴突和树突方向延伸。
神经原纤维由神经丝和微管聚集成束所构成，神经原纤维构成神经元的细胞骨架，具有支持作用，参与细胞内的物质转运。
现细胞之间的通讯。
12.化学突触：以神经递质为媒介，单向传导。
由突触前成分、突触后成分与突触间隙组成。
13.动脉周围淋巴鞘：简称为淋巴鞘，由位于中央动脉周围的淋巴组织构成。
主要含有大量T细胞，属于胸腺依赖区，同时含有巨噬细胞、交错突细胞等，但无毛细血管后微静脉。
14.胃底腺：分布于胃底和胃体，为单管状或分支管状腺。
每个胃底腺分为颈部、体部和底部3部分，由主细胞、壁细胞、颈粘液细胞、干细胞和内分泌细胞组成。
15.皱襞：皱襞是由黏膜和黏膜下层向腔面形成的突起。
16.小肠绒毛：小肠壁的内表面有大量的环形皱襞，皱襞上有许多绒毛状的突起。
17.微绒毛：是上皮细胞游离面的细胞膜和细胞质伸出的微细指状突起。
HE染色原理
HE染色原理详解1. 引言HE（Hematoxylin and Eosin）染色是一种广泛应用于组织切片染色的方法。
它是组织学研究中最常用的染色方法之一，可以用于观察和识别不同类型的组织细胞、细胞器和细胞组分，对于发现和诊断疾病具有重要的意义。
本文将详细介绍HE染色的基本原理以及每个步骤的具体操作。
2. HE染色基本原理HE染色使用两种染料，即天青（Hematoxylin）和伊红（Eosin）。
天青染色核酸物质，如细胞核和核染色质；伊红则染色细胞质和细胞器。
这两种染料相互作用，形成了HE染色效果。
2.1 天青（Hematoxylin）染色原理天青是一种天然染料，通过与组织中的阴离子基团结合而发生染色反应。
天青与酸性物质结合形成的盐类在碱性条件下呈现出蓝色或紫色，使得细胞核等含有核酸的区域染色深蓝色。
天青染色可以分为以下几个步骤：1.组织固定：将待染的组织标本进行固定，一般使用10%中性缓冲福尔马林。
2.脱水：将组织标本通过逐渐浓度递增的酒精溶液进行脱水处理。
3.清洁：用去嵌剂的醛固定液对组织标本进行处理。
4.蜡包埋：将组织标本放入熔蜡中，使其浸透均匀。
5.切片：用梯度旋转切片机切取薄片。
6.抗静电：使用正电极处理切片以减少静电。
7.染色：将切片浸入天青染料中，使其染色蓝色。
8.除碱：用醋酸或其他酸性溶液将切片除去多余的天青染料。
9.脱水：逆序使用乙醇溶液将切片脱水。
10.透明：用透明度递增的有机溶剂对切片进行透明化处理。
11.封片：将切片放入玻璃片中，并用固定剂固定。
2.2 伊红（Eosin）染色原理伊红是一种酸性染料，其分子中含有阳离子染色基团。
伊红可与细胞质内的嗜多染色质、酸性粒细胞内的颗粒以及胶原纤维等物质结合，形成染色沉淀，使细胞质等区域呈红色。
伊红染色可以分为以下几个步骤：1.脱蜡：将切片放入去蜡剂中，去除组织标本中的蜡质。
2.脱水：使用递减浓度的酒精溶液对切片进行脱水处理。
3.染色：将切片浸入伊红染料中，使其染色红色。
眼科学常见实验方法
2. 2 标本处理
2. 2. 1 视网膜铺片制作: 将眼球浸于 4%多聚甲 醛 磷酸缓冲液中固定 4℃过夜,自扁平部将眼球 剖成 前后两部分,取后半部分周边放射状剪开数 条,将视 网膜与巩膜和脉络膜小心分离,得视网膜
铺片。
2. 2. 2 血管染色: 按照ADP 酶染色[1] 的方法 对视网 膜铺片进行染色: 将视网膜铺片用 Tris-马
取材·脱水
（ ２）取材 大小１．５×１．５×０．２－ ０．３ｃｍ，厚度不 宜超过０．５ｃｍ，取材整齐、 平整、切成方形、圆形或矩 形，不要切成三角形， 要选取具有代表性的病变组 织。内窥镜活检、诊断 性刮宫等碎组织要用纱布包 好，再用大头针扎紧后 固定
３）脱水 利用梯度酒精逐步脱水，适当掌握其 浓 度与脱水的时间。加温脱水可使组织固缩，以室 温 脱水为佳；只有脱水彻底，组织才能透明充分，才 有利于石蜡的渗入。脱水剂要定期更换，组织块的 周围脂肪组织不宜过多，否则将引起脱水不良，难以 切片。
宜薄切，观察髓鞘神经轴索则可切厚些。
烤片脱蜡、水化，苏木素染色
（ １０）烤片 烤片时温度的控制与时间 的把握最 为重要，温度过高，组织与细胞 会出现龟裂；温度过 低或烤片时间不足， 切下的组织块容易脱落，一般 ６５℃烤２
０－ ３０ｍｉｎ，可防止上述现象。
（ １１）脱蜡、水化，苏木素染色 染色 前，切片须 经过两次二甲苯脱蜡，务求将 石蜡脱尽，再经梯度酒 精脱苯，最后至水， 再入苏木素液染色。该染液的配 置要准确， 染色时间的控制应依据苏木素的配方、染 液的新旧、季节、室温等多种因素综合考 虑，一般情 况下染５－ １５ｍｉｎ；冬天， 室温过低苏木素的钾明矾容 易析出，影响
当，玻片整 洁。⑧字体端正，号码清楚。
视网膜血管ADP酶染色
组织病理切片以及HE染色
组织病理切片以及 HE 染色组织病理切片以及HE 染色（一）实验原理:苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE 染色）能较好地显示组织结构与细胞形态,可用于观察、描述正常与病变组织的形态学,而且HE 切片可较长时间保存,被称为常规染色方法。
（二）实验步骤:一、制作切片1、取材、固定:取小鼠肾脏组织适当大小,并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块,进行石蜡切片。
脱水就是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后,必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂,通过这种溶剂的媒介作用,使石蜡浸入组织块。
在此过程中,因组织块中的水分被溶剂所取代,组织块变得透亮,因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯,处理时间为30min 左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其她浸透剂（如火棉胶、碳蜡与明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中,常需经过 3 小时的浸渍,期间需更换 3 次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为组织病理切片以及 HE 染色52-56 C。
组织块经过浸蜡或浸透,用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡与树脂等）包起的过程称包埋,包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度与韧度,有利于切成薄片。
石蜡包埋就是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60 C左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时,则需采用低温石蜡包埋,以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机与平推式切片机,以前者为多用。
切片厚度一般为3-5 ym。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上,迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40 C恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40 C的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60 C烤片30-60min后即可进行染色。
HE染色
HE染色是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法.TTC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲月赞，用来表示细胞的活力。
配制多为2％，染色要避光，37度条件下，它是评价脑缺血损伤常用的指标。
微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化学因素的作用而进行的。
物理因素如细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。
化学因素则是根据细胞物质和染料的不同性质而发生地各种化学反应。
酸性物质对于碱性染料较易吸附，且吸附作用稳固；同样，碱性物质对酸性染料较易于吸附。
如酸性物质细胞核对于碱性染料就有化学亲和力，易于吸附。
但是，要使酸性物质染上酸性材料，必须把它们的物理形式加以改变（如改变pH值），才利于吸附作用的发生。
相反，碱性物质（如细胞质）通常仅能染上酸性染料，若把它们变为适宜的物理形式，也同样能与碱性染料发生吸附作用。
细菌的等电点较低，pH值大约在2—5之间，故在中性、碱性或弱酸性溶液中，菌体蛋白质电离后带阴电荷；而碱性染料电离时染料离子带阳电。
因此，带阴电的细菌常和带阳电的碱性染料进行结合。
所以，在细菌学上常用碱性染料进行染色。
影响染色的其它因素，还有菌体细胞的构造和其外膜的通透性，如细胞膜的通透性、膜孔的大小和细胞结构完整与否，在染色上都起一定作用。
此外，培养基的组成、菌令、染色液中的电介质含量和pH、温度、药物的作用等，也都能影响细菌的染色。
二、染料的种类和选择染料分为天然染料和人工染料两种。
天然染料有胭脂虫红、地衣素、石蕊和苏木素等，它们多从植物体中提取得到，其成分复杂，有些至今还未搞清楚。
目前主要采用人工染料，也称煤焦油染料，多从煤焦油中提取获得，是苯的衍生物。
多数染料为带色的有机酸或碱类，难溶于水，而易溶于有机溶剂中。
为使它们易溶于水，通常制成盐类。
染料可按其电离后染料离子所带电荷的性质，分为酸性染料、碱性染料、中性（复合）染料和单纯染料四大类。
1、酸性染料这类染料电离后染料离子带负电，如伊红、刚果红、藻红、苯胺黑、苦味酸和酸性复红等，可与碱性物质结合成盐。
HE染色的步骤及方法
HE染色的步骤及方法HE染色（hematoxylin and eosin staining）是一种广泛应用于组织学研究与临床病理学中的常规染色方法，用于显示组织和细胞的形态结构、特征和组织的组织学构造。
HE染色的主要步骤包括固定、脱水、透明、浸染、洗涤、脱色、洗涤、著色、酸洗、洗涤和封片等。
下面将详细介绍每个步骤的具体方法。
1.固定：将待染的组织标本放入含有4%至10%的缓冲醛（如10%的中性缓冲醛）中固定。
固定的时间一般为24至48小时，具体时间根据组织的大小和种类而定。
2.脱水：在固定后，将组织标本转移到带有不同浓度的乙醇溶液中进行脱水。
脱水的目的是逐渐将水分从组织中溶解掉，以便更好地进行后续处理。
常用的乙醇浓度为70%、80%、95%、绝对乙醇和绝对乙醇。
3.透明：将脱水的组织标本转移到透明剂中，如苯酚、甘油等。
透明的目的是去除残留的乙醇，并将标本与石蜡相容，以便进行后续处理。
4.浸染：将透明的组织标本转移到硬化的石蜡中，通过加热使其温度达到融点，使组织与石蜡充分浸透。
通常情况下，标本需要浸染多次以确保充分浸透。
5.洗涤：将浸染好的组织放入清洁的容器中，用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除未浸透的石蜡。
6. 脱色：将洗净的组织标本放入xylene或但醇溶液中进行脱色，以去除标本中的石蜡。
脱色时间视标本的大小和种类而定，通常为30分钟至1小时。
7.再洗：将脱色的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的脱色剂。
8. 著色：将洗净的组织标本置于染色剂中进行著色。
HE染色中，常用的染色剂为血红和嗜酸性染料安伊汀（Eosin）。
组织标本一般需在血红染色剂中浸泡2至5分钟，然后脱水，再在安伊汀染色剂中浸泡2至5分钟。
也可根据需要调整具体的染色时间。
9.酸洗：将著色好的组织标本用弱酸性缓冲液进行酸洗，以去除过量的染色剂。
酸洗时间一般为几秒钟至几分钟。
10.再次洗涤：将经酸洗的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的酸洗液。
HE染色法
HE染色法苏木精—伊红染色法( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
原理易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia )；而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性（neutrophilia)。
组织内的蛋白质构成蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。
在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。
而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。
如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。
所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。
脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。
经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。
HE染色实验注意事项
HE染色实验注意事项
一、pH值的调节
如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。
因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。
染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
二、分色时间的控制
分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。
如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。
三、酒精脱水应彻底
切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。
切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。
四、避免切片干燥
在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。
五、避免切片污染
出现切片污染，污染物遮盖该部位的细胞或组织难以观察期形态改变。
应定期过滤各种染液和试剂以避免其中的沉淀物所引起的污染。
六、避免脱蜡不完全
冬季室温低时（14℃以下），二甲苯应在水浴缸中适当加温到30℃后再脱蜡，以避免因脱蜡不完全引起的染色不均匀呈雾化状态。
七、封片注意事项
最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。
HE染色概念及定义
He染色介绍苏木精—伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
染色分类易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia ) 。
组织内的蛋白质构成蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。
在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。
而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。
如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。
所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。
去氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中称蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。
经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。
再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。
故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。
染色结果细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。
实验指南·细胞实验HE染色
实验指南·细胞实验HE染色点HE染色做为病理实验中常见的方法之一，想必大家都不陌生，今天跟大家再一起看看具体它的基本原理和操作流程1HE染色基本原理HE染色法之所以成为细胞染色最常用的方法是因为HE染色法过程中除化学反应外，还有物理作用中吸附、吸收效果，使HE染色提供良好的核浆对比染色效果。
属性为碱性的苏木素染色液可以使细胞着蓝色，为酸性的伊红使细胞着红色，其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。
两种不同的染色液使细胞通过颜色来改变折光率，在光镜下呈现出细胞图像。
★★ ★ ★★2HE染色实验材料固定液：冰丙酮、常用95%乙醇苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，再取NaIO 31g，水5ml，然后加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1%盐酸系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶培养皿、培养瓶、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜3HE染色操作步骤01石蜡切片脱蜡至水依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗02苏木素染细胞核切片入Harris苏木素染3-8min，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，0.6%氨水返蓝，流水冲洗03伊红染细胞质切片入伊红染液中染色1-3min04脱水封片将切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片05显微镜镜检，图像分析若细胞用4％多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5minQ浙江华臻生物A浙江华臻生物技术公司是一家集生物医学基础研究、科研产品研发销售于一体的科研服务公司。
病理切片的结果分析方法
病理切片的结果分析方法HE染色：又称苏木素-伊红染色法，其中苏木素是Hematoxylin，简称H，伊红是Eosin，简称E，这是是普通光学显微镜观察与鉴别细胞凋亡与细胞坏死的一种染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
检验原理：* 苏木素是碱性染料，蓝紫色，可以使细胞核等着色。
被苏木素着色的结构本身为酸性，具有嗜碱性(Basophilic)。
* 伊红是酸性染料，粉红色。
可以将大多数细胞的细胞质染成红色。
被伊红着色的结构本身为碱性，具有嗜酸性(Acidophilic)。
* 不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性(Neutrophilic)。
结果：细胞核呈蓝色，细胞质，肌纤维，胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。
钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。
Masson三色染色：主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别染色。
Masson染色是最为常用的结缔组织染色法，此法多用于观察病变组织中纤维结缔组织的增生和分布，纤维性肿瘤与肌源性肿瘤的鉴别。
对酒精性肝硬化/坏死后性肝硬化及各型肝炎导致的小叶汇管区纤维组织增生程度的差别具有重要价值。
Masson染色在肾穿刺活检中可以用于判别在肾小球毛细血管网的系膜氏和上皮下是否存在嗜复红蛋白的沉积，对于肾脏疾病的病理诊断有重要意义。
检验原理：利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子大小和组织的渗透性有关。
根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成份显示出来结果：细胞核呈黑色，肌纤维呈红色，胶原纤维呈亮绿色。
抗酸染色法: acid－fast staining method 1882年由埃利希（F．Ehrlich）首创并经F．齐尔（Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。
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HE染色
.HE染色简介:
苏木精一伊红染色法（hematoxylin-eosin staining ），简称HE染色法，石
蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。
经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝, 如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。
再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。
故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。
.实验步骤:
1.脱蜡:
将石蜡切片在65C烘箱中烘烤40-60分钟，后用二甲苯（I）、（n）浸泡，各
15min ；2.水化：
无水酒精（100%乙醇）2min,下行至90%、80%、70%酒精各2min,蒸馏水（I）、
(U)各2min；
3.染色:
石蜡画圈，用滴管滴加苏木素在脑片上，放湿盒40s；（苏木素需要回收）
4.流水浸洗:
把玻片装入玻片铁架子里，在1L烧杯里用自来水对玻片进行流水浸洗；（脑片
不要对着水流直接冲）
5.1%盐酸酒精分化:
快速提拉2-3下，用时3-5s左右;
6.流水浸洗:
自来水洗3次，每次20min ；
7.伊红染色:
时间15min ；
8.流水浸洗;
9.脱水:
先在通风橱外的70%酒精浸没，时长2-3S,以颜色适宜为准，再放入通风橱中脱水，70%、80%、90%2-3s, 100%酉精I、n 1min，二甲苯I、n 2min；
10.封片:
上述处理好的玻片，取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下去，避免发生气泡
三.结果的判断: 3.1实验结果:
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。
细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。
胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。
例
如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。
胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。
3.2 HE染色评定标准:
(1)切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕;
(2)染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。
四•注意事项:
1•染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法，不同的染色液染色后的
处理是不一样的。
2•染色过程中所用的时间以及酒精梯度脱水的选择要根据染色时的室内温度、染液的新鲜程度及实验室的实际情况等灵活掌握。
在室温高、切片、染色液又是新配制的，染色时间就要短，反之时间就长。
.尼氏染色简介: 常用的碱性染料有Cresyl violet （焦油紫，甲酚紫，克紫）；thio nine （硫荲）；tolridi ne blue （甲苯胺蓝）等。
我们主要掌握的是焦油紫染色。
.实验步骤:
将石蜡切片在65C 烘箱中烘烤40-60分钟，后用二甲苯（I ）、（n ）浸 无水酒精（100%乙醇）2min ,下行至90%、80%、70%酒精各2min , （I ）、（n ）各 2min ；
3•染色：石蜡画圈，用滴管滴加焦油紫在脑片上，放湿盒
15s ；（焦油紫需要回
收） 4.流水浸洗：把玻片装入玻片铁架子里，在
1L 烧杯里用自来水对玻片进行流水
浸洗；（脑片不要对着水流直接冲） 5. 流水浸洗;
9.脱水：先在通风橱外的70%酒精浸没，时长2-3S ，以颜色适宜为准，再放入通
风橱中脱水，70%、80%、90% 2-3S, 100%酒精 I 、n 1min ，二甲苯 I 、n 2min ； 10.封片：上述处理好的玻片，取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一 端逐步盖下去，避免发生气泡。
三.结果判断: 镜下观察：尼氏小体呈蓝紫色。
四. 0.4%焦油紫的配置:
0.2g 焦油紫溶于50ml 双蒸水中，滴加0.4ml 冰醋酸，pH 调至3-4之间，过滤;
五. 注意事项:
1.染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法，不同的染色液染色后的 处理是不一样的。
2．染色过程中所用的时间以及酒精梯度脱水的选择要根据染色时的 室内温度、 染液的新鲜程度 及实验室的实际情况等 灵活掌握 。
在室温高、 切片、染色液又是 新配制的，染色时间就要短，反之时间就长。
尼氏染色
1•脱蜡:
泡，各 15mi n ；
2.水化:
蒸馏水。