人肺癌A549细胞凋亡相关基因的表达及意义
得力生诱导肺癌细胞株A549细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响
Ｃａ ｅ ４ ｌ ｎ Ｖｉｒ ｎｃ ｒ Ａ５ ９ Ｃｅｌｉ ｔ ｏ
ＺＨ ＡＮＧ ｎ— ａ ＤＩ Ｇ ｅ — ｏ ｇ ＸＩ Ｙａ ｘｉ ， Ｎ Ｗ ｉｒ ｎ ， ＡＯ － Ｚｕ ｋｅ
（ ． ０ ６Ｇｒ ｄ ｆＭ ｅ ｉ ｌ ｐ ｒｍｅ ｔ ｆ Ｇｒ ｄ ａｅＳ ｈ ｏ ， ｎ ｈ ｎ ｎ ｖｒｉ １ ２ ０ ａ ｅ ｄ ｃ ｏ ａ Ｄｅ ａ ｔ ｎ ａ ｕ ｔ ｃ ｏ ｌ Ｎａ ｃ ａ ｇ Ｕ ｉｅｓｔ ｏ ｙ；
关 键 词 ： 力生 ； ５９ 得 Ａ ４ 细胞株 ； 细胞凋亡 ； ｕｖ ｉ ｓｒｉｎ ｖ
中图分 类号 ： ７４２ Ｒ ３．
文献标 识 码 ： Ａ
文章编 号 ： ００ ２４２０）１ ０４ －０ １０ —２９ （０９０ － ０７ ４
Ｔｈ ｆ ｃ ｆＤｅ ｉｈｅ ｎ Ｉ ｄｕ ｉ ｇ Ａｐ ｐｔ ｓｓ ａ ｕ ｖ ｖ ｎ ｅ Ｅｆ ｅ ｔ ｏ ｌｓ ｎｇ ｉ ｎ ｃ ｎ ｏ ｏ ｉ ｎｄ Ｓ ｒ ｉ ｉ Ｅｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｏ ｕ ａ ｎ ｓ ａ ｌＣｅ ｌＬｕ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｈ ｍ ｎ Ｎｏ — ｍ ｌ ｌ ｎｇ
张艳 霞 ， 丁伟 荣。 肖祖克 。 ，
（ ． 昌 大 学 研 究 生 院 医 学 部 ２ ０ 级 ；２ 江 西 省 人 民 医 院 呼 吸 内科 ， 昌 ３ ０ ０ ） １南 ０６ ． 南 ３ ０ ６
摘 要 ：目的
探讨 中成药得力生诱 导肺癌 细胞株 Ａ ４ 细胞 凋亡 及其 对 ｓｒｉｎ 因表 达 的影响 。方法 ５９ ｕｖ ｉ基 ｖ
ｅ ｐｒ ｓ ｉｎ ｆｈｕ ａ ｏｎ ｓ ｌ ｃ ｌ ｌ ｎｇ ｃ ｎｃ ｒ Ａ５ ｅ １ Ｍ ｅ ｈｏ ｓ Ｍ ＴＴ ｓ ａ ｓ ｕｓ ｄ ｔ ｅ ｘ ｅ ｓｏ ｏ ｍ ｎ ｎ — ｍａ ｌ ｅ ｌ ｕ ａ ｅ ４９ ｃ ｌ． ｔ ｄ ａ ｓ ｙ ｗａ ｅ ｏ ｄ — ｔ ｒ ｎ ｈｅｐｒ ｉｅ ａ ｉ ｎｈｉ ｔｏｎ ｂ ｌｓ ｎ ｏ Ａ５ ｅ １ ｅ ｍｉ ｅ ｔ ｏｌ ｒ ｔｏｎ ｉ ｂｉｉ ｙ Ｄｅ ｉｈｅ ｇ ｔ ４９ ｃ ｌ．Ａｎｎｅ ｎ— ｋｉ ｗａ ｓ ｄ ｔ ｅ ｔｔ ｅ ｆ ｘｉ Ｖ ｔ ｓ ｕ ｅ ｏ ｔ ｓ ｈ
a549细胞形态特点
a549细胞形态特点a549细胞是一种人类肺腺癌细胞系，广泛应用于肺腺癌的研究中。
在细胞形态特点方面，a549细胞表现出以下几个特点：1. 细胞形态a549细胞呈椭圆形或卵圆形，大小约为15-30μm。
细胞质呈淡紫红色，细胞核位于细胞中央，呈圆形或椭圆形，直径约为10-15μm。
细胞核染色质均匀分布，核仁明显。
细胞质内含有丰富的细胞器，如内质网、高尔基体、线粒体等。
2. 细胞表面特征a549细胞表面呈现出微绒毛状结构，使细胞表面显得粗糙。
细胞表面还存在一些微细突起，使细胞具有一定的粘附性。
这些突起结构有助于细胞与周围细胞或基质进行黏附和相互作用。
3. 细胞增殖特点a549细胞具有较高的增殖能力，在培养基中可形成较为紧密的细胞群。
细胞群中的细胞紧密排列，呈薄板状或长条状。
细胞生长速度较快，通常在培养基中可见到细胞的分裂和增殖现象。
4. 细胞迁移特点a549细胞具有一定的迁移能力，在培养基中可形成细胞单层的移行现象。
细胞从初始位置逐渐移动到周围空白区域，形成新的细胞单层。
细胞迁移速度较快，表现出较强的侵袭性。
5. 细胞凋亡特点a549细胞在一定条件下可发生凋亡现象。
凋亡细胞通常具有以下特点：细胞体积缩小，细胞核凝缩和碎裂，细胞质内出现凋亡小体等。
凋亡细胞通常会被周围细胞或者巨噬细胞吞噬，从而完成清除和消除的过程。
a549细胞具有椭圆形或卵圆形的细胞形态，细胞表面具有微细突起和微绒毛状结构，细胞增殖速度快且具有迁移能力，同时可发生凋亡现象。
这些形态特点使得a549细胞在肺腺癌的研究中具有重要的应用价值，并且为科学家们提供了一个重要的模型系统，以进一步研究肺腺癌的发生机制、治疗方法及预后评估等方面的问题。
miR_214对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响
肺癌是对人类生命威胁最大的恶性肿瘤之一。
早期研究表明在部分人类癌症发病机制中MicroRNA(miRNA)的改变可能参与调控[1]。
小分子RNA(miRNAs)是一种内源性的单链非编码RNA，成熟miRNA主要通过与靶基因的3UTR区特异结合来抑制靶基因的转录和翻译过程，引起靶基因mRNA发生降解或翻译受到抑制，进而发挥其生物学功能[2]。
miRNA被认为在多种细胞过程中发挥关键作用如扩散、生长、分化与细胞凋亡[3,4]。
近年来越来越多的研究发现miRNA在乳腺癌、 胃癌、直肠癌及白血病等许多恶性肿瘤的发生过程起着癌基因及抑癌基因作用。
但对于miRNA在肺癌发病机制中的作用还知之甚少[5]。
本研究构建了miR-214的真核表达载体，并将其转染人肺癌A549细胞，以探讨其对A549细胞增殖和侵袭能力的影响。
1材料和方法1.1 细胞培养和转染 人肺腺癌细胞株A549，用含有10%新生牛血清，100 U/ml的青霉素和100 U/ml 的链霉素的DMEM培养液在37℃、5%CO 2饱和湿度条件下培养。
当细胞生长至对数生长期后，按照lipo2000(Invitrogen公司)说明书的方法进行转染。
细胞转染48h后进行后续相关实验。
1.2 Real-time PCR 用Trizol(Invitrogen公司)提取细胞总RNA后反转录为cDNA(Takara)。
miR-214的反转录引物为5′-GTC GTA TCC AGT GCA GGG TCC GAG GTA TTC GCA CTG GAT ACG ACA CTG CC-3′；real-time PCR引物序列：上游引物5′- GGA CAG CAG GCA CAG ACA-3′，下游引物5′- CAG TGC AGG GTC CGA GGT-3′。
以U6为内参，反转录引物序列为5′-GTC GTA TCC AGT GCA GGG TCC GAG GTA TTC GCA CTG GAT ACG ACA AAA TAT GGA AC-3′；real-time PCR引物序列：上游引物作者简介：林述琨(1958-)，男，本科，主治医师，主要从事病理诊断工作，E-mail：ling-tong-sheng@通讯作者：温吉海(1966-)，男，本科，主任医师，肺外科主任，副院长，主要从事肺外科工作，E-mail：wen-jihai@The effects of miR-214 on proliferation and invasion abilities of lung cancer cell line A549ｍｉＲ－２１４对人肺癌Ａ５４９细胞增殖和侵袭能力的影响林述琨1 王耀鹏1 温吉海21.大连，普兰店市中心医院病理科；2.普兰店市中心医院肺外科中图分类号 R735.1 文献标识码 A 文章编号 1672-2809(2012)36-0031-04 LIN Shu-tun 1，WANG Yao-peng 1，WEN Ji-hai 21.Department of Pathology,Pulandian central hospital,Da lian 116200,China；2.Department of Thoracic Surgery,Pulandian central hospital,Da lian 116200,China[摘要] 目的：通过构建miR-214的真核表达载体，研究其对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。
A549肺癌细胞条件培养液促进人骨髓间充质干细胞的增殖和迁移
CHINESE JOURNAL OF ANATOMY V ol.44 No.1 2021 解剖学杂志 2021年第44卷第1期A549肺癌细胞条件培养液促进人骨髓间充质干细胞的增殖和迁移*姜杨1王璐璐1金海峰1姚立杰1张嵩2刘丹阳3李永涛1张善强1沈雷1△（齐齐哈尔医学院，1 解剖学教研室，2 细胞生物学教研室，3 组织学胚胎学教研室，齐齐哈尔 161006）摘要目的：探讨A549肺癌细胞对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）增殖和运动的影响。
方法：以提取A549肺癌细胞和BEAS-2B正常人肺上皮细胞上清液制备条件培养基，培养的hBMSCs分别为A549组和BEAS-2B组；2组均添50 nmol/L趋化因子-8（CXCL-8），分别为A549 C组和BEAS-2B C组，若同时添加100 nmol/L triciribine （Akt抑制剂）分别为A549 CT组和BEAS-2B CT组；A549组加入100 nmol/L triciribine为A549 T组。
正常条件下培养的hBMSCs为对照组。
ELISA检测细胞上清液中CXCL-8含量和hBMSCs裂解液Akt、P-Akt蛋白的表达。
MTT实验、流式细胞仪和transwell细胞小室实验分别检测各组hBMSCs吸光度值（A490值）、细胞凋亡率和细胞迁移数目。
结果：与BEAS-2B上清液相比，A549上清液中CXCL-8含量明显升高。
各组hBMSCs的A490值、细胞凋亡率、细胞迁移数目、Akt和P-Akt蛋白表达等均具有显著差异，尤以A549 C组hBMSCs最明显。
与A549 C 组相比，A549 CT组hBMSCs的A490值和细胞迁移数目、Akt和P-Akt蛋白表达均降低，细胞凋亡率升高较显著。
结论：A549细胞表达的CXCL-8能激活Akt通路，促进hBMSCs增殖和运动。
关键词趋化因子-8；人骨髓间充质干细胞；Akt信号通路；细胞迁移Conditioned media prepared from A549 lung carcinoma cells promotes the proliferation and migration of human bone marrow mesenchymal stem cells*Jiang Yang1， Wang Lulu1， Jin Haifeng1， Yao Lijie1， Zhang Song2， Liu Danyang3，Li Yongtao1， Zhang Shanqiang1， Shen Lei1△（1. Department of Anatomy，2. Department of Cell Biology，3. Department of Histology and Embryology， Qiqihar Medical University， Qiqihar 161006， China）Abstract Objective：To investigate the effect of A549 cells （lung carcinoma cells） on the proliferation and migration of human bone marrow mesenchymal stem cells （hBMSCs）. Methods： The supernatants of A549 cells and BEAS-2B cells （the normal human bronchial epithelial cell line）were extracted. hBMSCs cultured with the supernatants were called A549 group and BEAS-2B group respectively； 50 nmol/L chemokine-8 （CXCL-8）was added to both groups to form A549 C group and BEAS-2B C group； 100 nmol/L triciribine （Akt inhibitor） was added at the same time to form A549 CT group and BEAS-2B CT group； 100 nmol/L triciribine was added to A549 group to form A549 T group. hBMSCs incubated in the conventional condition were served as the control group. The CXCL-8 in the cell culture supernatants and the expression of Akt and P-Akt in hBMSCs lysates were tested by ELISA. MTT assay， flow cytometry and transwell assay were used to detect the absorbance （A490）， apoptosis rate and the number of migrating cells in each group respectively. Results： Compared with the BEAS-2B supernatant， the CXCL-8 in the A549 supernatant was significantly increased. There were significant differences in A490， apoptosis rate， the number of migrating cells， and Akt and P-Akt expressions of hBMSCs in each group， especially in A549 C group. Compared with the A549 C group， the A490 and the number of migrating cells， Akt and P-Akt expression of hBMSCs in the A549 CT group were reduced， but the apoptosis rate was increased significantly. Conclusion： CXCL-8 expressed by A549 cells can activate the Akt pathway and promote the proliferation and migration of hBMSCs.Key words C-X-C motif chemokine ligand-8；human bone marrow mesenchymal stem cell； Akt signaling pathway； cell migrationdoi： 10.3969/j.issn.1001-1633.2021.01.003·论 著·* 黑龙江省卫生健康委员会科研课题（2018470）第1作者 E-mail：*****************.cn△通信作者，E-mail：******************.cn收稿日期：2020-04-09；修回日期：2020-09-09间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）是促成肺癌发生的因素之一[1]。
PUMA基因转染对人肺癌A549细胞的促凋亡作用及其机制研究的开题报告
PUMA基因转染对人肺癌A549细胞的促凋亡作用
及其机制研究的开题报告
【摘要】
肺癌在全球范围内是最常见的恶性肿瘤之一，治疗方案的探索一直是临床医学的重要研究方向。
近年来，基因治疗作为一种新型的治疗手段备受关注。
本文将研究PUMA基因转染对人肺癌A549细胞的促凋亡作用及其机制，为肺癌的治疗开发提供新的治疗思路。
【研究目的】
1.探究PUMA基因转染对人肺癌A549细胞的促凋亡作用。
2.研究PUMA基因转染对A549细胞凋亡机制的影响。
【研究方法】
1.实验室模拟A549细胞。
2.将PUMA基因构建成转染载体。
3.通过Western blot和RT-qPCR检测PUMA基因转染后A549细胞凋亡相关蛋白和mRNA的表达水平。
4.采用流式细胞术检测在PUMA基因转染下A549细胞的凋亡率。
【预期结果】
通过对PUMA基因的转染，可以显著提高A549细胞的凋亡率，同时降低细胞增殖率。
同时，PUMA基因转染的机制主要是通过调节Bcl-
2/Bax通路的平衡，使其向凋亡信号通路倾斜。
【意义】
本研究将探究PUMA基因转染对肺癌的治疗效果以及其可能的作用机制，为肺癌的治疗提供新的思路和理论基础。
通过该研究，可以为肺癌治疗提供新的方案和方法，同时也为基因治疗的应用提供理论支持。
肺腺癌A549细胞抗失巢凋亡相关基因的确认及C8orf4基因的表达
西安 ７ ０ ３ １０ ８
１７ ） 男 河南温县人 ， 博士 ， 主治医师 ， ， 讲师 主要研究方 向： 肺癌的发病分子机制 。Ｅ— ａ ： ｅ ｈｉ ｍ ｕ ｅ ｕ ｃ ｍ ｉ ｌ ｎａ ｌｉ ｗ ＠ｆ ｍ ．ｄ ．ｎ 【 作者简介 】 李 文海（９ ３一 ， ，
１６ ， 河南沁 阳人 ， 博士 ， 主任医师 ， 教授 ， 主要研究方 向： 肺癌的多学科 治疗 。 【 通讯作者 】 李小飞（ ９ １一）男 ，
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∞ ｖｒ ａｓｒ ｔ ｎ—ｐｌ ｅ ｓ ｃａ ａｔ ｎ Ｒ ｅ ｅｒ ｃｐｏ ｓ ｔ ｅｄｆ ｒｎｉ ｅ ｐｅ— ｌ ｓ ｔｎ ｉ ｉ ｏ ｍ ｒ ｅ ｈ ｉ ｒ ｃｉ （ Ｔ—Ｐ Ｒ）ａｄＷｅｔ ｎ ｂ ｏｔｎ ． Ｒｅ ｕｌｓ：Ｔｈ ｉ ｅ ｅ ｔａ ｘ ｒ ｓ ｙ ａ ｎｅ ｏ Ｃ ｎ ｓ ｒ ｌｔｉ ｇ ｅ
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安罗替尼对肺癌细胞A549增殖、凋亡的影响及对PI3K
激光生物学报ACTA LASER BIOLOGY SINICAVol. 32 No. 4Aug . 2023第32卷第4期2023年8月收稿日期：2023-03-11；修回日期：2023-05-26。
基金项目：山西省自然科学基金面上项目（201901D 111371）。
* 通信作者：邓双年，主治医师，主要从事各种实体肿瘤内科治疗方面的研究。
E-mail: dsn 9484647251@ 。
安罗替尼对肺癌细胞A549增殖、凋亡的影响及对PI3K/AKT 通路的调控邓双年a*，李 娟b ，李 辉c（临汾市人民医院 a. 肿瘤科；b. 消化科；c. 胸外科，临汾 041000）摘 要：基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI 3K ）/丝苏氨酸蛋白激酶（AKT ）信号通路探究安罗替尼对A 549细胞增殖、凋亡的影响。
将A 549细胞分为对照组、各剂量试验组、安罗替尼组、阳性药物组、抑制剂组和激活剂组。
干预24 h 后检测A 549细胞活力、细胞形态、增殖率、凋亡情况及相关蛋白的表达水平。
结果显示：20 μmol/L 安罗替尼处理后，A 549细胞活力降低；安罗替尼组和阳性药物组较对照组A 549细胞生长受到抑制，细胞增殖率、细胞周期素D 1（Cyclin D 1）及p-PI 3K 、p-AKT 的表达水平降低，细胞凋亡数量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达水平升高。
抑制剂增强了上述各指标的变化，而激活剂则具有与抑制剂相反的趋势。
该研究结果说明，安罗替尼可显著抑制人肺癌A 549细胞的增殖并促进其凋亡，其作用机制可能与抑制PI 3K/AKT 通路的信号转导相关。
该研究结果进一步说明了安罗替尼作为抗肺癌药物的潜在价值，为抗肺癌药物的研发提供了新的理论基础。
关键词：安罗替尼；肺癌；激酶信号通路；增殖；凋亡中图分类号：R 734.2 文献标志码：A DOI ：10.3969/j.issn.1007-7146.2023.04.009Effect of Anlotinib on Proliferation and Apoptosis of Lung Cancer cellA549 and Regulation of PI3K/AKT PathwayDENG Shuangnian a*, LI Juan b , LI Hui c(Linfen People ’s Hospital a. Department of Oncology; b. Department of Gastroenterology; c. Department of Thoracic Surgery,Linfen 041000, China)Abstract: To investigate the effects of anlotinib on proliferation and apoptosis of A 549 cells based on phosphatidylinosi-tol 3-kinase (PI 3K)/serine-threonine protein kinase (AKT) signaling pathway. A 549 cells were divided into the control group, the experimental groups with different doses, the anlotinib group, the positive drug group, the inhibitor group and the activator group. The intervention time was 24 hours. The cell viability, cell morphology, the rate of proliferation, apoptosis and related protein expression levels were detected. The results showed that cell viability decreased after treatment with 20 μmol/L anlo-tinib. Compared with the control group, the cell growth of anlotinib group and positive drug group was inhibited, the cell prolif-eration rate, cysteinyl aspartate specific proteinase D 1 (Cyclin D 1) and the expression levels of p-PI 3K and p-AKT decreased, and the number of apoptosis cells and the expression of cysteine aspartic protease-3 (Caspase-3) increased. The inhibitor en-hanced these changes, while the activator had the opposite trend to the inhibitor. These results of this study indicate that anlotinib can significantly inhibit the proliferation and promote apoptosis of A 549 cells, and its mechanism might be related to the inhibi-tion of PI 3K/AKT pathway signal transduction. The results of this study further illustrate the potential value of antilung cancer drugs and provide a new theoretical basis for the research and development of anti-lung cancer drugs.Key words: anlotinib; lung cancer; kinase signaling pathway; proliferation; apoptosis （Acta Laser Biology Sinica , 2023, 32(4): 360-367）361第4期肺癌（lung cancer）为常见恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在我国居于首位［1］。
细胞凋亡实验报告
细胞凋亡实验报告细胞凋亡实验报告引言：细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，它在维持生物体内部平衡和发育过程中起着关键作用。
本次实验旨在通过细胞凋亡实验，探究不同因素对细胞凋亡的影响，从而进一步了解细胞凋亡的机制和调控。
材料与方法：1. 细胞系：使用人类肺癌细胞系A549作为实验对象。
2. 药物：选择化学药物紫杉醇（Paclitaxel）作为细胞凋亡诱导剂。
3. 细胞培养条件：将A549细胞系在含有DMEM培养基和10%胎牛血清的培养皿中培养，保持在37℃、5% CO2的恒温培养箱中。
实验步骤：1. 细胞培养：将A549细胞系接种于培养皿中，培养至细胞密度达到80%左右。
2. 细胞处理：将培养皿中的培养基抽取，加入不同浓度的紫杉醇处理液，分为高、中、低三个浓度组，每组设置相应的对照组。
3. 细胞观察：将处理后的细胞培养皿放回恒温培养箱中，培养24小时后观察细胞形态和数量的变化。
4. 细胞计数：使用显微镜观察细胞数目，并通过计数室内的细胞数目，计算细胞存活率。
5. 细胞凋亡检测：使用流式细胞仪检测细胞凋亡率，采用荧光染料标记细胞并进行分析。
结果与讨论：在本次实验中，我们观察到不同浓度的紫杉醇处理后，A549细胞的形态和数量发生了明显变化。
在高浓度组，细胞数量明显减少，细胞形态发生变化，出现细胞收缩和凋亡体的形成。
而在低浓度组，细胞数量减少较少，细胞形态变化不明显。
对照组中，细胞数量和形态均与处理组相似。
通过细胞计数的结果，我们计算出了细胞存活率，并发现随着紫杉醇浓度的增加，细胞存活率逐渐降低。
这说明紫杉醇可以诱导A549细胞发生凋亡，并且凋亡率与药物浓度呈正相关。
进一步使用流式细胞仪检测细胞凋亡率，我们发现在高浓度组中，细胞凋亡率明显增加，而在低浓度组和对照组中，细胞凋亡率相对较低。
这与细胞存活率的结果相一致，进一步验证了紫杉醇可以诱导A549细胞发生凋亡的能力。
细胞凋亡是一种高度调控的细胞死亡过程，它在生物体内部平衡和发育过程中发挥着重要作用。
丹参酮ⅡA对人A549／CDDP细胞凋亡和耐药蛋白表达的作用
作 用 ，同样 是 Ａ Ｂ优于 ＡＥ Ａ。提示 Ａ Ｂ具 有 更强 的镇 痛作 用 。Ｃ Ｉ 型 观察 显 示 ，小 鼠 自发 性 Ｃ 模 疼 痛 和诱 发性 疼痛 程度相 似 ，模 型 一 致性 较 好 。进 一 步利 用 Ｃ 模 型 ，考 察 ＡＢ对 神 经病 理 性 ＣＩ 疼 痛 的镇 痛作用 ，结 果表 明 ，ＡＢ连 续给 药 ７ ，可 以显著 抑制 Ｃ Ｉ 鼠产生 的 自发 性疼 痛和 诱 天 Ｃ小
中 国药 理 通 讯 ２ １ 第 二 十七 卷 第 三 期 ００年
抗 肿瘤作用 进行 了考 察 。体 外 抗 肿 瘤 实验 结 果显 示 ，Ａｗ 、ＡＥ、ＡＥ Ａ、ＡＢ对 以上 ５种 人 源肿 瘤 细胞均 有较强 的生 长抑制 作用 。体 内抗 肿 瘤 实验 结果 显 示 ，ＡＷ 、ＡＥ连 续 灌 胃给 药 ７天 ，可 以显著抑制 小 鼠移 植 性 肿 瘤 Ｓ ８ １０的生 长 ，且 对 荷瘤 小 鼠的免 疫 器 官 没有 影 响 ，提 示 ＡＷ 、ＡＥ 具 有 良好 的抗肿 瘤作用 ，且 不产生 环磷 酰胺样 免疫抑 制 。 应用醋 酸所致 小 鼠扭体 模 型 、热板 致 痛 模 型及 小 鼠坐骨 神 经 慢性 压 迫 模 型 （ Ｃ ）对 Ａ 、 Ｃ Ｉ ｗ
２ ６
中国药理通讯 ２ １ ４ ／ ＤＤ ２ ，肺癌 耐药 蛋 白 （ Ｒ ） 的荧光 亮 度 明显 低 于非 药 物作 用 组 。结 论 Ｔａ Ⅱ Ｌ Ｐ ｎ
Ａ诱 导 Ａ５９ Ｃ Ｐ细胞 凋亡并 抑 制其增 殖作用 ；通过下 调 ｓｒｉｉ 因表 达和上 调 ｂｘ基 因表 ４ ／ ＤＤ ｕｖｖｎ基 ａ 达来诱 导 Ａ５ ９Ｃ Ｄ ４ ／ Ｄ Ｐ细胞 凋亡 ；降低耐 药蛋 白 （ Ｐ Ｉ ）表 达 。
发 性疼 痛 。还 考察 了连续 ７天 给予 ＡＢ对小 鼠痛 阈 的影 响 ，结 果 显示 ，ＡＢ组 小 鼠的痛 阈在 给 药
枸杞多糖对人肺癌A549细胞凋亡及Survivin表达的影响
收稿日期：2011-09-27；修订日期：2011-11-26基金项目：山东省自然科学基金（No．ZR2010HM065）作者简介：肖琳（1980-），女（汉族），山东泰安人，现任潍坊医学院助教，硕士学位，主要从事中药抗肿瘤与分子生物学研究工作．*通讯作者简介：王守训（1955-），男（汉族），山东潍坊人，现任潍坊医学院教授，硕士学位，主要从事医学基础研究工作．枸杞多糖对人肺癌A549细胞凋亡及Survivin 表达的影响肖琳1，王平1，崔涛2，王守训1*（1．潍坊医学院，山东潍坊261053；2．山东省潍坊市中医医院，山东潍坊261041）摘要：目的探讨枸杞多糖（LBP ）诱导人肺癌A549细胞的凋亡的作用及其作用机制。
方法在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的LBP ，应用流式细胞仪FITC /PI 双染法检测细胞凋亡率，RT －PCR 及Western blot 法分析加药前后凋亡抑制基因Survivin mRNA 和蛋白表达情况。
结果流式细胞仪FITC /PI 双染法检测结果显示LBP 可诱导人肺癌A549细胞凋亡，并且随着LBP 浓度增加，凋亡率逐渐增加；LBP 可使Survivin mRNA 和蛋白的表达明显降低，并成一定的量效关系。
结论LBP 可显著诱导人肺癌A549细胞凋亡，其作用机制可能与LBP 抑制A549细胞凋亡抑制基因Survivin 表达有关。
关键词：肺癌，LBP ，细胞凋亡，Survivin DOI 标识：doi ：10．3969/j．issn．1008-0805．2011．12．040中图分类号：R962文献标识码：A 文章编号：1008-0805（2011）12-2917-02Effcts of LBP on Human Lung Adenocarcinoma A 549Cell Apoptosis and Expressions ofSurvivinXIAO L in 1，WANG Ping 1，CUI Tao 2，WANG Shou-xun －2（1．Weifang Medical College ，Weifang ，Shandong 261053，China ，2．Weifang Traditional Chinese MedicicalHospital ，Weifang Shandong 261041，China ）Abstract ：Objective To investigate the effect and mechanism of LBP on apotosis of human lung adenocarcinoma cells A549．Methods After A549were treated with LBP in different concentrations and with different time ，the Annexin V －FITC /PI double staining analysis by flow cytometry was used to evaluate apoptosis rate．The levels of Survivin mRNA and Survivin protein were de-tected by RT －PCR and Western Blot．Results LBP could induce cell apoptosis in A549cells ，the apoptotic rate was dose depe-dent．The survivin gene and protein expression was down regulated with LBP ，which was LBP dose depedent．Conclusion LBP can effectively induce cells apoptosis in lung adenocarcinoma A549cells ，this may result from its actioin of reduce survivin gene ex-pression．Key words ：Lung adenocarcinoma ；LBP ；Cell apoptosis ；Survivin肺癌是世界上对人类健康与生命危害极大的恶性肿瘤，其发病率逐年上升，目前我国肺癌占男性肿瘤发病率和死亡率的首位，女性发病率的第2位，死亡率的第1位，而其治疗效果却往往不理想，而且放、化疗对病人损伤极大，因此迫切需要寻求新型的治疗药物。
探讨MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制
探讨MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制朱逸;贡力;钮洪艳【摘要】Objective: To study the apoptosis of adenocarcinoma of lungA549 cell treated with different concentrations of proteasomes inhibitor MG132, and to observe the expression of Bcl-2 and Bad in A549 cells. Methods: In vitro, A549 cells were exposed to 0, 5, 10, 20, 40 μmol/L of MG132. 24 hours later, the survival rate of A549 cells was detected with MTT chromatometry, flow cytometry detected the apoptosis rate of A549 cells, and the expression of Bcl-2 and Bad in A549 cells was measured with Western Blot. Results: MG132 caused the apoptosis of A549 cells in a concentration-dependent manner, the survival rate of cells was gradually decreased while the apoptosis rate of cells was increased after 24 hours exposure to MG132. Meanwhile, the expression of Bcl-2 was decreased, and the Bad expression was unchanged in A549 cells. Conclusion: MG132 could induce A549 cells apoptosis partly through depressing the expression of Bcl-2, but ndt he Bad expression.%目的:研究不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,并且观察对细胞中Bcl-2和Bad两种凋亡相关蛋白表达的影响.方法:体外培养A549细胞分别暴露于0、5、10、20、40 μmol/L的MG132,24 h后MTT法测定细胞存活率,流式细胞术(FCW)检测细胞的凋亡率,Western Blot方法测定A549细胞中Bcl-2和Bad两种蛋白的表达情况.结果:MTT法和流式细胞术检测结果显示,A549细胞的存活率和凋亡率与MG132呈浓度依赖性关系,MG132浓度越高细胞存活率越低,并且凋亡率越高.Western Blot方法测定结果显示A549细胞中Bcl-2的表达随着MG132浓度增高而逐渐减少,而Bad的表达无明显变化.结论:MG132可以诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,实现该作用的可能机制部分是通过降低Bcl-2蛋白的表达,而Bad在这一过程中似乎没有表现出明显的作用.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2011(008)034【总页数】3页(P32-34)【关键词】肺腺癌;蛋白酶体抑制剂;A549细胞;Bcl-2;Bad【作者】朱逸;贡力;钮洪艳【作者单位】徐州医学院附属淮安市第二人民医院心胸外科,江苏淮安,223002;徐州医学院附属淮安市第二人民医院心胸外科,江苏淮安,223002;徐州医学院附属淮安市第二人民医院心胸外科,江苏淮安,223002【正文语种】中文【中图分类】R734.2;R730.54近几十年来，肺癌的发病率和死亡率不断升高。
CIK细胞对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响
２ 实 验 方 法 ：１ ＣＫ 细 胞 的 制 备 及 细 胞 体 外 培 养 ， 参 ． （） Ｉ 见 考 文献 ［ ］ （ 透 射 电 镜 法 观 察 ＣＫ 细 胞 对 人 肺 癌 细 胞 ２ 。 ２） Ｉ
Ａ４ ５ ９凋 亡 情 况 的 影 响 ： 人 肺 癌 细 胞 Ａ ４ 将 ５ ９置 于 ３ ￣ ５ ７Ｃ、 ％
前 提下 ， 直接 损伤 并 消 除肿 瘤 细 胞 ， 其 在 消 除微 小 尤
残 留 病 灶 方 面 具 有 显 著 作 用 。 细 胞 因 子 诱 导 的 杀 伤 细 胞 （ｙｏｉｅｉ ｕｅ ｉｅ ｅ Ｃ Ｋ） 是 一 种 新 型 ｃｔ ｎ ｄ ｃｄｋｌ ｒ ｌ Ｉ 就 ｋ ｎ ｌ ｃ ｌ，
讨 机 制 。 方 法 常规 方法 体 外 诱 导 生成 ＣＫ细 胞 ， Ｉ 胞 为 效 应 细 胞 ， 肺癌 细胞 Ａ ４ Ｉ Ｃ Ｋ细 人 ５ ９为 靶 细 胞 ， 较 观 察人 肺癌 细胞 Ａ ４ 比 ５９
的 凋 亡 情 况 。结 果 电镜 法 观 察 Ｃ Ｋ细 胞 能 诱 导 人 肺 癌 细 胞 Ａ ４ Ｉ ５９出 现凋 亡 的 超 微 结 构 变 化 ，ｎ ｅｉ ／ Ｉ 式 细 胞 分 析 法 检 测 ａｎ ｘ Ｖ Ｐ 流 ｎ 早 期 凋 亡 率 发 现 ＣＫ实 验 组 明显 高 于 对 照 组 。结 论 Ｉ
ＣＩ ｃ ｌｓ ｗｅ ｅ ｉ ｕ ｅ ｙ ｃ ｌｕ ｉ ｇ ＰＢＭ Ｃ ｔ ｅ ｕ ａ ｔ ｄ ｎ ｅｌａ ｐｔｓｓ ｗａ ｅｅ ｅ ．Ｒｅ ｕ ｔ Ｅｌｃ ｒ ｃ ｏ ｃ ｐｉ ｂｓ ｒ ａ Ｋ ｅｌ ｒ ｎｄ ｃ ｄ ｂ ｕ ｔｒｎ ｗｉｈ ｒｇ ｌ ｒｍｅｈｏ ａ ｄ ｃ ｌ ｐｏ ｏ ｉ ｓ ｄ ｔｃｔｄ ｓ ｌｓ ｅ ｔｏｎ ｍｉ ｒｓ ｏ ｃ ｏ ｅ ｖ —
多西紫杉醇诱导人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549／CDDP凋亡的研究
ｄ ｃ ｔｘ １ ＴＥＭ ａ ｄ ｏ ｅａ ｅ． ｎ Ａｎ ｅ ｉ Ｖ／ Ｉ ｔｉｉｇ ｗｅｅ ｍｐｏ ｅ ｔ ｍｅ ｓ ｒ ａ ｏ ｔｓｓ ｉｄ ｃ ｄ ｂ ｄ ｃ ｔｘ １ ｎ ｘｎ Ｐ ｓａｎｎ ｒ ｅ ｌｙ ｄ ｏ ａ ｕ ｅ ｐ ｐ ｏ ｉ ｎ ｕ ｅ ｙ ｏ ｅａ ｅ．
ａ ｎｄ ＴＥＭ ｅ ｅ ｗ ｒ ｕｓ ｄ ｏ ｏｂ ｅ ｖｅ ｃ ｌ ｅ ｔ ｓ ｒ ｅ ｌ ｏｒ ｈｏｌ ｉａ ｈａ ｇｅ ． ＦＡ Ｃｓ ｗ ａ ｅｄ ｏ ｄｅ ｅ ｔ ｔ ｅ ｅ ｌ ｙ ｌ ｒ ｅ ｔ ｅ ｆ ｃ ｏｆ ｍ ｐ ｏｇｃ ｌｃ ｎ ｓ ｓ ｕｓ ｔ ｔ ｃ ｈ ｃ ｌ ｃ ｃｅ ａ ｒ ｓ ｆｅ ｔ
ｂ ｆｒ ｎ ｆｅ ｒ ａｍｅ ｔｏ ４ ｎ ４ ／ ｅｏｅ ａ ｄａｔｒｔｅ ｔ ｎ ｆＡ５ ９ａ ｄ Ａ５ ９ ＣＤＤＰ ｃｌ ｔ ｏ ｅａ ｅ．Ｒｅｕｔ Ａｆｅ ｈ ｒａｍｅ ｔｏ ｏ ｅａ ｅ ， ｅｌ ｗｉｈ ｄ ｃ ｔｘ １ ｓ ｓｌ ｓ ｔｒｔ ｅｔｅ ｔ ｎ ｆｄ ｃ ｔｘ ｌ
显著的 Ｇ 期 阻滞作用。 同时诱 导细胞凋亡、 可 坏死和胞质 自切。 以后两者为主。Ｆ ｓ 白在 多西紫杉 醇作 用后表达 明 并 ａ蛋
显增强。 结论 多 西 紫杉 醇 对 Ａ５ ９ Ａ５ ９ｃ Ｄ ４及 ４ ／ Ｄ Ｐ细 胞 均 具有 显著 的 Ｇ２Ｍ 期 阻滞 作 用 。 同 时诱 导其 凋亡 、 死和 胞 ／ 能 坏 质 自切 。 以后 两 者 为主 。Ｆ ｓ 因 可能 在 多西 紫杉 醇 抗肿 瘤作 用 中具 有 重要 作 用 。 ａ基
ＧＵＯ ｉ ｉ ｇ Ｗ Ｕ Ｇｕ — ｎ ＱＩ ｉ ｈ ｎ ｅ ｌ Ｒｕ－ ｎ 。 ｏ ｍｉｇ・ ＡＮ Ｇｕ— ｅ ｇ・ｔａ ｌ ｓ
（ ｎｔ ｕ ｅ ｆ Ｒｅ ｉ ｔｒ ｅｅ ｒｈ Ｘｉｑａ ｓ ｉ ｌＴｈｒ ｌ ａ ｙ Ｍｅ ｉａ ｎ ｖｒｉ Ｃ ｏ ｇ ｉｇ ４ ０ ３ ， ｈｎ ） Ｉ ｓ ｔｔ ｏ ｓ ｒ ｏｙ Ｒ ｓａ ｃ ， ｎ ｉ ｏＨｏｐｔ ， ｉｄ Ｍｉ ｔｒ ｄ ｃ ｌ ｉｅｓｔ ｈ ｎ ｑｎ ０ ０ ７ Ｃ ｉａ ｉ ｐ ａ ａ ｉ Ｕ ｙ，
NET-1shRNA抑制肺癌细胞A549中NET—1表达及对癌细胞增殖的影响
代 培养 的异位或正常子宫 内膜细胞 高表达 Ｅ ｏ但 Ｅ 异 位 ｐ ， Ｍｓ
子 宫 内膜 腺 体 细 胞 表 达 程 度 更 高 。 因 此 ， 们 通 过 对 缺 氧 处 我
理后 Ｅ 异位子宫 内膜腺体 细胞添加 ｒ ｕ ｐ ０Ｕ ｍ 进行 Ｍｓ Ｈ Ｅ ｏ５ Ｉ／ ｌ
ｓｇ ａ ｌ ｇ ｄ ｓｒ ｙ ｅ ｏ ｒ ｆ ｆ ｖ ｒ ｎ ａ ｄ ｕ ｅｉ ａ ｃ ｒ ｎ ｎ ｄ ｉ ｎ ｌｉ ｅ ｔｏ ｓｘ ｎ ｇ ａｔ ｏ ａ ｉ ｎ ｔ ｒ ｃ ｎ ｅ ｓｉ ｕ ｅ ｎ ｓ ｏ ａ ｎｅ
ｇｎｃｆｃ ｒ Ｊ ．Ｅ ｒ ｌ ｎｅｔ ２０ ３ （０）８ １— ９ ． ｅ ｉ ａｔ ［ ］ ｕ Ｃｉ Ｉｖｓ， ０ ３，３ １ ：９ ８ ６ ｏ Ｊ ｎ
［ ］ Ｙａｕ ａＹ， ｓａＴ Ｔ ｎ ｋ ｅ １ ｎｉｉｏ ｆｅ ｔｒｐｉｔ ７ ｓｄ Ｍｕｈ ， ａａａＨ，ｔ ．Ｉｈｂｔｎｏ ｒ ｈｏｏｅｉ ａ ｉ ｙ ｎ
明了我 们的推测 。 Ｅ ｏ可以通 过调节抗凋亡 蛋 白的表达 抑制凋 亡 ， ｐ 调控红 血球 的生成 与损 失 ， 以维 持红 细胞体 积 的平 衡。Ｅ ｏ 可 以 ｐ还 抑制缺血缺 氧区域神 经元的凋亡 ， 同时促进梗 死 区域边 缘组 织 的新 生血 管生成 的研 究结 果 近年 来也 有 报道 。Ｙ ｓｄ ａｕ ａ
现代肿瘤 医学
２１ ０ ２年 ８月 第 ２ １ ０卷第 ８ 期
ＭＯ Ｅ Ｎ Ｏ Ｃ Ｌ Ｇ Ａ ｇ２ １ ， Ｏ ．０， （ ０ Ｄ Ｒ Ｎ Ｏ Ｏ Ｙ， ｕ．０ ２ Ｖ Ｌ ２ Ｎ！ ８ ．
・ ５９・ １６
在子宫 内膜异位症发生 过程 中 ， 子宫 内膜异 位种植 与生 长都要完成黏附 、 侵袭 和血管生成 “ 三步 曲” Ｅ 异位 内膜 。 Ｍｓ 的转移 、 种植 多发生 于腹腔 或盆腔 ， 在这些部 位 ， 缺血 、 氧 缺 的内膜细胞可 以部： 分的从腹腔液 中汲取 营养物质 ， 但氧气 的 供 给则必须 由相应血管供给 ， 以缺氧环 境是异 位 内膜存 活 所 所 面临的首要困难 ， 实验 通过对原代培 养细胞进 行缺氧 处 本 理， 简单模拟 Ｅ 病变发生 的早期情况 。 Ｍｓ 通过本实验观察 ， 缺氧处 理后 ， Ｍｓ Ｅ 组腺 体 细胞 与正 常
Mir-16对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响
的细胞 比例 明显减少 。与各对照组相 比， Ｍ ｉ ｒ 一 １ ６显 著抑制野生 型 ＷＩ Ｐ １ — ３ ’ Ｕ Ｔ Ｒ表达载体 的荧光 素酶活性 。【 结论 】 Ｍｉ 卜１ ６在
２ ． Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｔ ｈ ｏ ｒ ａ ｃ ｉ ｃ Ｓ ｕ ｒ ｇ ｅ ｒ ｙ ， Ｔ ｈ ｅ Ｆ ｉ ｒ ｓ ｔ Ａ ｆ ｉ ｆ ｌ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｓ ｕ ｎ Ｙ ａ ｔ — ｓ ｅ ｎ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ５ １ ０ ０ ８ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
检测细胞 的增殖 、 凋亡及细胞周 期 。构建 野生型及 突变型 ＷＩ Ｐ １ ３ ’ 一 Ｕ Ｔ Ｒ的荧光素酶报告 载体 ， 检测 荧光素酶 的相对 活性 ． 验
证在肺腺癌 中 ＷＩ Ｐ １ 是Ｍ ｉ ｒ 一 １ ６的作用靶 点 。【 结果 】 在人肺 腺癌 Ａ ５ ４ ９ 细胞 中 Ｍ ｉ ｒ 一 １ ６ 呈低表达 ； 将Ｍ ｉ ｒ 一 １ ６ 转染至 Ａ ５ ４ ９ 细胞
ｐ ｒ ｏ ｍ ｏ ｔ ｅ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ． 【 Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ 】 Ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｇ ｉ ｅ ｓ ｔ ｏ ｒ ｅ ｓ ｕ ｍ ｅ ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ 一 １ ６ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｍ ａ ｙ ｂ ｅ ｂ ｅ ｎ ｅ ｉ ｆ ｔ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗ ｉ ｔ ｈ Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ ｉ ｎ
癌症实验报告
一、实验背景癌症是一种严重威胁人类健康的疾病，其发病机制复杂，涉及多个基因和信号通路的异常。
本研究旨在通过实验手段，探究癌症细胞的增殖与凋亡机制，为癌症的预防和治疗提供理论依据。
二、实验目的1. 观察癌症细胞在体外培养条件下的增殖情况。
2. 分析癌症细胞凋亡的相关因素。
3. 探讨癌症细胞增殖与凋亡之间的相互关系。
三、实验材料与方法1. 实验材料（1）细胞：人肺癌细胞系A549、人乳腺癌细胞系MCF-7、人结肠癌细胞系HCT-116。
（2）试剂：DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、Annexin V-FITC/PI双染试剂盒、细胞凋亡检测试剂盒、MTT试剂盒、CCK-8试剂盒等。
2. 实验方法（1）细胞培养：将A549、MCF-7、HCT-116细胞分别接种于6孔板，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
（2）细胞增殖实验：将细胞分为实验组和对照组，实验组给予一定浓度的药物处理，对照组给予等体积的溶剂。
分别于24小时、48小时、72小时后，采用MTT法和CCK-8法检测细胞增殖情况。
（3）细胞凋亡实验：将细胞分为实验组和对照组，实验组给予一定浓度的药物处理，对照组给予等体积的溶剂。
采用Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率。
（4）数据分析：采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析，采用t检验比较实验组和对照组的差异。
四、实验结果1. 细胞增殖实验（1）MTT法：实验组与对照组相比，细胞增殖受到抑制，且随药物浓度增加，抑制作用增强。
（2）CCK-8法：实验组与对照组相比，细胞增殖受到抑制，且随药物浓度增加，抑制作用增强。
2. 细胞凋亡实验实验组与对照组相比，细胞凋亡率显著升高，且随药物浓度增加，凋亡率逐渐升高。
五、讨论与分析1. 细胞增殖实验结果表明，药物处理能够抑制癌症细胞的增殖，这可能与药物对细胞周期调控蛋白的抑制作用有关。
2. 细胞凋亡实验结果表明，药物处理能够诱导癌症细胞凋亡，这可能与药物对凋亡相关基因的调控有关。
细胞转染实验报告
细胞转染实验报告细胞转染实验报告引言细胞转染是现代生物学研究中常用的技术手段之一，通过将外源基因或分子导入目标细胞，可以实现基因表达、蛋白质功能研究等多种目的。
本文将介绍一次细胞转染实验的设计、操作步骤和结果分析。
实验设计本实验旨在研究细胞内特定基因的表达情况，并通过观察细胞形态和功能变化，探究该基因在细胞生理过程中的作用。
我们选择了人类肺癌细胞株A549作为实验对象，并选取了目标基因X作为转染载体。
实验步骤1. 细胞培养：将A549细胞培养在含有适宜培养基的培养皿中，保持在37°C恒温培养箱中，供给适当的CO2和湿度。
2. 转染载体构建：将目标基因X克隆到适当的转染载体中，确保载体的稳定性和表达效率。
3. 细胞转染：将构建好的转染载体与转染试剂混合，加入到培养皿中的细胞上，进行转染操作。
注意控制转染试剂的浓度和处理时间，以避免对细胞产生过多的毒性。
4. 转染后处理：根据实验设计，对转染后的细胞进行适当的处理，例如培养在特定的培养基中，或添加特定的诱导剂。
5. 细胞采集：根据实验需要，在适当的时间点采集细胞样品，用于后续的分析。
实验结果1. 细胞形态观察：在转染后的细胞中，我们观察到了明显的形态变化。
与未转染的细胞相比，转染后的细胞出现了增殖减缓、形态不规则等现象，这可能与目标基因X的表达和功能变化有关。
2. 蛋白质表达分析：通过Western blot等蛋白质分析技术，我们检测到了目标基因X在转染后的细胞中的表达情况。
结果显示，与对照组相比，转染组中目标基因X的表达水平明显增加，这进一步验证了转染的有效性。
3. 功能实验：通过细胞增殖、凋亡、迁移等功能实验，我们发现转染后的细胞在这些生理过程中表现出明显的差异。
这表明目标基因X可能参与了这些功能的调控。
结果分析通过以上实验结果，我们初步得出了目标基因X在细胞中的表达和功能变化的结论。
然而，由于实验设计的局限性和实验条件的限制，我们还需要进一步的研究来验证和深入探究这些发现。
肺癌细胞A549
肺癌细胞A549 Livin基因在常见化疗药物作用下的表达和对细胞增殖的影响作者：陆乘俊孙超来源：《医学信息》2015年第07期摘要：目的研究化疗药物对人肺细胞癌A549抑制基因Livin基因的影响。
方法将不同化疗药物浓度按100、50、25、12.5、6.25、、3.13、1.56、0.78ug/ml，与A549共同培养，分别作用24、48、72h，MTT检测细胞凋亡结果；real time PCR检测Livin mRNA的表达，以及Western blots检测Livin蛋白的变化。
结果不同浓度化疗药物与A549培养后，细胞凋亡率与化疗的浓度增加而升高以及Livin基因的表达也明显的改变（P关键词：化疗药物；肺癌细胞；Livin基因随着吸烟人群的增加（包括吸入二手烟）及大气污染的加重，肺恶性肿瘤的发病率逐年增加；治疗目前除手术切除外，主要为化疗与放疗，但化疗药物的耐受性往往影响化疗药物的疗效；目前研究发现Livin基因与肿瘤的耐受性有一定的关系[1，2]，因此，我们选用常见的化疗药物作用于肺癌细胞株，观察Livin基因表达的改变，探讨Livin基因与细胞凋亡的相互关系。
1资料与方法1.1一般资料江苏省无锡市人民医院肿瘤科提供化疗药物依托铂苷、卡铂、多柔比星。
中科院上海生化与细胞生物学研究所提供人肺癌细胞株（A549）。
1.2实验用仪器与试剂 96孔细胞培养板（Costar， Denmark）；细胞培养箱（NAPCO，USA）；倒置相差显微镜（OLYMPUS，JAPAN）。
DMEM培养基（GIBCO，USA）（每L 含10%小牛血清、L-谷氨酰胺0.33mg，青霉素100U、链霉素100U、pH7.4）；胰蛋白酶（MERCK，USA）；二甲基亚砜（DMSO）（Merck，Germany），无水乙醇（分析纯，上海振兴化学试剂厂，批号：20021200365）；Livin（abcam USA）、碘化丙啶（PI）（Sigma，USA），南京生物工程公司提供引物。
GSNO对人肺腺癌A549细胞的作用
GSNO对人肺腺癌A549细胞的作用目的观察S-亚硝基谷胱甘肽（GSNO）对人肺腺癌A549细胞的作用，为GSNO作为药物来治疗肺癌提供依据。
方法培养的A549细胞分别给予0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/L GSNO 5个剂量，并分别培养24、48、72 h，应用CCK8试剂检测IC50；应用CCK8试剂检测二硫苏糖醇（DTT）逆转GSNO作用的给药时间点；应用原位凋亡荧光检测试剂盒检测GSNO给药组和GSNO联合DTT 给药组中A549细胞的凋亡情况。
结果GSNO分别处理24、48、72 h后检测，结果IC50分别为18.174、2.020、1.836 mmol/L；在GSNO给予20、40 min后给予DTT，结果OD值显著提高（P＜0.05），因而确定DTT给药时间点为GSNO 给药后20 min；GSNO给药组显示凋亡细胞大量增加，GSNO联合DTT给药组则逆转了A549细胞的大量凋亡。
结论A549细胞凋亡可能是GSNO抑制细胞生长的一个重要机制，GSNO诱导的A549细胞凋亡可能与巯基-亚硝基化修饰作用有关。
GSNO能促使A549细胞凋亡，该过程对于人肺腺癌的治疗具有明显的指导意义。
标签：S-亚硝基谷胱甘肽；二硫苏糖醇；A549；肺癌肺癌是最常见的恶性肿瘤，在全世界显示有极强的患病率和致死率。
A549细胞是来源于肺泡上皮细胞的恶性细胞系，它是体外研究人肺腺癌的标准细胞[1]。
S-亚硝基谷胱甘肽（S-nitrosoglutathione，GSNO）是机体存在的一种内源性一氧化氮（nitric oxide，NO）供体。
GSNO在体内可被迅速分解释放出NO，GSNO 释放出NO后生成的副产物没有毒性。
GSNO在体外是一种NO缓释剂，其特点是在细胞培养液中可持续、稳定地释放NO[2-3]。
大量研究报道，NO具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用[4-6]。
二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT）是一种小分子的有机还原剂，DTT的用途除了作为还原剂和去保护剂，也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键[7]。
洛铂诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制的实验研究
Ｂ ＭＵ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ， Ａｐ ｒ ． ２ ０ １ ３， Ｖ ｏ １ ． ３ ６ ， Ｎ ｏ ． ２
・８１ ・
・
论 著
・
洛 铂诱 导 人 肺 腺 癌 Ａ ５ ４ ９细胞 凋 亡 机制 的实 验 研 究
解 明德 王理胸 外科
程。
Ｌ Ｂ Ｐ明显诱 导人 肺腺癌 Ａ ５ ４ ９细胞凋亡 ， 通 过线粒体 途径参 与其凋 亡过
【 关键词 】 洛铂； 肺腺癌 ； Ａ ５ ４ ９ 细胞 ； 凋亡 ； Ｂ ａ ｘ； Ｂ ｃ ｌ － ２ 【 中图分类号 】 Ｒ ７ ３ ４ ． ２ 【 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号 】 １ ０ ０ １ — ９ ５ １ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ — ０ ０ ８ １ － ０ ５
ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ｌ ｏ ｂ ａ ｐ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ （ ２ ． ５ ， ５ 。 １ ０ Ｉ ｘ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ） ． Ｉ ｎ ｖ ｅ ｒ ｔ ｅ ｄ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ａ ｓ ｔ ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｅ ， Ｆ ｌ ｏ ｗ ｃ ｙ ｔ ｏ ｍ ｅ －
【 摘要 】 目的
２ ７ ６ ５ ０ ０
取 对数生长 期的 Ａ ５ ４ ９ 细胞分 为阴性对 照组
探讨洛铂（ Ｌ Ｂ Ｐ ） 诱 导人肺腺癌 Ａ ５ ４ ９ 细胞凋亡作用机 制。方法
和实验组 （ 分 别加入 ２ ． ５ 、 ５和 １ ０￣ ｍ ｏ ｌ ｆ Ｌ Ｌ Ｂ Ｐ ） 。采用倒置相差 显微 镜观察各 组 Ａ ５ ４ ９细胞形 态学改变 ， 利用流 式细胞 仪检测 各组 Ａ ５ ４ ９细胞凋亡率 ， Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ检测凋亡 Ａ ５ ４ ９细胞 中 Ｂ ａ ｘ 、 Ｂ ｃ ｌ 一 ２的表达 。结 果 显微镜 下观察 到 Ｌ Ｂ Ｐ抑制 Ａ ５ ４ ９细胞 的增 殖； 流式细胞 仪结果显示 Ｌ Ｂ Ｐ诱 导 Ａ ５ ４ ９细胞 凋亡 ， 并呈浓度 和时间依赖性； Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ结果 显示 Ｌ Ｂ Ｐ可使 Ａ ５ ４ ９细胞 Ｂ ａ ｘ 基 因表 达 上调 ， Ｂ ｃ ｌ － ２基 因表达下调 ， 二者呈负相关。结论
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摘要】目的比较耐顺铂的人肺腺癌细胞(A549DDP)凋亡相关基因的表达与亲代A549细胞的差异，探讨细胞凋亡与细胞耐药的发生机制。
方法应用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片，检测A549和A549DDP细胞相关凋亡基因表达水平。
结果A549DDP细胞表达BAD、BAG3、BFAR、CARD8、CASP6、GADD45、TNFRSF14、CD70、TRADD、TRAF1、TRAF3基因较亲代A549细胞显著增高(P<0.05),二者比值上调2倍以上。
结论肺腺癌A549DDP细胞过表达上述凋亡相关基因，可能是导致细胞凋亡受抑、细胞耐药的主要原因。
【关键词】肺癌;凋亡基因;细胞凋亡;耐药细胞耐药是导致化疗失败的主要原因。
研究发现耐药的发生与细胞凋亡基因的异常表达密切相关。
采用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片方法检测细胞凋亡相关基因，具有敏感性高、速度快和重复性好等优点。
目前尚未见以Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片方法检测A549细胞凋亡相关基因的报道。
本文采用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片检测人肺腺癌亲代细胞与耐顺铂细胞(A549和A549DDP)凋亡相关基因,并对检测结果的临床意义进行初步分析，进一步探讨肿瘤细胞凋亡与耐药的发生机制。
1 对象与方法1.1 对象人肺腺癌亲代A549细胞和耐顺铂的A549DDP细胞(华西医科大学新桥医院呼吸病研究所提供)。
1.2 方法1.2.1 细胞培养人肺腺癌A549与A549DDP细胞,以含有10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5% CO2条件下培养,每2～3 d传代1次,初始密度为2×105/ml(2 ml/6孔板)。
取对数生长期细胞进行实验。
1.2.2 凋亡基因检测按着Oligo GEArray基因芯片实验操作步骤进行(Oligo GEArray细胞凋亡基因芯片由上海康成生物科技有限公司提供)。
1.2.3 RNA 抽提Trizol一步法进行细胞总RNA的抽提。
1.2.4 RNA质量检测经变性琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收测定法对RNA质量进行检测。
1.2.5 cRNA标记与合成首先合成cDNA，再合成cRNA，并对合成的cRNA进行标记和扩增，进而cRNA 纯化。
1.2.6 芯片杂交、化学发光检测、图象采集和数据分析。
1.3 统计学分析采用χ2检验。
2 结果对芯片中114个与凋亡相关的基因检测时发现耐顺铂的A549DDP细胞表达凋亡相关基因Bcl 2凋亡调节基因家族(BAD、BAG3)、caspase家族(CASP6、CARD8)、肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF1、TRAF3、CD70)、肿瘤坏死因子受体超家族成员(TNFRSF14、BFAR)及与肿瘤坏死因子受体超家族成员TNFRSF关联的死亡结合域(TRADD、GADD45)较亲代A549细胞显著增高(P<0.05)，二者比值上调2倍以上(表1)。
表1 A549与A549DDP细胞凋亡相关基因表达水平上调2倍以上基因3 讨论肿瘤的发生与发展是细胞增殖和凋亡平衡失调的结果。
凋亡是一种程序性细胞死亡,许多信号通道介导细胞凋亡过程，凋亡相关基因表达异常与细胞凋亡受抑及细胞耐药密切相关。
而耐药性又是影响肿瘤化疗效果的重要因素,化疗失败的主要原因之一就是细胞耐药。
此时,药物能如期进入细胞内并损害细胞,但因与凋亡相关的基因过度表达或表达下调而致凋亡受到抑制,此种损害被转换为无效信号。
本组耐顺铂的A549DDP细胞表达BAD、BAG3、BFAR、CARD8、CASP6、GADD45、TNFRSF14、CD70、TRADD、TRAF1、TRAF3基因较亲代A549细胞显著增高，二者比值上调2倍以上，表明上述凋亡基因的过表达参与A549细胞耐药。
BAD、BAG3均属Bcl 2凋亡调节基因家族成员，位于细胞质内线粒体外膜，通过存在于细胞内的可变蛋白(折叠或伸展结合)和抑制Ga2+跨膜运动，增强肿瘤细胞抗氧化性能，参与细胞的抗凋亡作用，进而增加细胞对化疗药物的抵抗性〔1〕。
肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)是一类新近发现的细胞内信号传导的衔接蛋白。
迄今为止，已发现6种不同的TRAF (TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6)。
作为一种衔接蛋白，TRAFs与一些细胞表面受体直接作用，介导下游信号级联反应，调节细胞生存或死亡平衡。
在6种TRAFs分子中，TRAF1、TRAF3、TRAF5在细胞的凋亡过程中起着重要的作用。
TRAF1表达相当局限，仅存在脾、肺及睾丸中，因此，TRAF1是TRAFs分子中最有可能出现差异表达的分子之一。
新近研究证实TRAF1是一种抗凋亡蛋白，TRAF1过表达抑制caspase 8活化,进而抑制肺癌细胞凋亡〔2，3〕;TRAF3、TRAF5通过活化信号转导，活化泛素蛋白连接酶参与细胞凋亡调节。
本研究显示A549DDP细胞表达TRAF1、TRAF3基因水平明显高于亲代A549细胞，提示TRAF1、TRAF3参与肺腺癌细胞凋亡抑制，导致细胞耐药。
肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)有许多成员，涉及到促凋亡及抗凋亡两种截然不同的信号传导途径，究竟TNFRSF活化后细胞是生存还是死亡则取决于双方信号水平的强弱对比及作用时机的不同。
在生理状态下，TNFR1其信号途径是TNF依赖型的，非配体依赖的TNFR1信号凋亡通路被阻断，行使这种负调作用的蛋白是死亡结构域沉默蛋白(silencer of death domains，SODD)。
在非配体存在的情况下，SODD与TNFR1胞浆段的死亡结构域预先结合，形成SODD TNFR1复合体，该复合体不能与含有死亡结构域的TNFR1结合蛋白(TNFR1 associated death domain protein，TRADD)等相互作用，TNFR1信号通路处于失活状态。
给予TNF刺激后，SODD从复合体中脱落，TNFR1信号通路被打开〔4〕。
首先，TRADD与TNFR1通过死亡结构域之间的作用相互结合，然后TRADD作为一个衔接平台，进一步募集其他信号分子至激活受体，从而决定细胞生存与死亡。
受体作用蛋白(receptor interacting protein，RIP)通过死亡结构域与TRADD结合,可进一步激活TNFR相关因子2(TNFR associated factor 2，TRAF2)，活化的TRAF2再激活2个独立的信号传导途径：(1)可通过磷酸化作用激活NF κB诱导激酶，继而活化κB激酶复合物抑制蛋白，导致其降解从而失去对NF κB的抑制，NF κB转位至细胞核激活多种基因的转录，主要包括抗凋亡基因如细胞凋亡抑制蛋白基因 1、2，B细胞淋巴瘤 2基因,生长抑制和DNA 损伤诱导基因45的转录，通过抑制caspase 8的活化等途径发挥抗凋亡作用。
(2)TRAF2还可与凋亡信号调节激酶,转化生长因子 β活化激酶,促分裂原激活的相关蛋白激酶等分子相互作用并最终激活c Jun氨基端激酶(c Jun NH2 terminal kinase，JNK)，通过JNK/SAPK途径抗凋亡〔5，6〕。
肿瘤坏死因子受体超家族14(TNFRSF14)，通过细胞表面受体信号连接转导途径，活化caspase抑制剂，抑制活化的caspase，释放螯合的细胞质中的NF k颗粒，参与细胞凋亡。
caspase家族是一组与细胞凋亡有关的蛋白酶，包括很多成员,本实验中涉及的CARD6、CARD8、CASP6均属caspase家族。
化疗药物引起的细胞凋亡均须激活caspase。
caspase蛋白酶在死亡受体介导的细胞凋亡中起着中心的作用。
其中caspase 8(CARD8)是这一凋亡过程中首先被活化的ICE家族蛋白酶。
由于caspase 8具有FADD样DED结构域，并且能够通过DED结构域与FADD结合，所以caspase 8可以在凋亡过程中间接与细胞膜受体发生联系，从而将细胞膜事件转化为细胞浆事件。
caspase 8活化后，一方面它可以剪切活化caspase 3、caspase 7、caspase 4、caspase 9和caspase 10，通过这些蛋白酶剪切底物使凋亡得以进行;另一方面，它的活性可以被CrmA所抑制，籍此可作为细胞凋亡负调控因素作用的环节。
caspase 6具有活化水解酶、水解蛋白和分解肽作用，可以降解层蛋白B参与细胞的凋亡活动。
本组实验研究显示A549DDP细胞表达CARD8、CASP6水平较亲代A549细胞增高明显，提示上述caspase家族成员参与肺腺癌A549细胞耐药的发生。
CD70分子(CD70)具有结合肿瘤坏死因子的作用，参与细胞间的信号转导，影响细胞凋亡; BFAR 具有双向调节细胞凋亡的功能因子，能够活化泛素蛋白连接酶，进而活化泛素蛋白，具有抗凋亡作用;TRADD，与TNFRSF1A 关联的死亡结合域，活化信号转导，正调节Ⅰ κ(粒)B激酶/NF κ(粒)B级联反应，参与细胞凋亡;本研究显示A549DDP细胞表达BFAR、GADD45、CD70、TRADD水平均较亲代A549细胞高，二者比值超过2倍以上，提示上述基因参与肺腺癌A549细胞凋亡抑制。
本文在对A549DDP与亲代A549细胞凋亡相关基因的表达研究中发现部分基因在细胞耐顺铂后表达明显上调，说明这些基因参与肺腺癌细胞的凋亡抑制和细胞耐药的发生;但也发现部分基因表达下调,是否参与细胞耐药并如何参与还不十分清楚，有待进一步探讨。
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