形态病理
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形态
牛君星
目录
组织包埋切片
染色
冰冻切片
组织包埋切片
组织包埋切片简介
• 组织包埋是将客户组织标本通过固定，取材，脱 水等过程后，用石蜡作为包埋剂，将组织标本包 埋在石蜡中！
标本
固定
取材
脱水、透 明、透蜡 包埋
切片
组织包埋切片过程步骤
、一、固定：组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然
延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。为了使 标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药 品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分 转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。这种处 理就是固定。除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化 以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某 些部分易于染色。
• 固定液：
• • • • 4%多聚甲醛 Bouin氏固定液 FAA FAS(眼球固定液）
组织包埋切片过程步骤
固定注意事项：
1. 固定剂应有足够的量，一般为组织块体积的10～15倍。 2.根据组织的不同和实验目的不同，选取不同的固定剂。 3.固定时间依材料大小、固定剂种类而异，可从1小时到几十 小时，有时中间需要更新固定剂。某些固定剂对组织的 硬化作用较强，作用时间应严加控制，不能过长。
组织包埋切片过程步骤
二，取材：组织固定完成后，要进行脱水，在脱水前为了
选取目的组织同时也为了脱水能够顺利进行，要对组织进 行有目的性的切割，这个过程就叫取材。 心脏（心室 心房） 脑（海马 黑质 纹状体 ..) 肠 （长条 圆环） 皮肤（全层）
组织包埋切片过程步骤
取材源自文库意事项：
1.切面要平整，厚度不易超过2mm，否则脱水效果不能保证。 2.对于有特许要求的组织，取材时要保证对目的组织的完整保 留。
检验结果： 胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，肌纤维、 纤维素和红细胞染红色、胞核染蓝黑色。
PAS糖原染色
染色原理
PAS染色全称为过碘酸雪夫氏染色（periodic acid shiff， PAS），又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质 （如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基经 过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结 合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在 的部位。等可显示阳性反应，呈紫红色。
组织包埋切片过程步骤
三，脱水：生物组织中含有大量的水分，它和石蜡是不能
相溶的，致使在包埋时石蜡无法渗入组织内部，因此须使 用脱水剂将水分除尽，这就是脱水的作用。
组织包埋切片过程步骤
四、透明：组织块用非石蜡溶剂脱水后必须经过透明。透
明剂能同时与脱水剂和石蜡混合，它取代了脱水剂后，石 蜡便能顺利地渗入组织。
HE染色
染色结果：细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深 蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色， 胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤 维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
Masson染色
主要用途： 主要用于胶原纤维 和肌纤维的鉴别染色。
组织包埋切片过程步骤
五、透蜡和包埋：组织脱水后在透明剂（二甲苯）中透明
后，融化的石蜡就容易进入组织中，然后将组织放入模具 中倒入液体的石蜡，待凝固，组织就包埋成组织蜡块了。
组织包埋切片过程步骤
六、切片：包埋好的蜡块就可以进行切片，一般切 片的厚度在3到6微米（默认4微米），过薄过厚 都不容易切片！ 植物 脂肪（5-8微米）
适用范围
用于显示糖原和多糖类中性粘液和酸性粘液物质，而且还能 显示基底膜、系膜基质、纤维蛋白、血管透明变性、淀粉 样等物质。
番红固绿
特殊染色
天狼猩红 （胶原纤维） 甲苯胺蓝 尼氏染色 LFB 镀银 番红固绿 阿利新蓝 茜素红 vonkossa（钙结节） EVG 维多利亚蓝（弹性纤维） TRAP（破骨细胞）
染色
染色
活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞 内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别 出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去 原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及 染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。 针对组织的不同及需要观察特异性，染色里面分很多 中，下面，我们来看看一些常见的染色。
冰冻切片
缺点
1．不容易做连续切片。 2．切取的组织不能过大，组织过大不容易冻结或者组织冻 结不均，影响切片及染色效果。 3．不容易制作较薄的切片。 4．组织块在冻结过程中容易产生水的结晶而影响细胞的形 态结构及抗原物质的定位，并且组织结构也不如石蜡切片 清晰。
油红O染色
HE染色
苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称 HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精 染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖 体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外 基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病 理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
维多利亚蓝染色
冰冻切片
冰冻切片
• 冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使
组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制 作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速 病理诊断 • 切片厚度（8微米）
冰冻切片
优点
1．简便，可以不需要对组织固定、脱水、透明、包埋等手 续即可进行切片，减少了一些中间环节。 2．快速，用时短。 3．组织变化不大。 4．能很好保存脂肪，类脂等成分。 5．能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类，特别是对于 那些对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗 原和水解酶保存较好。
牛君星
目录
组织包埋切片
染色
冰冻切片
组织包埋切片
组织包埋切片简介
• 组织包埋是将客户组织标本通过固定，取材，脱 水等过程后，用石蜡作为包埋剂，将组织标本包 埋在石蜡中！
标本
固定
取材
脱水、透 明、透蜡 包埋
切片
组织包埋切片过程步骤
、一、固定：组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然
延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。为了使 标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药 品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分 转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。这种处 理就是固定。除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化 以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某 些部分易于染色。
• 固定液：
• • • • 4%多聚甲醛 Bouin氏固定液 FAA FAS(眼球固定液）
组织包埋切片过程步骤
固定注意事项：
1. 固定剂应有足够的量，一般为组织块体积的10～15倍。 2.根据组织的不同和实验目的不同，选取不同的固定剂。 3.固定时间依材料大小、固定剂种类而异，可从1小时到几十 小时，有时中间需要更新固定剂。某些固定剂对组织的 硬化作用较强，作用时间应严加控制，不能过长。
组织包埋切片过程步骤
二，取材：组织固定完成后，要进行脱水，在脱水前为了
选取目的组织同时也为了脱水能够顺利进行，要对组织进 行有目的性的切割，这个过程就叫取材。 心脏（心室 心房） 脑（海马 黑质 纹状体 ..) 肠 （长条 圆环） 皮肤（全层）
组织包埋切片过程步骤
取材源自文库意事项：
1.切面要平整，厚度不易超过2mm，否则脱水效果不能保证。 2.对于有特许要求的组织，取材时要保证对目的组织的完整保 留。
检验结果： 胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，肌纤维、 纤维素和红细胞染红色、胞核染蓝黑色。
PAS糖原染色
染色原理
PAS染色全称为过碘酸雪夫氏染色（periodic acid shiff， PAS），又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质 （如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基经 过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结 合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在 的部位。等可显示阳性反应，呈紫红色。
组织包埋切片过程步骤
三，脱水：生物组织中含有大量的水分，它和石蜡是不能
相溶的，致使在包埋时石蜡无法渗入组织内部，因此须使 用脱水剂将水分除尽，这就是脱水的作用。
组织包埋切片过程步骤
四、透明：组织块用非石蜡溶剂脱水后必须经过透明。透
明剂能同时与脱水剂和石蜡混合，它取代了脱水剂后，石 蜡便能顺利地渗入组织。
HE染色
染色结果：细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深 蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色， 胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤 维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
Masson染色
主要用途： 主要用于胶原纤维 和肌纤维的鉴别染色。
组织包埋切片过程步骤
五、透蜡和包埋：组织脱水后在透明剂（二甲苯）中透明
后，融化的石蜡就容易进入组织中，然后将组织放入模具 中倒入液体的石蜡，待凝固，组织就包埋成组织蜡块了。
组织包埋切片过程步骤
六、切片：包埋好的蜡块就可以进行切片，一般切 片的厚度在3到6微米（默认4微米），过薄过厚 都不容易切片！ 植物 脂肪（5-8微米）
适用范围
用于显示糖原和多糖类中性粘液和酸性粘液物质，而且还能 显示基底膜、系膜基质、纤维蛋白、血管透明变性、淀粉 样等物质。
番红固绿
特殊染色
天狼猩红 （胶原纤维） 甲苯胺蓝 尼氏染色 LFB 镀银 番红固绿 阿利新蓝 茜素红 vonkossa（钙结节） EVG 维多利亚蓝（弹性纤维） TRAP（破骨细胞）
染色
染色
活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞 内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别 出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去 原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及 染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。 针对组织的不同及需要观察特异性，染色里面分很多 中，下面，我们来看看一些常见的染色。
冰冻切片
缺点
1．不容易做连续切片。 2．切取的组织不能过大，组织过大不容易冻结或者组织冻 结不均，影响切片及染色效果。 3．不容易制作较薄的切片。 4．组织块在冻结过程中容易产生水的结晶而影响细胞的形 态结构及抗原物质的定位，并且组织结构也不如石蜡切片 清晰。
油红O染色
HE染色
苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称 HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精 染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖 体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外 基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病 理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
维多利亚蓝染色
冰冻切片
冰冻切片
• 冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使
组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制 作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速 病理诊断 • 切片厚度（8微米）
冰冻切片
优点
1．简便，可以不需要对组织固定、脱水、透明、包埋等手 续即可进行切片，减少了一些中间环节。 2．快速，用时短。 3．组织变化不大。 4．能很好保存脂肪，类脂等成分。 5．能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类，特别是对于 那些对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗 原和水解酶保存较好。