兰属Cymbidium植物ISSR遗传多样性分析

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兰花种间杂种的非共生萌发研究和ISSR分析

兰花种间杂种的非共生萌发研究和ISSR分析本研究以8个兰科植物为亲本,进行兰科远缘杂交实验和杂种的非共生萌发研究。

运用ISSR分子标记法对送春×多花兰的F1代和两亲本进行分析。

本实验的目的是通过远缘杂交的方法创造新的种质并在分子水平和形态特征上评价后代特性,为兰花育种做一些基础性的探索工作。

研究结果如下:1.以8个兰科植物为亲本,进行远缘杂交实验。

16个杂交组合中有12个得到朔果,5个杂交组合的种子成功萌发。

表明送春×多花兰、多花兰×送春、春剑×送春、送春×春剑、春兰×送春、多花兰×春兰等属内组合较易获得杂种,叉唇钗子股×珍珠矮、多花指甲兰×珍珠矮、硬叶兜兰×送春、送春×硬叶兜兰等属间组合较难获得杂交后代。

2.以送春×多花兰的F1代种子为试材,对促进非共生萌发的技术措施进行了探索,研究表明胚龄7个月、0.1 mol/L KOH处理10 min的种子萌发率最高。

种子萌发后原球茎的增殖以Z<sub>4</sub>（KC+BA 0.4 mg/L+NAA 0.6 mg/L+KT 0.2 mg/L）培养基为最好,增殖系数可达到12.8。

在原球茎增殖和分化成苗过程中加入活性碳能够有效地防止切口褐化。

3.送春×多花兰杂交种子的非共生萌发过程的系统观察表明,F1代种子在萌发过程中一些形态特征介于双亲之间,萌发后约90天时形成的原球茎类似原球茎与根状茎的复合体,当分化后在原球茎生根部位下方仍然有类似根状茎的结构存在。

由于母本为地生兰,父本为附生兰,其杂交后代对生态的适应性有待进一步观察。

4.采用正交试验设计法进行了ISSR-PCR反应最佳体系的优化,从80个ISSR引物中筛选出14个多态性较高的引物,并通过梯度PCR试验,确定每一个引物的最佳退火温度。

再用这14个引物对送春×多花兰的F1代59个单株个体和两亲本共61份材料进行ISSR-PCR扩增。

兰科植物各论

、瘤瓣兰属、万带兰属、蕾丽兰属 ( Laelia)、指甲兰属 (Aerides)、树兰属(Epidendrum)及兰属的虎头兰类等。地生兰包括兜兰属、虾脊兰属、白芨属（ Bletilla）、米而顿兰 (Miltonia)属、鹤顶兰属（Phains）等。
三、兰花的分布
兰花分布广泛，从72°N -52°S均有分布，80%-90%种类分布在以赤道为中心的热带、亚热带地区。主要分布于南、北纬30°以内，尤以亚洲热带和亚热带、美洲热带地区为主，降水在1500—2500毫米左右。中国兰主产于亚洲尤其在中国的亚热带地区，其分布纬度略向北1—2度。主要分布区有：
四、兰花的分类
(一)按生态习性分类
1、附生兰类：主要产于热带，它们多生长于树干上（或岩石、悬崖上），以粗壮根系附着在树干、岩石等表面，根系裸露于空气中，不从树干、岩石上吸取养分，而自雨水、露水、雾水中吸取水份、无机盐，也从落叶、脱落树皮、昆虫等动物残
体中吸取养分。常见有卡特兰属（Cattleya）、蝴蝶兰属 (Phaiaenopsis)、万带兰属(Vandacidum)等属的种类。
3、根通常下垂，但有些种类如西藏虎头兰的根向上生长成篮状或鸟巢状，上面积存落叶供给养分。
4、根组织内或根际周围，生有根菌（也称兰菌，为真菌类，可固定空气中的氮），菌丝体侵入根内后被分解、吸收，以供给养分和水分。尤其对无胚乳且胚发育不完全的兰种子而言，尤需根菌的侵入。
（五）果实：
果为蒴果，含几个或多数种子，种子细小，近无胚乳，胚分化不完全。
1、直立茎：为单轴类。茎直立或倾斜向上，叶片长在茎两侧，随着新叶生长，老叶脱落。常见有兜兰、蝴蝶兰、指甲兰、万带兰、凤兰、火焰兰等。

兰属植物EST-SSR标记开发及应用

兰属植物EST-SSR标记开发及应用作者：孙叶刘红马辉单东方曹宏包建忠陈秀兰赵国琦来源：《江苏农业学报》2020年第03期摘要：本研究利用蘭属植物杂交种转录组测序数据开发EST-SSR标记，分析标记的多态性及兰属种质的遗传多样性，为兰属植物种质资源的创新和分类研究提供参考。

结果表明，转录组测序分析获得113 780条Unigene，从中共识别到23 709个SSR位点，SSR位点出现频率为20.84%。

从设计的200对引物中筛选出20对具有多态性，并且扩增条带大小与预期相符的EST-SSR标记引物，对48份兰属种质材料进行PCR扩增，平均多态位点数为3.0，共检测到81.00个等位基因，平均每对引物检测到4.05个等位基因。

观测杂合度平均值为0.320 8，期望杂合度平均值为0.507 0;Shannon’s信息指数的变化范围为0.233 8～1.472 4，平均值为0.932 1，多态信息含量为0.110 3～0.662 2。

对4个参试兰属植物种群进行遗传多样性分析，春兰和大花蕙兰的F1杂交种群与大花蕙兰种群亲缘关系较近，与春兰种群的亲缘关系较远。

聚类分析结果表明，遗传相似系数为0.72时，48份种质聚成7类，春兰和大花蕙兰的F1代杂交种群大多聚入第I类，春兰种群聚入第V类，第II类、第III类、第IV类、第VII类均为大花蕙兰种群。

关键词：兰属植物;EST-SSR标记;遗传多样性;亲缘关系中图分类号：S682文献标识码：A文章编号：1000-4440（2020）03-0681-08Development and application of EST-SSR marker in CymbidiumSUN Ye1，2，LIU Hong2，MA Hui2，SHAN Dong-fang2，CAO Hong2，BAO Jian-zhong2，CHEN Xiu-lan2，ZHAO Guo-qi1（1.College of Animal Science & Technology， Yangzhou University， Yangzhou 225009，China;2.Institute of Agricultural Sciences of the Lixiahe District in Jiangsu Province， Yangzhou 225007， China）Abstract： Expressed sequence tag-simple sequence repeat （EST-SSR） markers were developed based on transcriptome sequencing， the polymorphism of markers and the genetic diversity of Cymbidium germplasms were analyzed in order to provide reference for the innovation and classification of resources. The results showed that 113 780 unigenes were obtained from transcriptome sequencing， a total of 23 709 SSR loci were detected in the unigene with the frequency of 20.84%. In addition， 20 pairs of EST-SSR primers with polymorphism were selected from 200 primers， and the size of amplified bands was in accordance with the expectation. Moreover， 48 Cymbidium germplasms were amplified by PCR， and the average number of polymorphic loci was 3.0. A total of 81.00 alleles were observed， with an average of 4.05 alleles per locus. The mean values of observed heterozygosity and expected heterozygosity were 0.320 8 and 0.507 0，respectively. Shannon′s information index ranged from 0.233 8 to 1.472 4， and the average value was 0.932 1. The polymorphic information content（PIC） ranged from 0.110 3 to 0.662 2. The F1 population of Cymbidium georingii and Cymbidium hybridum was close to thepopulation of C. hybridum， and far away the population of C.georingii. Cluster analysis results indicated that 48 germplasms were grouped into seven groups at the genetic similarity coefficient of0.72， the F1 population of C.georingii and C. hybridum was grouped into class I， the population ofC.georingii was grouped into class V， and class II， class III， class IV and class VII were the population of C. hybridum.Key words：Cymbidium;expressed sequence tag-simple sequence repeat （EST-SSR）marker;genetic diversity;genetic relationship兰属植物主要分于中国、日本、韩国、马来群岛、印度西北部、澳大利亚北部和东部等国家和地区，具有很高的观赏价值和经济开发价值。

基于ITS2序列探讨兰属的DNA条形码鉴定和系统发育关系

基于ITS2序列探讨兰属的DNA条形码鉴定和系统发育关系巫伟峰;陈孝丑;陈发兴;陈春;张毅智【摘要】兰属中许多类型具有极高的观赏和经济价值,并在兰花产业中占据重要地位.由于兰属植物复杂的演化、遗传历史,f直以来分类鉴定困难,存在诸多分类学争议.近年来,快速发展的DNA条形码技术为兰属植物的分类鉴定提供了新的思路.该研究利用12个兰属本地样品和250条GenBank下载的兰科ITS2序列(其中81条属于兰属),通过BLAST1、遗传变异、建树法等分析评估了ITS2序列用于兰属植物分子鉴定的可行性,并基于建树结果探讨了兰属的系统发育关系.BLAST1结果显示,ITS2序列可以准确鉴定12个本地兰属样品的属、亚属划分,鉴定成功率达到100％;在组水平也具有较好的鉴定能力,鉴定成功率为92％,但在物种水平上的鉴别能力较差,鉴定成功率仅17％.参考库(GenBank下载的250条兰科ITS2序列)遗传变异分析结果显示,兰属ITS2序列具有很高的遗传多样性(变异率为74.9％),在属、亚属水平上能较好地区分,但在组或组下的物种水平,由于组内和组间变异、种内和种间变异存在较大重叠,鉴别能力较差.建树结果显示,ITS2序列可以将兰属中的建兰亚属、兰亚属和大花亚属明显区分开,建兰亚属与兰亚属亲缘较近,两者与大花亚属亲缘较远,同还发现莲瓣兰与春兰在系统发育树中关系紧密,结果支持DuPuy&Cribb的3亚属划分,并暗示莲瓣兰可能是春兰下的f个变种或品种(支持率为69％).综上所述,ITS2序列在兰属植物的分子鉴定上具有f定的应用价值,可作为兰属植物DNA条形码鉴定的辅助条形码.【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2019(031)008【总页数】10页(P1295-1304)【关键词】ITS2;兰属;DNA条形码;系统发育关系;兰科【作者】巫伟峰;陈孝丑;陈发兴;陈春;张毅智【作者单位】福建省林业科技试验中心,福建南靖 363600;贵州省植物园,贵州贵阳 550000;福建省林业科技试验中心,福建南靖 363600;福州植物园,福建福州350000;福建农林大学园艺学院,福建福州 350000;;福建省林业科技试验中心,福建南靖 363600;福建省林业科技试验中心,福建南靖 363600【正文语种】中文【中图分类】S682.31兰属(Cymbidium)是兰科(Orchidaceae)植物中最著名且分布范围最广的一类[1]，全世界约有70种，中国约有49种[2]。

蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)离体快繁及四倍体培育研究

蕙兰（Cymbidium faberi Rolfe）离体快繁及四倍体培育研究蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)为兰科(Orchidaceae)兰属(Cymbidum Sw.)多年生草本花卉,具有很高的观赏价值,也是经济价值最高的兰花之一。

兰花主要靠分株繁殖,生长速度慢,繁殖系数低,另外兰花种子没有胚乳和子叶,常规播种难以萌发。

兰花育种的主要方法是杂交育种,但由于兰花种子发育不全,杂交育种很繁琐。

冈此,繁殖和育种是兰花的主要问题。

迄今为止,有关兰花的研究主要集中于洋半和国兰中的墨兰,而蕙兰的相关研究很少。

通过组织培养进行多倍体的诱导是进行快速繁殖和品种改良的有效途径。

为此,本文对蕙兰组织培养中多倍体诱导进行了研究,以期为蕙兰新品种的选育奠定基础。

蕙兰离体再生体系的研究结果表明:最佳外植体消毒方式是以洗涤剂浸泡10 min,自来水冲洗30 min,75%乙醇消毒60 s,0.1%升汞消毒10 min(加数滴吐温-20).无菌水冲洗4-6次为宜。

初代诱导芽分化的适宜培养基为MS+1.5 mg/L6-BA+0.2 mg/LNAA,诱导率达93.3%:其继代增殖的适宜培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/LNAA,增殖系数为4.8;适宜的生根培养基为MS,植株和根系生长状况良好,生根率为100%,移栽成活率为85%。

在建立离体再生体系基础上,利用秋水仙素溶液为诱变剂,采用浸泡法和混培法对蕙兰进行多倍体诱导,结果表明:两种方法中以浸泡法处理效果较好,以0.5%秋水仙素溶液浸泡处理48 h为佳,诱变产生的植株经染色体鉴定,其染色体数目为2n=4x=88,属四倍体类型,诱导率高达13.3%。

四倍体蕙兰在二倍体的适宜增殖培养基上增殖,在MS+1.0 mg/LIBA的生根培养基上生根,增殖与生根情况良好,移栽成活率为60%。

对诱导获得的四倍体蕙兰新种质与二倍体植株进行了外部形态和细胞学的比较观察,结果表明:在同一生长阶段和环境条件下,四倍体植株叶片形态充分体现了器官的巨人性。

兰属植物Cymbidium的栽培及其历史

这一类包括：C.ensifolium, C.sinense, C.kanran, C.floribundum, C.devonianum, C.cyperifolium, C.faberi, C.goeringii, ncifolium and C.macrorhizon. 这些原生种的分布从日本跨过中国南部到尼泊尔和印度的喜马拉雅地区。
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影响蕙蘭栽培的因素及方式
4．蘭花的微繁殖技术 (2)
茎尖组织培养是切取一个新生长茎尖的顶端分生组织部分并接种于一个预置液体培养基的无菌试管中，然后将试管放置于旋转轮或震荡器上。周期性的不断的运动阻止茎尖分生组织向根与茎的方向分化，而是分化成许多胚胎植物和原胚体。该分化物可以由水平方向切分开，而且这个过程可以一直重复，直到达到所要求的数量为止；然后再进行根与茎的诱导培养；最后将分化成熟的幼苗移植，进行常规栽培。
1.) 树皮、泥炭、珍珠岩、陶粒等。
2.) 泥炭土为基础，加入沙、珍珠岩和树皮混合而成略偏酸性材料, pH值在5.5-6.0；还可以加入一定量的缓效肥，缓效肥的用量约为一般植物的一半为好。
• 3.) 无机介质，象岩棉、塑料泡沫、和海绵等也用来栽植蘭花。
• 4.) 园艺用岩棉和珍珠岩混合栽植大花蕙蘭效果很好（工业用岩棉不能用来种植蘭花，以下所指均为园艺用岩棉).
•
从旧盆中取出植物时务必小心，有时你必须破坏旧盆才能无伤害地取出植株。
首先清理黄叶、病叶、老花梗等；然后检查根系生长情况，摘除烂根、干瘪的假鳞茎，去掉老的基质。
那些叶已脱落的老鳞茎如果不影响株型、容器空间的利用可以保留，因为它们是无损于植物生长，而且还可能帮助水分和营养的储存。
•
选择好合适的容器，底部垫上瓦片、塑料泡沫等透水的大颗粒材料。将植株放入盆

我国南方地区兰科植物多样性与遗传变异分析

我国南方地区兰科植物多样性与遗传变异分析在我国的南部地区，特别是云南、广西、贵州等地，生长着大量的兰科植物，这些植物形态各异、色彩斑斓，是中国乃至世界上独一无二的自然景观。

同时，由于南方地区的气候和地形复杂多样，这些兰科植物的遗传变异程度也非常高，成为了兰科植物多样性和遗传变异研究的热点。

兰科植物的多样性作为一类典型的花卉植物，兰科植物拥有许多色彩绚丽、形态各异的花朵。

在我国，兰科植物的种类非常多，有些植物只生长在非常特殊的地理环境中，使得它们的分布范围非常有限。

例如南药兰、水萝卜、水龙骨等珍稀植物，都只分布在云南某些特定的山谷或河流附近，是非常难以获取的材料。

此外，由于兰科植物的繁衍生殖方式多样，有性繁殖、无性繁殖等多种方式，使得它们之间的遗传差异非常大。

一些物种甚至存在着多倍体、二倍体和多倍体混合体等现象，这种复杂程度使得兰科植物成为了研究生物多样性和遗传变异的重要对象。

兰科植物的遗传变异众所周知，生物之间的遗传差异主要来源于基因、染色体和基因组的变异等多种因素。

而在兰科植物中，由于其繁殖生殖方式的多样性，这些遗传变异的因素也非常多。

首先，由于有性繁殖和无性繁殖的交替进行，可能会导致某些物种在不同生殖阶段的遗传变异有所不同。

例如，水仙兰在有性繁殖时会产生独特的遗传变异，而在无性繁殖时则会没有这种变异。

而对于一些常见的兰科植物，例如文心兰、蝴蝶兰等，由于它们存在较多的两倍体和多倍体混合体等现象，使得它们之间的遗传变异也非常丰富。

此外，兰科植物的基因组结构也非常复杂。

例如一些物种的DNA序列非常长，构建其基因组图谱也是一项复杂而艰巨的任务。

这些基因组结构的复杂性使得它们对环境因子的适应能力非常高，也使得它们能够产生更为多样化的遗传变异现象。

兰科植物多样性和遗传变异研究的意义从科学的角度来看，兰科植物多样性和遗传变异的研究能够深入探索生命的奥秘，为生物多样性的保护和维护做出重要的贡献。

并且，由于一些兰科植物具有高经济价值的特点，例如某些药用兰、食用兰、观赏兰等，对于它们繁殖生长的研究也有着极大的经济意义。

百里香属7种植物遗传多样性的RAPD和ISSR分析的开题报告

百里香属7种植物遗传多样性的RAPD和ISSR分析的开
题报告
一、研究背景和意义
百里香属（Thymus）是唇形科多年生草本植物，在全球范围内广泛分布，具有
药用价值。

随着生物多样性的逐渐减少，对百里香属植物的遗传多样性研究越来越受
到重视。

RAPD（随机扩增多态性DNA）和ISSR（间隔序列重复引物）技术是两种常
用的遗传多样性分析方法，广泛应用于植物遗传多样性研究中。

本研究旨在通过RAPD和ISSR技术对百里香属7种植物的遗传多样性进行分析，为保护和合理利用该植物资源提供科学依据。

二、研究内容和方法
本研究选取了百里香属7种植物进行遗传多样性分析，包括Thymus vulgaris、Thymus x citriodorus、Thymus pulegioides、Thymus herba-barona、Thymus serpyllum、Thymus capitatus和Thymus zygis。

采用RAPD和ISSR技术对各种植物
的遗传多样性进行分析，并比较两种技术在分析中的差异。

首先，通过大量的文献调查和前人研究，选择合适的引物，设计合理的扩增条件；收集并处理多种来源的植物样品；运用PCR技术扩增样品DNA；通过电泳技术分离扩增出的DNA条带，并进行分析。

三、研究意义
本研究可对百里香属植物的遗传多样性进行比较全面的分析，揭示不同物种之间的遗传关系和演化历史，为百里香属植物的保护和开发利用提供科学依据和参考。

同时，由于RAPD和ISSR技术具有简便、高效、快速等优点，该研究所得的结
果也将有助于推进遗传多样性研究在其他植物物种中的应用和发展。

兰属(Cymbidium)植物茎的初探

兰属(Cymbidium)植物茎的初探王国兴【期刊名称】《园艺学报》【年(卷),期】1989(16)4【摘要】在兰花栽培中对兰属(Cymbidium)几种植物的茎作了初步观察,加深了对兰茎的认识,认为兰茎的形态及其生物学特性具有重要的意义。

观察的种类一、长苞组(Sect.Maxillarianthe Schltr.) 1.春兰(Cymbidium goeringii(Rchb.f.)Rchb.f.2.春剑(变种)C.goeringii(Rchb.f.)Rchb.f.var.longibracteatum(Y.S.Wu etS.C.Chen)Y.S.Wu et S.C.Chen 3.峨眉春蕙(变种)C.faberi Rolfevar.omeiense(Y.S.Wu et S.C.Chen)Y.S.Wu et S.C.Chen 4.送春(变种)C.faberi Rolfe var.szechuanicum(Y.S.Wu et S.C.Chen)Y.S.Wu et S.C.Chen 5.建兰C.ensifolium(L.)SW. 二、宽叶组(Sect.Geocymbidium Schltr.) 6.兔耳兰Cymbidium lancifolium Hook. 7.无齿兔耳兰 C.javanicum B1. 三、腐生组(Sect.Macrorhizon Schltr.) 8.大根兰Cymbidium macrorhizum Lind1.【总页数】2页(P314-315)【关键词】兰属植物;兰科;茎;生物学特性【作者】王国兴【作者单位】成都市园林科学研究所【正文语种】中文【中图分类】S682.310.1【相关文献】1.利用同工酶和SDS-PAGE技术对一些兰属(Cymbidium)品种的分析(简报) [J], 叶庆生2.兰属Cymbidium植物ISSR遗传多样性分析 [J], 吴振兴;王慧中;施农农;赵艳3.兰属(Cymbidium)5种植物叶结构特征 [J], 宋军阳; 罗腾; 张宁4.兰属(Cymbidium)5种植物叶结构特征 [J], 宋军阳;罗腾;张宁5.利用RAPD技术分析兰属(Cymbidium)品种间的亲缘关系 [J], 文李;叶庆生;王小菁;潘瑞炽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

30份建兰种质资源的表型性状遗传多样性研究

1.2 方法 1.2.1 表型性状的选择及数据采集由于兰属植物是以观叶赏花为主，评价兰属植物的重要指标
是兰花的叶姿、叶艺和花的颜色、形状等特征，根据云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所制定的兰属植物品种特异性、一致性和稳定性
第6期
王宏利等: 30 份建兰种质资源的表型性状遗传多样性研究
编号 No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Tab. 1
品种 Varieties 梨山狮王君荷黄光登汇翠粉荷红猫芯蝶素君荷红月红君荷富山奇蝶朝阳三星蝶荷三星黄一品峨眉牡丹荷王秋雪
表 1 30 个建兰品种材料及种源地情况 Sample materials and provenances of 30 C. ensifolium varieties
表型性状多样性是遗传物质多样性的具体表现，是进行遗传多样性研究最基本最重要的组成部分[2]。目前，我国兰属植物的研究主要集中在兰花的鉴别分类[3-5]、高效栽培[6-9]、组织培养[10-12] 及分子调控机理[13-15]等方面。广西农业科学院花卉研究所的卜朝阳等在春兰、豆瓣兰、蕙兰等国兰资源收集繁育及育种研究方面取得了较好成果，但在兰属植物各种质的遗传背景领域等方面研究还鲜见报道。曾碧玉等[16]收集了大量各地区的兰属品种并对兰花选育种研究进展进行了综述；傅巧娟等[17]则从细节出发，调查兰属植物的株形、叶片等农艺特征在品种间的相关性，得出
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测试指南，选取了株高、叶长、花瓣形状、花葶着花数等 25 个具有代表性且遗传相对稳定的表型性状进行测试，当待测品种在盛花期时分别选取健康单株用卷尺、游标卡尺对各个性状进行测量，然后进行统计分析。 1.2.2 性状评价标准参考敖素燕等[21]的 31 个国兰品种的数量性状分析及国兰表型性状与核型分析方法，确定建兰测试性状及方法见表 2。在建兰花朵开放到最佳状态时，记录表 2 的各项指标，各项指标的观察样本数不少于 5 株，以实测值求平均数对数量性状、赋值后的质量性状（表 3）进行记录和分析。 1.3 数据处理

均匀设计优化建兰ISSR-PCR体系

均匀设计优化建兰ＩＳＳＲ－ＰＣＲ体系摘要：采用均匀设计，对影响建兰ISSR—PCR体系的引物、Mg2+、dNTP 和Taq DNA聚合酶浓度等进行4因素5水平和4因素3水平两轮优化，建立了适合于建兰ISSR-PCR的反应体系：在20μL反应体系中，含引物0.25tLmol/L、Mg2+2.5mmol/L，dNTP 0.2mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U和模板DNA 40ng.在此基础上对扩增程序中的循环次数和退火温度，以及ISSR引物进行筛选，筛选获得的扩增程序为：94℃预变性5min；接着进行32个循环：94℃变性35s，52－56℃退火45s，72℃延伸90s；循环结束后，72℃延伸10min.同时筛选得到14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。

关键词：建兰；ISSR—PCR；均匀设计建兰(Cymbidium ensifolium(Linn.)Sw.)为兰科(Drchidaceae)兰属(Cymbidium)植物，极具观赏和经济价值，兰科植物广泛分布于各种生态环境，表现有高度特异的形态、结构和生理特性，建兰也不例外，长期的自然杂交以及人工选育，品种间存在很高的遗传分化和种间类型，这为杂交育种选配亲本提供了丰富的种质资源；但同时，仅凭花色、花型、叶色、叶型、花梗等传统的形态指标来辩识品种，则存在很大难度，这不仅给品种的整理和研究带来困难，同时也影响新品种的注册登录和产权保护。

以DNA指纹图谱为指标的分子标记技术，标记的位点数远大于形态标记和生化标记，且不易受环境因素的影响，可弥补或解决形态标记和生化标记中的缺陷或难题，因此，被广泛用于植物品种的鉴定，ISSR(inter-simple sequence repeat，简单序列重复区间)是Zietkiewicz等在SSR(simplesequence repeat，简单序列重复)基础上创建的，基于PCR技术的一种新型分子标记，其基本原理是利用真核生物基因组中广泛存在的SSR来设计引物，而无需预先克隆和测序，用于ISSR-PCR 扩增的引物通常为16－18个碱基序列，其主体是2－4个碱基组成的串联重复序列，然后在其5′端或3’端加上1－4个锚定碱基，引起特定位点退火，使引物与相匹配的SSR的一端结合，从而保证ISSR引物能够对SSR之间的DNA序列进行PCR扩增，ISSR分子标记操作简单，可揭示的多态性较RAPD和RFLP、SSR高，重复性较RAPD好。

兰科植物内生细菌物种多样性及其促生机理研究进展

1 兰科植物内生细菌的多样性
1． 1 多样性研究方法一直以来，兰科植物内生细菌的多样性研究主
要以传统的分离培养法为主，通过平板培养法分离培养，然后根据菌体的形态特征、生理生化特性进行分类研究。这种传统的研究方法是微生物学研究的基石，对微生物群落结构，尤其在发现新物种资源方面具有不可替代的作用。但是内生菌对生存环境的要求特殊，目前对这些特殊要求还不够清楚，分离培养过程中所用培养基可能不能完全满足内生菌的需求，它们在脱离原生境的情况下不易存活，使得分离出的内生菌种类大大减少，不能客观全面反映微生态系统中微生物的真实状况。过去，为了得到兰科植物内生细菌的实体，一直采用传统纯化培养中常用的细菌培养基和操作方法，从多种兰科植物上只得到少数几种内生细菌［5 －6］，后来经过对分离前表面灭菌条件和培养基成分进行改进［7］，使分离培养条件与自然状态更接近，从而获得了更多的内生细菌资源。
热带亚热带植物学报 2012, 20(1): 92~98 Journal of Tropical and Subtropical Botany
兰科植物内生细菌物种多样性及其促生机理研究进展
张萍a, 宋希强a,b*
(海南大学, a. 热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室； b. 园艺园林学院, 海南儋州 571737 )
收稿日期： 2011－06－27
接受日期： 2011－09－22
基金项目：国家自然科学基金项目(30860233, 31160178)；霍英东青年教师基金项目(11029)；教育部博士点基金项目(20104601110002)；海南省

兰科菌根真菌多样性研究及其对兰科植物的影响

兰科菌根真菌多样性研究及其对兰科植物的影响菌根(Mycorrhiza)是自然界植物在长期的生存过程中与真菌共同进化而形成的一种普遍存在的共生现象。

兰科植物(Orchidaceae)是典型的菌根植物,几乎所有的兰科植物都与真菌共生,菌根共生关系几乎伴随着兰科植物从种子萌发到开花结果的整个生活史。

开展兰科菌根真菌多样性及其对兰科植物生长影响研究,对兰科植物与真菌之间关系和共生分子机制的研究,兰花资源保护、野生种群的生态恢复及产业化经营具有重要意义。

本研究对11种兰属(Cymbidium)和41种石斛属(Dendrobium)植物共生真菌进行了分离和鉴定,分析和讨论了样本间菌根真菌多样性差异及与兰科植物的专一性关系;以多种兰科植物和兰科菌根真菌为研究对象,在组织培养条件下构建了真菌与兰科植物种子、根状茎(原球茎)和幼苗的共生体系,筛选对兰科植物的生长有促进作用的菌根真菌,并以此为基础讨论了植物与真菌的专一性关系;运用生物信息学分析方法,预测和分析了小兰屿蝴蝶兰(Phalaenopsis)和铁皮石斛(Dendrobium officinale)与菌根真菌共生相关的Ca M和CML基因家族。

主要研究结果如下:(1)从11种兰属植物中共分离获得1450株兰科菌根真菌,属于22个OTUs,分布在胶膜菌科(Tulasnellaceae)、角担菌科(Ceratobasidiaceae)和蜡壳耳科(Sebacinaceae)中;其中物种丰富度最大为四川建兰菌根(7个OTUs),物种丰富度最小为浙江蕙兰、贵州春兰和湖南春兰(2个OTUs)。

(2)从41种石斛属植物中共分离获得1434株兰科菌根真菌,属于48个OTUs,分布在胶膜菌科、角担菌科和蜡壳耳科中;物种丰富度最大为滇桂石斛(7个OTUs),物种丰富度最小的为短棒石斛、紫瓣石斛和高山石斛(仅1个OTU)。

(3)利用单因素方差分析(ANOVA)和非参数多元方差分析(PERMANOVA)对不同的植物样本间的菌根真菌在群落结构差异进行了研究。

浙江景宁国家重点保护野生植物多样性及保护建议

接收日期：2023-05-23 接受日期：2023-08-14 基金项目：景宁县科技计划项目(2022A27) *通信作者。

E-mail:*****************浙江景宁国家重点保护野生植物多样性及保护建议何海荣1，吴耀成2，金民忠2，林坚2，程力波3，夏丽敏2*(1. 景宁畲族自治县鸬鹚乡农业农村服务中心，浙江景宁 323508；2. 景宁畲族自治县生态林业发展中心，浙江景宁 323500；3. 景宁畲族自治县景南乡经济发展服务中心，浙江景宁 323504)摘要：通过实地调查、查阅文献等方法对浙江景宁县域国家重点保护野生植物资源及多样性进行调查分析。

经调查，景宁有国家重点保护野生植物28科38属51种，其中国家一级保护野生植物1种、二级保护50种。

文中统计了国家重点保护植物的科、属、种组成和分布特点等情况，分析其濒危状况及致濒原因；同时结合景宁实际，提出加强宣传教育增进民众保护意识、加大执法力度提高依法保护水平、加强资源调查掌握动态变化、强化自然保护地管理提高保护成效等保护措施。

关键词：国家重点保护野生植物；植物组成；保护建议；浙江景宁Doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2023.04.008中图分类号：Q948 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2023)04-0336-07Diversity and Protection Suggestions of National Key Protected Wild Plantsin Jingning, Zhejiang ProvinceHE Hai-rong 1, WU Yao-cheng 2, JIN Min-zhong 2, LIN Jian 2, CHENG Li-bo 3, XIA Li-min 2*(1. Agricultural and Rural Service Center of Cormorant Township, Jingning She Autonomous County, Jingning 323508, Zhejiang China; 2. Ecological Forestry Development Center of She Autonomous County, Jingning 323500, Zhejiang China; 3. Economic DevelopmentService Center of Jingnan Township, Jingning She Autonomous County, Jingning 323504, Zhejiang China)Abstract: The project team completed the investigation and analysis of national key protected wild plant resources and their diversity in Jingning County by means of literature review and field investigation. According to the investigation, there are 51 species of wild plants in 38 genera and 28 families under state key protection in Jingning, including 1 species of first class and 50 species of second class. The composition and distribution characteristics of the family, genus and species of the state key protected plants were studied, and the endangered status and causes of endangerment were analyzed. At the same time, according to the actual situation of Jingning, the corresponding protection measures were proposed such as strengthening publicity and education to enhance the public protection awareness, strengthening law enforcement to improve the level of protection, strengthening resource investigation to understand the dynamic changes, strengthening the management of natural protected areas to improve the effectiveness of protection.Key words: national key protected wild plant; plant composition; protection suggestion; Jingning Zhejiang国家重点保护野生植物是指原生地天然生长的珍贵植物和原生地天然生长并具有重要经济、科学2023,52(4): 336～342.Subtropical Plant Science第4期何海荣等：浙江景宁国家重点保护野生植物多样性及保护建议﹒337﹒研究、文化价值的濒危、稀有植物，分为国家一级保护野生植物和国家二级保护野生植物[1]。

广西河池市野生兰科植物资源分布调查

广西河池市野生兰科植物资源分布调查文章编号：1006-1126-（2020）04-0565-10摘要：通过查阅文献资料，结合实地走访和踏查，对广西河池市野生兰科（Orchidaceae ）植物资源的分布与生境进行调查。

结果表明，广西河池市的野生兰科植物共有61属184种，种类丰富，生活型全面，主要以地生和附生为主；地生兰科植物33属90种，附生兰科植物25属83种，腐生兰科植物4属4种，半附生兰科植物3属7种。

罗城县野生兰科植物有104种，占河池市野生兰科植物资源总数的56.52%；环江县有131种，野生兰科植物分布最多，占总数的71.20%；天峨县86种，占46.74%。

以上3县的兰科植物种数明显高于其他县（区），资源分布不均。

河池市野生兰科植物区系成分中，与热带亚洲分布有关的植物占绝对优势；北温带区系和东亚区系的影响较小。

河池市的野生兰科植物种类虽然丰富，但仍需加强兰科植物的收集保存、保护和资源利用。

关键词：资源调查；保护利用；野生兰科植物；河池中图分类号：S682.31文献标识码：A收稿日期：2020-05-09基金项目：河池市科学研究与技术开发计划项目（河科能1047002-12）第一作者：韦艺（1987—），女，工程师，主要从事园林树木栽培研究。

通信作者：谢代祖（1978—），男，高级工程师，主要从事生态学及经济林研究。

韦艺，谢代祖，韦林，韩俊严，李运飞，古恋（河池市林业科学研究院，广西河池547000）Investigation on Resources Distribution of Wild Orchidaceae Plants inHechi of GuangxiWei Yi,Xie Daizu,Wei Lin,Han Junyan,Li Yunfei,Gu Lian(Hechi Forestry Research Institute,Hechi,Guangxi 547000,China)Abstract:Based on literature references,investigation and reconnaissance,distribution and habitat of wild Or⁃chidaceae plant resources in Hechi of Guangxi were investigated.Results showed that there were 61genera and 184species of wild Orchidaceae plants in Hechi of Guangxi including all kinds of living types,which were mainly terrestrial and epiphytic.There were 33genera and 90species of terrestrial plants,25genera and 83species of epiphytic plants,4genera and 4species of saprophytic plants,and 3genera and 7species of hemiepiphyte plants.There are 104species of wild Orchidaceae plants in Luocheng county,accounting for 56.52%of the total resources in Hechi.There were 131species in Huanjiang county with the maximum distribution,accounting for 71.20%of the total.There were 86species in Tian'e county,accounting for 46.74%.The distribution of Orchidaceae plant species in the three areas was significantly higher than other counties.In flora of Orchidaceae plants,tropical Asia distribution took absolute advantage.North temperate and East Asian flora had slight influence.Although species of wild Orchidaceae plants in Hechi were abundant,collection,conservation,protection and utilization of Orchidaceae plants should be strengthened.Key words:resources investigation;protection and application;wild Orchidaceae plant;Hechi 第49卷第4期2020年12月广西林业科学Guangxi Forestry Science Vol.49No.4Dec.2020广西河池市有丰富的兰科（Orchidaceae ）植物资源，但缺乏本底资源调查，兰科植物的种群数量与分布状况没有详细的资料可供参考，野生兰科植物资源的利用有限，影响和制约了河池市兰花产业的发展。

兰花分子图谱的构建

兰花分子图谱的构建兰花(Cymbidium)具有很高的观赏价值、经济价值和文化价值,目前其新品种的选育多采用杂交育种方法,育种周期长,效率低。

分子标记辅助选择育种能有效缩短育种周期,提高育种效率和效果,但迄今兰花上未见到有关分子图谱构建和分子标记辅助选择的研究报道。

本研究采用‘玉女兰’(C.‘Yunv’)和‘黄叶红花墨兰’(C.sinense‘Huangyehongmo’)杂交构建F1作图群体,通过转录组测序开发SSR标记,并利用这些标记构建兰花分子遗传图谱。

主要研究结果如下:1.作图群体的构建。

对‘玉女兰’×‘黄叶红花墨兰’杂交种子进行离体培养,共获得513个株系。

对各株系的组培快繁特性和试管苗性状进行观测,结果表明,各株系在中间繁殖体增殖、分化能力以及芽苗生长速度上差异明显,试管苗形态多样,有松散、较紧凑和紧凑等各种类型,叶片长和叶片宽差异明显,说明杂种后代群体具有遗传多样性。

从该群体中随机选取94个后代组成作图群体,该群体在组培快繁特性、株型和叶片性状上具有多样性,各类型的比例与原杂种后代群体相近。

2.兰花转录组测序和SSR标记开发。

对‘企剑白墨墨兰’(C.sinense‘Qijianbaimo’)的营养器官和生殖器官进行转录组测序,共获得51764个unigenes,利用MISA软件对1 kb以上的unigenes 进行SSR位点的筛选,得到4419个SSR位点,出现频率为8.54%。

墨兰转录组中的SSR类型丰富,从二核苷酸到六核苷酸重复基序均有分布,主要集中在二和三核苷酸,分别占57.00%和33.76%,AG/CT核苷酸基序占总核苷酸基序数的比例最高,为3.73%。

利用Primer Premier 5.0进行引物设计,从4419对SSR引物中筛选出了318对SSR引物,从大花蕙兰转录组中获得185对SSR引物。

以‘玉女兰’和‘黄叶红花墨兰’为材料进行通用性和多态性引物筛选,318对墨兰SSR引物共有235对引物在双亲中扩增出清晰的条带,其有效扩增率为73.89%,61对引物具有多态性,占可扩增引物的19.18%;185对大花蕙兰SSR引物中有143对引物扩增出清晰的条带,有效扩增率为77.29%,17对引物扩增出多态性条带,占可扩增引物的9.19%。

紫茎泽兰的遗传多样性及其种群结构分析

紫茎泽兰的遗传多样性及其种群结构分析紫茎泽兰Ageratina adenophora是我国危害最严重的恶性外来入侵杂草之一,隶属于菊科泽兰属,原产于墨西哥至哥斯达黎加一带,现广泛分布于世界热带、亚热带30多个国家和地区并已在多个国家造成危害。

该杂草于20世纪40年代由中缅边境传入我国,目前在我国西南地区,特别是云南省广泛分布,且正以每年几十公里的速度向我国北方地区入侵。

其入侵之处常导致生态系统组成和结构的完全改变,破坏生物多样性,并严重影响土地的利用,从而对入侵地区的生态、经济和社会造成重大损失。

本研究利用分子标记技术从核DNA和叶绿体DNA角度研究了入侵我国的紫茎泽兰种群的遗传多样性和种群结构,揭示了入侵我国的紫茎泽兰种群间可能存在的遗传变异,并对该杂草在我国的传播扩散路径进行了推测,探讨了我国境内的紫茎泽兰入侵来源、入侵路线和方式,为有效控制和阻击该杂草提供了理论依据和遗传背景。

主要结果如下: 1. 简单系列重复（SSR）在菊科植物中具有一定的保守性。

从向日葵基因组DNA中开发的SSR引物难以在紫茎泽兰基因组DNA中找到靶标系列,两者间很难找到可共用的SSR引物。

2.ISSR是分析紫茎泽兰遗传多样性的有效分子标记。

100条所筛选的ISSR 引物中有51条在紫茎泽兰基因组DNA中出现扩增产物。

含（AG）和（GA）系列的引物大多能在紫茎泽兰中获得清晰的扩增产物,而含（AT）和（TA）系列的引物却难以得到目标产物:五碱基重复系列引物和混合基元引物在紫茎泽兰中未能得到任何扩增产物或扩增产物弥散,显示了不同微卫星系列在紫茎泽兰基因组中的分布差异。

所筛选的ISSR引物中有20条在不同地区的紫茎泽兰DNA样品中呈现多态性,其中二碱基重复系列引物16条,三碱基和四碱基重复系列引物各2条。

20条ISSR多态性引物在64个样点的紫茎泽兰中共扩增出577个条带,其中多态性条带479个,占总条带数的83%,说明入侵我国的紫茎泽兰具有丰富的遗传多样性。

兜兰属植物离体繁殖和系统学研究的开题报告

兜兰属植物离体繁殖和系统学研究的开题报告题目：兜兰属植物离体繁殖和系统学研究一、研究背景兜兰属（Cypripedium）是兰科植物中非常重要的一个属，全世界大约有50多种，其中我国自然分布了20种，且多数为保护植物。

由于其珍贵、罕见的特性，兜兰属植物成为人们研究的重点。

同时，由于其繁育繁殖困难、生长周期长等特性，目前很多兜兰属植物种群数量不断减少，为了保护和保存这些珍贵资源，必须进行相关的繁殖和系统学研究。

二、研究内容1. 离体繁殖技术的研究：通过对不同兜兰属植物种类进行不同条件下的离体培养和培育研究，探索兜兰属植物的最佳离体繁殖条件，为其大规模繁育提供技术基础。

2. 兜兰属植物遗传多样性研究：通过分子生物学等方面的技术手段，对兜兰属植物进行遗传多样性研究，探索兜兰属植物的遗传演化规律，并建立兜兰属植物的系统发育关系，为其种间变异和分类提供依据。

三、研究意义1. 通过离体繁殖技术的研究，可以大规模地生产兜兰属植物，为植物资源的保育和利用提供技术支持。

2. 通过对兜兰属植物的遗传多样性研究，可以更全面地了解兜兰属植物的遗传特征，为其保护和分类提供依据。

3. 研究成果可为推广兜兰属植物栽培、利用、以及构建兜兰属植物资源保护体系提供科学依据。

四、研究方法1. 离体培养技术：通过不同培养基、激素浓度和光照、温度等参数的调整，探索兜兰属植物的最佳离体培养条件。

2. 遗传多样性研究：采集不同地点的兜兰属植物，在分子生物学和统计学的基础上，对其进行遗传多样性分析。

五、预期成果1. 研究成果将为兜兰属植物的离体繁殖提供技术基础，并为其在观赏、药用等方面的实际应用提供支持。

2. 通过遗传多样性研究，可以更全面地了解兜兰属植物的遗传特征，为其保护和分类提供依据。

3. 研究成果可为构建兜兰属植物资源保护体系提供科学依据。

基于ISSR分子标记的白术遗传多样性分析

第40卷第04期 2021年04月Vol.40No.04Apr. 2021种子 (Seed)基于ISSR 分子标记的白术遗传多样性分析蒋小刚，王华，周武先，张美德（湖北省农业科学院中药材研究所，湖北恩施445000）摘要基于ISSR 分子标记技术研究17份不同产地白术种质的遗传多样性和亲缘关系。

结果表明，筛选出9条多态性引物，平均多态性条带百分率为72%，各种质间遗传相似系数（GS ）值在0.589〜0.04之间，遗传距离（GD ）值在0.84〜0..25之间，聚类分析将17份种质划分为7组，其中B3（湖南省平江县-2）和B 17（浙术1号）材料间亲缘关系最近，B5（湖北省咸丰县小村乡）和B 14（浙江省新昌县回山乡）材料间亲缘关系最远。

17份白术种质资源具有较高的遗传多样性，遗传信息丰富。

关键词：白术；遗传多样性；亲缘关系;ISSR DOI ：10.16590 ,/ki. 1001-4 705.02 1.04.006中图分类号：S 567.3+ 3 文献标志码：A文章编号：100-4 705（202 1）04-0006-05Genetic Diversity Analysis of Atractylodes macrocephalaBased on ISSR MarkersJIANG Xiaogang ，WANG Hua ，ZHOU Wuxian ，ZHANG Meide（Institute of Chinese Herbal Medicines? Hubei Academy of Agricultural Sciences ，Enshi Hubei 445000,China ）Abstract : Genetic diversity and genetic relationships of 1 7 A . macrocephala germplasms from different,place were studied by ISSR markers. The results showed that. 9 polymorphic primers were selected , and the average percentage of polymorphic bands was 72 %.The genetic similarity coefficient. (GS ) andgenetic distance (.GD ) of various germplasms ranged from 0.589 to 0.904 and 0.084 to 0.425 ? respec tively.Further, the 17 germplasms were divided into 7 groups by cluster analysis. Among them , B 3(namely Pingjiang-2 from Hunan Povince) and B 1 7 (namely Zheshu 1 ) had the closest, genetic rela tionship , while B 5 (from Xiaocun village ,Xianfeng County,Hubei Province) and B 1 4 (from Huishan village ?Xinchang County ?Zhejiang Province) had the farthest genetic relationship..n conclusion , the 17A . macrocephala germplasms had high genetic diversity and rich genetic information.Key words ：Atractylodss macrocephala ; genetic diversity; genetic relationship ； ISSR白术（Atractylodss macrocephala Koidz.）为菊科苍术属多年生草本植物，原产地为浙江、安徽，现已在浙江、安徽、河北、湖南、湖北等地普遍种植[1],白术以根茎入药，挥发油是主要药效成分，其中含有苍术醇、苍术酮、白术内酯等药用成分,具有健脾益气，燥湿利水，止汗安胎的功效白术栽培历史悠久，长期不同产区及居群的引种和杂交现象导致白术出现种质混杂、市场药材质量参差不齐等问题因此研究白术的遗传多样性和亲缘关系对白术种质鉴定、分类和良种选育至关重要。