免疫胶体金层析法hcg课件
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胶体金介绍ppt课件-PPT课件
胶体金诊断平台介绍
胶体金原理及其产品介绍
什么是胶体金？
胶体金免疫技术的特点是以纳 米级别的胶体金作为标记物。 胶体金(colloidal gold)是氯金酸 (chloroauric acid)的水溶胶，具有 高电子密度，并能与多种生物大分 子结合，已成为继荧光素、放射性 同位素和酶之后，在免疫标记技术 中较常用的一种非放射性示踪剂。
试纸条组成结构
胶体金垫 样品垫 控制线（C线） 吸水滤纸
PVC底板
层析方向 测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
胶体金层析法一般原理介绍
（双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
视频
早早孕产品形式
图片
形式
试纸条
卡型
笔型
电子验孕笔
价格
最经济
3-5元
5-10元
>$5.0
（国外价格）
使用方法
1.试纸：将试纸条标： “MAX”一端浸入尿液，尿液液面请勿 超过标志线，待尿液爬至观察区后取出试纸条平放。3-5分钟 观察结果，10分钟后无效。 2.用吸管吸取尿液，加入4滴到检测卡的加样孔中，3-5分钟观察 结果，10分钟后无效。 3.将尿液滴加到试纸上或直接淋在检测笔的吸尿棒上，尿液爬上 后平放，10分钟观察。
3、PVC板 PVC板是用来承载膜、金子、 辅料等成分的底板，它是试纸 条的骨架。 PVC板的标准：板上的粘性 要适中；板的长度要合乎规格； 板的硬度也要达到一定的标准。
胶体金原理及其产品介绍
什么是胶体金？
胶体金免疫技术的特点是以纳 米级别的胶体金作为标记物。 胶体金(colloidal gold)是氯金酸 (chloroauric acid)的水溶胶，具有 高电子密度，并能与多种生物大分 子结合，已成为继荧光素、放射性 同位素和酶之后，在免疫标记技术 中较常用的一种非放射性示踪剂。
试纸条组成结构
胶体金垫 样品垫 控制线（C线） 吸水滤纸
PVC底板
层析方向 测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
胶体金层析法一般原理介绍
（双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
视频
早早孕产品形式
图片
形式
试纸条
卡型
笔型
电子验孕笔
价格
最经济
3-5元
5-10元
>$5.0
（国外价格）
使用方法
1.试纸：将试纸条标： “MAX”一端浸入尿液，尿液液面请勿 超过标志线，待尿液爬至观察区后取出试纸条平放。3-5分钟 观察结果，10分钟后无效。 2.用吸管吸取尿液，加入4滴到检测卡的加样孔中，3-5分钟观察 结果，10分钟后无效。 3.将尿液滴加到试纸上或直接淋在检测笔的吸尿棒上，尿液爬上 后平放，10分钟观察。
3、PVC板 PVC板是用来承载膜、金子、 辅料等成分的底板，它是试纸 条的骨架。 PVC板的标准：板上的粘性 要适中；板的长度要合乎规格； 板的硬度也要达到一定的标准。
孕酮和HCG在孕期的检测意义ppt课件
协助诊断保胎治疗、产后及流产的情况
滋养层疾病的诊断,疗效观察及预后判断 产前筛查
（唐筛）
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孕酮
孕酮(Progesterone，PROG)是一种含21碳的固醇类激素，为类固醇 激素合成过程中的中间代谢产物。但血液中的女性孕酮几乎都是由黄 体或胎盘所产生；男性孕酮水平很低，主要由肾上腺皮质产生。
可吸附于滋养细胞表面，以免胚胎滋养层细胞被母体淋巴细胞攻 击，并在胎儿垂体分泌LH以前，刺激胎儿睾丸分泌睾酮促进男性 性分化；
可促进性腺发育，对男性能刺激睾丸中间质细胞的活力，增加雄 性激素（睾酮）的分泌。
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HCG结构、特性
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应用及意义
早孕的诊断及胚胎发育状况的监测 异位妊娠诊断
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正常孕酮参考值
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早期妊娠的维持需要足够的孕酮，妊娠黄体分泌孕酮对于早孕维持是必
须的。当某种原因使黄体分泌孕酮降低时，将会发生先兆流产或难免流
产。
正常早孕、先兆流产、难免流产，血清孕酮水平有明显差异，孕酮作为
判断先兆流产患者能否治疗成功的标准。
结合血清HCG可诊断，HCG治疗中若孕酮值持续下降至12.3ng/ml，治
疗无效，如孕龄大于8周，孕酮值低于14.7ng/ml。胞胎成功率低，因结 合B超及时流产。
《胶体金检测技术》ppt幻灯片
〇 质控区一 测试区
对照线 检测线
培 训 资 料
加样孔
C7 S
15
4. 结果应在5~10分钟读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
阴性 阴性 阳性 无效 无效
培训资料
16
A、 阴 性 ( - ) : C、T 线均出现。表示样品中不含有克伦特罗或其深度低于检测限。
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心(西安)
主要内容一、免疫胶体金技术的发展历史二、 胶体金检测卡的基本原理及构造三、 免疫胶体金层析法检测原理及应用四、S-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍五、 常见问题分析与注意事项六、 免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
2
培训资料一 、免疫胶体金技术的发展史1. 1939年(英，植物) Kausche 和Ruska 把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。2. 1971年(美，微生物) Faulk 和Taylor 首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。3 . 1974年(奥) Romano 等将胶体金标记在马抗人IgG 上，实Fra Baidu bibliotek了间接免疫金染色法。同年Bauer 等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。
尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果风吹太阳晒， NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位 置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电 风扇、空调的风直吹。
对照线 检测线
培 训 资 料
加样孔
C7 S
15
4. 结果应在5~10分钟读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
阴性 阴性 阳性 无效 无效
培训资料
16
A、 阴 性 ( - ) : C、T 线均出现。表示样品中不含有克伦特罗或其深度低于检测限。
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心(西安)
主要内容一、免疫胶体金技术的发展历史二、 胶体金检测卡的基本原理及构造三、 免疫胶体金层析法检测原理及应用四、S-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍五、 常见问题分析与注意事项六、 免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
2
培训资料一 、免疫胶体金技术的发展史1. 1939年(英，植物) Kausche 和Ruska 把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。2. 1971年(美，微生物) Faulk 和Taylor 首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。3 . 1974年(奥) Romano 等将胶体金标记在马抗人IgG 上，实Fra Baidu bibliotek了间接免疫金染色法。同年Bauer 等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。
尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果风吹太阳晒， NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位 置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电 风扇、空调的风直吹。
(动物传染病学实验课件)5 临床血清学快速检测技术
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
（二）胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛 细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢 向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利 用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗 原/抗体。
➢ 最常用的是双抗夹心法检测抗原
（HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的 作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于
静电作用成为一种稳定的胶体状态。
➢胶体金的质量判定标准
✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金源自文库粒为球 形，大小均一，无棱角。
✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状 各异。
胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
3.特异性好：因为该技术大多用于单克隆抗 体标记，这决定了它具有很好的特异性。
2020/7/25
胶体金快速诊断技术的应用
1.病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感 、新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。
2.寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊 虫病、恙虫病。
3.细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。
2020/7/25
（三）实验材料
1.取不同试剂时应注意更换枪头，防止交叉 污染。
2.混匀过程中，避免阳性对照、阴性对照和 被检样品之间的交叉污染。
（二）胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛 细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢 向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利 用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗 原/抗体。
➢ 最常用的是双抗夹心法检测抗原
（HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的 作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于
静电作用成为一种稳定的胶体状态。
➢胶体金的质量判定标准
✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金源自文库粒为球 形，大小均一，无棱角。
✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状 各异。
胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
3.特异性好：因为该技术大多用于单克隆抗 体标记，这决定了它具有很好的特异性。
2020/7/25
胶体金快速诊断技术的应用
1.病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感 、新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。
2.寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊 虫病、恙虫病。
3.细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。
2020/7/25
（三）实验材料
1.取不同试剂时应注意更换枪头，防止交叉 污染。
2.混匀过程中，避免阳性对照、阴性对照和 被检样品之间的交叉污染。
课件：实验七-胶体金免疫层析技术
切条\包装
• 切条
(演示:BIODOT CM4000切条机)
• 包装
实验步骤：
1、加被检样品：100 ul/孔，阳性、阴性对照。 2、5min后观察结果。
1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内）
溶液喷点
(喷点演示:BIODOT XYZ系列喷点仪器)
• C\T线溶液前处理: 1.过滤,0.22um孔径滤膜 2.离心1万转10分钟
• C\T线喷点工艺与接触划点工艺比较 • 因划膜式为软管将抗体划到膜表面,而膜本身的物理性质为软脆,划
管会在其表面留下印痕.划痕容易对层析的金标复合物形成阻力,导 致假阳性。
干燥
• 干燥方法的比较
37度干燥４h：颗粒感较强，易中间白，周边深; 低温真空干燥３h：颜色均一，只是两端稍浅，有一定的柔性。
试纸条组装
• 在干燥间内准备好吸水滤纸、样品垫、PVC底板，在 PVC底板中央贴上包被好的硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜 上缘粘贴吸水滤纸，硝酸纤维素膜下缘粘贴胶体金垫，胶 体金垫下缘粘贴样品垫，完成后用裁切机将贴好的试纸板 切成4 mm宽的试纸条。再将试纸条密封于铝箔袋中，完 成产品的组装。
不同膜厂家的产品 (Whatman,Millipore,Sartorius) 大致为: 135s和180s
抗原、抗体包被固相NC膜的制备
胶体金快速免疫诊断技术课件
•30
•胶体金快速免疫诊断技术
•31
•胶体金快速免疫诊断技术
•1
•胶体金快速免疫诊断技术
•2
•胶体金快速免疫诊断技术
•3
•胶体金快速免疫诊断技术
•4
•胶体金快速免疫诊断技术
•5
•胶体金快速免疫诊断技术
•6
•胶体金快速免疫诊断技术
•7
•胶体金快速免疫诊断技术
•8
•胶体金快速免疫诊断技术
•9
•胶体金快速免疫诊断技术
•10
•20
•胶体金快速免疫诊断技术
•21
•胶体金快速免疫诊断技术
•22
•胶体金快速免疫诊断技术
•23
•胶体金快速免疫诊断技术
•24
•胶体金快速免疫诊断技术
•25
•胶体金快速免疫诊断技术
•26
•胶体金快速免疫诊断技术
•27
•胶体金快速免疫诊断技术
•28
•胶体金快速免疫诊断技术
•29
•胶体金快速免疫诊断技术
•胶体金快速免疫诊断技术
•11
•胶体金快速免疫诊断技术
•12
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
•胶体金快速免疫诊断技术
•13
•胶体金快速免疫诊断技术
•14
•胶体金快速免疫诊断技术
•15
•胶体金快速免疫诊断技术
胶体金介绍ppt课件-PPT课件
试纸条组成结构
胶体金垫 样品垫 控制线（C线） 吸水滤纸
PVC底板
层析方向 测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
胶体金层析法一般原理介绍
（双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
视频
早早孕产品形式
图片
形式
试纸条
卡型
笔型
电子验孕笔
价格
最经济
3-5元
5-10元
>$5.0
（国外价格）
使用方法
1.试纸：将试纸条标： “MAX”一端浸入尿液，尿液液面请勿 超过标志线，待尿液爬至观察区后取出试纸条平放。3-5分钟 观察结果，10分钟后无效。 2.用吸管吸取尿液，加入4滴到检测卡的加样孔中，3-5分钟观察 结果，10分钟后无效。 3.将尿液滴加到试纸上或直接淋在检测笔的吸尿棒上，尿液爬上 后平放，10分钟观察。
3、PVC板 PVC板是用来承载膜、金子、 辅料等成分的底板，它是试纸 条的骨架。 PVC板的标准：板上的粘性 要适中；板的长度要合乎规格； 板的硬度也要达到一定的标准。
评价一个试剂的标准
评价一个试剂好坏的标准有： 1、灵敏度 2、特异性 3、背景 4、吸样和上样 5、和对照试剂比较 6、市场反馈 7、检验机构的评价
吸水棒吸水后会改变颜色
技术创新
3、喷膜机 喷膜机是将包被液包被到膜上 面的机器。 影响产品质量和实验效果的参 数有： ①喷膜速度 ②喷膜参数 ③灌注量 ④线条间隔和位置
免疫层析快速诊断技术简介培训课件
免疫层析快速诊断技术 简介
什么是快速检测？
快速检测是一种廉价的、一次性的、基 于膜的检测方法，它能提供分析物存在于 液体样品的视觉证据。
这种检测可以以独立的试纸条，也可以 以装在塑料盒中的形式进行。
总的来说，做此项检测至少需要50ul的 液体标本，可在5－30分钟完成。
免疫层析快速诊断技术简介
3
免疫层析快速诊断技术简介
14
胶体金结果判读方法：
1.色卡法
将反应好的试纸条T线颜色与制作的色卡比较，看颜色属于那一 个档次，则在数据记录时候填写该档次标识。最后做灵敏度比较。 2.图形扫描法
将反应好的试纸条放在扫描仪器内，选择灰度扫描，获得灰度线 条图象。然后打开分析软件，将该灰度图象导入，自动分析出灵敏 度，本底情况。 3.读条仪法
上海科华 厦门新创 北京万泰
目前涉足该领域的科研机构很多，从中科院 到CDC，细数来也有三五十家。
免疫层析快速诊断技术简介
9
检测原理
免疫检测的原理就是使用一种分析物— 要么是抗原要么是抗体—探测和捕获与其 对应的另外一半。
免疫层析快速诊断技术简介
10
免疫层析法检测原理分类介绍 （双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
很多厂家都开发了对应的读条仪，大部分都是采用简单的30万 象素数码摄像头做一个拍摄，然后用软件分析。
免疫层析快速诊断技术简介
什么是快速检测？
快速检测是一种廉价的、一次性的、基 于膜的检测方法，它能提供分析物存在于 液体样品的视觉证据。
这种检测可以以独立的试纸条，也可以 以装在塑料盒中的形式进行。
总的来说，做此项检测至少需要50ul的 液体标本，可在5－30分钟完成。
免疫层析快速诊断技术简介
3
免疫层析快速诊断技术简介
14
胶体金结果判读方法：
1.色卡法
将反应好的试纸条T线颜色与制作的色卡比较，看颜色属于那一 个档次，则在数据记录时候填写该档次标识。最后做灵敏度比较。 2.图形扫描法
将反应好的试纸条放在扫描仪器内，选择灰度扫描，获得灰度线 条图象。然后打开分析软件，将该灰度图象导入，自动分析出灵敏 度，本底情况。 3.读条仪法
上海科华 厦门新创 北京万泰
目前涉足该领域的科研机构很多，从中科院 到CDC，细数来也有三五十家。
免疫层析快速诊断技术简介
9
检测原理
免疫检测的原理就是使用一种分析物— 要么是抗原要么是抗体—探测和捕获与其 对应的另外一半。
免疫层析快速诊断技术简介
10
免疫层析法检测原理分类介绍 （双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
很多厂家都开发了对应的读条仪，大部分都是采用简单的30万 象素数码摄像头做一个拍摄，然后用软件分析。
免疫层析快速诊断技术简介
胶体金技术简介 ppt课件
一步法
固相系统,常温保存
开发周期长,使用方便
20-40nm 胶体金 大孔径膜 侧向流动
免疫渗滤法
多步法
液体/固相系统 液体需要冷冻保存 开发周期短,使用不方便
10-15nm 胶体金 小孔径膜 竖向流动
4
免疫层析法技术优势:简单/现场/快速
1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内）
33
胶体金技术发展展望(四)
新层析模式：Amic 4 Castchip
34
80年代：第一代产品，免疫渗滤法 (Flow Through)
90年代：第二代产品，免疫层析法 （Lateral Flow）,女性妊娠 HCG
21世纪：快速诊断方法适应市场需要， 胶体金技术进入快速发展期，成为IVD 的热点（传染病、毒品、食品安全、畜 牧兽医等领域）
3
两种技术的比较
免疫层析法
女性妊娠hcglh等传染病乙肝五项艾滋梅毒流感等肿瘤标志物afp粪便血红蛋白等心梗系列肌钙蛋白肌红蛋白肌酸激酶毒品吗啡k粉摇头丸冰毒等农牧业畜牧兽医站商检系统边检口岸农牧类院系和研究所传染病禽流感兽瘟疫等病毒烟草花叶病毒犬细小病毒等环境环保监测部门研究机有害物质超标食品安全食品安全检测中心监管部门农兽药残留磺胺类瘦肉精等大肠杆菌黄曲霉素免疫层析法试纸条结构测试线质控线c线胶体金垫吸水滤纸样品垫nc膜硝酸纤维素膜层析方向pvc底板10免疫层析法检测原理分类介绍双抗体夹心法以大分子hcg检测为例11免疫层析法检测原理分类介绍竞争法以小分子吗啡检测为例12免疫层析法检测原理分类介绍间接法标记proteina以hiv抗体检测为例13免疫层析法检测原理分类介绍双抗原夹心法标记抗原14技术流程assembledcardsteststripscutfinalproductprocessesreagentsmaterialsdesiccantadhesivecardstoplaminateabsorbentpadmembraneconjugatepadsamplepadpouchhousingpackagingcapturereagentsdetectorreagentsalts15平台准备与技术分项材料准备
固相系统,常温保存
开发周期长,使用方便
20-40nm 胶体金 大孔径膜 侧向流动
免疫渗滤法
多步法
液体/固相系统 液体需要冷冻保存 开发周期短,使用不方便
10-15nm 胶体金 小孔径膜 竖向流动
4
免疫层析法技术优势:简单/现场/快速
1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内）
33
胶体金技术发展展望(四)
新层析模式：Amic 4 Castchip
34
80年代：第一代产品，免疫渗滤法 (Flow Through)
90年代：第二代产品，免疫层析法 （Lateral Flow）,女性妊娠 HCG
21世纪：快速诊断方法适应市场需要， 胶体金技术进入快速发展期，成为IVD 的热点（传染病、毒品、食品安全、畜 牧兽医等领域）
3
两种技术的比较
免疫层析法
女性妊娠hcglh等传染病乙肝五项艾滋梅毒流感等肿瘤标志物afp粪便血红蛋白等心梗系列肌钙蛋白肌红蛋白肌酸激酶毒品吗啡k粉摇头丸冰毒等农牧业畜牧兽医站商检系统边检口岸农牧类院系和研究所传染病禽流感兽瘟疫等病毒烟草花叶病毒犬细小病毒等环境环保监测部门研究机有害物质超标食品安全食品安全检测中心监管部门农兽药残留磺胺类瘦肉精等大肠杆菌黄曲霉素免疫层析法试纸条结构测试线质控线c线胶体金垫吸水滤纸样品垫nc膜硝酸纤维素膜层析方向pvc底板10免疫层析法检测原理分类介绍双抗体夹心法以大分子hcg检测为例11免疫层析法检测原理分类介绍竞争法以小分子吗啡检测为例12免疫层析法检测原理分类介绍间接法标记proteina以hiv抗体检测为例13免疫层析法检测原理分类介绍双抗原夹心法标记抗原14技术流程assembledcardsteststripscutfinalproductprocessesreagentsmaterialsdesiccantadhesivecardstoplaminateabsorbentpadmembraneconjugatepadsamplepadpouchhousingpackagingcapturereagentsdetectorreagentsalts15平台准备与技术分项材料准备
实验六 胶体金免疫层析技术ppt课件
胶体金试纸条诊断技术
肖书奇
电话：
E-mail:
实验六 胶体金免疫层析技术
1
实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
实验六 胶体金免疫层析技术
2
简介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫 渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的 免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性 腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表 面抗原（HBsAg）等检测。
实验六 胶体金免疫层析技术
6
胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另 一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体 金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
实验六 胶体金免疫层析技术
7
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
质检线
吸收垫
背衬 （底板）
检测线
硝酸纤维素膜
实验六 胶体金免疫层析技术
8
测定
测定时将试纸条下端浸入液体标 本中，下端吸水材料即吸取液体 向上端移动，流经C处时使干片 上的免疫金复合物复溶，并带动 其向膜条渗移。
实验六 胶体金免疫层析技术
9
测定
若标本中有待测特异抗原，即可 与免疫金复合物中的抗体结合， 此抗原抗体复合物流至测试区即 被固相抗体捕获，在膜上显出红 色反应线条（T）。
肖书奇
电话：
E-mail:
实验六 胶体金免疫层析技术
1
实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
实验六 胶体金免疫层析技术
2
简介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫 渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的 免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性 腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表 面抗原（HBsAg）等检测。
实验六 胶体金免疫层析技术
6
胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另 一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体 金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
实验六 胶体金免疫层析技术
7
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
质检线
吸收垫
背衬 （底板）
检测线
硝酸纤维素膜
实验六 胶体金免疫层析技术
8
测定
测定时将试纸条下端浸入液体标 本中，下端吸水材料即吸取液体 向上端移动，流经C处时使干片 上的免疫金复合物复溶，并带动 其向膜条渗移。
实验六 胶体金免疫层析技术
9
测定
若标本中有待测特异抗原，即可 与免疫金复合物中的抗体结合， 此抗原抗体复合物流至测试区即 被固相抗体捕获，在膜上显出红 色反应线条（T）。
淋病奈瑟菌的免疫胶体金检测及与传统方法的灵敏度比较ppt课件
淋病奈瑟菌的免疫胶体金检测 及与传统方法的灵敏度比较
姓名 导师
1
1 立题依据和国内外研究背景 2 主要研究内容 3 技术路线
2
4 可行性分析 5 创新性与特色分析 6 进度安排 7 预期成果
3
1.1 立题依据和国内外研究背景
淋病奈瑟菌为革兰阴性球菌,是淋病的病原体。1879年，奈瑟从 35例急性尿道炎、阴道炎及新生儿急性结膜炎病人的分泌物中，分 离出淋病双球菌。1885年，Bumm在人、牛或羊的凝固血清培养基 上培养淋球菌获得成功，将菌种接种于健康人的尿道内也可产生同样 的症状。至此，淋球菌是淋病的病原体的结论始告成立。据 WHO估 计,全球每年淋病新发病例超过6000万,发展中国家发病率更呈明显上 升的趋势。在我国淋病的感染率居性传播疾病之首。且随着抗生素的 广泛使用，淋病奈瑟菌对抗生素的耐药率越来越高，先是青霉素对它 失效，再是四环素，环丙沙星，而现在到了头孢克肟。因此，对淋病 奈瑟菌进行更深入的研究显得愈发急迫。
3
假阳性率
较假阳性率高低。
10
3.3 技术路线（临床指标检测）
采集淋病奈瑟菌女性携带者的尿液和非携带者的尿液
1
制作简易的层析法免疫胶体金检测试剂，试剂中包含 全部实验所得单抗种类。
2
将测试剂浸入尿液，检测、统计、计算假阳性率、假 阴性率。
3
11
4 可行性分析
姓名 导师
1
1 立题依据和国内外研究背景 2 主要研究内容 3 技术路线
2
4 可行性分析 5 创新性与特色分析 6 进度安排 7 预期成果
3
1.1 立题依据和国内外研究背景
淋病奈瑟菌为革兰阴性球菌,是淋病的病原体。1879年，奈瑟从 35例急性尿道炎、阴道炎及新生儿急性结膜炎病人的分泌物中，分 离出淋病双球菌。1885年，Bumm在人、牛或羊的凝固血清培养基 上培养淋球菌获得成功，将菌种接种于健康人的尿道内也可产生同样 的症状。至此，淋球菌是淋病的病原体的结论始告成立。据 WHO估 计,全球每年淋病新发病例超过6000万,发展中国家发病率更呈明显上 升的趋势。在我国淋病的感染率居性传播疾病之首。且随着抗生素的 广泛使用，淋病奈瑟菌对抗生素的耐药率越来越高，先是青霉素对它 失效，再是四环素，环丙沙星，而现在到了头孢克肟。因此，对淋病 奈瑟菌进行更深入的研究显得愈发急迫。
3
假阳性率
较假阳性率高低。
10
3.3 技术路线（临床指标检测）
采集淋病奈瑟菌女性携带者的尿液和非携带者的尿液
1
制作简易的层析法免疫胶体金检测试剂，试剂中包含 全部实验所得单抗种类。
2
将测试剂浸入尿液，检测、统计、计算假阳性率、假 阴性率。
3
11
4 可行性分析
免疫层析快速诊断技术简介胶体金课件
业 边检口岸,农牧类院系和
研究所
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环境 环保监测部门,研究机构 有害物质超标
食 品 食品安全检测中心,各监 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠杆菌,黄曲霉素 安全 管部门
胶体金纸条生产厂商
目前，国内能点出来的厂家有40多家 北京蓝十字 杭州艾康等
上海科华 厦门新创 北京万泰
刀片: 日本进口, 耐磨高碳钢材料 免疫层析法检测原理分类介绍
（双抗体夹心）
切割宽度设定位数：0. 刀片: 日本进口, 耐磨高碳钢材料 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠杆菌,黄曲霉素
相关仪器设备
BIODOT XYZ3050 点膜喷金机
仪器参数 仪器尺寸为： 430mmx410mmX360mm 平台大小: 450mmX70mm 平台移动速度: 0-330mm/sec X、Y、Z轴移动误差: <50um 定位精度: ±10um in 1 axis;±25um in 2 axis 喷点方式 BJQ3000: 非接触喷点 AJQ3000: 非接触喷点 划线宽度 BJQ3000:0.50mm/line （喷点0.20mm/drop）
这种检测可以以独立的试纸条，也可以 以装在塑料盒中的形式进行。
总的来说，做此项检测至少需要50ul的 液体标本，可在5－30分钟完成。
胶体金纸条的不同种类
层析法技术优势:简单\现场\快速
人绒毛膜促性腺激素定性检测试剂(胶体金法)
附件12
人绒毛膜促性腺激素定性检测试剂(胶体金法)
注册申报资料指导原则
一、前言
本指导原则旨在指导注册申请人对人绒毛膜促性腺激素（HCG）定性检测试剂（胶体金法）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本指导原则是对人绒毛膜促性腺激素（HCG）定性检测试剂（胶体金法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
二、适用范围
人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）定性检测试剂（胶体金法）运用双抗体夹心免疫胶体金层析技术实现对尿液中人绒毛膜促性腺激素进行体外定性检测，不可用于滋养细胞肿瘤的检测。
本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。
三、注册申报资料要求
（一）综述资料
人绒毛膜促性腺激素（HCG），是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，它是由α和β二聚体的糖蛋白组成。其中α-亚单位为垂体前叶激素所共有；β-亚单位是HCG所特异的。HCG的主要功能就是刺激黄体，有利于雌激素和黄体酮持续分泌以促进子宫蜕膜的形成，使胎盘生长成熟。现代认为HCG是由滋养层过渡型细胞和合体细胞产生的。在妊娠的前8周增殖很快，以维持妊娠。在大约孕8周以后，HCG逐渐下降，直到大约20周达到相对稳定。利用HCG双抗体检测妊龄女性尿液中的HCG含量，在妊娠早期可快速得知结果，是辅助诊断的有效手段。
实验六 胶体金免疫层析技术ppt课件
胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、 新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。
寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫 病、恙虫病。
细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。
实验六 胶体金免疫层析技术
14
H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
实验六 胶体金免疫层析技术
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
实验六 胶体金免疫层析技术
3
简介
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠） 的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带 负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳 定的胶体状态，故称胶体金。
实验六 胶体金免疫层析技术
4
简介
胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗
实验六 胶体金免疫层析技术
10
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合 （免疫金复合物中的单克隆抗体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色 质 控 线条（R）。
实验六 胶体金免疫层析技术
11
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
实验六 胶体金免疫层析技术
实验六 胶体金免疫层析技术
6
胶体金试纸条诊断技术的原理
胶体金 ppt课件
(二) 方法类型
• 1.双抗体夹心法 若图20-2所示，G处为金标抗 体(免疫金)，T处包被抗体，C处包被抗金标抗 体，B处为吸水纸。测试时A端滴加待测标本， 通过层析作用，待测标本向B端移动，流经G 处时将金标抗体复溶，若待测标本中含待测抗 原，即形成金标抗体-抗原复合物，移至T区时， 形成金标抗体-抗原-抗体复合物，金标抗体被 固定下来，在T区显示红色线条，呈阳性反应， 多余的金标记抗体移至C区被抗金标抗体捕获， 呈现红色质控线条。
的质控带，若标本中不含待测抗原，金标抗体 则与T处膜上的标准抗原结合，在T处出现棕 红色的线条，实验结果为阴性。
• 3．间接法 为了消除待测血清标本中 大量的非特异性IgG与特异性IgG竞 争结合金标记抗人IgG，降低了试验
敏感性，胶体金间接免疫层析法测 抗体常设计成反流免疫层析法(图204)。
三、免疫金的保存
• 免疫金复合物最终用稀释液配制成工作浓度保 存。稀释液通常是加入含稳定剂的缓冲液。缓 冲溶液常用中性的PBS或Tris缓冲液。多种蛋 白质、葡聚糖、PEG2000、明胶等均为良好的 高分子稳定剂，PEG和BSA是最常用的稳定剂。 稳定剂有两大作用：①为保护胶体金的稳定性， 使之便于长期保存；②为防止或减少免疫金复 合物的非特异性吸附反应。稳定剂的合理选择 是十分重要的，不适当的稳定剂有时也会导致 非特异性反应。
最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法。
免疫胶体金层析法hcgPPT课件
免疫胶体金层析法
——金标记免疫法测HCG
.
1
原理
• 采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维 素膜为载体，使抗原抗体反应和洗 涤在同一渗滤膜上，反应后根据在 膜上的颜色判断结果。
• 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔 膜毛细管作用，使膜一端的液体慢 慢向另一端渗移，犹如层析
.
2
← HCG分子 ← 鼠抗人HCG单抗 ← 胶体金颗粒 ←胶体金标记鼠抗人HCG单抗
金标鼠抗人IgG单抗随层析作用向上移动，到达质控线，无羊抗鼠IgG( 二抗)或破坏失效，不结合而 不显色，作为质控对照。
.
6
大便隐血
MAX
.
7
注意事项
• 1. 将试条有标志线的下端浸入尿液标本中， 深度不可超过标志线（若超过，可能会出 现假阳性）
• 2. 约3秒后取出，平放，5分钟内观察结果 (时间不能小于5分钟)：两条红线为(+)，提 示尿中含HCG。一条红线为(一)，表示不含 HCG。（时间过短，可能有假阴性）
←羊抗鼠IgG
.
3
positive
HCG 阳性标本
MAX
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控
线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质. 控对照。
——金标记免疫法测HCG
.
1
原理
• 采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维 素膜为载体，使抗原抗体反应和洗 涤在同一渗滤膜上，反应后根据在 膜上的颜色判断结果。
• 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔 膜毛细管作用，使膜一端的液体慢 慢向另一端渗移，犹如层析
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2
← HCG分子 ← 鼠抗人HCG单抗 ← 胶体金颗粒 ←胶体金标记鼠抗人HCG单抗
金标鼠抗人IgG单抗随层析作用向上移动，到达质控线，无羊抗鼠IgG( 二抗)或破坏失效，不结合而 不显色，作为质控对照。
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6
大便隐血
MAX
.
7
注意事项
• 1. 将试条有标志线的下端浸入尿液标本中， 深度不可超过标志线（若超过，可能会出 现假阳性）
• 2. 约3秒后取出，平放，5分钟内观察结果 (时间不能小于5分钟)：两条红线为(+)，提 示尿中含HCG。一条红线为(一)，表示不含 HCG。（时间过短，可能有假阴性）
←羊抗鼠IgG
.
3
positive
HCG 阳性标本
MAX
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控
线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质. 控对照。
相关主题
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←羊抗鼠IgG
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
2
positive
HCG 阳性标本
MAX
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控
线与2/羊16/抗202鼠1 IgG(二抗)结合而显色免，疫作胶体为金质层析控法对hcg照。
• 2. 约3秒后取出，平放，5分钟内观察结果 (时间不能小于5分钟)：两条红线为(+)，提 示尿中含HCG。一条红线为(一)，表示不含 HCG。（时间过短，可能有假阴性）
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
7
方法学评价
• 该法为定性检测尿中HCG，不能确定其浓度 • 因为该法是用单抗来测定HCG，特异性较高， 黄
疸、蛋白、血细胞和浑浊度对结果观察都无影 响。、 • 晨尿中一般含有最高的HCG值，检出率较高。 • 检测时间：HCG一般在受精卵着床后几天才出现 在尿液中，而且要达到一定的量才能被检出，因 此，对于平时月经正常的妇女需在月经推迟后才 可能在尿中检出，二月经周期长或排卵异常的妇 女有可能在停经40-44天才能检出 • 尿液稀释：如果喝水过多使尿液稀释可能会导致 假阴性结果。
原理
• 采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维 素膜为载体，使抗原抗体反应和洗 涤在同一渗滤膜上，反应后根据在 膜上的颜色判断结果。
• 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔 膜毛细管作用，使膜一端的液体慢 慢向另一端渗移，犹如层析
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
1
← HCG分子 ← 鼠抗人HCG单抗 ← 胶体金颗粒 ←胶体金标记鼠抗人HCG单抗
Байду номын сангаас
免疫胶体金层析法hcg
4
试纸条失效
失效
MAX
金标鼠抗人IgG单抗随层析作用向上移动，到达质控线，无羊抗鼠IgG( 二抗)或破坏失效，不结合而 不显色，作为质控对照。
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
5
大便隐血
MAX
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
6
注意事项
• 1. 将试条有标志线的下端浸入尿液标本中， 深度不可超过标志线（若超过，可能会出 现假阳性）
2/16/2021
免疫胶体金层析法hcg
8
3
negative
HCG 阴性标本
MAX
尿中无HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体不结合而不显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
2/16/2021