1-细胞生物学实验
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告
动物细胞融合
【实验目的】
⒈了解动物细胞融合的常用方法。⒉学习化学融合的基本操作过程。
⒊观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化。
【实验原理】
细胞融合是指在自发或者诱导条件下,两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合,包括病毒诱导融合、化学诱导融合和电激诱导融合。
⒈病毒诱导融合
仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。这类病毒的被膜中含有融合蛋白,可介导病毒和宿主细胞融合,同时也可介导细胞与细胞的融合。用紫外线灭活后,这些病毒即可诱导细胞发生融合。
⒉化学诱导融合
很多化学试剂能够诱导细胞融合,如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列,在去除这些物质之后,细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力,细胞膜融合,胞质流通,发生融合。化学诱导方法,操作方便,诱导融合的概率比较高,效果稳定,适用于动、植物细胞,但对细胞具有一定的毒性。PEG是被广泛使用的化学融合剂。
⒊电激诱导融合
包括电诱导、激光诱导等。其中,电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子,沿电力线排布成串,再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜,细胞膜的脂质分子发生重排,由于表面张力的作用,两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
细胞生物学实验(本科生)实验内容
细胞生物学实验(本科生)实验内容
实验一细胞的结构
目的:
1、熟悉实验室规范
2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点;
3、掌握临时制片法;
4、学会生物绘图
内容:
(一)录像:临时标本片的制作
(二)光镜下细胞器形态学观察:
1、高尔基体(兔神经节切片)
2、细胞核及核仁(蝾螈表皮装片)
3、线粒体(肾小管切片)
4、细胞骨架(培养肝癌细胞飞片)
5、中心体*(马蛔虫受精卵切片)
(二)操作:
制作人口腔上皮细胞临时制片(显示活体线粒体)
(三)实验报告:
绘制人口腔粘膜上皮细胞
实验二细胞化学细胞工程
目的:
1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧
2、了解几种化学成分的显示方法及原理;
3、观察各种化学成分在细胞中的分布;
4、了解PCC原理;
5、了解细胞融合及其应用;
内容:
(一)录象:克隆羊
(二)观察:
1、糖原(动物肝切片,PAS反应)
2、酸性蛋白(蟾蜍血涂片,酸性固绿染色)
3、酸性磷酸酶*(鼠腹腔液涂片,金属沉淀法显色)
4、DNA* (小鼠睾丸切片,Feulgen反应)
5、DNA、RNA*(人口腔粘膜上皮细胞涂片,吖啶橙染色,荧光显微镜观
察)
6、细胞融合(鸡血细胞、培养细胞)
7、PCC*(Hela细胞)
(三)操作:
制作蟾蜍血涂片,显示DNA、RNA
(四)实验报告:
甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果
实验三显微测量细胞的生理活动
目的:
1、掌握显微测量技术;
2、观察细胞的生理活动;
3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理;
内容:
(一)录象:细胞的活动显微测量
(二)观察:
1、胞质环流(黑藻叶片)
2、吞噬作用*(小鼠白细胞)
3、吞噬作用(蟾蜍白细胞)
细胞生物学实验1
实验方法
⒈线粒体的超活染色与观察 ⑴人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 刮取口腔颊粘膜上皮细胞,置于1 5000詹纳斯绿 刮取口腔颊粘膜上皮细胞,置于1/5000詹纳斯绿 B染液中, 37℃染色10~15min,显微镜下观察。 37℃染色10~15min,显微镜下观察。 注意不可使染液干燥。 ⑵洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察 撕取一小片洋葱鳞茎内表皮,置于1 5000詹纳斯 撕取一小片洋葱鳞茎内表皮,置于1/5000詹纳斯 绿B染液中,染色10~15min,镜下观察。 染液中,染色10~15min,镜下观察。
实验目的
观察动、植物活细胞内线粒体、液泡 系的形态、数量与分布。学习一些细胞器 的超活染色技术。
实验原理
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所,其形态和wk.baidu.com量 随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发 生变化。 詹纳斯绿B 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料,可专一性地对线 粒体进行超活染色,这是由于线粒体内的细胞色素 氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化状态(即有 色状态),呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞质中, 这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 中性红为弱碱性染料,对液泡系(即高尔基体)的 染色有专一性,只将活细胞中的液泡系染成红色, 细胞核与细胞质完全不着色,这可能是与液泡中某 些蛋白质有关。
实验用品
⒈器材:显微镜、恒温箱、镊子、双面刀片、 载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水 纸。 ⒉试剂: Ringer溶液、1/3000中性红溶液、 Ringer溶液、1 3000中性红溶液、 1/5000詹纳斯绿B溶液 5000詹纳斯绿B ⒊材料:人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细 胞、绿豆幼根根尖
试验1细胞大小测定
《细胞生物学》实验
(养殖:1——3;生技、海科:1——6)
实验一细胞器的分离、提取与测量
【目的】
掌握叶绿体分离的一般原理和方法,学习用测微尺测量细胞与细胞器大小的测定方法,并了解应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。
【原理】
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器,能发生特有的能量转换。利用低速离心机可以分离叶绿体,其分离在等渗溶液(0.35 mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行,目的是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。将匀浆液在1000r/min离心,去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞,然后,3000 r/min离心,可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。在室温下进行分离要迅速。
用显微测微尺可以直接测量细胞大小,精确度较高。显微测微尺分为物镜测微尺和目镜测微尺2种。目镜测微尺是1块小玻璃圆片(可放人目镜内,其大小正好卡人目镜筒内),在圆片正中央刻有1cm长的直线,直线上均匀分为100小格或50小格,每小格的长度,随目镜和物镜的放大倍数而变动。物镜测微尺是一块特制的玻璃载片,载片中央刻有一条1mm长的直线,均匀地刻分为100个小格,每小格为1/100mm (为10μm),用一小圆形玻璃盖片封盖着,物镜测微尺较目镜测微尺小格的间距精确,通过目镜测微尺测量细胞与细胞器的大小(小格数),然后换以物镜测微尺校测小格数的精确数值,即为测量的细胞与细胞器大小结果。
某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态,从激发态回到基态时,就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光),这种光就称为荧光。若停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后,可直接发出荧光(称为自发荧光),如叶绿素的火红色荧光。有的生物材料本身不发荧光,但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光(称为间接荧光),如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。
1-细胞生物学实验
(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片,上有一带精细刻度的标尺。
2 . 总长度为 1mm,分为 100 等份,每一个格的长度为 0.01mm(10μm)。
(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺,使之与目镜测微尺平行且 左端对齐(0刻度重合)。
③由左向右找到目镜测微尺与镜台测微尺重合的位点, 分别记录两尺重合处的刻度,计算目镜测微尺每小格 的长度。
ห้องสมุดไป่ตู้
(4)测量细胞并计算核质比
①口腔上皮细胞标本片→低倍镜下选无重叠、伸展良好、 结构完整的细胞→换高倍镜测量。 ②口腔上皮细胞为扁平形 ( 近似椭圆形 ), 测细胞的长半径 ( 直径 ) ,短半径 ( 直径 ) ,计算细胞体积。以同样方法测核 并计算核体积(或将核近似看作球形)。 ③按公式计算核质比。
实验内容
一、动物细胞无丝分裂的观察——鸡血涂片
(一)原理
雷马克(Remak)于1841年最早在鸡胚血细胞中发现 血细胞分裂过程中没有出现纺锤丝和染色体的变化, 故称无丝分裂(Amitosis)
(二)结果与观察
处于分裂过程不同阶段的鸡血红细胞,核仁先行分裂, 向核的两端移动,细胞核伸长呈杆状;进而,在核的中部 从一面或两面向内凹陷,使核成肾形或哑铃形改变;最后, 从细胞中部直接收缩成两个相似的子细胞。
细胞生物学实验
细胞生物学实验
一、细胞培养
1、细胞复苏
将冻存有细胞的冻存管从-70ºC 冰箱中取出,迅速置于已预热37ºC的水浴箱中不断摇动使冻存液在1 min 内解冻。在超净工作台内吸出细胞悬液并滴加在含6 ml DMEM 培养基的离心管中,放入离心机1 000 rpm 离心6 min, 弃上清液,向离心管中加入DMEM 培养基6 ml 吹打混匀制成细胞悬液种于培养瓶中, 放入37ºC 5%CO2培养箱中继续培养,24 h 内换液,以除去残存冻存液和未贴壁细胞。
2、细胞培养与传代
当细胞长满培养瓶底约85%~90%时弃去原培养液,用PBS 轻洗2~3 次,弃去PBS,加入适量胰蛋白酶液,在倒置显微镜下观察,若胞质回缩,细胞间不再连接成片时,吸弃胰蛋白酶液,加入DMEM 培养基终止消化,轻轻吹打直至细胞全部脱落悬浮,将细胞悬液吸出分装至2~3 个培养瓶中,再加入适量DMEM 培养基和胎牛血清,血清浓度为10%,放入培养箱中静置培养。传代第2 天吸出原培养
液,加入新培养液。细胞约2~3 天传代1 次。
3、细胞冻存
细胞冻存前一天更换培养基,观察细胞生长情况,使细胞处于指数生长期。按照细胞传代的方法收集,去少量细胞悬液在倒置显微镜下进行细胞计数。然后将细胞悬液吸入离心管,1000 rpm 离心6min,弃上清,吸取细胞冻存液,吹打混匀细胞,使细胞密度为1×107个/ml,将细胞悬液吸入冻存管中严密封口,冻存管做标记。先将冻存管放入4ºC 冰箱30 min,接着置于-20ºC 冰箱1 h,再移入超低温冰箱中保存。
细胞生物学实验汇总
细胞生物学实验汇总
1.细胞培养实验:细胞培养是一种将细胞在人造环境下生长和繁殖的
方法。这种实验可以用来研究细胞的生长和增殖,观察细胞的形态变化,
评估细胞的功能和活性等。培养的细胞可以来自动物组织、植物组织或微
生物等。
2.免疫荧光染色实验:这种实验可以用来观察细胞内特定的蛋白质、
细胞器或DNA分布。研究人员可以利用荧光染料或标记的抗体与目标分子
结合,在显微镜下观察细胞瞬态或持久性标记。这种实验可以帮助我们研
究细胞的结构和功能,探索细胞中不同分子的相互作用。
3.转染实验:转染是将外源DNA或RNA引入细胞内的过程。这种实验
可以用来研究基因在细胞中的功能,或将外源基因导入到细胞中来改变其
表达。常见的转染方法包括酵母转染、细菌转染、质粒转染和病毒转染等。转染实验可以帮助我们了解基因调控机制和研究细胞行为的变化。
4. 测定细胞增殖实验:这种实验可以用来测定细胞增殖速度和细胞
生长的影响因素。常见的细胞增殖实验包括MTT(3-(4,5-二甲基-2-苯
唑基)-2,5-二苯基四氮唑)实验、BrdU(5-溴脱氧尿苷)实验等。这些
实验可以帮助我们了解细胞增殖的分子机制和影响细胞增殖的因素。
5.测定细胞凋亡实验:细胞凋亡是一种编程性死亡的过程,是维持细
胞内稳态的重要机制。测定细胞凋亡的实验可以帮助我们研究细胞死亡的
调控机制,并评估不同因素对细胞凋亡的影响。常见的细胞凋亡检测方法
包括DNA损伤、细胞膜破裂和细胞色素释放等。
6.蛋白质分离和电泳实验:这种实验可以用来分离和鉴定细胞中的蛋
白质。常见的蛋白质分离方法包括凝胶电泳、二维凝胶电泳和西方印迹等。
(完整版)医学细胞生物学实验1
酸性蛋白的显示结果
(左图×100,右图×400)
碱性蛋白的显示结果
(左图×100,右图×400)
DNA和RNA的显示结果
(左图×100,右图×400)
作业
2#→0.1%碱性固绿染色30分钟 →冲洗→吸干→观察
2、DNA和RNA的显示
3#血涂片→凉干→70%乙醇中固定5-10 分钟→冲洗→甲基绿一哌罗宁混合染液 染色20分钟→冲洗→吸干→观察 四、作业 (1)绘制蟾蜍红C所显示的酸性蛋白或 碱性蛋白的分布图 (2)绘制蟾蜍红C所显示的DNA和RNA 分布图
实验一 光学显微镜的使用与细胞化学成分的分析
• 实验内容
• 一、显微镜的结构及使用方法
• 1、光学显微镜的主要构造
• 机械部分
• 照明部分
• 光学部分
• 2、光学显微镜的使用方法
• 对光 置片 低倍Hale Waihona Puke Baidu高倍
• 低倍镜使用
•
高倍镜使用
• 3、使用光学显微镜的注意事项
复原
二、细胞化学成分的分析
1 、酸性蛋白和碱性蛋白的显示 •制作蟾蜍血涂片三张,编号。 •1#、2#血涂片→凉干→70%乙醇中固定5 分钟→冲洗→90℃的5%三氯醋酸处理15 分钟→冲净 → 1#→0.1%酸性固绿染色3分钟
细胞生物学实验报告
1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察,了解细胞的形态及其显微构造;
2、学习显微测量的方法,对细胞的大小有向来观认识。
小白鼠肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;
普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片。
(一)细胞形态观察
l、动物细胞的观察
〔1〕人肝细胞切片:在显微镜下子细观察肝细胞的形态构造。
〔2〕鸡血细胞涂片的观察:观察血细胞的组成;红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察〔1〕取蚕豆叶片横切片的观
察:注意表皮细胞和叶肉细胞的根本构造。
〔二〕细胞的大小和测量
1、卸下目镜的上透镜,将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上,再旋上目镜
的上透镜。
2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好,使测微尺分度位于视野中央。调焦
至能看清镜台测微尺的分度。
3、小心挪移镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度含糊,可转动目镜上
透镜发展调焦),使两尺左边的向来线重合,然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。
4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每
格等于多少μm:
1、目镜校正: 40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数
2、细胞大小的测量:
1、血细胞按含量上下,主要含有:红细胞,白细胞,血小板。
白细胞最大,红细胞次之,血小板最小。红细胞:主要的功能是运送氧。 白细胞:主
要扮演了免疫的角色, 当病菌侵入人体时, 白细胞能穿过毛细血管壁, 集中到病菌入侵部位,
将病菌包围,吞噬。血小板:止血过程中起着重要作用。细胞形态见以下图。
2、植物细胞普通比动物细胞大一些。形态图见下。
细胞实验教案1.
细胞生物学实验教案
实验一细胞核与线粒体的分级分离
一、实验目的
了解差速离心法分离细胞器的原理,以及练习使用差速离心法分离哺乳动物的细胞核与线粒体。
二、实验原理
细胞内不同结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种组分分级分离出来。分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆,在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离,其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步,这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。匀浆(Homogenization)低温条件下,将组织放在匀浆器中,加入等渗匀浆介质(即0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。分级分离(Fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀,再用较高的转速,将浮在上清液中的颗粒沉淀下来,从而使各种细胞结构,如细胞核、线粒体等得以分离。由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中,所以每级离心得到的第一次沈淀必然不是纯的最重的颗粒,须经反复悬浮和离心加以纯化。分析分级分离得到的组分,可用细胞化学和生化方法进行形态和功能鉴定。
三、细胞核的分离提取
(一)操作步骤
1.用颈椎脱位的方法处死小白鼠后,迅速剖开腹部取出肝脏,剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中,反复洗涤,尽量除去血污,用滤纸吸去表面的液体。
2.将湿重约1g的肝组织放在小平皿中,用量筒量取8ml预冷的0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液,先加少量该溶液于平皿中,尽量剪碎肝组织后,再全部加入。
《细胞生物学实验》课件
离心机
分离细胞组分,如细胞核、线 粒体等。
恒温水浴箱
保持恒定的温度环境,用于实 验操作。
实验试剂
生理盐水
维持细胞正常生理状态,防止 细胞脱水或吸水。
胰蛋白酶
用于消化细胞膜,分离细胞。
DAPI染料
染色细胞核,便于观察细胞分 裂相。
抗体
用于免疫荧光标记,检测特定 蛋白或核酸等生物大分子。
实验对象
动物细胞
如小鼠和人源细胞系,用于研究 细胞生长、分裂和分化等过程。
植物细胞
如烟草或拟南芥等模式植物细胞 ,用于研究细胞壁、质体和线粒 体等功能。
03
实验操作
细胞培养
1 2
细胞培养的基本原理
细胞培养是一种在体外模拟体内环境,使细胞在 适宜的条件下生长的技术。
细胞培养的步骤
准备培养器皿、接种细胞、培养细胞的观察与记 录。
《细胞生物学实验》 ppt课件
目录
CONTENTS
• 实验概述 • 实验材料 • 实验操作 • 实验结果 • 结论与讨论
01
实验概述
实验目的
掌握细胞培养技术
通过本实验,学生将熟悉并掌握细胞培养的基本技术和方法,了 解细胞在体外生长和繁殖的条件和要求。
理解细胞形态与功能的关系
通过观察不同类型细胞的形态和生长特点,学生将进一步理解细胞 形态与其功能之间的关系。
细胞生物学实验
扩散与渗透
水的渗透同样是从自 由能高的地方向自由 能低的地方移动,如 果考虑到溶质的浓度, 水是从溶质浓度低的 地方向溶质浓度高的 地方流动。
红细胞膨胀与收缩
▪ 将红细胞放在某些等渗盐溶液中,由于 红细胞膜对各种溶质的通透性不同,膜两侧 的渗透压平衡会发生改变,也会发生溶血现 象。因此,发生溶血现象所需时间长短可作 为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本 实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料, 将其放入不同的介质溶液中,观察红细胞的 变化。
实验用品
▪ 1、材料:普通显微镜、普通离心机、扭力天平、 10ml试管、10ml刻度离心管、试管架,2ml注射器 (无需针头)或5ml移液管、洗耳球、滴管、载玻 片、擦镜纸、记号笔。
▪ 2 、 试 剂 : 0.128mol/L NaCl 溶 液 、 0.128mol/L NH4Cl 溶 液 、 0.128mol/L NH4AC 溶 液 、 0.128mol/L NaNO3溶液、0.09mol/L Na2SO4溶液、0.24mol/L葡 萄 糖 、 0.24mol/L 甘 油 、 0.24mol/L 乙 醇 、 0.24mol/L丙酮、0.128mol/L KNO3溶液、蒸馏水。
A Typical Plant Cell
普通光学显微镜
显微镜的分辨率与放大倍数
▪ 3. 分辨力:指分辨物体最小间隔的能力。
细胞学实验——精选推荐
目 录
1.1.细胞生物学实验细胞生物学实验
2.2.实验一实验一实验一 细胞膜的通透性观察细胞膜的通透性观察
3.3.实验二实验二实验二 植物细胞骨架的观察植物细胞骨架的观察
4.4.实验三实验三实验三 线粒体的超活染色与观察线粒体的超活染色与观察
5.5.实验四实验四实验四 叶绿体的分离与观察叶绿体的分离与观察
6.6.实验五实验五实验五 线粒体的分离与观察线粒体的分离与观察
7.7.实验六实验六实验六 酸性磷酸酶的显示方法酸性磷酸酶的显示方法
细胞生物学实验
细胞生物学是当前生命科学中核心学科之一,也是重要的专业基础课,其理论与实验技术已广泛地用于研究细胞的形态结构、基因表达与克隆、病毒、细菌、胚胎发育、远缘杂交、人类疾病的发病机制、药物机理等领域,随着分子生物学的研究渗入,分子细胞生物学也得到了突飞猛进的发展。目前许多综合大学、农业、医学及药科大学把细胞生物学作为本科生和研究生的必修课或基础理论课,同时也开设了专门的细胞生物学实验课,学生们通过实验,进一步地加深了对理论课的理解,也为今后的专业实验课和毕业论文实验奠定了基础。本讲义精心选择了细胞生物学中的常规实验,作为教材面向全院本科生进行讲授。
实验一实验一 细胞膜的通透性观察细胞膜的通透性观察
一、实验目的
1.1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。了解细胞膜对物质通透性的一般规律。
2.2.了解溶血现象及其发生机制。了解溶血现象及其发生机制。
二、实验原理
细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜,可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的,水是生物界最普遍的溶剂,水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散,这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低渗盐溶液中,水分子大量渗到细胞内,可使细胞胀破,血红蛋白释放到介质中,由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液,这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中,由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同,膜两侧的渗透压平衡会发生改变,也会发生溶血现象。因此,发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料,将其放入不同的介质溶液中,观察红细胞的变化。
细胞生物学实验报告1-动物细胞融合
【实验目的】
1.了解动物细胞融合的常用方法
2.学习化学融合和电融合的基本操作
3.观察动物细胞融合过程中的行为和变化
【实验原理】
1.病毒诱导融合
仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。这类病毒的被膜中含有融合蛋白,可以介导病毒同宿主细胞融合,也可以介导细胞与细胞的融合。用紫外线灭活后,这些病毒即可诱导细胞发生融合。
2.化学诱导融合
很多化学试剂都能诱导细胞融合,如聚乙二醇(PEG),二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂,磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列,在去除这些物质之后,细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复的过程中相接处的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力,细胞膜融合,胞质流通,发生融合。化学诱导方法,操作方便,诱导融合的概率比较高,效果稳定,适用于动、植物细胞,但对细胞具有一定的毒性。PEG是被广泛使用的化学融合剂。
3.电击诱导融合
包括电诱导、激光诱导等。其中,电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子,沿电力线排布成串,再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜,细胞膜的脂质分子发生重排,由于表面张力作用,两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制,融合概率高,作用机制明确,可重复性高等优点。
【实验材料】
1.材料鸡血红细胞
2.试剂 50%PEG、0.85%氯化钠溶液、GKN缓冲溶液
3.器材倒置显微镜、离心机、量筒、注射器、载玻片、盖玻片、离心管等
【实验步骤】
1.取离心管,加入冷藏的鸡血1ml,加入4ml 0.85%氯化钠溶液,摇匀
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告
目录:
1.实验目的
2.实验原理
3.实验步骤
4.实验结果与分析
5.实验结论
6.实验心得
1.实验目的
本实验旨在通过观察细胞的结构和功能,了解细胞的基本特征和生物
学意义。
2.实验原理
细胞是生物体的基本单位,由细胞膜、细胞质和细胞核组成。细胞膜
起着维持细胞内外环境平衡和物质交换的作用;细胞质内含有各种细胞器,如线粒体、高尔基体等,对细胞的代谢和功能发挥重要作用;细胞核则是
细胞的遗传物质DNA的储存和转录的场所。
3.实验步骤
步骤1:制备观察细胞的标本
将动植物组织样本切片并固定在载玻片上,用甲醛或酒精进行固定。
步骤2:观察细胞结构
将载玻片放在显微镜下,视野适当调整,首先用低倍镜观察整个组织
结构,再用高倍镜观察细胞的细节。
步骤3:细胞核染色
在载玻片上滴加少许乙醇溶液,保持片面湿润,然后在玻片上滴加适
量的苏丹红G溶液,使其覆盖整个标本,再用玻片一端旋转均匀。然后,
用甲苯将玻片内溶液洗净,再用约10%苏丹红醇溶液染色5-10分钟,最
后用水洗净,挤去水分。
步骤4:观察细胞核结构
将载玻片放在显微镜下,用高倍镜观察染色的细胞核。注意观察核膜、染色质和核仁的形态和位置。
4.实验结果与分析
通过实验观察,得出以下结果和分析:
-细胞膜:细胞膜是细胞的外层包裹结构,具有选择性通透性,能够
控制物质的进出。观察结果显示细胞膜是一个薄膜状结构,包裹着细胞质
和细胞核。
-细胞质:细胞质是细胞核和细胞膜之间的区域,包含各种细胞器。
观察结果显示细胞质呈胶状或颗粒状,其中可以看到线粒体、高尔基体等
细胞器。
-细胞核:细胞核是细胞的遗传中心,储存了细胞的遗传物质DNA。
细胞生物学实验 1
细胞生物学实验 1
实验1 细胞的形态观察和大小测定
【作业和思考题】
(1)将实验观察与计算结果填入表1.1。表1.1细胞的形态和大小细胞名称洋葱鳞茎内表皮细胞洋葱鳞茎内表皮细胞洋葱鳞茎内表皮细胞口腔上皮细胞口腔上皮细胞口腔上皮细胞形态特征长柱形长柱形长柱形不规则长方形不规则长方形不规则长方形细胞体积 1507.98 1486.98 1486.67 7804.00 9754.70 10874.93 核体积 34.27 35.09 35.13 25.63 27.89 31.87 核质比例 0.0236 0.0242 0.0242 0.00330 0.00287 0.00239 (2)各种细胞的细胞核大小是否有区别?为什么?
通过观察和计算,我们得出各种细胞的细胞核大小是存在差异的。植物细胞的细胞核比动物细胞的细胞核小,核质比却稍大。因为动物是高等生物,其细胞核内遗传物质含量也较高,所以细胞核比较大。质比例植物细胞稍大。
洋葱鳞茎内表皮细胞口腔上皮细胞
100*10 100*10
实验二细胞膜的渗透性
【作业和思考题】 1、问题回答
1)取试管一支,加入0.17mol/L氯化钠10ml,再加入1ml稀释鸡血,轻轻摇动,注意观察溶液颜色有无变化?有无溶血现象?为什么?
答:溶液有颜色变化,会出现溶血现象。因为鸡血红细胞在氯化钠溶液中,对氯化钠溶液有较好的渗透性,渗入的氯化钠溶质能够提高红细胞的渗透压,所以促使水分进入细胞,引起溶血现象。
2)取试管一支,加入0.17mol/L氯化铵10ml,再加入1ml稀释鸡血,轻轻摇动,注意观察溶液颜色有无变化?有无溶血现象?为什么?
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实验一、细胞的形态结构与显微测量 实验二、细胞生理活动的实验观察 实验三、细胞核与线粒体的分级分离 实验四、细胞分裂的形态观察 实验五、细胞原代培养 实验六、细胞计数及死活细胞的鉴定 实验七、综合设计性实验
实验一
细胞的形态结构与显微测量
实验目的
(一) 观察并了解细胞的基本形态。 (二)掌握临时制片和显微绘图的方法。 (三)了解显微测微尺的原理及使用方法
(I) Use of low objective lens (II) Use of high objective lens
Structure of the microscope
Mechanical part Optics part Lighting part
(一)临时制片——口腔上皮细胞标本的制备
玻片、解剖器材、滴管、牙签、吸水纸 3.试剂:1%鸡血悬液、6%淀粉肉汤、0.3%台盼兰、酵
母悬液、生理盐水、0.2%亚甲基兰染液
实验内容
(一)细胞的吞噬活动 (二)细胞活性的鉴定—酵母菌
1.原理
白细胞是机体防御系统中能游走的单位。它分为粒细胞系、单 核细胞系、淋巴系三类。
游走性、变形运动、趋化性、吞噬异物。
a.实验前二天,每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤 0.5~1ml(含O.3%台盼兰,起标记作用),以刺 激腹腔产生较多的巨噬细胞。
b.实验时,每组取一只经上述处理的小鼠,腹腔 注射1%鸡血悬液0.5~1ml,注射后轻揉小鼠腹 部以使红细胞悬液分散均匀。
c.1小时后,用颈椎脱位法处死小鼠,迅速剖开小 鼠腹壁,向腹腔注入0.5ml~1ml生理盐水,用牙 签轻轻搅拌使生理盐水与腹腔液混匀。
10x10
.
erythrocytes
leucocyte
Blood platelet
Chalice-shaped
(columnar,dense, elliptical-shaped nuclear)
Pillar cell
10x40
Skeleton muscle cell(fibrous,have many myofibril)
马蛔虫受精卵细胞:6条染色体
(二)观察
三、蝗虫精巢减数分裂压片标本的制备与观察
(一)原理
减数分裂(Meiosis)是配子发生过程中的一种特殊有丝分 裂,即染色体复制一次,而细胞连续分裂两次,结果使染 色体数目减半的过程。减数分裂过程中体现了遗传三大定 律,所以说减数分裂在稳定种的遗传性状和繁殖中均起着 重要作用,是生物遗传与变异的细胞学基础。
三、 试剂: Carnoy固定液、70%乙醇、醋酸洋红染液、45 %醋酸、二甲苯。
实验内容
一、动物细胞无丝分裂的观察——鸡血涂片
(一)原理
雷马克(Remak)于1841年最早在鸡胚血细胞中发现 血细胞分裂过程中没有出现纺锤丝和染色体的变化, 故称无丝分裂(Amitosis)
(二)结果与观察
处于分裂过程不同阶段的鸡血红细胞,核仁先行分裂, 向核的两端移动,细胞核伸长呈杆状;进而,在核的中部 从一面或两面向内凹陷,使核成肾形或哑铃形改变;最后, 从细胞中部直接收缩成两个相似的子细胞。
作业
1.简要说明分级分离细胞的原理及意义 2.描述显微镜下所见结果
实验六 细胞分裂的形态观察
实验目的
通过标本制备和观察了解生物体细胞的无丝分裂、 有丝分裂形态特征及生殖细胞的减数分裂过程。
实验用品
一、 材料和标本: 鸡血涂片、马蛔虫子宫切片、固定的蝗 虫精巢。
二、 器材和仪器 : 显微镜、擦镜纸、解剖针、眼科镊子、 载玻片、盖玻片、吸水纸、培养皿、冰箱。
3.高速离心分离提取线粒体
操作步骤 装 有 上 清 液 的 高 速 离 心 管 → 17000rpm 离 心
20 分 钟 → 弃 上 清 , 留 取 沉 淀 物 → 加 入 0.25mol/L蔗糖-0.003 mol/L氯化钙液1ml, 用吸管吹打成悬液→17000rpm离心20分钟→将 上清吸入另一试管中,留取沉淀物,加入 0.1ml 0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙 溶液混匀成悬液→取上清液和沉淀物悬液,分 别滴于载玻片上,各滴一滴0.02%詹纳斯绿B 染液盖上盖片染20分钟→油镜下观察,颗粒状 的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色。
许多酸性染料不易穿过活细胞的质 膜进入细胞内,却能渗入死亡的细胞 内,使其着色,以此来鉴别死活细胞。
2.方法 取酵母悬液一滴于洁净玻片上,滴一滴0.2%亚甲基
蓝染液,加盖片,2分钟后于显微镜下观察细胞。
3.结果 死细胞被染成蓝色,活细胞不着色。
实验作业
画图记录细胞吞噬实验所见结果
实验三
细胞核与线粒体的 分级分离
实验用品
一、材料和标本 小白鼠
二、器材和仪器 玻璃匀浆器、普通离心机、台式 高速离心机、普通天平、光学显微镜、载玻片、 盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10ml 量筒、25ml烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸 水纸、纱布、螬盘、平皿。
三、试剂 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶 液、1%甲苯胺兰染液、0.02%詹纳斯绿B染液、 0.9%NaCl溶液。
蝗虫精巢取材方便,标本制备方法简单,染色体数目较 少,蝗虫初级精母细胞染色体数2n=22+X,经过减数分裂 形成四个精细胞,每个精细胞的染色体数为n=ll+X或n=11
(二)蝗虫精巢压片标本的制备
差速离心法主要用于分离细胞器和病毒。
其优点是:操作简单,离心后用倾倒法即可将上清夜与沉 淀分开,并可使用容量较大的角式转子。
缺点是:①分离效果差,不能一次得到纯颗粒;②壁效应 严重,特别是当颗粒很大或浓度很高时,在离心管一侧会 出现沉淀;③颗粒被挤压,离心力过大、离心时间过长会 使颗粒变形、聚集而失活。
二、细胞有丝分裂的观察——马蛔虫子宫切 片
(一)原理
细 胞 有 丝 分 裂 (Mitosis) 的 现 象 是 分 别 由 施 特 拉 斯 布 格 (Strasburger, 1880) 在 植 物 细 胞 和 弗 勒 明 (Flemming , 1882) 在动物细胞中发现。有丝分裂过程包括一系列复杂 的核变化,染色体和纺锤体的出现,以及它们平均分配到 每个子细胞的过程。
接下去的操作见下面的流程图。
健那绿染色:各取10μlD4悬浮液和健那绿染液在载玻片 上混合,10分钟后加盖玻片,观察线粒体。
改良苯酚品红染色:取10μlD6涂片,滴10μl改良苯酚品 红染液,5分钟后加盖玻片,观察细胞核。
2.细胞核的分离提取
处死小白鼠→取出肝脏,剪成小块→在盛有0.9%NaCl的烧 杯 中 洗 涤 → 将 湿 重 约 1g 的 肝 组 织 放 在 平 皿 中 → 量 筒 量 取 8ml0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液,先加少量该溶 液于平皿中→剪碎肝组织后,再全部加入→剪碎的肝组织倒入 匀浆管中研磨3~5次→ 用3层纱布过滤匀浆液于离心管中→将 装有滤液的离心管放入离心机2500rpm离心15分钟→缓缓取上清 液,移入高速离心管中,保存于有冰块的烧杯中,余下的沉淀 物进行下一步骤→用6ml0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶 液悬浮沉淀物,2500rpm离心15分钟→弃上清,将残留液体用吸 管吹打成悬液→ 滴一滴于载玻片上,自然干燥→ l%甲苯胺兰 染色后盖片即可观察。
d.用注射器抽取腹腔液,滴片,然后盖上盖片。
e.镜检,高倍镜下画图记录所见结果。
3.结果
在高倍镜下,数量较多、体积较大、圆型或不规则的 细胞,其表面有许多似刺状的小突起(伪足),胞质 中有许多数量不等的蓝色颗粒(为吞入的含台盼蓝淀 粉肉汤形成的吞噬泡)即为吞噬细胞。
(二)细胞活性的鉴定—酵母菌 1.原理
Vn V=
Vc- Vn
Vn细胞核体积 Vc细胞体积
(三)永久制片的观察
Observation of cell morphological structure
➢ human blood smear ➢ toad blood smear ➢ mouse small intestine pillar epidermal cell ➢ skeleton muscle slide
①口腔上皮细胞标本片→低倍镜下选无重叠、伸展良好、 结Biblioteka Baidu完整的细胞→换高倍镜测量。
②口腔上皮细胞为扁平形(近似椭圆形), 测细胞的长半径 (直径),短半径(直径),计算细胞体积。以同样方法测核 并计算核体积(或将核近似看作球形)。
③按公式计算核质比。
椭圆V=4πab2/3(a 长半径,b短半径) 圆V=4/3R3(R半径)
实验用品
(一)材料: 人口腔上皮细胞(自取) 蛙血细胞涂片 人血涂片 单层柱状上皮细胞永久制片 骨骼肌纵切片
(二)器材:
载玻片 牙签 吸水纸 永久制片
盖玻片 擦镜纸 纱布 镜台测微尺
实验内容
临时制片——口腔上皮细胞标本的制备 显微测量 永久制片的观察
using of the microscope
度需用镜台测微尺标定。
(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片,上有一带精细刻度的标尺。 2.总长度为1mm,分为100等份,每一个格的长度为
0.01mm(10μm)。
(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺,使之与目镜测微尺平行且
左端对齐(0刻度重合)。
③由左向右找到目镜测微尺与镜台测微尺重合的位点, 分别记录两尺重合处的刻度,计算目镜测微尺每小格 的长度。
在白细胞中,以粒细胞、单核细胞的吞噬活动较强,故称此二 类细胞为吞噬细胞。单核细胞由血液进入组织后逐渐演变成巨 噬细胞。吞噬细胞主要靠吞噬来处理异物。
吞噬细胞首先由于趋化作用而向异物游走,然后伸出伪足包围 异物,并发生内吞作用形成吞噬泡将异物吞入细胞,继而溶酶 体与吞噬泡融合消化异物。
2.方法
取载玻片一张(揩净)→加一滴生理盐水→取材(口腔内颊 部上皮细胞)→涂于生理盐水中→盖盖玻片→染色(甲基 蓝)1’→观察
(二)显微测量
1.显微测量计
目镜测微尺 镜台测微尺
(1) 目镜测微尺
1.外形是一圆形玻片,装入目镜镜筒中。 用于测量标本用。 2.刻度标记0~100,实际分为200等份,每一个格的长
实验目的
1、了解分步离心分离细胞成分的方法原理。 2、学习、熟悉高速离心机的使用方法。
离心分离的原理
(一)实验原理 先用研磨、超声振荡、低渗等方法将组织或细胞破碎
(匀浆化),释放出细胞中的各种亚组分,再利用不同的 离心条件将它们分离出来,以供进一步分析研究之用。
1、差速离心法:从低速到高速逐级沉淀分离,使较大的 颗粒先在较低转速中沉淀,再用较高转速将原先悬浮在上 清液中的较小颗粒分离沉淀下来,从而使各种亚细胞组分 得以分离。但由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离 心时是均匀分布于整个离心介质中的,各每级分离得到的 第一次沉淀必然不是纯的最重颗粒,须经反复悬浮和离心 加以纯化。
如镜台测微尺1mm处(全长)与目镜测微尺75 刻度(150小格)重合,则:
目镜测微尺每小格的实际长度=
1 150
mm
=0.0067mm=6.7μm
④同样的方法标定高倍镜下目镜测微尺 每小格的实际长度
计算公式如下:
目镜测微尺每小格的实际长度
镜台测微尺长度 =
目镜测微尺格数
= 30×10μm 200
(4)测量细胞并计算核质比
五、实验操作
1. 取猪肝1g,放入小烧杯中,加4ml 0.25M蔗糖缓冲液, 将组织剪成约1mm立方的小块。
2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中,再将内管(带柄 的活塞)插入外管中,缓慢而均匀地施力,上下旋转拉 动,匀浆7-10分钟,然后用六层纱布过滤回洗净的原烧 杯中。(这两步操作略)
3. 每组取1个5ml离心管,加入匀浆液2ml,2000rpm离 心10分钟。(每组1管)
nuclei
四、作业
1.绘制口腔上皮细胞(点线绘图法) 2.低倍镜、高倍镜下测微尺的标定方法及结果 3.计算核质比
镜台测微尺
目镜测微尺(200小格)
实验二、细胞生理活 动的实验观察
实验目的
通过制片与观察加深理解细胞吞噬等生理活动 掌握死活细胞鉴别的原理及方法
实验用品
1.材料:小白鼠 2.器材和仪器: 光学显微镜、2ml注射器、载玻片、盖