肝炎病毒微生物学检验复习重点

肝炎病毒（hepatitis virus）
1.肝炎病毒：①以侵害肝脏为主的一组病原体；②病毒性肝炎感染率和发病率非常高；
③属于法定乙类传染病；④五种：甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎病毒；
2.五类肝炎病毒比较
（一）HA V
1.临床意义：①粪－口途径传播；②污染食物、水源、海产品及食具等；③只有急性期，
终身免疫；④1988年上海HA V流行；
2.基因组：①单股正链RNA；②5′NCR－ORF－3′NCR组成；③ORF分为P1、P2和P3
三个功能区
3.生物学特性：①敏感动物：灵长类；②敏感细胞：HEK，Vero；③理化特性与抵抗力：
较强的抵抗力；尤其耐酸、耐热，耐有机溶剂；
4. 实验诊断
（1）标本采集：①血清学检查：血清或血浆，IgM；②HA V抗原检测：粪便；③病毒颗粒观察：肝活检组织；
（2）形态学检查：粪便：①直接电镜技术；②免疫电镜技术；③固相免疫电镜技术；（3）实验诊断
A 抗体检测：
IgM：用于急性感染的早期诊断，常用IgM抗体捕捉ELISA检测法
IgG：双份血清IgG抗体上升>4倍为阳性，用于流行病学调查、既往感染或疫苗接种效果评价，常用间接ELISA检测法
B .抗原检测：常用ELISA双抗体夹心法，难以常规开展
（4）核酸检测：核酸分子杂交、逆转录PCR（RT－PCR）；
5. 报告及解释：在判断急性、新近或者既往感染
病毒抗原或核酸、IgM型抗体、IgG型抗体
（二）HBV
1. 传播途径
（1）血源性传播: 输血、注射、外科和牙科手术、针刺等
（2）母婴垂直传播：宫内传播、分娩时微小皮损处传播、产后母婴密切接触
（3）接触传播：日常接触或性接触
2. 流行病学：全球性流行但地区差异很大；我国为高发区，HBsAg+率9.75%，呈家族聚集性；农村高于城市，南方高于北方，男性高于女性；20~29岁为发病高峰。

3. 乙型肝炎的临床表现
潜伏期：30~180d；隐性感染→健康携带者；愈后→恢复期携带者；
急性肝炎；慢性肝炎：轻型、重症；
肝癌、肝硬化：DNA整合、X基因、HBsAg；
关节炎、肾小球肾炎：HBs免疫复合物；
致病机制：免疫病理作用；
4. 生物学特性：嗜肝DNA病毒科、正嗜肝病毒属
大球形颗粒，Dane颗粒，感染性病毒体；
小球形颗粒，HBsAg；
管形颗粒，HBsAg；
5. 分型与变异
血清型、基因型、变异性（多样性变异，4个区均容易变异，从而逃避宿主免疫，引起漏检）6. HBV的复制方式
（1）吸附并进人肝细胞后，脱去衣壳，病毒的DNA进入肝细胞核内。

（2）在DNA聚合酶的催化下，以负链DNA为模板，延长修补正链DNA裂隙区，使形成完整的环状双链DNA。

（3）双链DNA继而形成超螺旋环状DNA，在细胞RNA聚合酶的作用下，以负链DNA为模板，转录形成长度分别为2.1kb和3.5kb的RNA。

前者转译出外衣壳蛋白;后者除转译出内衣壳蛋白外，还作为HBV DNA复制的模板，故亦称其为前基因组。

（4）病毒的前基因组、蛋自引物及DNA聚合酶共同进入组装好的病毒内衣壳中。

（5）在病毒DNA聚合酶的逆转录酶活性作用下，自DR区开始，以前基因组RNA为模板，逆转录出全长的HBV DNA负链。

在负链DNA合成过程中，前基因组被RNA酶降解而消失。

（6）病毒以新合成的负链DNA为模板，也自DR区开始复制互补的正链DNA。

（7）复制中的正链DNA(长短不等)与完整的负链DNA结合并包装于内衣壳中，再包上外衣壳成为病毒体，从细胞质释放至细胞外。

7. 蛋白质：共编码7个蛋白
外膜蛋白、核衣壳蛋白、P蛋白、X蛋白、
8.实验诊断
（1）标本采集：免疫学检查：血清或血浆；核酸检测：血清最佳
（2）免疫学检测：
项目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc
方法：ELISA （最常用，定性）、免疫层析法（胶体金或硒标法）、发光免疫分析（定量）、反相间接血凝试验（少用）
HBV的免疫学诊断：
（3）ELISA：利用抗原和抗体特异性结合
方法：间接法: 测定抗-HBs、夹心法：测定HBsAg和HBeAg、竞争法：测定抗-HBc 和抗-HBe
（4）报告及解释：
（5）核酸检测：
核酸杂交：斑点杂交、Southern Blotting（3.2kb为游离型，> 3.2kb为整合型，<3.2kb 弥散状为复制型）、原位杂交
PCR：引物、Taq DNA聚合酶、dNTP
（三）HDV
1. 临床意义
（1）沙粒病毒科、δ病毒属
（2）与HBV密切相关，属于缺陷病毒，其组装依赖HBsAg
（3）传染途径：输血、静脉吸毒、密切接触等
（4）临床特征：同步感染引起急性肝炎，重叠感染引起慢性重症肝炎
2. 生物学特性：属于缺陷病毒，其组装依赖HBsAg；
基因组：1.7kb单股负链RNA病毒，9个ORF，其中ORF5编码HDAg 3. 实验诊断
（1）HDV抗原：血清或肝活检组织用去垢剂处理去除HBsAg后，用荧光免疫或ELISA检测；
（2）血清学检测：
抗HDV-IgM，新近感染，捕捉法ELISA
抗HDV总抗体，采用竞争法检测
（3）核酸检测：血清最佳（抗凝剂？），RNA是病毒存在的直接证据，采用RT-PCR，核酸杂交法
（4）报告及解释：
HDAg：主要见于急性丁型肝炎早期、在慢性HDV中，可呈波动性反复阳性
HDV抗体
HDV RNA：HDV存在及复制的指标
（四）HCV
1. 临床意义
（1）黄病毒科，肝病毒属
（2）引起慢性肝炎，占输血后肝炎的80%~90%，与肝癌和肝硬化关系密切，
（3）传播途径：血液传播、性接触传播、母婴传播、家庭内接触传播等，但约半数途径不明
（4）20多个基因型，Ⅰ~Ⅵ型常见：欧美各国流行者多为Ⅰ型、亚洲和我国流行者主要为Ⅱ型
①②③④⑤⑥
2.生物学特性：①球形，由包膜、衣壳和核心组成；②单股正链RNA，9.4kb；③一个ORF，
9个基因区；
3. 实验诊断
（1）标本采集：免疫学检查：血清或血浆；核酸检测：血清最佳，抗凝剂？
（2）免疫学检测：
筛选试验：ELISA法，以C22、C33和NS5区蛋白作为包被抗原
确认试验：RIBA (重组免疫印迹法)，2条带以上为阳性，主要用于ELISA初筛检测可疑者（3）核酸检测：
RT-PCR 检测HCV-RNA，是HCV感染的直接证据
bDNA（branch DNA)技术：人工合成的带侧链的DNA作为探针检测靶mRNA ，侧链用激发物进行标记，用化学发光进行信号放大。

（4）报告及解释：抗－HCV是非保护性抗体、抗－HCV阳性仅表明HCV感染、
HCV RNA是HCV早期诊断最有效指标
（五）戊型肝炎病毒
1. 临床意义：①粪－口途径传播，呈暴发流行；②污染食物、水源、海产品及食具等；
③潜伏期2~9w，急性重症肝炎，终身免疫；④1986~1988年新疆南部HEV流行；
2.生物学特性
（1）肝炎病毒科、肝炎病毒属
（2）20面体球形颗粒，直径30nm，无包膜；基因组：单股正链RNA，7.5kb，3个ORF 3.实验诊断
（1）标本采集：免疫学检查：血清或血浆；核酸检测：血清最佳，抗凝剂？
（2）免疫学检测：抗体检测
IgM型：诊断的重要指标，常用IgM抗体捕捉ELISA检测法
IgG型：双份血清，用于流行病学调查、既往感染或疫苗接种效果评价
（3）核酸检测：最佳方法
RT－PCR检测：血清、胆汁、粪便
难以临床常规开展
（4）报告及解释：判断急性、新近或者既往感染
病毒抗原或核酸、IgM型抗体、IgG型抗体
（六）其他肝炎病毒
1. 庚型肝炎病毒（HGV）：Flaviviridae(黄病毒科)肝病毒属（Hepacivirus），经血液传播，检测方法为ELISA-Ab，RT-PCR
2. 输血传播病毒：TT病毒科Anellovirus属，30~50nm球形，无包膜，－DNA环状，经血液传播，检测方法为PCR -DNA。