临床检验技师微生物真菌检验讲义
临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第一章_绪论
第一章绪论本科目考试复习特点需要理解的原理少，死记硬背的内容多各论繁多，容易混淆某些相关联章节可一起复习图形记忆、关联记忆、标题记忆……1.微生物、微生物学与医学微生物学（1）微生物的概念（2）微生物的分类及作用（3）微生物与人类的关系（4）微生物学、医学微生物学的概念2.临床微生物学的性质和任务（1）临床微生物学的性质和任务（2）临床微生物检验的思路与原则3.感染性疾病和临床微生物学的现状、发展和展望（1）感染性疾病的现状（2）发展和展望微生物的概念自然界的一大群形体微小、结构简单、肉眼不能直接看到，须借助光学/电子显微镜放大数百至数万倍才能看到的微小生物。
特点：①个体小；②结构简；③种类多；④分布广；⑤繁殖快；⑥变异快。
微生物的分类及作用微生物与人类的关系寄居在人类体表和体内的微生物可分为三类：﹥正常菌群：定居在人类皮肤及黏膜上的各类非致病微生物，非但无害，而且具有拮抗某些病原微生物和提供某些营养物的作用。
﹥条件致病性微生物：由于机体抵抗力下降，微生物寄居部位改变或寄居微生物丛（菌群）平衡失调，此时正常菌群可致病。
如表皮葡萄球菌、白假丝酵母菌。
﹥病原微生物：可引起人类和动、植物致病的微生物。
如霍乱弧菌，HIV等。
微生物学、医学微生物学的概念﹥微生物学：研究微生物的类型、分布、形态结构、生命活动及其规律，以及与人类、动植物等相互关系。
﹥医学微生物学：主要研究与医学有关的病原微生物的生物学特性、致病性、免疫性，以及特异性诊断和防治措施的学科，以控制和消灭感染性疾病和与之有关的其他疾病，保障和提高人类健康水平。
临床微生物的性质和任务（1）研究感染性疾病的病原体特征（2）提供快速、准确的病原学诊断（3）指导临床合理使用抗生素（4）对医院感染进行监控临床微生物检验的思路与原则感染性疾病的现状、发展和展望现状：（1）易感人群不断增加（2）新病原体不断出现、已控制的病原体死灰复燃（3）感染因子在非感染性疾病中的作用越来越明显（4）细菌耐药和医院感染的问题日趋严重发展：（1）快速诊断方法的发展（2）非培养快速鉴定（3）分子生物学飞速发展（4）计算机技术的发展有关临床微生物检验的目的，错误的是A.为临床诊断提供病原学依据B.为临床治疗提供参考用药信息C.为医院提供耐药动态信息D.改进或更新微生物检验方法E.监测寄生虫感染『正确答案』E『答案解析』临床微生物检验的目的不包括对寄生虫感染的监测。
临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第十五章_弧菌科及检验
第十五章弧菌科及检验本章内容一、弧菌属（一）霍乱弧菌（二）O139型霍乱弧菌（三）副溶血性弧菌（四）其他弧菌二、气单胞菌属与邻单胞菌属（一）气单胞菌属（二）邻单胞茵属革兰阴性直杆菌或弧菌有极端鞭毛氧化酶阳性动力阳性发酵葡萄糖弧菌属——分类根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、致病性和耐盐性等将弧菌分为四类：①O1群霍乱弧菌；②不典型O1群霍乱弧菌:能被O1群血清凝集但不产生致病毒素；③非O1群霍乱弧菌；④其他弧菌：包括副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河弧菌、创伤弧菌、麦氏弧菌和拟态弧菌。
大多数为非病原菌，对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。
霍乱弧菌——生物学特性形态与结构形态：弧形或逗点状，“鱼群状”。
人工培养后呈杆状。
染色：G-。
特殊结构：有菌毛，无芽胞，部分有荚膜。
一端有一根粗而长的鞭毛，悬滴观察可见穿梭样或流星状运动。
·培养特性营养要求：不高，可无盐生长。
气体环境：兼性厌氧。
菌落特征：耐碱不耐酸。
pH8.5的碱性蛋白胨水：培养6～9h，增菌形成菌膜。
碱性琼脂平板：较大圆形扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。
硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）：较大黄色菌落。
亚碲酸钾琼脂平板：还原亚碲酸钾成金属碲，使菌落中心呈灰褐色。
庆大霉素琼脂：形成的菌落中心呈灰褐色。
·抗原·变异性：有形态变异、菌落变异、溶血性变异和毒力变异。
·抵抗力：对热、干燥、日光、酸、消毒剂很敏感。
但耐碱力较强。
霍乱弧菌——微生物检验及鉴定·标本采集：以粪便（米泔水样便）为主，尽可能在用药之前采取。
及时接种适宜培养基。
常用的保存或运送培养基有碱性蛋白胨水、文-腊二氏保存液和卡-布运送培养基等。
·形态学检查：①动力观察：米泔水样粪便悬滴观察可见流星或穿梭状运动的细菌。
②制动试验：加霍乱多价诊断血清后弧菌凝集，运动停止。
③涂片染色：革兰染色，观察革兰染色阴性呈鱼群状排列的弧菌。
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第十三章病原性球菌及检验葡萄球菌——分类按色素及生化反应金黄色葡萄球菌：金黄色。
表皮葡萄球菌：白色。
腐生葡萄球菌：柠檬色。
按血浆凝固酶凝固酶阳性葡萄球菌：金黄色葡萄球菌。
凝固酶阴性葡萄球菌：表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。
葡萄球菌——生物学特性形态与结构形态：球形。
大小：0.5～1.5μm（中等）。
排列：葡萄状。
染色：G+。
特殊结构：无鞭毛和芽胞，个别有荚膜。
培养特性营养要求：一般。
气体环境：需氧或兼性厌氧。
温度环境：35～37℃；pH7.4。
菌落特征：普通琼脂平板24～48小时培养，形成直径2～3mm、圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐不透明、色素、溶血环。
抗原蛋白抗原：完全抗原，有种属特异性。
结合在细胞壁的肽聚糖部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A 蛋白。
多糖抗原：半抗原，具有型特异性，有三种：①A 型多糖抗原；②B 型多糖抗原；③C 型多糖抗原。
抵抗力：耐热，耐干燥，耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。
葡萄球菌——微生物检验及鉴定标本采集：脓汁、渗出液、血液、尿液、粪便、痰液等。
形态学检查：革兰阳性球菌呈葡萄串状排列。
分离培养：血标本肉汤增菌35℃ 24h 后或脓汁、尿道分泌物、脑脊液离心沉淀物接种血琼脂平板。
35℃18～24h ，可见典型产生不同色素的菌落。
金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明溶血环。
粪便、呕吐物接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂平板，经35℃ 18～24h 培养，可形成细小菌落，48h 后形成典型菌落。
生化试验（鉴定）触酶试验 血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验 新生霉素敏感试验 金黄色葡萄球菌 + + + + 表皮葡萄球菌 + - + 腐生葡萄球菌 +--耐药性检测：苯唑西林耐药的葡萄球菌（MRS ），耐甲氧西林的金葡菌（MRSA ），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE ），耐万古的金黄色葡萄球菌（VRSA ），耐万古的表皮葡萄球菌（VRSE ）。
葡萄球菌——致病性及临床意义感染类型 疾病致病因素侵袭性疾病（化脓性感染）皮肤软组织感染：如毛囊炎、疖、痈等血浆凝固酶、葡萄球菌溶血素、杀白细胞素全身性感染：如败血症、脓毒血症、骨髓炎、心内膜炎、脑膜炎等医院内感染毒素性疾病食物中毒，急性胃肠炎肠毒素、表皮溶解毒素、毒性休克综合征毒素烫伤样皮肤综合征 中毒性休克综合征葡萄球菌性肠炎（假膜性肠炎）金黄色葡萄球菌：引起疖、痈、外科伤口、创伤的局部化脓性感染，播散入血后可引起深部组织的化脓性感染；其产生的肠毒素可引起食物中毒，表现为急性胃肠炎。
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第十二章微生物自动化检测1.微生物自动培养系统（1）自动血培养检测系统（2）自动分枝杆菌检测系统2.微生物自动鉴定系统（1）原理（2）基本结构与性能（3）工作流程和操作要点3.自动药敏检测系统（1）微量稀释法试验系统（2）纸片扩散法阅读系统自动血培养检测系统原理：检测细菌和真菌生长时所释放的二氧化碳来作为血液中有无微生物存在的指标。
检测技术：放射标记、颜色变化（CO2感受器）、荧光技术和压力检测等。
适用：血培养，其他无菌部位标本如脑脊液、胸水、腹水和关节液等。
仪器的基本结构包括：①主机，恒温孵育系统（全自动）、检测系统；②计算机及其外围设备；③培养瓶；④抗凝剂和吸附剂。
影响因素：正确使用和定期维护；采血次数；采血时间；采血量；采血方法；及时送检；终末传代。
自动分枝杆菌检测系统原理：检测分枝杆菌生长时所释放的C02或者所消耗的02作为标本中有无微生物存在的指示。
检测技术：放射标记、颜色变化、荧光技术等。
微生物自动鉴定系统的原理微生物数码分类鉴定技术基本原理：计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。
（1）数据库：已知临床相关菌株按照对各种生化反应的出现频率事先编码建立数据库。
（2）数码鉴定：计算未知菌对5种反应的出现频率。
（3）编码：对未知菌编码。
（4）查码。
微生物自动鉴定系统的基本结构与性能全自动微生物鉴定仪的主要结构：·充液/封口部件：标本注入。
·读数仪/孵箱：读取样本生长变化。
·计算机：分析资料储存。
·键盘：输入操作指令。
·打印机：显示打印结果。
微生物自动鉴定系统的工作流程及操作要点（1）菌种准备：标本处理，预实验和菌落的选择。
（2）接种：制备细菌悬液，接种。
（3）观察及记录结果。
（4）结果解释。
自动药敏检测系统-微量稀释法试验系统目前应用最多的系统。
分类：计算机辅助手工系统、半自动系统、全自动系统。
原理：肉汤稀释法；常采用比浊法检测液体培养基中细菌生长。
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第二十九章临床标本微生物检验标本的采集本章内容血液、脑脊液、脓液、痰液、粪便、尿液、生殖道标本。
（1）标本采集（2）常见的病原体（3）临床意义血液标本采集1.皮肤消毒。
2.采血时间和频率一般在病人发热初期或高峰期采集，或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集。
怀疑细菌性心内膜炎时，血培养不少于三次。
3.采血部位和采血量一般为静脉采血，成人采血量10～20ml，儿童3～5ml，婴儿1～2ml。
4.床边直接注入血液培养基，不得用EDTA，枸橼酸钠抗凝。
5.检查血管内导管有无细菌污染，可无菌操作，剪下导管5cm远侧段，置无菌容器内送检。
6.运送：室温。
血液标本常见病原体种类病原菌革兰阳性球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌革兰阳性杆菌结核分枝杆菌、产单核李斯特菌革兰阴性球菌脑膜炎奈瑟菌、卡他布兰汉菌革兰阴性杆菌大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、克雷伯菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜血杆菌真菌假丝酵母菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌厌氧菌拟杆菌、产气荚膜梭菌血液标本——临床意义·当少量细菌侵入血液循环，为一过性，不繁殖或很少繁殖，不引起或仅引起轻微的炎症反应者称为菌血症，若有全身性炎症反应的表现称为脓毒症。
·血液标本的细菌培养是诊断菌血症的基本而重要的方法，若从患者血液中检出细菌，一般视为病原菌感染，提示有菌血症。
·血液感染是一种危重的全身感染，对其进行病原菌的检验，提供病原学的诊断极为重要。
脑脊液标本采集1.腰椎穿刺术、小脑延髓池或脑室穿刺术。
2.用药前，无菌取脑脊液2～3ml。
3.标本采集后要立即送检，一般不能超过1小时。
4.细菌培养室温保存，病毒检查4℃保存。
脑脊液标本常见病原体脑脊液标本——临床意义·细菌、真菌、病毒引起的脑炎、脑膜炎。
脓液标本采集1.先清洗，再采集。
2.抽吸采集、拭子采集、排液法。
3.厌氧菌感染的脓液尽量避免接触空气。
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第二章细菌的形态结构与功能细菌的大小测量单位：微米（μm）1μm＝1/1000mm单细胞微生物：一个细菌=一个细胞细菌的形态与排列细菌的结构原核生物界的一种单细胞微生物。
具有细胞壁和原始核质，无核仁核膜；除核糖体外无其他细胞器。
细胞壁（1）肽聚糖结构（2）革兰阳性菌细胞壁（3）革兰阴性菌细胞壁（4）细胞壁缺陷型细菌（细菌L型）细胞壁是细菌细胞最外层具有坚韧性和弹性的复杂结构。
革兰染色细胞壁肽聚糖结构为革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞壁的共同成分。
革兰阳性菌G+菌革兰阳性菌G-菌革兰阳性菌细胞壁革兰阴性菌细胞壁革兰阳性菌革兰阴性菌与细胞壁关系肽聚糖层数可多达50层1～2层坚韧疏松不同革兰染色紫色红色对酒精通透性抗原性磷壁酸外膜组成不同毒性无内毒素有内毒素阴性菌细胞壁有脂多糖青霉素药效好差青霉素破坏肽聚糖五肽交联桥细胞壁缺陷型细菌（细菌L型）·形成条件：溶菌酶、青霉素、抗体、胆汁等作用·特点：肽聚糖结构受损·生物学特性：·多形性、革兰染色多阴性·需要特殊培养基（高渗培养基）·致病性：仍有一定致病性细胞膜（1）细胞膜的结构与功能（2）中介体细胞膜：细胞壁内侧紧包细胞质的脂质双层（脂质、蛋白质、多糖）G-菌细胞膜也称内膜。
中介体：又称中间体，是细胞膜内陷折叠而成的管状、囊状结构。
其功能类似真核细胞的线粒体，也参与细菌分裂。
（2）内含物（3）核糖体（4）质粒细胞质是蛋白质和酶类合成的重要场所。
性质：细胞膜包裹着的物质。
基本成分：水、蛋白质、脂类、核酸及少量糖和无机盐。
功能：含丰富的酶系统，参与营养物质的合成与分解。
核糖体：蛋白质合成场所质粒内含物：贮存营养物质质粒·双链闭环DNA分子·核质以外的遗传物质，控制细菌某些特定的遗传性状·非细菌生命活动所必需F质粒：制造性菌毛。
R质粒：决定细菌耐药性形成。
Vi质粒：参与细菌毒力。
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第三十章细菌对药物的敏感试验本章内容一、药敏试验中抗菌药物的选用二、细菌对药物的敏感试验扩散法（K-B法）稀释法杀菌试验体外联合药物敏感试验厌氧菌、结核分枝杆菌及酵母样真菌的体外抗菌药物敏感试验体内抗菌药物的活性与浓度测定三、细菌的耐药性和产生机制细菌耐药的机制细菌耐药性表型的检测药敏试验中抗菌药物的选用原则：·按临床需要选用抗菌药物的种类·同类抗菌药物仅选一个作为代表·根据测定细菌的种属和感染部位进行选药1.青霉素类：青霉素与青霉素结合蛋白（PBP）结合，抑制细菌细胞壁合成。
作用于不产青霉素酶的革兰阳性球菌、革兰阴性球菌、厌氧菌；产青霉素酶的葡萄球菌；大部分大肠埃希菌、奇异变形杆菌、流感嗜血杆菌等革兰阴性杆菌；产β-内酰胺酶肠杆菌科细菌和假单胞菌等。
2.头孢菌素类：头孢菌素与青霉素结合蛋白结合，发挥抑菌和杀菌效果。
随着代次增加对于革兰阳性球菌的抗菌效果减弱，对革兰阴性杆菌的作用增强。
第四代头孢菌素对阳性球菌与阴性杆菌作用几乎相同，并具有抗假单胞菌的作用。
3.其他β-内酰胺类（1）单环类：氨曲南等。
对G－菌作用强，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌。
对G＋和厌氧菌无作用。
（2）拉氧头孢类：对G＋菌有较好的抗菌活性，对厌氧菌有高度抗菌活性，但对非发酵菌无效。
（3）碳青霉素类：除了嗜麦芽窄食单胞菌、耐甲氧西林葡萄球菌、尿肠球菌和某些脆弱类杆菌耐药外，对几乎所用的由质粒或染色体介导的β-内酰胺稳定。
（4）β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂：与β-内酰胺类抗菌药物联用能增强后者的抗菌活性，如克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦。
4.氨基苷类：吸附作用造成膜的损伤；核糖体30S小亚基。
氨基苷类抗菌药物对需氧革兰阴性杆菌有较强的抗菌活性，对阳性球菌有一定的活性。
5.喹诺酮类：通过外膜空蛋白和磷脂渗透进入细菌细胞；作用于DNA旋转酶，干扰细菌DNA合成。
第二代喹诺酮类对革兰阴性和阳性细菌均有作用；第三代喹诺酮类对革兰阳性菌作用高于第二代的4～8倍，对厌氧菌亦有作用。
临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第二十一章_其他革兰阴性杆菌及检验(小细菌)-(36698)
第二十一章其他革兰阴性杆菌及检验（小细菌）本章内容嗜血杆菌属（一）流感嗜血杆菌（二）其他嗜血杆菌弗朗西斯菌属鲍特菌属布鲁菌属巴斯德菌属标题记忆关联记忆图像记忆小细菌·菌体小，形态近似球杆菌。
·无动力，无芽胞。
·对营养要求较苛刻。
·主要包括嗜血杆菌属、鲍特菌属、布鲁菌属等。
嗜血杆菌属·G-小杆菌，呈球杆状，有时呈杆状、长丝状等多形态。
·无动力、无芽胞。
·包括 16 个菌种，其中与临床有关的有流感、副流感、溶血、副溶血、嗜沫、副嗜沫、杜克及埃及嗜血杆菌。
·须在人工培养基中加入新鲜血液才能生长，故称嗜血杆菌。
流感嗜血杆菌——生物学特性·形态与结构形态：急性感染标本为短小球杆菌，恢复期或长期人工传代培养后可呈多形态性。
-特殊结构：毒力株（黏液型菌株）在营养丰富的培养基上，6～8h 有明显荚膜。
无鞭毛，无芽胞。
流感嗜血杆菌——生物学特性·培养特性营养要求：高。
气体环境：需氧或兼性厌氧。
温度环境：最适 37℃， pH7.6 ～ 7.8 。
·培养特性菌落特点：第 1 页共 5 页普通培养基中须加入 X 和 V 因子。
加热血平板（巧克力平板）：18～24h 后圆形、光滑湿润、边缘整齐，呈露滴状的小菌落。
在其中加一定量抗生素（万古霉素/ 杆菌肽 / 克林霉素）制成选择培养基可提高检出率。
在葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，离葡萄球菌菌落越远的菌落越小，此称为卫星现象，这有助于对流感嗜血杆菌的鉴定。
液体培养基：有荚膜的菌株均匀混浊生长，无荚膜的菌株颗粒状沉淀生长。
流感嗜血杆菌——微生物检验及鉴定·标本采集：根据病情采集相应的临床标本。
-·分离培养：巧克力琼脂平板或选择性巧克力琼脂平板，经 37℃培养 24～ 48h。
根据菌落形态、涂片染色、卫星现象， X、 V 因子需求与否判断。
临床常见真菌检验—浅部感染真菌(微生物检验课件)
真菌及检验
真菌形态检验技术
一、标本采集
常见标本类别
◆浅部感染：毛发、皮屑、指甲等 ◆深部感染：脓、痰、血液、脑脊液、宫颈分泌物等
一、标本采集
注意事项 ◆标本来源适宜 ◆用药前采集标本 ◆严格无菌操作 ◆标本量充足 ◆立即送检
一、标本采集 检验程序
二、直接镜检
镜检的意义： ①有诊断意义，如浅部真菌病等； ②通过真菌的形态，可确定某些致病性真菌
一、浅部感染真菌
标本： 病变部位标本。 检验方法：
直接镜检 分离培养 荧光检查
微生物检验
心脑浸液葡萄糖血琼脂
培养基用途
真菌的常规培养 真菌的常规培养 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 观察真菌菌落色素，用于鉴别 生化反应鉴别培养（红色癣菌和 石膏样癣菌） 深部真菌培养
二、培养方法
分离培养
平皿 培养法
分离培养；观察菌落
斜面培 养法
保存菌种
小培养法 观察结构、生长发育过程
二、培养方法 小培养法：
的属或种, 如假丝酵母菌的厚膜孢子等。
镜检的局限性： ①阴性结果不能排除真菌感染； ②有假阳性结果。 因此，对直接镜检可疑结果应作复查或用
其他检验方法鉴定。
菌菌丝或孢子存在时，即 可初步判定为真菌感染。
常用方法：
标本
加热
KOH溶液
菌丝
镜检
孢子
鉴定
1. 生化反应鉴定
糖(醇)类发酵试验 同化碳源试验 同化氮源试验 明胶液化试验 尿素分解试验
2. 免疫学检查
3. 其他鉴定试验
鉴定
芽管形成试验 : 待检菌 → 动物血清 → 37 ℃、2~4h → 镜检观察芽管
厚膜孢子形成试验：待检菌 → 吐温-80玉米粉琼脂 → 37 ℃→ 观察厚膜孢子
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第二十八章真菌检验本章内容真菌的基本特性真菌的基本微生物检验方法病原性真菌一、真菌的基本特性真菌是真核细胞型微生物，属于真菌界。
具有典型细胞核，有完整细胞器，不含叶绿素；寄生或腐生方式生存，由单细胞或多细胞组成；细胞壁含几丁质和（或）纤维素；能进行有性生殖和（或）无性生殖。
分类绝大多数对人类有益，如食用真菌及能产生抗生素的真菌等。
能引起人类和动物疾病的真菌仅150余种。
分为黏菌、真菌两个门。
其中与医学有关的真菌主要属于接合菌亚门、子囊菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门，鞭毛菌门中仅腐霉属在医学上有重要性。
绝大部分致病性真菌属于半知菌亚门。
结构基本结构为菌丝和孢子。
菌丝：真菌在适宜环境中，由孢子生出芽管逐渐延长或呈丝状，称为菌丝。
菌丝继续生长并向两侧分支，交织成团，称为丝状体。
营养菌丝：伸入到培养基内的菌丝。
气中菌丝：露出培养基表面的（部分气中菌丝可产生有性或无性孢子的称为生殖菌丝）。
孢子有性孢子：同一个菌体或不同菌体上的两个细胞融合形成。
无性孢子：菌丝直接生成，并不发生细胞融合。
致病性真菌多为无性孢子。
真菌孢子与细菌芽孢区别真菌与细菌区别培养与繁殖气体环境：需要较高的湿度和氧气。
温度酸碱：22～28℃，某些深部病原性真菌在37℃生长良好，pH 5.0～6.0。
培养特点：最常用沙保弱培养基，生长缓慢。
多数真菌是以出芽、形成菌丝、产生孢子以及菌丝分枝与断裂等方式进行繁殖。
抵抗力对热的抵抗力不强，一般60℃1h即被杀死。
对干燥、日光、紫外线及多数化学药品的耐受性较强；对1%～3%苯酚、2.5%碘酒、0.1%的升汞及10%甲醛比较敏感；对常用抗生素均不敏感，灰黄霉素、制霉菌素、两性霉素等对某些真菌有抑制作用。
致病性真菌性变态反应：真菌过敏。
真菌毒素中毒：真菌中毒、真菌毒素致癌。
二、真菌的基本微生物检验方法直接检测法1.不染色标本的直接检查：用低倍镜和高倍镜检查，观察时有酵母型细胞、菌丝、菌丝体和孢子。
2.染色标本检查：观察酵母型细胞、菌丝、菌丝体和孢子。
（1）革兰染色：适用酵母菌和类酵母菌，酵母型细胞和菌丝、孢子被染为G+紫色。
（2）墨汁负染色：适用隐球菌。
可见新型隐球菌宽厚荚膜。
（3）乳酸酚棉兰染色：适用各种真菌的检查。
酵母型细胞、菌丝和孢子被染为蓝色。
（4）瑞氏染色：适用于骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌。
3.直接检测抗原：可以用乳胶凝集试验、ELISA检测血清和脑脊液标本中的隐球菌抗原。
也可以用胶乳聚集试验检测标本中白色念珠菌抗原。
培养检查法1.常用真菌培养基沙保弱培养基：深浅部真菌的常规培养；皮肤真菌试验培养基：分离皮肤真菌；左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基：分离新生隐球菌；马铃薯葡萄糖琼脂：观察真菌菌落色素，用于鉴别真菌；脑心葡萄糖血琼脂：培养深部真菌，使二相性真菌呈酵母型；尿素琼脂：鉴别酵母菌和类酵母菌，石膏样毛癣菌和红色毛癣菌；玉米粉聚山梨酯-80琼脂：培养白色假丝酵母菌。
2.培养方法试管培养：是真菌分离培养、传代和保存菌种最常用方法。
玻片培养：主要用于在显微镜下观察真菌的自然形态和结构及生长发育的全过程。
可用于真菌菌种鉴定。
平皿培养：观察菌落形态，只能培养生长繁殖较快的真菌。
3.鉴定：主要依靠菌落特点、菌丝和孢子的形态特点，菌丝体上有无特殊的结构。
生化反应常用的有糖类发酵试验、同化碳源试验等。
真菌毒素检测生物学方法、薄层层析法、液相色谱法、间接竞争ELISA法等。
药敏试验定量试验：观察最小抑菌浓度。
定性试验：将受试菌对药物的敏感性进行分级。
根据培养基不同主要分为液基法和固基法。
三、病原性真菌（一）假丝酵母菌（俗称念珠菌）生物学性状形态：圆形或卵圆形。
染色：G+，着色不均匀。
繁殖与培养：出芽繁殖，称芽生孢子。
孢子伸长成芽管，不与母菌体脱离，形成较长的假菌丝。
在普通琼脂、血琼脂与沙保弱培养基上均生长良好。
需氧、室温或37℃孵育1～3天，菌落呈典型类酵母型菌落。
微生物检验1.直接镜检：镜下可见假菌丝和厚膜孢子。
2.分离培养及鉴定常用白色假丝酵母菌鉴定方法：1）芽管形成试验2）糖同化或发酵试验3）厚壁孢子形成试验：玉米粉琼脂。
4）商品化产色培养基可用于快速鉴定。
临床意义对人有致病性的主要有：白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌等。
其中以白假丝酵母菌的感染最为常见。
它们大多是人体正常菌群，感染既可以是内源性，也可以是外源性的。
浅部假丝酵母菌病：鹅口疮、阴道炎、角膜炎、甲沟炎等。
全身性感染：支气管、肺假丝酵母菌病、假丝酵母菌性肠炎，假丝酵母菌性膀胱炎或肾盂肾炎、假丝酵母菌性心内膜炎等。
（二）隐球菌（新型隐球菌）生物学性状形态：圆形的酵母型菌，外周有荚膜。
常见出芽现象。
染色：一般染色法不着色，印度墨汁作负染色镜检。
繁殖与培养：新型隐球菌在沙保弱和血琼脂上25℃和37℃均可生长，典型酵母型菌落。
抗原：新型隐球菌荚膜多糖抗原，分4个血清型。
微生物检验1.直接镜检：标本中菌体较大，呈较大的球形，菌体周围有肥厚的荚膜，印度墨汁染色镜检。
2.分离培养及鉴定常用隐球菌鉴定方法（1）尿素酶试验：新型隐球菌可产生尿素酶，而白色念珠菌为阴性；（2）糖同化及发酵试验：新型隐球菌、浅白隐球菌等可同化纤维二糖、肌醇等，但均不能发酵糖类；（3）酚氧化酶试验：接种左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基，经2～5d，新型隐球菌呈棕黑色菌落。
3.直接检测抗原：乳胶凝集试验、ELISA。
4.PCR检测致病物质：新型隐球菌的致病物质是荚膜。
临床意义隐球菌属中新型隐球菌为主要的人类病原菌。
其感染属外源性感染。
可经呼吸道侵入人体，由血流播散至脑及脑膜，也可侵犯皮肤、骨和关节。
隐球菌病好发于免疫功能低下者，特别是隐球菌性脑膜炎。
（三）曲霉菌生物学性状具横隔的分枝菌丝；分生孢子。
繁殖与培养：在沙保弱培养基上形成丝状菌落。
鉴定曲霉菌常用察氏琼脂，菌落气生部分和基内菌丝体以及培养基的颜色是鉴定菌种的依据之一。
微生物检验血清学诊断：可用ELISA、RIA等方法检测患者血清中的抗体。
也可用ELISA等方法检测患者血清、尿液或其他体液中的抗原。
皮肤试验：对过敏性支气管肺炎患者可用曲霉抗原提取液作皮试。
临床意义曲霉菌是条件致病菌。
呼吸系统曲霉病：引起支气管哮喘或肺部感染，主要有三种即过敏型、曲霉球（又称继发性非侵袭性肺曲霉病）和肺炎型。
全身曲霉病：原发病灶主要是肺，可随血播散至脑、心肌和肾等。
有些曲霉菌能产生毒素引起机体食物中毒，黄曲霉毒、杂色霉素有致癌作用。
（四）卡氏肺孢菌有包囊和滋养体两种形态。
包囊为感染型，滋养体为繁殖型。
痰液涂片吉姆萨染色检查包囊。
利用单抗查血清中的卡氏肺孢菌抗原。
也可检测核酸。
可寄生于多种动物和人体。
主要是空气传播，在健康人体内多为无症状的隐性感染。
当宿主免疫力下降时，潜伏的卡氏肺孢菌在病人肺内大量繁殖扩散，导致间质性浆细胞肺炎，又称卡氏肺孢菌肺炎（PCP）。
卡氏肺孢菌病是AIDS最常见、最严重的机会感染性疾病。
（五）马尔尼菲青霉双相真菌，在自然界中以菌丝形式存在，在组织中则可形成小圆形至椭圆形细胞。
涂片染色镜检，可见到典型圆形或卵圆形有明显横隔的孢子，常在巨噬细胞内。
可引起马尔尼菲青霉病（感染），最初通过吸入而致肺部感染，随后进入血流引起菌血症及其他部位感染。
（六）镰刀菌大分生孢子是镰刀菌的特征；有无小分生孢子及厚壁孢子是镰刀菌分类的主要特征。
标本直接检验，可见分支、分隔的透明菌丝，偶见镰刀状大分生孢子。
镰刀菌生态适应性强，广泛分布于自然界土壤、植物的地上及地下部分。
（七）毛霉目真菌标本直接镜检可见折光性强的粗大菌丝，无隔或少数分隔。
在培养基上生长较快，初起菌落表面呈棉花样、白色，渐变为灰褐色或其他颜色，顶端有黑色小点。
常引起毛霉病的以根霉属最为常见。
毛霉病是一种发病急，进展快、病死率极高的系统性条件致病性真菌感染。
免疫功能低下者易感。
临床上常见眼眶及中枢神经系统的毛霉病。
该病起初多发于鼻黏膜或鼻窦，继而扩散。
（八）组织胞浆菌双相性真菌，标本涂片吉姆萨染色可见在巨噬细胞内卵圆形较小的一端有出芽，为可疑标本。
主要侵犯网状内皮系统，有时也可由血行播散而侵犯全身各脏器。
引起三种不同临床表现：原发急性型组织胞浆菌病、慢性空洞型、严重播散型。
（九）浅部感染真菌毛癣菌属：感染的皮屑等经10%KOH溶液消化后镜检，可见有菌丝，其病发内、外可见菌丝或孢子。
易侵犯人体皮肤、指（趾）甲、毛发的角蛋白组织并生长繁殖。
表皮癣菌属：对人致病的只有絮状表皮癣菌。
小孢子菌属：感染皮肤和毛发，很少感染指（趾）甲。
其他浅部真菌：糠秕马拉色菌引起皮肤表面真菌感染；着色真菌和孢子丝菌可引起皮下组织真菌感染。
【例题】检测真菌常用的简便方法是A.直接镜检B.抗原检测C.抗体检测D.核酸检测E.液相色谱鉴定『正确答案』A『答案解析』检测真菌常用的简便方法是直接镜检。
二相性真菌在培养基上形成酵母型菌落的培养温度是A.25℃B.28℃C.35℃D.37℃E.41℃『正确答案』D『答案解析』双相性真菌在体内或体外含动物蛋白的培养基上37℃培养为酵母型真菌。
关于真菌孢子的描述，错误的是A.是真菌的休眠状态B.抵抗力不如细菌芽胞强C.一条菌丝上可长出多个孢子D.大部分真菌既能形成有性孢子，又能形成无性孢子E.大分生孢子是鉴定半知菌类的重要依据『正确答案』A『答案解析』真菌孢子是真菌的主要繁殖器官。
关于真菌的抵抗力，错误的一项是A.对干燥、阳光和紫外线有较强的抵抗力B.对一般消毒剂有较强的抵抗力C.耐热，60℃1小时不能被杀死D.对抗细菌的抗生素均不敏感E.灰黄霉素、制霉菌素B可抑制真菌生长『正确答案』C『答案解析』真菌对热的抵抗力不强，一般60℃1h即被杀死。
最常用的真菌培养基是A.沙保弱琼脂培养基B.玉米-吐温80培养基C.血琼脂D.SS琼脂E.基础琼脂『正确答案』A『答案解析』最常用的真菌培养基是沙保弱琼脂培养基。
观察真菌菌落色素，合适的培养基是A.沙氏培养基B.玉米粉培养基C.尿素琼脂D.马铃薯葡萄糖琼脂E.心脑浸出液葡萄糖琼脂『正确答案』D『答案解析』马铃薯葡萄糖琼脂用于观察真菌菌落色素。
下列除哪项外均属于呼吸道常见真菌A.白假丝酵母菌B.隐球菌C.组织胞浆菌D.曲霉菌E.毛霉菌『正确答案』C『答案解析』组织胞浆菌主要侵犯单核-吞噬细胞系统，有时也可由血行播散而侵犯全身各脏器。
不是易引起念珠菌感染的主要原因A.与念珠菌病人接触B.菌群失调C.长期使用激素或免疫抑制剂D.内分泌功能失调E.机体屏障功能遭破坏『正确答案』A『答案解析』念珠菌大多是人的正常菌群，属于条件致病菌。
白色念珠菌常引起A.癣病B.皮下组织感染C.皮肤粘膜、内脏感染D.毒血症E.真菌中毒症『正确答案』C『答案解析』白色念珠菌可引起浅部和全身性感染。