传统霍恩氏法计算LD50替代方法概述_图文.ppt
精选LD50计算方法之—Horn氏法(霍恩法)资料
1
2
2
2
3
4
2
4
LD50 1.00
可信限 0.100～10.0
3
0
2
4
3.16
0.221～45.2
3
0
3
4
1.00
0.0385～26.0
3
1
1
4
3.16
0.122～82.1
3
1
2
4
1.00
0.0149～66.9
0
0
3
3
3.16
1.07～9.36
0
0
4
3
2.15
1.29～3.59
0
1
2
3
3.16
0.779～12.8
6.81
3.03～15.3
4
1.47
0.880～2.45
4.64
2.78～7.74
4
3.16
1.07～9.36
10.0
3.38～29.6
4
2.15
0.649～7.15
6.81
2.05～22.6
4
1.47
0.442～4.87
4.64
1.40～15.4
4
1.00
4
1.47
4
1.00
4
3.16
4
1.78
4
0.386～25.9
1
1
3
3
1.78
0.288～11.0
1
1
4
3
1.00
0.196～5.09
1
2
2
3
1.78
0.229～13.8
精编LD50计算方法之—Horn氏法(霍恩法)资料
0
1
3
3
2.15
0.649～7.15
0
1
4
3
1.47
0.654～3.30
2
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2.15
0.556～8.34
0
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0.442～4.87
0
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4
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1.00
0.412～ 2.43
0
3
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1.00
0.338～2.96
1
0
3
3
3.16
0.621～16.1
1
0
4
3
1.78
0.778～4.01
1
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2
3
3.16
～
LD50 10.0 7.50 5.62
可信限 5.14～19.4 4.22～13.3
～
4
3.16
1.40～7.14
10.0
4.43～22.6
4
2.37
0.984～5.71
7.50
3.11～18.1
4
1.78
0.788～4.01
5.62
2.49～12.7
4
1.33
0.750～2.37
4.22
2.37～7.50
1
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0
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3
每组4只动物，组距3.16倍
传统霍恩氏法计算LD50替代方法概述
特点如下
固定剂量法设固定剂量以观察动物的试验反应, 观察指标是“明显毒性” ( clear sign on toxicity ) , 不以死亡为依据, 而是按毒性症状来判断受试物质的毒性, 故结果不是具体的LD50 值。 结果判定分为高毒、有毒、有害和毒性未分类等。
毒性等级法
1、背景 毒性等级法(Acute toxic class method)最初由Samiey 于1990 年提出, 用于危害评估危害分类以及危 险度评价, 它是以动物死亡作为实验终点的分阶段试验法。OECD于1992年采用了ATC，2001年更 新列为指南TG423，欧盟指令67/548/EEC附录V列为B.1tris。 2、原理 该法每次只选用3 个设定剂量( 25, 200, 2000 mg/kg) 之一, 单性别3 只动物进行试验, 根据上一个 步骤有无死亡以及死亡的动物数, 决定下一步的试验。根据预先设计好的判别表格进行毒性分级。 有3 种可能的结局: (1)无需进一步试验即可分级；(2)同一剂量水平再做3只动物； (3)在高一级或低一级剂量水平另做3只动物。
特点如下
大大减少实验动物的使用，不但可以进行毒性表现的观察，还可以估算LD50及其可信限。 适用于动物染毒后1d~2d内死亡的受试物，对预期染毒死亡延迟至5d以上(含5d)的受试物不适用。
固定剂量法
1、背景 固定剂量法(fixed dose procedure, FDP),英国毒理学会于1984 年正式提出。 OECD于1992年采用了FDP，欧盟指令67/548/EEC附录V列为B.1bis, OECD 于2001年作为指南TG420。 2008年我国采用该方法为国家标准。 2、原理 使用一组固定的剂量( 5, 50, 500或2000 mg/kg), 分预试验与主试验两个阶段进行。 预试验采用单性别1只动物循序进行, 一般用雌性, 除非有资料和指征提示雄性更敏感。如受试剂 量无中毒表现, 而高一档剂量有动物死亡, 则需在其间插入剂量。 主试验根据预试验结果, 一般只需一个剂量, 雄雌动物各5 只。观察出现“明显毒性”, 实验终止; 不出现中毒表现, 需提高一档剂量试验; 出现死亡, 需降低一档剂量试验; 如2000 mg/kg预试验和 主试验都不出现中毒体征, 试验终止。结果以不出现与受试化学物相关死亡的最高剂量表示。
LD50测定及处方、剂型、药典课件PPT28页
r=(N-1√) Dn/Dm
[实验步骤]
取小鼠
（10只）
称重 编号
给药，腹腔注射
（0.2ml/10g）
观察中毒表现并列表进行实验结果记录， 按公式计算LD50=lg-1(∑C/∑n) 。
表3: 序贯法测定普鲁卡因LD50实验结果记录统计表
————————————————————————————
剂量（mg/kg) 剂量对数 实验结果记录
死亡数 存活数 n C
——D—————lgD—(X—) ——————————F—计算—∑—CS时—，—×—F鼠+—S剂—量—nX
300
2.477 +
LD50测定及处方、剂 型、药典课件
聪明出于勤奋，天才在于积累
机能实验学课件
LD50测定及处方、剂型、药典
【煎剂】decoction，Dec.
生药（单味药或复方药）的煎出液。
【气雾剂】aerosol
【酊剂】tinctura，Tr.
生药的乙醇浸出液或药物的酒精溶液。
颠茄酊
碘酊
【洗剂】lotion，Lot.
医疗处方（医师根据病人的治疗需要而开写的 处方）
(三)处方基本结构
处方前项 处方头 处方正文
用法
药品名、剂型、规格、数量 Sig.（用法）
医师签名
（四）处方开处注意事项
▪ 钢笔书写，不得涂改； ▪ 单位：固体g、液体ml可省略，其余必须标明； ▪ 药量必须写清楚，整数后应加小数点和零； ▪ 药物总量：3日为宜，7日为限 ▪ 危重病例急需用药时，应于左上角注明“急”
半数致死量计算ppt下载
毒性分级标准
表 化合物经口急性毒性分级标准
毒性分级 6 级，极毒
小鼠一次 经口
大约相当体重 70kg 人的致死剂量
LD50(mg/kg)
<1
稍尝，<7 滴
5 级，剧毒
1～50
7 滴～1 茶匙
4 级，中等毒 51～500
1 茶匙～35g
3 级，低毒 501～5000
0.316×10t, 1.00×10t, 3.16×10t, 10.0×10t …,其中t=0, ±1, ±2, ±3…
当每组剂量公比为3√10 时， 各组剂量的系列为
0.464×10t, 1.00×10t, 2.15×10t, 4.64×10t
…,其中t=0, ±1, ±2, ±3…(结果较准确)。
3654 10
5 0.
••••
=3.
P为各剂量组的死亡率.
••••
=3.
当每组剂量公比为√10 时，
= Log (3.29为50％)所对应的横坐标点（M）,其相应的剂量对数就是LogLD50值,查反对数表可求出LD50.
当每组剂量公比为3√10 时，
•••• 4 2319 3.
k
∑p=3.5 7 5380 3.
某化合物小鼠经口染毒后死亡资料 4.
∑p =2.65 ••••
=3.
2
物的总数；
P为各剂量组的死亡率.
•••••logLD =X -i(∑p-0.5) 1218 10
1 0.
50 不等距的数值；
…,其中t=0, ±1, ±2, ±3…(结果较准确)。
••••SlogLD50=i. √(∑P-∑p2)/(n-1) =0.1218×√(3.5-2.65)/(10-1) =0.03743
半数致死量计算ppt课件
LD50的95%可信区间为： Log-1(3.3654±1.96×0.03473) = Log-1(3.2920～3.4388) =1958.84～2746.63mg/kg
二、霍恩氏法
(一)、本法基本要求： 1、设4个剂量组； 2、每组动物数相等。4只或5只； 3、 各剂量公比为√10或3√10
b＝（y2-y1)/(x2-x1)
毒性分级标准
表 化合物经口急性毒性分级标准
毒性分级 6 级，极毒
小鼠一次 经口
大约相当体重 70kg 人的致死剂量
LD50(mg/kg)
<1
稍尝，<7 滴
5 级，剧毒
1～50
7 滴～1 茶匙
4 级，中等毒 51～500
1 茶匙～35g
3 级，低毒 501～5000
6 4064 3.6090 10 7 5380 3.7308 10
0 0.0 0.00 1 0.1 0.01 3 0.3 0.09 5 0.5 0.25 7 0.7 0.49
9 0.9 0.81 10 1.0 1.00
∑p=3.5 ∑p2=2.65
••• i=0.1218
Xk=3.7308 ∑p=3.5
半数致死量计算
--介绍几种常用的计算方法
目的
掌握主要的LD50计算方法和急性毒性分 级标准。
一、改进(良)寇氏法
•(一).本法要求： 1.反应情况符合或接近对数正态分布； 2.剂量必需为等比级数(几何级数)； 3.各组动物数相等或相近； 4.最低剂量组动物死亡率<20％； 最高剂量组动物死亡率>80％.
三、概率单位图解法
•(一)本法基本要求： 1.资料呈对数正态分布； 2.剂量分组一般取等比级数,也可为等差或 不等距的数值； 3.各剂量组的动物数要求相等或相近； 4.由于在理论上死亡率不存在0％和100％, 所以0％更为0.25/N,100％改为（1-0.25）/N
霍恩法-保存
1 0 0 0 0 0 0 0 0 0
2 0 0 0 1 1 1 1 2 2
3 2 3 4 1 2 3 4 2 3
4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
LD50 2.15 1.78 1.47 2.15 1.78 1.47 1.21 1.47 1.21
0
0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2
0.122～82.1
0.100～1000 0.0472～212 0.149～669 0.221～45.2 0.122～82.1 0.385～260
Horn氏表2-1
各剂量组动物死亡数 (只)
每组4只动物，组距2.15倍
剂量1＝0.464 剂量2＝1.00 剂量3＝2.15 剂量4＝4.64 ×10t 剂量1＝1.00 剂量2＝2.15 剂量3＝4.64 剂量4＝10.0 可信限 1.38～3.36 1.21～2.61 ～ 1.25～3.71 0.989～3.20 0.853～2.53 0.825～1.78 0.784～2.75 0.674～2.18 LD50 4.64 3.83 3.16 4.64 3.83 3.16 2.61 3.16 2.61 可信限 2.98～7.23 2.61～5.62 ～ 2.70～7.99 2.13～6.89 1.84～5.44 1.78～3.83 1.69～5.92 1.45～4.69 ×10t 剂量2＝2.15 剂量3＝4.64 剂量4＝10.0 剂量2＝21.5 LD50 10.0 8.25 6.81 10.0 8.25 6.81 5.62 6.81 5.62 可信限 6.42～15.6 5.62～12.1 ～ 5.81～17.2 4.59～14.8 3.96～11.7 3.83～8.25 3.64～12.7 3.13～10.1 ×10t
中国药典ld50方法
中国药典ld50方法摘要：一、引言二、LD50方法的定义和作用三、中国药典LD50方法的具体步骤四、实验动物的选择与处理五、剂量设计与给药途径六、观察期与死亡率统计七、结果分析与LD50值的计算八、应用与局限性九、总结正文：一、引言在中国药物研究和开发过程中，安全性评价是至关重要的环节。
LD50（Lethal Dose 50）试验是毒性试验中最常用的一种方法，用于评估化学物质的急性毒性。
本文将详细介绍中国药典LD50方法的操作流程、注意事项及其在药物安全性评价中的应用。
二、LD50方法的定义和作用LD50方法是指通过一次性给予实验动物不同剂量的化学物质，观察其在一定时间内产生的毒性反应，以半数动物死亡剂量作为评价指标。
该方法有助于了解化学物质的急性毒性程度，为药物的研发和生产提供安全性依据。
三、中国药典LD50方法的具体步骤1.实验动物的选择：根据实验需求选择合适的动物种类和品系，一般选用小鼠、大鼠等常见实验动物。
2.动物处理：实验前对动物进行健康检查，确保其生理状态良好。
给动物适应环境，消除恐惧感。
3.剂量设计与给药途径：根据化学物质的性质，选择合适的剂量范围和给药途径。
通常采用口服、腹腔注射、皮下注射等途径。
4.观察期与死亡率统计：给药后观察动物的毒性反应，如行为异常、呼吸急促、腹泻等。
记录观察期内动物的死亡情况，计算死亡率。
5.结果分析与LD50值的计算：根据实验数据，绘制剂量-死亡率曲线，计算LD50值。
通常以剂量对数作为横坐标，死亡率作为纵坐标。
四、实验动物的选择与处理1.选择健康、年龄相近、体重均匀的动物。
2.实验前对动物进行健康检查，确保其生理状态良好。
3.给动物提供适宜的生活环境，保持清洁、安静、温暖、通风良好。
4.实验前对动物进行适应性饲养，使其适应实验环境。
5.实验当天，给动物称重，记录体重。
五、剂量设计与给药途径1.设计剂量时，应充分考虑化学物质的毒性、动物种属、给药途径等因素。
LD50的测定方法
LD50的测定方法LD50的测定方法有三种：概率单位法(Bliss法)、累计法(Reed-Muench、Karber)、序贯法概率单位法：1、进行实验：死亡率为10%-50%、50%-90%的组数各占一半。
死亡率为0%与100%时，舍去不用2、数据转换:计算剂量对数x与死亡率概率单位y3、对x与y进行回归分析，求出回归方程4、由回归方程计算当y=5时的x值5、取x值的反对数得到LD50如某农药对急性大白鼠的LD50测定计算剂品mg/kg 唱试功物数死亡数夕匕f剂M 对敷(X)死匸率概率单位(y)1000 10 1 10© 3.00001200 10 220 3.0792 1400 10 3 30 3.1461 1600 10 5 50 3.20411800 10 7 70 3.2553 2000 10 9 90 3.3010剂量mg/kg 受试动物数死匚数对数(x)死亡率概率单位W)1000 10 1 10 3,000037134 1200 10 2 20 3,0792 4.1534 1400 10 3 30 3-1461 4.4756 1600 10 5 50 3.20415 1800 10 7 70 32553 5.5244 2000 10 9 90 3.3D10 6.28161＞进行回归分析r =0.9738P =0001025v--20.9376 +8J526JV得: $ =-20.9376+ 8.1526兀(1) 计算当y=5时的咒值$=5 x = (5-a)/h = 3.1815(2) 取覧值的反对数，得LD创W50 =1518.7773 mg/kg该农药对大白鼠的LD刊为1519mg/kg a累积法测定LD502、死亡率在0-100%之间3、分别累计各组动物死亡总数与存活总数4、分别求各组的累计动物死亡率5、用线性插值法求半数致死量例：剂虽剂量~~~jgir 壊计kg対数功物数动物数动物数址【池肓帛款化「壬“H1K12,903100ID 032 Uh 000IgLD和y14347812 0»3.ft79w71：323.5294［事冊 3.1467311664.7059^£3 一204lib ES-J £J)9J K63636LS1M* 3. 2S5ll>91196.55173. Ml10KJ00100①死亡率每增加一个百分点，剂量对数增加：(3.146-3.079>/(64706-23.529) = 0.00163②死匸率从23.529%^jJliUSO%,剂量对数增加:0.00163 x (50 -23.529) =0.0431③lgLD50= 3.079 + 0.0431 = 3.1221④取&对数得到LD50为；1324.65序贯法测定1、做实验:从接近LD50的各组动物组数只一只动物进行，阳性,下一只动物用低n剂量开始，等比级数分4-6组;一级剂量，反之，则相反2、计算各组动物数3、计算各组动物组数n与剂量对数x的乘积之与:L nx4、计算LD50的对数值：Z hx/ L n1、剂量组按等差或等比级数分5-8组5、 取反对数得到LD50■■-■*■—' ■ --"fc ・ rx* < ■ -------------- L TISJ—-f ■* -* - •*- T-^^-r * f * *(ng/kg 削足対粧1 2 34 5 6 7 89 10 11 12 13 14 15 16 1718 193.763 □ 5755B.ace0.775ft- -■眼465 0.-9761-十十'15.012 1.1764 + +十+ + +23.acg 1.3767⑷加馳咙耳狄散卄傑醒经眠乃丫麻醉人亂的E D M 测芯剂星按竽比级数分组（r-1.596） +：催醒：未催皑mSulinraw Z. mg/M ；刈数X 动物数 动物数 动物数n反的率％05755IL7758 f ]gED 50「' 0刖1.1764 6 0♦ IgEDso = 18,9465/19 = 0.9971♦取反对数得到:EDso = 9-935415.0124 U 3.1032 944.44 SJ849----6 5(FS 100 L05S423.809 13767合计 io仗Eg3763。
半数致死量计算ppt课件
--介绍几种常用的计算方法
目的
掌握主要的LD50计算方法和急性毒性分 级标准。
一、改进(良)寇氏法
•(一).本法要求： •••• 1.反应情况符合或接近对数正态分布； •••• 2.剂量必需为等比级数(几何级数)； •••• 3.各组动物数相等或相近； •••• 4.最低剂量组动物死亡率<20％；
LD50(mg/kg)
<1
稍尝，<7 滴
5 级，剧毒
1～50
7 滴～1 茶匙
4 级，中等毒 51～500
1 茶匙～35g
3 级，低毒 501～5000
35～350g
2 级，实际无毒 5001～15000 350～1050g
1 级，无毒
>15000
>105Байду номын сангаасg
二、霍恩氏法
(一)、本法基本要求： 1、设4个剂量组； 2、每组动物数相等。4只或5只； 3、 各剂量公比为√10或3√10
当每组剂量公比为√10 时， 各组剂量的系列为
0.316×10t, 1.00×10t, 3.16×10t, 10.0×10t …,其中t=0, ±1, ±2, ±3…
当每组剂量公比为3√10 时， 各组剂量的系列为
••••1 1000 3.0000 10 ••••2 1323 3.1218 10 ••••3 1752 3.2436 10 ••••4 2319 3.3654 10 ••••5 3070 3.4872 10
6 4064 3.6090 10
7 5380 3.7308 10 ••••
0 0.0 0.00 1 0.1 0.01 3 0.3 0.09 5 0.5 0.25 7 0.7 0.49