利用正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺
蝉拟青霉多糖醇沉淀研究
厂 ）； 微 量 移 液 器 ＷＫ Ｙ型 １ ０ ０ — ５ ０ ０ ｌ
根 据 以上单 因素实 验结 果 ，选 定 醇 沉时 间 、醇 沉浓 度 、浓缩 倍 数三项 作为考察 因素 ，做Ｌ ９（ ３ ３ ）正交实验 。 （ 五）验证试验
９ ５ ％乙醇 沉 淀 多 糖 。据 此 分 离 提 纯 。再
利 用正 交实 验得 出的蝉 拟青 霉优 化 后 乙醇 沉淀 取条 件 ，进行 验证 性实
验 ，验证方法 的可行性和稳定性 。
三 、 结 果 与分 析
（ 三）供试 品制备方法
酶 法提 取 的多 菌丝 体粉 末 ，加 入１ Ｏ 倍 体 积 的 蒸 馏 水 。再 加 入 １ ． ０ ％ 的木瓜 蛋 白酶 ，在 ｐ Ｈ为６ 、５ ０ ℃下 加 热２ ｈ 。经 酶 灭 活 处 理 。将 提 取 液 以 ３ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ 的速度离 心 １ ５ ｍｉ ｎ ，取上 清
河南农业 ２ ０ １ ５年 第 ３期 （ 下）
沉 浓度 为７ ０ ％。 （ 四） 醇 沉 时 间 的影 响
斟
踺
由图３ 所 示 ：从 静 置 ２ ４ ｈ 到静 置 ４ ８ ｈ 多糖的沉淀量开 始变缓 ，从４ ８ ｈ 开
始 随 着 静 置 时 间 的 延 长 多 糖 增 长 更 加 缓慢 ，到６ ０ ｈ 左 右 多 糖 得 率 逼 近 最 大 值 ， 随 后 伴 随 时 间 的继 续 延 长 ，多 糖
多糖得率 。 （ 四 ） 醇 沉 正 交试 验
馏水溶解沉淀后按 Ｓ ｅ ｖ ａ ｇ ｅ 法脱蛋 白 ，再
利用正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺
利用正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺
熊中奎;金丽琴;吕建新
【期刊名称】《中国药师》
【年(卷),期】2006(009)006
【摘要】目的:优化蝉拟青霉多糖的提取条件.方法:采用正交试验,以蝉拟青霉多糖含量为指标进行研究.结果:经正交试验优化后的提取工艺:向蝉拟青霉的水浸出液中加入1%木瓜蛋白酶,于50℃,pH=7条件下提取2.5 h.结论:此优化工艺可缩短提取时间,提高多糖得率.
【总页数】2页(P533-534)
【作者】熊中奎;金丽琴;吕建新
【作者单位】温州医学院附属温岭医院,浙江,温岭,317500;温州医学院;温州医学院【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.正交试验优化洋葱多糖渗漉提取工艺的研究 [J], 王健;罗升娟;王艳;王统;李玉杰
2.正交试验优化红参多糖超声提取工艺 [J], 刘佳维;梁启超;雷涛;高馨;郭义美;岳超颖
3.正交试验优化南酸枣多糖的提取工艺 [J], 李景恩;龚毅;罗园珍
4.利用正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺 [J], 熊中奎;金丽琴;吕建新
5.正交试验优化恒山黄芪多糖微波辅助提取工艺 [J], 梁泰帅;张淼;姜佳琪
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蝉拟青霉中虫草素提取工艺研究
Extraction condition of cordycepin in Paecilomyces cicadae
LI Rui-xue1, WANG Tai-chu1, HU Fei 2 , JIA Hong-ying1, WANG Wei1, FAN Mei-zhen 3*
(1.The Sericultural Research Institute, Anhui Academy of Agricultural Sciences, Hefei 230061; 2.The Plant Protection Research Institute, Hefei 230031; 3.Anhui Agricultural University, Hefei 230036)
*通讯作者 收稿日期：2012-08-16 基金项目： 安徽省农科院青年基金项目 (12B0617) ； 国家蚕桑产业技术体系项目 (CARS-22-SYZ09) ； 安徽省农科院创Байду номын сангаас团队项目 (11C0610)。 作者简介：李瑞雪(1982—)，女，山东济宁人，硕士，助理研究员，主要从事生物活性物质及桑树育种的研究工作。
蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)又名蝉棒 束孢霉(Isaria cicadae)，是我国传统中药材蝉花 (Cordyceps sobolifera)的无性型菌株。蝉拟青霉的 人工发酵菌丝体具有抗辐射、抗惊厥、镇静、镇 痛和解热作用 [1-2] ，而且蝉拟青霉对机体的毒性
甚微，具有很好的医疗保健应用前景。其主要化 学成分与天然冬虫夏草相似，有虫草多糖、甘露 醇、麦角甾醇、腺苷、氨基酸、必需氨基酸和不 饱和脂肪酸等[3-4]。 虫草素是虫草属多种真菌产生的一种重要的
利用正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺
ｔｅ ｎ ｏ ｏｐ ｍｉ ｅｄ ｃｈ ｏｌ ｇｙ ｔｉ ｚ ｂｙ ｏｒ ｏｇ ｎａ ｄ ｔｈ ｏ ｌ ｅｓｉ ｃ ｓ ｏ ｅｎ ｒ ｅｓ ｎ ｔｉ ａ ｉ ｒ ｅ ｈ ｙ ｅｌ ｇｎ ａｎ ｈ ｒｔ ｐ ｏｃ ｓｉ ｇ ｍｅ ｎｄ ｍｐ ｏｖ ｔ ｅ ｉ ｄ．
■—啊
ｐ ｃｏ ｃ ｉ ｄ ａ ｐ ｙｃ ａ ｄ；ｒ。 ｎ ｅ ；ｘ ａ ｉ ａ ｉｍ ｅ ｃ ａ ｄ ；ｏ ｓ ｃ ｒ ｅ 。 ｈ 。 ｌ ｓ ｅ ｒ ｔｎ ｅ ｌ Ｙ ｓ ｃ ｉｅ ｌ ａ ｈ ｉ ｔｇａｔｔ ｔｃ。
转移 至 １ ｌ 量瓶 定 容 ，即得 ３ １ ｇ ｍ 的标 ０ｍ 容 ２ ． ｌ
药 理活性 研 究表明 蝉拟 青霉总 多糖具 有免 疫调 节 、抗 氧化 作 用 ＿ 。而鉴 于 目前 所使 用 的 室温 水 ｌ ＿
准 品溶 液 。 吸取标 准品溶液 ０（ 零用 ） １ 、 ０、０、 调 、０ ２ ４
圈圈＿
Ｏ ｅ ｉ ： ｔ ｙ ｈ 。 ｉ ｌ 。 ｉ 。 。 ｔｅ ｐｉ ｚ ｉ ｆｅｔ ｃｉ ｂ ｃ ｖ Ｔ ｕ ｅ ｐ ｍ ｎ ｔ ｎ ｆｒ ｈ 。ｔ ｉ ｔ ｎ。 ｘ ａ 。 ｄ ｔ ｅ 。ｓ ｄ ｔ ｔ ａ ｃ ｄ ｉ ｓ ｍａ。 ｒｔｎ
ｔｅ ｃｈｎｉ ｑｕｅ ｏｆ ｐｏ ｌｙｓ ｃｃｈ ｒｉｄ ｆｒｏ ｐ ｃｉｌ ｍｙｃ Ｃｉ ｄａ Ｍｅｔ ａ ａ ｅ ｍ ａｅ ｏ ｅＳ ｃａ ｅ． ｈｏｄ： Ｔ ｅｘ ａｃ ｏｎ ｒｏ ｈｅ ｔｒ ｔｉ ｐ ｃｅＳ ｗａｓ Ｓ ｓ ｄｉ ｄ ｂｙ ｔｕ ｅ ｏｒ ｈｏ ｏ ｔ ｇ ｎａｌ ｅｓ ｇ ｗ ｈ ｔｈ ｅ ｔｒ ｔ ｄ ｉ ｎ ｉｔ ｅ ｘ ａｃ ｙｉ ｄ ｆ ｏｌ ａ ｃｈ ｒｉ ｅ ｒ ｍ ｅｃ ｌｏ ｅｌ ｏ ｐ ｙｓ ｃ ａ ｄ ｆ ｏ ｐａ ｉ ｍｙｃ ｓ ｉ ｄ ｅ ｃ ｃａ ａｅ ａｓ ｅ ｃ ｖ ｍａ ｋｅ ｄ ｔｅ ｔｉ ｅ ｒ ｒ． Ｒｅｓ ｔ ｕｌ ｓ： Ａ１ Ｃ１ ３ Ｂ３ Ｄ ｉＳ ｔｈ ｂ ｔ ｒｏ ｓｓ ｎｇ ｅ ｅｓ ｐ ｃｅ ｉ ｃｏ ｉｔ ｏｎ ｗ ｃ ｉ ａｓ ｏｌ ｗｓ： ｎｄ ｉ ｓ． ｈｉ ｈ Ｓ ｆ ｌｏ ｈ ｔｉ ｔ ｅ ｅａ ｎｇ ｈ ｅｘ ａｃ ｆｏ ２． ｈ ｒｓ ｎ ｔｒ ｔｓ ｒ ５ ｏｕ ｉ ５０℃ ａｎ ｐ ｗｉ ｈ ％ ｐ ａｉ ｄ Ｈ７ ｔ １ ａｐ ｎ． Ｃｏ ｎｃｌ ｉ ｕｓ ｏｎ： ｈｅ ｒｏ ｅｓｓ ｎｇ Ｔ ｐ ｃ ｉ
蝉拟青霉多糖醇沉淀研究
蝉拟青霉多糖醇沉淀研究作者：刘芸，任慧婧，胡美忠，莫正昌来源：《河南农业·综合版》 2015年第6期铜仁职业技术学院刘芸任慧婧胡美忠莫正昌摘要：为进一步对蝉拟青霉多糖醇沉淀工艺进行研究，对提取时间、醇沉浓度、浓缩倍数等提取工艺影响因素分别做了探讨，并通过正交实验得出了较优化提取工艺路线。
结果表明，醇沉时间为60 h，醇沉浓度为70%，浓缩倍数为3倍时进行醇沉试验最佳。
关键词：蝉拟青霉多糖；醇沉淀；影响因素一、材料与设备（一）主要试剂乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇等，均购自重庆川江化学试剂厂。
（二）实验主要仪器旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；酒精计（河间市景和宏利玻仪厂）；电子天平JA2003（上海天平仪器厂）；可见分光光度计WFJ1200型（尤尼柯（上海）仪器有限公司）；恒温水浴锅H-S2s型（金坛市环保仪器厂）；低速离心机LD4-2型（北京医用离心机厂）；微量移液器WKY型100-500μl（上海求精生化试剂仪器有限公司）；超声波清洗机（宁波海曙达盛仪器厂）。
（三）供试品制备方法酶法提取的多糖溶液：准确称取经过预处理过的干燥菌丝体粉末，加入10倍体积的蒸馏水。
再加入1.0%的木瓜蛋白酶，在pH为6、50℃下加热2 h。
经酶灭活处理。
将提取液以3 000 r/min的速度离心15 min，取上清液。
二、试验与方法将经干燥恒重的葡萄糖99.5 mg转移至100 mL容量瓶定容后，吸取6 mL移至50 mL容量瓶定容，即得0.1 194 mg/mL的标准品溶液。
分别吸取2.5 mL、7.5 mL、12.5 mL、17.5 mL、22.5 mL、25 mL分别置于25 mL容量瓶中，再分别加1 mL5%苯酚、5 mL浓硫酸，迅速摇匀后于室温放置5 min置沸水浴中加热20 min迅速冷却至室温，于485 nm处以蒸馏水为空白测吸光度。
以葡萄糖浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，并计算出回归方程。
正交设计优选蛹草拟青霉中虫草素和虫草多糖的提取工艺
正交设计优选蛹草拟青霉中虫草素和虫草多糖的提取工艺黄婷婷;马云淑;阳丹;王维丽;谭麒冉【摘要】目的：采用正交设计优化蛹草拟青霉菌丝体中虫草素和虫草多糖的提取工艺。
方法：建立高效液相色谱测定指标成分虫草素含量的方法，采用正交试验法考察醇浓度、加醇量、提取次数与时间的组合3个因素对虫草素乙醇提取率的影响。
醇提后残渣以水提取多糖，采用苯酚-浓硫酸比色法在490 nm 处测定虫草多糖的含量，以单因素法筛选多糖提取工艺。
结果：HPLC 色谱条件下精密度的RSD 为0.30％，稳定性的 RSD 为1.27％，重复性的RSD 为2.93％。
以乙醇浓度为90％，加醇量为10倍量，提取3次，每次1 h 虫草素的提取率最高；而以乙醇浓度为95％，加醇量为6倍量，提取3次，每次1 h 提取虫草素后的残渣再以水提取，虫草多糖得率最高。
结论：所优化的提取工艺虫草素和虫草多糖提取率均较高，采用的含量测定方法稳定可靠。
%Objective:To optimize the extraction processes of cordycepin and cordycepic polysaccharides from mycelia of Paecilomyces militaris by using Orthogonal design.Methods:A HPLC method was established to determine the content of cordycepin which was taken as indexes,and orthogonal test method was used to investigate three factors of alcohol concentration,alcohol volume ratio,and the combination of extraction times with time to influence on the extraction efficiency of cordycepin.Detection was performed at wavelength of 260 nm.The column temperature was 30 ℃ and the injection volume was 1 0 μL.After extracted by alcohol,the residue of mycelia was dealt with water to extracted cordycepic polysaccharides, and colorimetric method by using phenol—concentrated sulfuric acid as chromogenic agent was usedto determine the content of cordycepic polysaccharides in the extract under 490 nm.Results:Under the condition of HPLC,the precision of RSD was 0.30%,the stability of RSD was 1 .27% and the RSD of reproducibility was 2.93%.The results showed the extract ratio of cordycepin was the highest with the process parameters of 90% alcohol,1 0 times of alcohol volume ratio,3 times with 1 h for every time.And the water extract ratio of Cordyceps polysaccharide in the mycelia residue was the highest after cordycepin was extracted from mycelia with 95% alcohol,6 times of alcohol volume ratio,3 times,with 1 h each time.Conclusion:The extraction efficiency of cordycepin and Cordyceps Polysaccharide was high under the optimum process,and the methods of the content determination were stabile and reliable.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2016(018)002【总页数】5页(P203-207)【关键词】蛹草拟青霉菌丝体;正交试验;虫草素;虫草多糖;高效液相色谱法【作者】黄婷婷;马云淑;阳丹;王维丽;谭麒冉【作者单位】云南中医学院药学院，云南昆明 650500;云南中医学院药学院，云南昆明 650500;云南中医学院药学院，云南昆明 650500;云南中医学院药学院，云南昆明 650500;云南中医学院药学院，云南昆明 650500【正文语种】中文蛹草拟青霉(Paecilomyces mil itaris Liang sp.nov.)是从蛹虫草Cordyceps milltaris(ex Fr)Link中分离而得的一种真菌，现多用作蛹虫草的代用品。
蝉拟青霉多糖的纯化工艺
器 ３ ０ ． ０ ０ ％
２ ５ ． ｏ ｏ ％
用标准 曲线计算多糖含量。
６ 、蛋 白质 标 准 曲线 （ 见６ ０ 页 图 ２ ） 。用 紫外一 可见 分光光 度计 ，在 ５ ９ ５
２ ０ ． ０ ０ ％
ｎ ｍ波长处测 定样 品溶液 吸光度 ，建 立
蛋 白质 标 准 曲线 回归方 程 。 线 性 回 归 方 程 式 Ｙ ＝ ０ ． ０ ０ ７ ８ ｘ ＋
１ １ １
Ｏ Ｏ Ｏ ０
透析袋 （ 截流分 子量 １ ． ４ 万 ，北 京经科
宏达生物技术 有限公司） ；考马斯亮蓝
一
式 中 ：０ Ｄ 为吸 附前溶 液 的吸光
度；
ｇ ２ ５ ０ （ Ａ Ｒ，中国 医药集 团上 海化 学试
剂公司） ；大孔吸附树脂Ａ Ｂ 一 ８（ 天津市 兴复精细化 工研究所） ；大孔吸附树脂 Ｄ１ ０ １（ 天津市兴 复精 细化工 研究所 ） ； 大 孔吸 附树脂 Ｎ Ｋ Ａ （ 天 津南 开大 学化
蝉拟青霉多糖 的纯化工艺
铜仁职 业技术学院药学院 刘
贵州理工大学
摘
芸
贵州大学生命科学学 院 谭艾娟
王珂佳
黄
锴
贵州轻工业职业技术学院
要 ： 以多糖含量为指标 ，对除蛋 白、脱 色、透析纯化 工艺参数进行优化 ，以期提 高蝉拟青霉 多糖的纯化 工艺水平 。结果显 示：以木
瓜蛋白酶提取 液，Ｓ ｅ ｖ ａ ｇ法脱蛋 白２次基本 除蛋 白完全 ；ＡＢ 一 ８型大孔吸 附树脂纯化效果最好，在 ｐ Ｈ为 ７ 、温度 ２ ５ ｑ Ｃ、４ ｍｇ ／ ｍＬ上样液 浓度 、 ２ ｍＬ ／ ｍｉ ｎ上样速度 ；透析 时间为 ７ ２ ｈ的纯化条件下，纯化 效果 最好 。
酶法提取蝉拟青霉多糖的研究
（． ｌｅ ｅｏ ｉｅＳ ｉｎ ｅ Ｇｕｚ ｏ ｉｅｓｔ Ｇｕｙ ｎ ， ｉｈ ｕ５ ０ ２ Ｃｈｎ ２Ｃ ｌ ｇ ｆＡｎｍａ ｃｅ ｃ ｓ Ｇｕｚ ｏ ｉｅｓｔ， ｉａ ｇ Ｇｕｚ ｏ １Ｃｏｌｇ ｆＬ ｆ ｃｅ ｃ ｓ， ｉｈ ｕ Ｕｎｖ ｒｉ ｙ， ｉａ ｇ Ｇｕｚ ｏ ５ ０ ５， ｉａ； ．ｏｌ ｅｏ ｉ ｌＳ ｉｎ ｅ ， ｉｈ ｕＵｎｖ ｒｉ Ｇｕｙ ｎ ， ｉｈ ｕ ｅ ｙ
５ ０ ２ Ｃ ｉａ ５０ ５， ｈｎ）
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｅｆ ｃｓｏ ａ ａｎ ｃ ｌ ｌｓ ｎ ｅ ｔｓ ｎ ｅ ｔ ｃ ｉｎ ｒ ｔ ｆｐ ｌｓ ｃ ｈ ｒ ｅｆｏ Ｐ ｅ ｉ ｍｙ ｅｗ ｒ ｅ ｅ ｍｉ ｅ ｒ ｏ ｏ ａ ｓ ｒ ｃ ： ｆ ｔ ｆ ｐ ｉ ， ｅ ｌ ａ ｅａ ｄ ｐ ｃａ ｅｏ ｘｒ ｔ ａｅ ｏ ｏｙ ａ ｃ ａ ｉ ｒ ｍ ａ ｃ ｌ ｃ ｅ ｅ ｄ ｔｒ ｎ ｄ ｉ ｏ ｔ ｇ ｎ ｌ ｅ ｐ ｕ ａ ｏ ｄ ｏ ｎ ｈ ｔｓ． ｈ ｅ ｕ ｔ ｓ ｏ ｅ ｈ ｔ ｈ ｏｙ ａ ｃ ａ ｉｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ｘｒ ｃ ｅ ｙ ｐ ｐ ｉ ｓｔ ｅ ｈ ｇ ｅ ｔａ ｎ ｈ ｅ ｎ ｙ — ｘｒ ｃ ｉｎ ｍｅｈ ｄ ｅ ｔ Ｔ ｅ ｒ ｓ ｌｓ ｈ ｗ ｄ ｔ ａ ｅ ｐ ｌ ｓ ｃ ｈ ｒｄ ｏ ｔｎ ｔ ｔ ｄ ｂ ａ ａｎ ｗａ ｈ ｉｈ ｓ ｍｏ ｇ ｔ ｒ ｅ ｅ ｚ ｍｅ ｅ ｔ ｔ ｔ ｏ ， ｔ ｅ ａ ａ ｏ
摘
要 ： 正交优化的方法分别研究木瓜蛋 白酶 、 用 纤维 素酶 、 果胶酶对蝉拟青霉多糖得率 的影 响。结 果表明 ， 木瓜蛋 白酶法提
正交实验法超声提取灵芝多糖最佳工艺研究
正交实验法超声提取灵芝多糖最佳工艺研究
胡斌杰 ,韩艳霞 ,姬 红 (开封大学化学工程学院 ,河南开封 475004)
摘要 本研究利用超声波法及正交实验法对灵芝多糖的提取工艺进行了研究 。实验结果表明 ,超声波能显著 提高灵芝多糖的提取含量 ,最佳提取条件为 :药材粒度为 20目 ,提取温度为 55℃,超声处理时间为 20 m in,料液比 为 1∶20。多糖的最高提取含量比热水法 、稀酸法 、稀碱法分别提高了 36117%、45145%、39113%。
关键词 灵芝多糖 ;正交实验 ;超声提取 ;含量测定 中图分类号 : R28412 文献标识码 : A 文章编号 : 100124454 (2008) 0120142202
灵 芝 Ganoderm a lucid ium ( Leyssl1 ex Fr1 ) Ka rst,为担子菌纲 多 孔 菌 科 灵 芝 属 真 菌 〔1〕。《本 草 纲目 》中称灵芝“甘温无毒 , 主治耳聋 , 利关节 , 保 神 ,益精气 ,坚筋骨 ,好颜色 ,疗虚劳 ,治痔 ”。灵芝 多糖 ( Ganoderm a lucid ium Polysaccharide)是灵芝的 主要有效成分之一 ,具有多种药理学活性〔2〕。传统 的灵芝多糖提取方法耗时长 ,而且提取率较低 。目 前 ,超声技术在植物多糖的提取中已越来越引起人 们的重视 ,超声提取方法具有高回收率 、加热快速 、 控温容易等优点 。利用该方法提取灵芝多糖 ,操作 方法简单 、节能 ,为提取灵芝多糖的一个可行方法 。 本研究采用正交实验探讨了不同粒度 、提取温度 、超
多糖含量 = C·D ·F ×100% W
C:供试液中葡萄糖浓度 (mg /m l) ; D:供试液中的稀释因 数 ; F:换算因素 ; W :供试样品重量 ( g)
正交法优化陈皮多糖提取工艺及其体外抗氧化活性研究
Advances in Analytical Chemistry 分析化学进展, 2023, 13(3), 262-270 Published Online August 2023 in Hans. https:///journal/aac https:///10.12677/aac.2023.133030正交法优化陈皮多糖提取工艺及其 体外抗氧化活性研究王俊青，宁雅琴，王晴晴，冯晓敏，徐紫怡，周海嫔*滁州学院材料与化学工程学院，安徽 滁州收稿日期：2023年6月28日；录用日期：2023年7月19日；发布日期：2023年7月31日摘 要目的：探究陈皮多糖提取率的影响因素，优化多糖的提取工艺条件，评价多糖的体外抗氧化活性。
方法：以料液比、超声时间、超声温度为条件进行单因素试验，并进行正交试验优化提取条件；利用对DPPH 自由基和羟基自由基的清除率进行陈皮多糖的体外抗氧化研究。
结果：提取工艺最佳条件为超声时间30 min ，料液比1:40，超声温度70℃，提取率为22.32%。
结论：正交试验优选了陈皮多糖的最佳提取工艺，体外抗氧化研究验证了陈皮多糖具有抗氧化活性且呈现出较好的量效关系。
本研究为陈皮的进一步开发利用提供了依据。
关键词陈皮，多糖，单因素考察，正交法，体外抗氧化Optimization of Extraction Process and Antioxidant Activity of Tangerine Peel Polysaccharide by Orthogonal MethodJunqing Wang, Yaqin Ning, Qingqing Wang, Xiaomin Feng, Ziyi Xu, Haipin Zhou *School of Materials and Chemical Engineering, Chuzhou University, Chuzhou AnhuiReceived: Jun. 28th , 2023; accepted: Jul. 19th , 2023; published: Jul. 31st , 2023AbstractObjective: To explore the factors affecting the extraction rate of Tangerine peel polysaccharide,*通讯作者。
蝉拟青霉深层发酵的研究
蝉拟青霉深层发酵的研究李忠;刘爱英;金道超【摘要】为了筛选到蝉拟青霉优良的培养基及摇瓶发酵条件,通过对碳、氮源筛选的单因素实验,筛选出葡萄糖为碳源、蛋白胨为氮源;在此基础上以筛选的碳源、氮源及无机盐K2HPO4,MgSO4·7H2O为考察因素,以菌丝体生物量为指标,利用正交实验筛选出生物量较高的培养基组合.结果表明,最优培养基按质量分数为葡萄糖3%,蛋白胨1.5%,K2HPO4 0.1%,MgSO4·7H2O 0.05%.适宜的摇瓶发酵条件为培养温度25～27 ℃,培养基起始pH 6～7,接种量6%,摇床转速为150 r/min,500 mL三角瓶最适装液量为100 mL,发酵周期为7 d.【期刊名称】《河北大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(030)006【总页数】6页(P682-687)【关键词】蝉拟青霉;深层发酵;培养基优化;培养条件【作者】李忠;刘爱英;金道超【作者单位】贵州大学,农学院,贵州,贵阳,550025;贵州大学,贵州山地农业病虫害重点实验室,贵州,贵阳,550025;贵州大学,真菌资源研究所,贵州,贵阳,550025;贵州大学,贵州山地农业病虫害重点实验室,贵州,贵阳,550025【正文语种】中文【中图分类】Q946蝉拟青霉Paecilomycescicadae(M iquel)Sam son是麦角菌科(Clavicipitaceae)真菌蝉棒束孢菌及其寄主山蝉幼虫的干燥复合体,又称蝉花P.cicadae,是一种传统的药用真菌.蝉花性寒味甘,具散风热、定惊、镇痛解痉等功效[1].据《中药大辞典》中记载,蝉拟青霉含有糖原、甘露醇、生物碱及麦角甾醇等多种活性物[2].陈祝安[3]、刘广玉[4]等证明蝉拟青霉及人工培养物有明显的镇痛、镇静和解热等功效,且其作用与天然蝉花和冬虫夏草(Cordycepssinensis)十分相似,而且蝉拟青霉对机体的毒性甚微[5],其主要化学成分与天然冬虫夏草相似[6].蝉拟青霉P.cicadae是不仅具有药理活性,还具有极为广谱、较强致病性的虫生真菌,可以寄生鳞翅目(Lep idop tera)、膜翅目(Hym enop tera)中的很多昆虫[7-9],对蚜虫、粉虱等刺吸式口器害虫的致病性也有报道[10-13].目前蝉花的使用中存在着资源有限、人工采集困难,功能活性组分不明、作用机制不清楚,甚至原料不纯等问题,这就成为蝉花这种传统中药走向世界的一个很大障碍[1].由于天然蝉花资源有限,为解决这个矛盾,人们便开始了用分离自蝉花的蝉拟青霉P.cicadae进行人工发酵的方法来生产其菌丝体,可较好地解决天然蝉花资源短缺的问题.为此,十分有必要对蝉拟青霉的发酵工艺进行研究,以便于用发酵的菌丝体替代子实体作为保健品、药品的原料或生产杀虫制剂等.1.1 菌种蝉拟青霉(P.cicadae)LB菌株,采自贵州省茂兰自然保护区,现保存于贵州大学植保科学实验室.1.2 培养方法1.2.1 菌种活化将保存菌种用接种针接入斜面培养基上,25℃恒温培养7 d.1.2.2 液体培养方法从活化斜面菌种中挑取3～4块大小相同的菌块接入装有100 m L PDA液体培养基的三角瓶(500 m L)中,26℃,120 r/min,培养3 d得一级菌种.将一级菌种按10%(V/V)的接种量接入盛有90 m L供试培养基(500 m L三角瓶)中,自然p H 值,26℃,120 r/m in,培养7 d后收集菌丝体.1.3 碳源筛选培养基以质量分数酵母膏1%,K2HPO40.2%,M gSO4·7H2O 0.1%为基本培养基,p H自然.分别以葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖为碳源,添加量均为3%.1.4 氮源筛选培养基以质量分数葡萄糖3%,K2HPO40.2%,M gSO4·7H2O 0.1%为基本培养基,p H自然.分别以酵母膏,牛肉膏,蛋白胨,NH4NO3,(NH4)2SO4,NaNO3为氮源,添加量均为1%.1.5 培养基正交筛选实验根据1.3和1.4中碳、氮源单因素实验结果,选择最好的碳、氮源各1个,再配以K2HPO4,M gSO4的不同浓度,按L9(34)设计4因素3水平正交实验,9个组合,3次重复.因素水平见表1.1.6 菌丝干重的测定发酵结束后,将发酵液用4层纱布过滤后,菌丝体经蒸馏水冲洗3次后,在45℃的条件下烘干至恒重,电子天平称菌丝体干重.1.7 数据处理实验数据均用平均值表示,用SPSS13.0软件进行统计分析.2.1 培养基成分对菌丝生物量的影响2.1.1 碳源的筛选由表2结果可知,以葡萄糖作碳源的培养基中,菌丝体生物量最高,为20.48 g/L,其次是蔗糖、麦芽糖和果糖,以乳糖作碳源时生物量最小,其中葡萄糖与蔗糖对菌丝生物量的影响差异未达到极显著水平,而与其他各种碳源之间菌丝生物量差异达到极显著水平.因此以下实验选用葡萄糖为碳源.2.1.2 氮源的筛选由表2结果可知,不同的氮源对蝉拟青霉菌丝生物量的影响顺序依次是:蛋白胨>酵母膏>牛肉膏>硫酸铵>硝酸钠,有机氮源明显优于无机氮源,铵态氮优于硝态氮.其中蛋白胨与其他各种氮源对菌丝生物量的影响差异达到极显著水平,即以蛋白胨作为氮源效果最好(22.86 g/L),其次是酵母膏,因此下面正交实验选用蛋白胨为氮源. 2.1.3 培养基成分综合实验选用葡萄糖作为碳源,蛋白胨作为氮源,K2HPO4和M gSO4作为无机盐,进行L9(34)正交实验(表3).实验结果表明,葡萄糖的极差最大,是影响发酵菌丝体生物量的主要因素,其次是蛋白胨,K2HPO4的极差最小,各因素对菌丝产量影响的主次顺序为A>B>D>C.从发酵菌丝体生物量来考察各因素水平值,A可取A2,B可取B3,C可取C1,D可取D2,最佳培养基组合为A2B3C1D2,即以菌丝生物量来考察,选定最适合培养基的组合为葡萄糖3%(质量分数,下同),蛋白胨1.5%,磷酸氢二钾0.1%,硫酸镁0.2%.2.2 培养条件对菌丝生物量的影响以筛选出的培养基(质量分数葡萄糖3%,蛋白胨1.5%,磷酸氢二钾0.1%,硫酸镁0.2%)来进行如下实验.2.2.1 温度对菌丝生物量的影响500 m L三角瓶装100 m L培养液,接种量10%,转速120 r/min,置于21,23,25,27,29℃下接种培养,7 d后测定培养温度对菌丝生物量的影响.结果如图1所示,21～25℃,菌丝体生物量随温度升高而增加,25℃时菌丝生物量达到最大(22.90 g/L),与27℃菌丝体生物量(22.61 g/L)差异不显著.当温度超过27℃菌丝体生物量逐渐下降,表明25～27℃为适宜培养温度.2.2.2 初始p H值对菌丝生物量的影响500 m L三角瓶装100 m L培养液,接种量10%,转速120 r/min,将p H值分别调为4～10进行实验,25℃下培养7 d后,结果如图2所示.由图2可知,在p H 6时菌丝产量最高,达到22.51 g/L,但与p H 7菌丝生物量差异不显著,若提高p H,则菌丝生物量会很快下降,因此应选择初始p H为6～7,一般选择自然即可.2.2.3 瓶装量对菌丝生物量的影响500 mL三角瓶中分别装入100,150,200,250 mL培养液,接种量10%,转速120 r/min,25℃下培养7 d后,结果如图3.图3显示,装液量为100 m L时,发酵菌丝体的菌丝干重最高,达到22.53 g/L.因此选用500 m L三角瓶装100 m L液体培养液为好.2.2.4 摇床转速对菌丝生物量的影响选择10%接种量,分别选取100,125,150,175,200 r/min转速,25℃振荡培养7 d.从图4可知,转速增加,通气量增大,溶解氧增多,菌丝生长量增多,菌丝球直径变小.当转速达到200 r/min时,菌丝生长量最大(23.5 g/L);其次是150 r/min,但二者无差异,除了175 r/min外,与其他差异显著.综合菌丝生长和菌丝球直径大小2个因素的关系,振荡转速以150 r/min为宜.2.2.5 接种量对菌丝生物量的影响500 m L三角瓶装100 m L培养液,温度25℃,转速150 r/min,选择接种量分别为2%,4%,6%,8%,10%,12%,14%,16%进行实验,结果见图5.7 d后各处理菌丝生物量在接种量为2%～8%时,随着接种量的增加菌丝生物量逐渐增加,当接种量为8%时,菌丝生物量为23.03 g/L,达到最高,但与6%,10%接种量差异不显著,考虑到工业化大规模生产的实际,可以选择6%的接种量.2.2.6 培养时间对菌丝生物量的影响在500 mL摇瓶中,采用上述已确定的最佳发酵条件进行发酵实验,以确定最适发酵周期,选择培养时间分别为3,4,5,6,7,8,9,10 d进行实验,结果见图6.在发酵过程中,随着培养时间的延长,菌丝生物量逐渐增加,到第8天菌丝生物量为22.6 g/L,达到最大,但与第7天菌丝生物量无差异.此后若再继续培养,则因溶氧量降低,菌体老化自溶,导致菌丝生物量有所下降.影响微生物生长的因子很多,本文初步探讨了C源、N源、无机盐以及液体培养参数对蝉拟青霉菌丝生长的影响.研究结果表明,蝉拟青霉对供试碳源都有不同程度的利用,但葡萄糖和蔗糖较为理想.菌丝体能利用有机氮和铵态氮,有机氮比无机氮更利于菌丝生长.蝉拟青霉液体发酵研究表明,25～27℃为最适温度段;该菌对p H值要求不高,在初始p H 6～7内生长最快;发酵过程中通气状况对菌丝的生长状况影响很大,而装液量的多少直接影响培养基的通气状况.若装液量过大则影响通气,菌丝缺氧而生长缓慢,通气过多(装液量少),菌体过度生长,反而影响菌球数量,使菌球干重减少.实验表明,当装液量为500 m L三角瓶装100 m L时菌丝干重达到最高;考察菌丝生物量,培养7 d即可终止发酵,但若要考察其他代谢产物,还需要进一步研究.本实验是摇瓶研究结果,对小规模的发酵生产有指导作用,为大规模发酵生产的研究提供参考,但对于在工厂化生产中的应用有待进一步研究.【相关文献】[1]王琪,刘作易.药用真菌蝉花的研究进展[J].中草药,2004,34(4):469-471.[2]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社,1999:2557.[3]陈祝安.蝉花的人工培养及其药理作用研究[J].真菌学报,1993,12(2):138-144.[4]刘广玉,胡菽英.天然蝉花和人工培养品镇静镇痛作用的比较[J].现代应用药学,1991,8(2):5-8.[5]陈万群,陈古荣.冬虫夏草代用品研究进展[J].中草药,1994,25(5):269-271.[6]俞滢,顾蕾,陈启琪,等.蝉花的化学成分分析[J].杭州师范学院学报,1997(6):61-66.[7]邓淑群.中国的真菌[M].北京:科学出版社,1963.[8]陈祝安.虫生真菌蝉拟青霉的研究[J].真菌学报,1991,10(4):280-287.[9]KA TSUH IKO,YAGINUMA.PaecilomycescicadaeSam son isolated from soil and cicada and its virulence to the peach fruit mothCarposinasasakiiMatsumura[J].Japanese Journalof App lied Entomology and Zoology,2002,46(4):225-231.[10]张永军,刘爱英,梁宗琦.紫外线对蝉拟青霉原生质体的诱变效果[J].贵州农业科学,1998,26(6):1-3.[11]邹晓,刘爱英,梁宗琦.紫外线诱变蝉拟青霉对白粉虱致病性的影响[J].菌物研究,2004,2(4):35-39.[12]赵杰宏,韩洁,邹晓,等.蝉拟青霉异核体菌株和亲本菌株对蚜虫致病力的研究[J].莱阳农学院学报:自然科学版,2006,23(4):276-279.[13]李忠,金道超,邹晓,等.蝉拟青霉不同来源菌株的生长特性及对蚜虫的致病性[J].植物保护学报,2007,34(6):637-641.。
蝉花多糖超声波辅助提取工艺的优化
收稿日期院圆园员员原员员原员源 基金项目院九江学院大学生创新性实验项目渊九院字咱圆园员园暂员源 号原源圆冤曰江西省科技支撑计划项目渊2012ZBBF60128冤 作者简介院余文娟渊员怨怨园原冤袁女袁江西武宁人袁在读本科生袁研究方向为生物技术袁渊电话冤员缘圆苑园员怨圆缘园猿渊电子信箱冤缘怨圆员愿苑圆远员岳择择援糟燥皂曰
再哉 宰藻灶原躁怎葬灶袁载哉 酝蚤灶早原皂蚤灶袁孕粤晕 蕴蚤原澡怎蚤袁云粤晕 再燥怎原枣怎袁悦匀耘晕 再藻 渊悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻袁 允蚤怎躁蚤葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 允蚤怎躁蚤葬灶早 猿猿圆园园园袁 允蚤葬灶早曾蚤袁 悦澡蚤灶葬冤
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正交试验优化红豆杉硒多糖的提取
正交试验优化红豆杉硒多糖的提取商龙臣;李琴;张驰【摘要】以恩施高硒地区的珍贵药用植物红豆杉为研究对象,以料液比、水浴浸提时间以及微波处理时间为试验因素设计正交试验,优化了红豆杉硒多糖的提取分离纯化工艺.通过硫酸苯酚法测定红豆杉中硒多糖的含量,采用原子荧光法测定硒多糖中硒的含量,并以SPSS统计软件对正交试验结果进行处理和分析.结果表明,3因素对硒多糖提取率影响大小为料液比＞微波处理时间＞水提时间,且红豆杉中硒多糖的最佳提取条件为料液比1∶80(W/V)、水浴浸提时间30 min、微波处理时间5 min.在此条件下,测得红豆杉中硒多糖含量为1.96％,硒多糖中硒含量为0.0555 μg/g.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2014(041)024【总页数】4页(P95-98)【关键词】红豆杉;硒多糖;提取分离;正交优化【作者】商龙臣;李琴;张驰【作者单位】湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;湖北民族学院生物资源保护与利用湖北省重点实验室,湖北恩施445000【正文语种】中文【中图分类】S791.493;Q539研究表明，多糖具有免疫调节作用、抗肿瘤生物学效应以及抗衰老、降血糖等作用[1]，硒具有抗氧化衰老、提高机体免疫力、抗癌防癌等生物学活性[2]。
而作为一种有机硒化合物，硒多糖兼有多糖和硒的生物活性，不仅如此，与单纯的硒或多糖相比，硒多糖的生物活性远远优于二者，且更容易被生物体吸收利用[3-4]。
但由于硒在地壳中的含量相当稀少且分布较分散，红豆杉资源也极其稀缺，并且红豆杉中硒含量较低，因此对于红豆杉中硒多糖的研究并不是很多。
本试验以微波处理样品，提取效率高、时间短、能耗低，并通过正交试验进行优化，为提高红豆杉硒多糖提取率提供实践依据，也可以为含硒多糖保健品的生产提供新的途径，从而为充分利用恩施药用植物资源提供理论支持。
正交试验优选灵芝多糖的提取工艺
正交试验优选灵芝多糖的提取工艺陈乃东;陈琼;何健【摘要】[目的]对灵芝多糖的提取工艺进行优选.[方法]将灵芝在50℃条件下干燥恒重,过40目筛,用无水乙醇对灵芝干粉进行脱脂预处理,脱脂完毕风干后在不同的料液比、温度、提取时间的条件下进行单因素试验,并在单因素试验的基础上进行正交试验获得最佳提取工艺.[结果]灵芝多糖的最佳提取工艺为:料液比1∶20(W/V,g/ml,下同),提取时间为3h,提取温度为90℃；在此条件下,灵芝多糖得率可达1.61％.[结论]该方法优选了灵芝多糖的提取工艺条件,为灵芝多糖的进一步开发利用提供了依据.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(041)019【总页数】3页(P8146-8148)【关键词】灵芝(GANODERMA);多糖;正交试验【作者】陈乃东;陈琼;何健【作者单位】皖西学院生物与制药工程学院,安徽六安237012;皖西中药与天然药物工程技术研究中心,安徽六安237012;皖西学院生物与制药工程学院,安徽六安237012;皖西学院生物与制药工程学院,安徽六安237012【正文语种】中文【中图分类】S567.3+1灵芝(GANODERMA)是多孔菌科真菌赤芝［Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.］或紫芝［Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang］的干燥子实体［1－2］，全国大部分地区均有分布，多生于栎树及其他阔叶树的腐木上。
商品用灵芝大多为人工培养，全年采收，除去杂质，剪除附有朽木、泥沙或培养基质的下端菌柄，阴干，然后在40～50℃烘干［3］。
灵芝首载于东汉时期我国最早的本草学专著《农本草经》，历代医家都认为灵芝能治疗多种疾病，故将其列为上品［4］。
灵芝多糖为灵芝的主要成分之一，微溶于水，在热水中溶解度较大，不溶于乙醇等有机溶剂。
灵芝味甘性平，归心、肺、肝、肾经，能补气安神、止咳平喘。
均匀设计与正交设计联用优选香菇多糖的微波辅助提取工艺研究_蔡锦源
为 9.37%，且微波辅助提取法提取的香菇多糖抗氧化活性也比热水浸提法高。
关键词：均匀设计；正交设计；香菇多糖；微波辅助提取；抗氧化活性
中图分类号：TS201.1
文献标志码：B
0 引言
均匀设计与正交设计联用方法可以克服两种 试验设计方法单独使用时的局限性， 能在复杂的 试验因素与水平下尽快找到最佳试验条件组合， 已 应 用 于 药 学 实 验 [1]、 铁 皮 石 斛 多 糖 提 取 [2] 和 银 杏 复 方 配 比 [3]等 最 佳 工 艺 的 筛 选 。 多 糖 是 一 类 由 20 个 以 上 的 醛 糖（或 酮 糖）通 过 糖 苷 键 链 接 在 一 起 的 聚 合物，作为四大生命物质之一，在维持机体各项生 命 活 动 方 面 发 挥 着 重 要 的 作 用 [4]。 香 菇 多 糖 是 香 菇 子实体细胞壁的结构成分，具有抗氧化[5]、抗菌[ 6 ] 、 调 节 免 疫 [7]、 抗 病 毒 [8]、 抗 衰 老 [9]、 降 血 糖 以 [10] 及 抗 肿 瘤 等 [11-12] 多种生物活性。作为香菇主要有效成分的 香菇多糖是一种重要的生物反应调节剂， 可通过 刺激免疫细胞成熟、分化和增殖，改善宿主机体平 衡，达到恢复和提高宿主细胞对淋巴因子、激素和 其他生理活性因子的反应性，毒副作用小[13]。因此， 建立高效经济的香菇多糖提取方法具有重要的现
1 材料与方法
1.1 材料与试剂 香菇： 购于柳州市某超市； 苯酚、 浓硫酸、乙
醇、葡萄糖、邻苯三酚、三羟甲基氨基甲烷、双氧 水、硫酸亚铁、水杨酸、盐酸等均为分析纯。
第1期
蔡锦源，等： 均匀设计与正交设计联用优选香菇多糖的微波辅助提取工艺研究
79
1.2 仪器与设备 GZX-9070MBE 电热恒温鼓风干燥箱： 上海博
正交实验优化虎眼万年青多糖提取工艺及抗氧化活性评价
【 作者】 通讯 陈瑞 战 （９７ ，男，教授 ，博士 ， 事天然产物有 效成 分提取 、分 离及 活性研 究。 １６一） 从
・
７ ・ ５
实 验原 料 为虎 眼万 年青 （ 鳞茎 ） 由中科 院长 春应用 化 学研 究所 化 学生 物学 实验 室 提供 。样 品经 吉林 省 ，
药检所鉴定 Βιβλιοθήκη 确认为虎眼万年青 的子实体。 ［ 关键词】 虎眼万年青 ；多糖 ；正交实验 ；提取 ； 氧化 活性 抗
【 中图分类号】 ９ ６３ Ｑ ４． 【 文献标识码】 Ａ 【 文章编号】 Ｏ ８ １ ８ （０ ２０ — ０ ５ ０ ｌＯ — ７ ｘ２ １）３ ０ ７ — ６
多糖广泛存在于动物 、植物和微 生物体 内，是生命 的物质基础 ，具有可与核酸或蛋 白质相 比拟的信息
功 能 ，参 与细 胞 间 的识别 、机体 免 疫 功能 的调 节 、细 胞 间物 质 的运 输 、细胞 的转 化 、凋亡 等 过 程 ，且 大 多
数无毒。研究发现多糖具有抗肿瘤和：疫调节［ 抗菌 、抗病毒［ 免 １ Ｊ 、 ２ １ 、抗氧化和抗衰老等多方面的药理活性 ， 已成为理想 的药物和天然抗氧化剂来 源。近来研究发现中药多糖能够清除物理的、化学的及生物来源的多
对 Ｐ ３ 蛋白质合成前体的结合及核酸的合成有抑制作用 ，比常见抗癌药喜树碱 、阿霉素 、紫杉醇抗癌活性 ３８ 还高 ｌ 倍 以上 ０ ；虎眼万年青 中的水溶性多糖成分 ，含量很高 ，约占虎眼万年青干重的 ２ ％以上 ，具有很 ０
高 的抗 肿瘤 活性 ｌ。 １ ０ １ 本 文在 单 因 素试验 的基 础上 ，采用 正交 试验 优化 多 糖最 佳提 取工 艺 ，并 采用 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ、 ・ ・ Ｈ 自由基 Ｏ一 Ｏ 、
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２ 结果
２．１ 标准曲线 如图１，回归方程为Ａ＝７．６７４Ｃ＋０．０４８， Ｒ２＝０．９９８３，其中 Ａ 为吸收度值，Ｃ（ｍｇ·ｍｌ－１）为葡 萄糖浓度，线性范围为 ０．０１０７～０．２１４ｍｇ·ｍｌ－１。 ２．２ 室温水提取法 蝉拟青霉多糖得率为１．９２％。 ２．３ 正交试验 如表 ２ 所示，试验因素的极差顺 序：ＲＢ＞ＲＤ＞ＲＡ＞ＲＣ ，即试验因素对多糖得率影响的
（１．温州医学院，浙江 温州 ３２５０３５；２．温州医学院附属温岭市第一人民医院 药剂科，浙江 台州 ３１８０００）
［摘 要］ 目的：优化蝉拟青霉多糖的提取条件。方法：以蝉拟青霉多糖含量为指标，采用正交试验进行研 究。结果：经正交试验优化后的提取工艺：向蝉拟青霉的水浸出液中加入 １％ 木瓜蛋白酶，于 ５０ ℃、ｐＨ＝７ 条件下提取 ２．５ ｈ 。结论：经正交试验优化后的提取工艺可缩短提取时间，提高多糖得率。 ［关键词］ 蝉拟青霉；多糖；正交试验；提取 ［中图分类号］ Ｒ９６５．２ ［文献标识码］ Ａ ［文章编号］ １０００－２１３８（２００６）０５－０４２２－０２ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｃｉｃａｄａｅ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ＸＩＯＮＧ Ｚｈｏｎｇ－ｋｕｉ，ＪＩＮ Ｌｉ－ｑｉｎ，ＬＶ Ｊｉａｎ－ｘｉｎ． Ｗｅｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｗｅｎｚｈｏｕ ３２５０３５ Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｃｉｃａｄａｅ． Ｍｅｔｈｏｄ： Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｃｉｃａｄａｅ ａｓ ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ ｍａｒｋｅｒ． Ｒｅｓｕｌｔｓ： Ａ１Ｂ３Ｃ１Ｄ３ ｉｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ： ｈｅａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｏｒ ２．５ ｈｏｕｒｓ ｉｎ ５０℃ ａｎｄ ｐＨ７ ｗｉｔｈ １％ ｐａｐａｉｎ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｃａｎ ｓｈｏｒｔｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｃｉｃａｄｉｄａｅ； ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ； ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
１９．７３
Ｒ
２．６
７．０
０．７５
３．９
图 １ 苯酚硫酸法测定糖含量的标准曲线 Fig.1 Standard curve of carbohydrate content detected by the phenol-sulfuric acid method
表 ３ 方差分析 Ｔａｂ．３ ＡＮＯＶＡ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ
收稿日期：２ ０ ０ ５ － １ ２ － １ ０ 基金项目： 浙江省教育厅科研基金资助项目（２ ０ ０ ２ ０ ４ ７ １ ）。 作者简介： 熊中奎（ １ ９ ７ ６ － ） ，男，浙江温岭人， 医学硕士。 通讯作者： 金丽琴，教授，硕士生导师，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｑｉｎｊｉｎ＠１２６．ｃｏｍ。
转移至 １０ ｍｌ 容量瓶定容，即得 ３２１ μ ｇ．ｍｌ－１ 的标 准品溶液。吸取标准品溶液０（调零用）、１０、２０、４０、 ８０、１２０、２００ μｌ 补蒸馏水至 ３００ μｌ，再分别加 ５００ μｌ ６％ 苯酚、２．００ ｍｌ 浓硫酸。摇匀后于 ４８５ ｎｍ处测定吸收度。以葡萄糖浓度为横坐标，吸收度 为纵坐标，绘制标准曲线，并计算出回归方程。 １．４ 室温水提取法 称取蝉拟青霉菌丝体粉末２ ｇ， 在室温条件下以每次 １２ ｍｌ 蒸馏水提取 ２４ ｈ，共 提取 ３ 次。离心取上清液，以截留分子量 ３５００ 的 透析袋透析。测定透析液多糖含量并计算得率。 １．５ 以正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺 １．５．１ 正交试验表头设计［４］：见表１，以蝉拟青霉多 糖的含量为指标，确定温度、ｐＨ 值、木瓜蛋白酶 用量、提取时间为试验因素，每个因素备选三个 水平。
表 １ 因素水平表 Ｔａｂ．１ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ
ｌｅｖｅｌ
Ａ Ｔ ｅ ｍ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ （℃）
Ｂ ｐＨ
Ｃ
Ｄ
Ｅｎｚｙｍｅ（％） Ｔｉｍｅ （ｈ）
１
５０
６．０
１．０
１．５
２
５５
６．５
பைடு நூலகம்１．５
２．０
３
６０
７．０
２．０
２．５
— 422 —
第 36 卷
熊中奎，等：利用正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺
第5 期
１．５．２ 正交试验：分别称取蝉拟青霉菌丝体粉末 每份 ２．００ ｇ，共 ９ 份，加蒸馏水 ５０ ｍｌ，按照因 素水平表加入木瓜蛋白酶，调节 ｐＨ 值，调控水浴 温度，按照指定时间水浴后，离心取上清液，以截 留分子量 ３５００ 的透析袋透析。测定透析液多糖含 量并计算得率。 １．６ 统计学处理方法 采用方差分析。
参考文献：
［１］ 杨介钻，金丽琴， 吕建新， 等． 蝉拟青霉多糖抗衰老作用的 实验研究［Ｊ］．中国老年学杂志，２００４，２４（４）：３４３－３４４．
［２］ 陈秀芳，金丽琴， 吕建新， 等． 蝉拟青霉对腹腔及肺泡巨噬 细胞的激活作用［Ｊ］．中国病理生理杂志，２００２，１８（６）：６９４－６９７．
［３］ 丁保金， 金丽琴， 吕建新． 苯酚硫酸光度法测定蝉拟青霉 多糖的含量［Ｊ］．温州医学院学报，２００４，３４（１）：１５－１６．
第 36 卷第 5 期 第230606卷年 1 0 月
温 州 医 学 院 学 报 Journ温al o州f W 医en z学ho u院M e学dic a报l College
利用正交试验优化蝉拟青霉多糖的提取工艺
Vol.36 No.5 O c第t . 2 05 0期6
· 论 著 ·
熊中奎 １， ２， 金丽琴 １， 吕建新 １
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药理活性研究表明蝉拟青霉总多糖具有免疫调 节、抗氧化作用［１，２］。而鉴于目前所使用的室温水 提取法对蝉拟青霉多糖的提取效率较低，故拟采用 正交试验优化蝉拟青霉多糖提取工艺。
１ 材料和方法
１．１ 仪器 Ｓｐｅｃｔｒｕｍｌａｂ ２２ＰＣ 可见分光光度计 （上海棱光技术有限公司生产）；Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ３２ 低
Ｎｏ．
Ａ
Ｂ
Ｃ
Ｄ
ｙｉｅｌｄ（％）
１
１
１
１
１
４．３９
２
１
２
２
２
６．４１
３
１
３
３
３
７．０６
４
２
１
２
３
５．６１
５
２
２
３
１
４．８２
６
２
３
１
２
６．６６
７
３
１
３
２
６．０１
８
３
２
１
３
７．０６
９
３
３
２
１
６．６２
Ⅰ
１７．８６
１６．０１
１８．１１
１５．８３
Ⅱ
１７．０９
１８．２９
１８．６４
１９．０８
Ⅲ
１９．６９
２０．３４
１７．８９
［４］ 王虎， 陈华庭， 郑菁． 正交设计研究补肾壮骨胶囊醇提工 艺［Ｊ］．中国现代应用药学杂志，２００３，２０（６）：４７１－４７３．
［５］ 吕圭源，王一涛．中药新产品开发学［Ｍ］．北京：人民卫生出 版社，１９９７．６４－９９．
［６］ 徐建祥，晏志云，赵谋明，等．酶法脱蛋白技术用于螺旋藻多 糖的提取工艺的研究［Ｊ］．食品与发酵工业，１９９８，２４（３）：２４－２８． （本文编辑：毛文明，郑俊海）
ＳＳ
ｄｆ
Ａ
１．１８
２
Ｂ
３．１２
２
Ｃ
０．１０
２
Ｄ
２．９１
２
ｅｒｒｏｒ ７．２９
１８
ＭＳ
Ｆ
０．５９
１．４４
１．５６
３．８０
０．０５
０．１２
１．４６
３．５６
０．４１
Ｆ０．０５ （２，１８） ＝ ３ ． ５ ５
Ｐ ＞０．０５ ＜０．０５ ＞０．０５ ＜０．０５
３ 讨论
提取蝉拟青霉多糖多采用室温水提取法，该方 法提取温度低，可避免多糖的降解，但是提取得率 低，耗时长。为了提高得率和缩短提取时间，本试 验采用正交试验优化蝉拟青霉的提取工艺，在正交 试验过程中加入木瓜蛋白酶，结果表明木瓜蛋白酶 对多糖得率影响不明显，但是在木瓜蛋白酶的作用 下，提取液中的蛋白质被水解，其含量下降，具有 除蛋白的作用［６］，因此在优化后的提取工艺中，仍 然加入了 １％ 的木瓜蛋白酶。